目的:研究高血脂人群的微小RNA-33a（microRNA-33a，miRNA-33a或miR-33a）和miR-33b的表达情况，探讨其与血脂指标的相关性。方法:纳入30例高血脂症患者为观察组，另纳入30位健康者为对照组。抽取观察组与对照组受试者的静脉血，采用全自动生化仪检测血清生化指标，包括：低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）、血糖（GLU）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、载脂蛋白A1（ApoA1）和载脂蛋白B（ApoB）。采用实时定量聚合酶链式反应（qPCR）检测所有受试者的血清miR-33a和miR-33b表达量。结果:观察组血清LDL-C、TG、TC明显高于对照组，HDL-C明显低于对照组，差异有统计学意义（均 P<0.05）。观察组miR-33a和miR-33b的相对表达量明显高于对照组（均 P<0.05）。miR-33a和miR-33b的表达量与LDL-C、TG、TC、ApoB水平正相关，与HDL负相关（均 P<0.05）。miR-33a和miR-33b的表达量的影响因素均为TG、TC和LDL-C。 结论:miR-33在高血脂人群中表达量升高，且与LDL-C、TG、TC、ApoB有一定的相关性。

目的:初步分析血管紧张素转化酶2（angiotensin-converting enzyme 2，ACE2）在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及潜在的调控机制。方法:纳入2020年2月至2021年5月期间，于中山大学附属第三医院行鼻内镜手术的患者23例，其中男性17例，女性6例，年龄23~66岁。通过免疫组织化学染色方法检测ACE2在非慢性鼻窦炎对照组、非嗜酸性慢性鼻窦炎伴鼻息肉（non-eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps，non-ECRSwNP）组和嗜酸性慢性鼻窦炎伴鼻息肉（eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps，ECRSwNP）组中的表达。利用GSE72713芯片分析ACE2与干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-13、IL-25、IL-33、胸腺基质淋巴细胞生成素、骨膜蛋白等Th1/Th2细胞因子的相关性。通过string数据库构建ACE2互作蛋白网络，cibersort算法评估GSE72713芯片免疫细胞浸润情况，并通过微小核糖核酸（miRNA）调控网络、基因集富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA）和药理学分析对ACE2进行综合分析。使用GraphPad 7.0及SPSS 20.0软件对实验结果进行统计学分析。结果:ACE2在non-ECRSwNP组较ECRSwNP组高表达。芯片分析显示ACE2表达与IFN-γ呈正相关，与IL-5、IL-13和骨膜蛋白呈负相关。免疫分析显示ACE2与M1型巨噬细胞浸润呈正相关，与M2型巨噬细胞浸润呈负相关。GSEA结果显示，干扰素相关通路在non-ECRSwNP组显著上调，而靶向ACE2的miRNA-200B/miRNA-200C/miRNA-429通路在ECRSwNP组上调。药理学分析结果显示，氨苄青霉素可上调ACE2表达，对乙酰氨基酚可下调ACE2表达。结论:ACE2在ECRSwNP和non-ECRSwNP中具有不同的表达模式，这可能与组织炎性因子浸润不同以及miRNA调控通路差异相关。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-33对小鼠肝再生的促进作用及其分子机制。方法:2018年9月到2019年12月，将40只C57/B6小鼠(购自上海斯莱克实验动物有限公司)按照数字随机分组法分为模型组和miR-33 KD组。模型组小鼠经尾静脉注射对照腺相关病毒1×10 11 vg/ml，miR-33 KD组小鼠经尾静脉注射miR-33敲降的腺相关病毒1×10 11 vg/ml。在注射20 d后，模型组和miR-33 KD组采用70%肝切除方法建立小鼠肝再生模型。分别在肝切术后4 d计算肝重/体重比，采用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)免疫组织化学染色分析肝脏细胞分裂能力；采用生物信息学分析miR-33的靶基因，采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞增殖指标细胞核增殖抗原(Ki-67)和靶蛋白在两组肝组织中的表达。组间比较采用 t检验。 结果:模型组和miR-33 KD组小鼠术后4 d肝脏/体重比分别为(4.10±0.61)%和(4.98±0.72)%。与模型组比较，miR-33 KD组术后4 d肝脏/体重比显著增加，差异有统计学意义( t＝2.019， P<0.05)。与模型组肝脏细胞BrdU阳性率(32.47±7.99)%比较，miR-33 KD组小鼠肝脏细胞BrdU阳性率(75.38±10.56)%显著增加，差异有统计学意义( t＝4.391， P<0.05)。与模型组肝脏细胞Ki-67蛋白表达水平(0.43±0.11)比较，miR-33 KD组小鼠肝脏细胞Ki-67蛋白表达水平(1.37±0.31)显著增加，差异有统计学意义( t＝3.281， P<0.05)。生物信息学显示细胞周期素依赖性激酶(CDK6)是miR-33的靶基因。与模型组CDK6蛋白表达水平(0.25±0.15)比较，miR-33 KD组CDK6蛋白表达水平(1.02±0.28)显著增加，差异有统计学意义( t＝3.108， P<0.05)。 结论:miR-33通过靶向作用于CDK6 3’端非编码区(3’UTR)区域，调控CDK6蛋白表达水平，进而影响细胞周期，调节正常肝脏细胞增殖。

Background::The molecular mechanisms driving tumorigenesis have continually been the focus of researchers. Cuproplasia is defined as copper-dependent cell growth and proliferation, including its primary and secondary roles in tumor formation and proliferation through signaling pathways. In this study, we analyzed the differences in the expression of cuproplasia-associated genes (CAGs) in pan-cancerous tissues and investigated their role in immune-regulation and tumor prognostication.Methods::Raw data from 11,057 cancer samples were acquired from multiple databases. Pan-cancer analysis was conducted to analyze the CAG expression, single-nucleotide variants, copy number variants, methylation signatures, and genomic signatures of micro RNA (miRNA)-messenger RNA (mRNA) interactions. The Genomics of Drug Sensitivity in Cancer and the Cancer Therapeutics Response Portal databases were used to evaluate drug sensitivity and resistance against CAGs. Using single-sample Gene Set Enrichment Analysis (ssGSEA) and Immune Cell Abundance Identifier database, immune cell infiltration was analyzed with the ssGSEA score as the standard.Results::Aberrantly expressed CAGs were found in multiple cancers. The frequency of single-nucleotide variations in CAGs ranged from 1% to 54% among different cancers. Furthermore, the correlation between CAG expression in the tumor microenvironment and immune cell infiltration varied among different cancers. ATP7A and ATP7B were negatively correlated with macrophages in 16 tumors including breast invasive carcinoma and esophageal carcinoma, while the converse was true for MT1A and MT2A. In addition, we established cuproplasia scores and demonstrated their strong correlation with patient prognosis, immunotherapy responsiveness, and disease progression ( P <0.05). Finally, we identified potential candidate drugs by matching gene targets with existing drugs. Conclusions::This study reports the genomic characterization and clinical features of CAGs in pan-cancers. It helps clarify the relationship between CAGs and tumorigenesis, and may be helpful in the development of biomarkers and new therapeutic agents.

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系.方法 体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平.构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体,设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组,根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞.将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养,Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1(Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平.通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能,利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA).结果 与正常组相比,OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P<0.0001).测序比对结果正确,成功构建cir-cHIPK3过表达慢病毒载体.感染RM细胞最佳MOI=80,以2μg/ml嘌呤霉素筛选得到稳定过表达circHIPK3的RM细胞.RT-qPCR结果显示,OE组细胞中circHIPK3表达水平较NC组显著增高(P<0.01).Western blot结果显示,在OGD/R培养条件下,OE组细胞中Iba-1和CD40蛋白表达水平较NC组显著降低(P<0.05).蛋白翻译分析显示,cir-cHIPK3具有2个内部核糖体进入位点(IRES)和1个开放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽.miRNA结合分析显示,circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合:hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p.结论 过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能,可能通过海绵miRNA发挥功能.

目的 探讨环状RNA结合基序蛋白(circRBM)33 对鼻咽癌细胞 6-10B增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)评估鼻咽癌组织和配对癌旁组织中circRBM33 和微小RNA(miR)-3196 的相对水平.将小干扰RNA阴性对照(si-NC组)、circRBM33 小干扰RNA(si-circRBM33 组)、miRNA模拟物阴性对照(miR-NC 组)、miR-3196 模拟物(miR-3196 组)、si-circRBM33 + miR-3196 抑制物(si-circRBM33 + anti-miR-3196 组)、si-circRBM33+miRNA抑制物阴性对照(si-circRBM33+anti-miR-NC组)分别转染 6-10B细胞.未转染 6-10B细胞记为对照(Con)组.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、划痕愈合实验、Transwell法分别检测 6-10B细胞活力及迁移和侵袭能力.通过双荧光素酶报告基因实验和实时定量PCR分析circRBM33 和miR-3196 之间的相互作用.结果 与癌旁组织比较,鼻咽癌组织中circRBM33 的相对水平明显升高,miR-3196 相对水平明显降低(P<0.05).与对照组、si-NC组比较,si-circRBM33 组细胞活力、划痕愈合率、侵袭数明显降低(P<0.05);与对照组、miR-NC组比较,miR-3196 组细胞活力、划痕愈合率、侵袭数明显降低(P<0.05).miR-3196 是 circRBM33 的靶基因,circRBM33 负性调控 miR-3196 表达.si-circRBM33+anti-miR-3196 组与 si-cir-cRBM33+anti-miR-NC组比较,细胞活力、划痕愈合率、侵袭数明显增加(P<0.05).结论 干扰circRBM33 可明显抑制鼻咽癌6-10B细胞迁移、侵袭和增殖,这是通过靶向上调miR-3196 实现的.

他克莫司治疗窗窄,个体间的药动学/药效学差异较大.以往研究表明临床指标和遗传因素可能是影响他克莫司剂量选择的重要因素,但这对个体差异的解释仍有限.近年来,微小RNA(miRNA)作为一种潜在的生物标志物和特异性治疗靶点受到广泛关注,该文汇总分析了与他克莫司代谢相关的miRNA研究进展,期望能够为该药临床个体化用药研究提供新的思路.目前关于miRNA与他克莫司相关性的研究,以miRNA对CYP3A5的影响居多,涉及miR-29a-3p、miR-99a-5p、miR-532-5p、miR-500a-5p等;与CYP3A4表达相关进而影响他克莫司药动学的miRNA,如miRNA-627-5p;作用于钙调磷酸酶进而影响他克莫司体内作用的miRNA,如miR-582-5p;肾移植患者尿液外泌体中与他克莫司剂量呈正相关的miRNA,如miR-155-5p和miR-223-3p,但这两种miRNA通过何种途径影响他克莫司浓度尚未阐明;可能与他克莫司体内不良反应相关的miRNA,如 miR-26b、miR-145、miR-183、miR-21-5p,miR-199a-5p 和 miR-214-3p、miR33a 有关.研究提示,miRNAs 能够在预测他克莫司疗效和不良反应方面提供新的生物标志物和干预靶点.

目的:观察β3肾上腺素受体(β3-AR)对心衰大鼠心脏MicroRNAs表达的影响及可能的作用机制.方法:大鼠冠脉左前降支结扎造成心衰模型,假手术大鼠只穿线不结扎.造模成功大鼠再随机分为:心衰组(CHF controlgroup)和心衰+SR 59230A组(CH-F+ SR group);假手术大鼠也随机分为假手术组(Sham group)和假手术+SR 59230A组(Sham+ SR group).Sham+ SR组和CHF+SR组每天两次腹腔注射SR(85 mmol/L,1ml),连续注射7周.结果:①miScript miRNA PCR Arrays显示,在体阻断β3-AR后,假手术组与心衰组有18种MicroRNAs共同表达下调;经文献比对,与NF-κB相关的MicroRNAs有6种,分别为miR-125b-5p,miR-143-3p,miR-145-5p,miR-26a-5p,miR-30a-5p和miR-320-5p.②大鼠心脏组织切片观察到NF-κB在心衰大鼠心肌细胞核与细胞质中均有分布,而p53在心肌细胞质分布较多,NF-κB和p53表达明显高于假手术组(P＜0.05).阻断β3-AR后,心衰组心脏NF-JcB和p53表达显著减少(P＜0.05),而假手术组NF-κB和p53表达略增加(P＜0.05).③Western blot结果发现心衰大鼠NF-κB p65表达高于假手术组(P＜0.05),给予β3-AR阻断剂后,心衰组心脏NF-κB 1p65和p53-Phospho-Serine 15表达均下降(P＜0.05),而假手术组心脏阻断β3-AR后,NF-κB、p53和p53-Phospho-Serine 15表达均增加(P＜0.05).结论:阻断β3肾上腺素受体有利于缓解心衰大鼠心脏的损伤;β3-AR可引起MicroRNAs表达变化且与NF-cB信号通路有关.

胆固醇稳态受多种因素的密切调节,而胆固醇代谢紊乱与2型糖尿病、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪性肝病等多种疾病的发生、发展密切相关.微小RNA(microRNA,miRNA)是脂代谢的转录后调控因子,miRNA-185-5p、miRNA-758-5p、miRNA-33a、miRNA-21、miRNA-122和miRNA-370与胆固醇的合成有关,miRNA-33、miRNA-144、miRNA-26、miRNA-758-3p、miRNA-106b、miRNA-10b、miR-NA-302、miRNA-145、miRNA-27a/b和miRNA-613与胆固醇的转运有关,多种microRNA共同参与调控胆固醇代谢中关键蛋白的表达,调控胆固醇的稳态平衡.

目的 探讨结直肠癌(CRC)患者术前、术后血浆微小RNA(miRNA)表达水平变化,以及术前血浆与癌组织miRNA表达水平的相关性.方法 选取2014年6月—2016年8月同济大学附属上海第十人民医院胃肠外科就诊的CRC患者32例,另选取同期体检健康者33例.采集健康者及CRC患者术前、术后1个月外周静脉血,留取CRC患者癌及癌旁组织.通过实时荧光定量聚合酶链反应检测血浆、癌组织与癌旁组织中miR-21、miR-17、miR-145、miR-15b、miR-150表达水平.结果 与健康者比较,CRC患者术前血浆miR-21、miR-17、miR-145、miR-15b表达水平上调(P<0.05);与术前比较,CRC患者术后1个月血浆miR-21、miR-17、miR-15b表达水平下调(P<0.05);与癌旁组织比较,CRC患者癌组织中miR-21、miR-17、miR-145、miR-15b表达水平上调,miR-150表达水平下调(P<0.05).相关性分析显示,CRC患者术前血浆与癌组织miR-21(r=0.516,P=0.002)、miR-15b(r=0.526,P=0.001)表达水平呈正相关.结论 CRC患者血浆和癌组织miR-21、miR-17、miR-145、miR-15b表达水平失调,其中血浆miR-21、miR-15b有望成为CRC新型非侵袭性诊断标志物.