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miRNA-33a、miRNA-33b在高血脂人群中的表达及与血脂指标的相关性
编辑人员丨4天前
目的:研究高血脂人群的微小RNA-33a(microRNA-33a,miRNA-33a或miR-33a)和miR-33b的表达情况,探讨其与血脂指标的相关性。方法:纳入30例高血脂症患者为观察组,另纳入30位健康者为对照组。抽取观察组与对照组受试者的静脉血,采用全自动生化仪检测血清生化指标,包括:低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、血糖(GLU)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)和载脂蛋白B(ApoB)。采用实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测所有受试者的血清miR-33a和miR-33b表达量。结果:观察组血清LDL-C、TG、TC明显高于对照组,HDL-C明显低于对照组,差异有统计学意义(均 P<0.05)。观察组miR-33a和miR-33b的相对表达量明显高于对照组(均 P<0.05)。miR-33a和miR-33b的表达量与LDL-C、TG、TC、ApoB水平正相关,与HDL负相关(均 P<0.05)。miR-33a和miR-33b的表达量的影响因素均为TG、TC和LDL-C。 结论:miR-33在高血脂人群中表达量升高,且与LDL-C、TG、TC、ApoB有一定的相关性。
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编辑人员丨4天前
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Circulating MicroRNAs as Potential Biomarkers in the Diagnosis of Neurosyphilis: A Case Control Study
编辑人员丨4天前
Objective::Laboratory diagnosis of neurosyphilis (NS) remains a great challenge. This study was the aimed to identify miRNA candidates as biomarkers to distinguish between NS, non-neurosyphilis, and healthy controls (HCs).Methods::We analyzed miRNA expression profiles in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from six patients with NS, eight patients with secondary syphilis (SS), and five HCs using microarray technology. The differentially expressed miRNAs were validated in 33 NS samples, 31 SS samples, and 30 HC samples using TaqMan miRNA real-time qPCR (qRT-PCR).Results::Thirty-nine miRNAs were differentially expressed in SS and NS patients compared with HCs. Thirteen miRNAs were randomly selected to validate their expression levels in the same samples used in microarray assay by qRT-PCR. All miRNAs were upregulated in SS and NS samples compared with HC. qRT-PCR analysis of the expression of the 13 miRNAs in a second cohort (76 samples) showed that the average expression levels of nine miRNAs were higher in SS than in NS (SS: 0.185, NS: 0.136, P=3.8E-10), while the expressions of the other four miRNAs were lower in SS than in NS (SS: 0.000757, NS: 0.000873, P=0.022). ROC curve analysis of the 13 miRNAs showed the area under the curve value to be 1.00 for distinguishing SS patients from HCs, 1.00 for distinguishing NS patients from HCs, 1.00 for distinguishing SS and NS patients from HCs, and 0.968 for distinguishing NS from SS patients. Conclusion::The present study is the first one that identified differentially expressed miRNAs in PBMCs from patients with NS. Our results suggest that the 13 candidate miRNAs in PBMCs may be novel noninvasive biomarkers for NS diagnosis.
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编辑人员丨4天前
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白癜风靶向治疗的研究进展
编辑人员丨4天前
白癜风是一种皮肤黏膜色素脱失为特征的获得性自身免疫性皮肤病。炎症细胞因子,如干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-17、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、IL-8、IL-21、IL-33、磷酸二酯酶(PDE)-4及转化生长因子(TGF)-β,在该病的进展中起着重要的作用,特别是IFN-γ/趋化因子配体(CXCL)10轴。近年来,靶向治疗通过调节与白癜风发病机制相关的细胞因子及其相应受体,对其治疗发挥了重要作用,JAK抑制剂及其与光疗联合治疗已被临床证实具有较好的治疗前景。本文全面评估各种生物制剂在白癜风治疗中的疗效和个体化用药选择,以期为临床药物治疗决策提供参考。
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编辑人员丨4天前
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小鼠肾脏衰老过程中长链非编码RNA的差异表达
编辑人员丨4天前
目的:分析小鼠肾脏衰老过程中长链非编码RNA(lncRNA)的差异表达情况,探索肾脏衰老的机制。方法:随机选取3、12和24月龄C57BL/6雄性小鼠各5只(体重均为25 g左右),采用PAS、Masson、半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色方法检测小鼠肾脏病理及细胞衰老情况。高通量测序得到3组小鼠组间差异表达的lncRNA及其表达丰度值,绘制热图。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异表达的lncRNA。构建竞争性内源性RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)网络(包含lncRNA、miRNA和mRNA),GO、KEGG富集分析预测差异表达lncRNA靶基因的生物学功能。结果:肾脏病理染色结果显示,随着小鼠月龄增加,肾小球系膜基质增多,基底膜增厚,肾小球硬化逐渐加重;肾脏纤维化逐渐加重;SA-β-gal染色阳性区域逐渐增加。测序结果显示,3组小鼠间差异表达的lncRNA共938个已知的lncRNA和542个未知的lncRNA。其中,与3月龄小鼠相比,12月龄小鼠有33个lncRNA表达上调,43个lncRNA表达下调;与3月龄小鼠相比,24月龄小鼠有130个lncRNA表达上调,91个lncRNA表达下调;与12月龄小鼠相比,24月龄小鼠有36个lncRNA表达上调,22个lncRNA表达下调。qRT-PCR验证的差异表达倍数较大、表达量较高的10个lncRNA与测序结果一致。GO富集分析结果显示,3组差异表达的lncRNA靶基因多定位于细胞核和细胞质,也可能通过与蛋白结合来发挥作用,还可能参与各种蛋白磷酸化、细胞周期、转录、转录调节等过程。KEGG富集分析结果显示,3组差异表达lncRNA的靶基因富集明显的通路是与肾脏衰老密切相关的Rap1信号通路、FOXO信号通路和MAPK信号通路。结论:不同月龄小鼠肾脏lncRNA表达存在显著差异,lncRNA的差异表达可能参与肾脏衰老的发生。
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编辑人员丨4天前
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miRNA-17~92基因簇、线粒体融合蛋白2在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义
编辑人员丨4天前
目的:探讨miRNA-17~92(miR-17~92)基因簇及线粒体融合蛋白2(MFN2)蛋白在子宫内膜癌(EC)中的表达及其临床意义。方法:收集2008年1月至2014年12月山东第一医科大学第二附属医院72例EC、36例子宫内膜非典型增生患者子宫内膜病变组织及22例因子宫颈上皮内瘤变Ⅲ级行全子宫切除术的正常子宫内膜组织;同时收集所有患者蜡块组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组织中miR-17~92表达水平,免疫组织化学SP法检测各蜡块组织中MFN2蛋白定位及表达水平。分析miR-17~92、MFN2蛋白与EC患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法绘制miR-17~92、MFN2不同水平患者生存曲线,并行log-rank检验;应用Cox比例风险回归模型进行多因素生存分析。结果:miR-17~92在EC、非典型增生及正常子宫内膜组织中相对表达量分别为1.49±0.46、1.01±0.30、0.69±0.20;EC组织中miR-17~92的表达水平高于其他子宫内膜组织,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。MFN2蛋白在EC、非典型增生、正常子宫内膜组织中的高表达率分别为20.8%(15/72)、39.4%(13/33)、85.0%(17/20);EC组织中MFN2蛋白高表达率低于其他子宫内膜组织,差异均有统计学意义(均 P<0.012 5)。EC患者中,组织学类型Ⅱ型患者miR-17~92相对表达量高于Ⅰ型患者( P<0.05),肌层浸润深度≥1/2患者miR-17~92相对表达量高于浸润深度<1/2患者( P<0.05);组织学类型Ⅰ型患者MFN2蛋白高表达率高于Ⅱ型患者( P<0.05),国际妇产科联盟(FIGO)分级Ⅰ级患者MFN2蛋白高表达率高于Ⅱ、Ⅲ级患者( P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,按EC患者miR-17~92中位相对表达量(1.421)分组时,低表达组(36例)中位总生存(OS)时间未达到,高表达组(36例)为36个月(95% CI 32~42个月),两组间OS差异有统计学意义( P=0.049);MFN2蛋白高表达组(15例)中位OS时间未达到,低表达组(57例)为38个月(95% CI 33~41个月),两组间OS差异有统计学意义( P=0.046)。多因素Cox回归分析显示,miR-17~92、MFN2表达水平为EC患者生存的独立影响因素( HR=3.10,95% CI 1.36~7.07, P=0.007; HR=0.30,95% CI 0.09~0.99, P=0.048)。 结论:EC组织中miR-17~92高表达、MFN2蛋白低表达,二者可能参与了EC的发生、发展,可作为判断EC患者预后的指标。
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编辑人员丨4天前
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miRNA-5193对子宫颈癌Caski细胞顺铂敏感性的影响
编辑人员丨4天前
目的:探讨miRNA-5193(miR-5193)对子宫颈癌Caski细胞顺铂敏感性的影响和机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定子宫颈癌细胞株C33A、SiHa、Caski和正常子宫颈细胞株Ect1/E6E7中miR-5193的表达水平。将Caski细胞分成对照组(不转染,正常培养)、miR-5193阴性对照(miR-NC)组(转染miR-NC模拟物)、miR-5193组(转染miR-5193模拟物)、miR-NC+顺铂组(10 μg/ml顺铂处理转染miR-NC模拟物的细胞)、miR-5193+顺铂组(10 μg/ml顺铂处理转染miR-5193模拟物的细胞)、miR-5193+顺铂+NC组(10 μg/ml顺铂处理共转染Foxp3阴性对照载体、miR-5193模拟物的细胞)、miR-5193+顺铂+Foxp3组(10 μg/ml顺铂处理共转染Foxp3过表达载体和miR-5193模拟物的细胞)。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况;流式细胞术PI单染法检测细胞周期,Annexin V- FITC/PI双染法检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测细胞CDK2、p27、C-caspase-3蛋白表达。应用生物信息学软件预测miR-5193靶基因,采用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。结果:子宫颈癌C33A、SiHa、Caski细胞中miR-5193相对表达量均低于正常子宫颈Ect1/E6E7细胞(0.56±0.06、0.41±0.03、0.23±0.02比1.00±0.10,均 P<0.05)。与对照组、miR-NC组比较,miR-5193组、miR-NC+顺铂组、miR-5193+顺铂组细胞增殖活性(吸光度值)降低(0.58±0.06、0.59±0.07比0.38±0.04、0.40±0.05、0.23±0.02,均 P<0.05),细胞凋亡率升高[(2.5±0.2)%、(2.7±0.3)%比(12.6±1.2)%、(11.9±1.5)%、(18.9±1.7)%,均 P<0.05],G 0/G 1期细胞比例升高[(50.4±4.2)%、(51.3±6.3)%比(62.3±3.2)%、(61.9±5.8)%、(71.4±5.4)%,均 P<0.05],p27、C-caspase-3蛋白表达水平升高,CDK2蛋白表达水平下降。软件预测miR-5193靶基因为Foxp3,并由荧光素酶报告系统确认。与miR-5193+顺铂+NC组相比,miR-5193+顺铂+Foxp3组细胞增殖活性(吸光度值)升高(0.24±0.03比0.65±0.05, t=21.094, P<0.01),G 0/G 1期细胞比例降低[(71.0±6.4)%比(60.3±4.1)%, t=4.196, P<0.01],细胞凋亡率降低[(19.6±1.6)%比(11.5±1.2)%, t=11.880, P<0.01],细胞中p27、C-caspase-3蛋白表达水平下降,CDK2、Foxp3蛋白表达水平升高。 结论:体外miR-5193可能通过靶向抑制Foxp3基因提高子宫颈癌Caski细胞对顺铂的敏感性。
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编辑人员丨4天前
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长链非编码RNA RP13-349O20.2在子宫颈癌组织中的表达及其对子宫颈癌细胞迁移、侵袭能力和化疗敏感性影响的实验研究
编辑人员丨4天前
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP13-349O20.2在子宫颈癌组织中的表达水平,及其体外对子宫颈癌细胞迁移、侵袭能力和化疗敏感性的影响及可能机制。方法:利用GEPIA.CANCER网站(数据更新时间2023年6月)分析RP13-349O20.2表达水平与253例子宫颈癌患者总生存的关系。回顾性收集2020年1月至2022年8月徐州医科大学附属滕州市中心人民医院40例子宫颈癌患者癌组织和癌旁组织(距离肿瘤边缘>2 cm),采用人正常子宫颈上皮细胞株H8和人子宫颈癌细胞株HCC94、C33A、Hela、HCC1106、SiHa进行体外细胞实验。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测子宫颈癌组织和癌旁组织、各细胞株中RP13-349O20.2的相对表达量。向RP13-349O20.2相对表达水平最高的C33A细胞分别转染RP13-349O20.2的小干扰RNA(siRNA)及其阴性对照序列的siRNA,分别为si-RP13-349O20.2组和si-Con组。采用划痕愈合实验检测两组C33A细胞的迁移能力,Transwell实验检测C33A细胞侵袭能力,CCK-8法检测C33A细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性(以吸光度值表示细胞增殖能力,吸光度值越低,增殖能力越弱,则对药物敏感性越强)。双荧光素酶报告基因实验验证RP13-349O20.2和miRNA-493-5p(miR-493-5p)、miR-493-5p和Nectin-4的靶向关系。采用qRT-PCR检测两组C33A细胞miR-493-5p和Nectin-4 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法检测两组细胞Nectin-4蛋白和PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果:根据GEPIA.CANCER网站数据分析显示,RP13-349O20.2低表达患者的总生存较高表达患者好( P<0.01)。40例子宫颈癌患者癌组织和癌旁组织中RP13-349O20.2相对表达量分别为4.04±0.32和1.18±0.14,差异有统计学意义( t=8.29, P<0.01)。与H8细胞比较,人子宫颈癌细胞株HCC94、C33A、Hela、HCC1106、SiHa细胞中RP13-349O20.2表达水平均高(均 P<0.01)。si-Con组和si-RP13-349O20.2组C33A细胞中RP13-349O20.2相对表达量分别为7.30±0.30和1.01±0.27,差异有统计学意义( t=15.62, P<0.01)。si-Con组和si-RP13-349O20.2组C33A细胞划痕抑制率分别为(32±9)%和(75±6)%( t=3.97, P<0.01),侵袭细胞数分别为(106±12)个和(36±8)个( t=4.79, P<0.01)。在5、10、20、40、80 μmol/L 5-氟尿嘧啶作用24 h后,si-RP13-349O20.2组C33A细胞吸光度值均低于si-Con组。双荧光素酶报告基因实验证实P13-349O20.2与miR-493-5p存在靶向关系( P<0.01),miR-493-5p与Nectin-4存在靶向关系( P<0.01)。si-Con组和si-RP13-349O20.2组C33A细胞miR-493-5p的相对表达量分别为1.02±0.13和5.48±0.85( t=5.21, P<0.01),Nectin-4 mRNA的相对表达量分别为5.65±0.33和0.99±0.34 ( t=9.87, P<0.01)。si-RP13-349O20.2组C33A细胞中Nectin-4蛋白表达水平较si-Con组低( t=9.21, P=0.001),PI3K-AKT信号通路蛋白p-STAT3、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平均低于si-Con组(均 P<0.01)。 结论:子宫颈癌组织中RP13-349O20.2水平较高,且其高表达可能预示患者预后不良。体外干扰RP13-349O20.2表达能够抑制子宫颈癌细胞迁移、侵袭能力,促进子宫颈癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性,其机制可能与miR-493-5p/Nectin-4信号通路和PI3K-AKT信号通路有关。
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编辑人员丨4天前
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循环微小RNA-185在骨肉瘤中的表达及临床意义
编辑人员丨4天前
目的:观察微小RNA(miRNA,miR)-185在骨肉瘤患者中的表达,探讨其在骨肉瘤诊断及预后中的价值。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测54对骨肉瘤患者和健康对照者(性别和年龄匹配)的miR-185表达。根据miR-185的中位数(2.381),将所有患者分为两组:高miR-185表达组(21)和低miR-185表达组(33)。然后分析miR-185表达与患者临床病理因素的相关性。血清样本在郑州大学第一附属医院2012年1月1日至2014年12月份从接受手术但未接受化学疗法或放射疗法的患者中收集,并分析miR-185表达与骨肉瘤患者的临床病理特征和总体生存率的关系。使用Manne Whitney U检验比较骨肉瘤患者和正常对照组血清miR-185水平的差异。对数秩检验和Kaplan-Meier方法评估骨肉瘤患者的总体生存率。采用Cox回归和多因素分析评估预后价值。 结果:与正常对照组比较,骨肉瘤患者血清中的miR-185表达显著降低( U=373.000, P<0.05),差异有统计学意义。miR-185的低表达与较大的肿瘤体积(直径<5 cm比直径≥5 cm的miR-185:3.100±0.359比1.806±0.226, P<0.01),较高的TNM分期(一、二期比三、四期的miR-185:2.986±1.562比1.566±1.305, P<0.01)和远处转移(未转移比转移的miR-185:3.014±1.660比1.590±1.148, P<0.01)密切相关,差异有统计学意义。Kaplan-Meier曲线生存分析和对数秩检验显示,miR-185的低表达与骨肉瘤患者的总生存率降低有关。此外,多变量分析表明,miR-185表达降低是骨肉瘤患者总体生存的独立预后生物标志物( P<0.01),差异有统计学意义。 结论:血清miR-185可作为一种肿瘤抑制因子,有助于骨肉瘤患者的诊断、预后。
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编辑人员丨4天前
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微小RNA-33对小鼠肝再生的影响及其作用机制
编辑人员丨4天前
目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-33对小鼠肝再生的促进作用及其分子机制。方法:2018年9月到2019年12月,将40只C57/B6小鼠(购自上海斯莱克实验动物有限公司)按照数字随机分组法分为模型组和miR-33 KD组。模型组小鼠经尾静脉注射对照腺相关病毒1×10 11 vg/ml,miR-33 KD组小鼠经尾静脉注射miR-33敲降的腺相关病毒1×10 11 vg/ml。在注射20 d后,模型组和miR-33 KD组采用70%肝切除方法建立小鼠肝再生模型。分别在肝切术后4 d计算肝重/体重比,采用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)免疫组织化学染色分析肝脏细胞分裂能力;采用生物信息学分析miR-33的靶基因,采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞增殖指标细胞核增殖抗原(Ki-67)和靶蛋白在两组肝组织中的表达。组间比较采用 t检验。 结果:模型组和miR-33 KD组小鼠术后4 d肝脏/体重比分别为(4.10±0.61)%和(4.98±0.72)%。与模型组比较,miR-33 KD组术后4 d肝脏/体重比显著增加,差异有统计学意义( t=2.019, P<0.05)。与模型组肝脏细胞BrdU阳性率(32.47±7.99)%比较,miR-33 KD组小鼠肝脏细胞BrdU阳性率(75.38±10.56)%显著增加,差异有统计学意义( t=4.391, P<0.05)。与模型组肝脏细胞Ki-67蛋白表达水平(0.43±0.11)比较,miR-33 KD组小鼠肝脏细胞Ki-67蛋白表达水平(1.37±0.31)显著增加,差异有统计学意义( t=3.281, P<0.05)。生物信息学显示细胞周期素依赖性激酶(CDK6)是miR-33的靶基因。与模型组CDK6蛋白表达水平(0.25±0.15)比较,miR-33 KD组CDK6蛋白表达水平(1.02±0.28)显著增加,差异有统计学意义( t=3.108, P<0.05)。 结论:miR-33通过靶向作用于CDK6 3’端非编码区(3’UTR)区域,调控CDK6蛋白表达水平,进而影响细胞周期,调节正常肝脏细胞增殖。
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编辑人员丨4天前
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冠状动脉粥样硬化性心脏病患者循环白细胞SREBP-2启动子甲基化与其他风险因素的相关性研究
编辑人员丨4天前
目的:探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)的启动子甲基化水平与血浆miR-33a以及血脂和心肌酶等生化指标的相关性。方法:病例对照研究,2017年8月至2018年4月在湖北医药学院附属太和医院心内科三病区招募冠状动脉造影检查受检者100例,其中冠状动脉造影显示梗阻的CAD患者50例以及冠状动脉造影阴性的对照者50例。采集外周血样本,提取白细胞DNA,通过焦磷酸测序法检测SREBP-2启动子区两个片段,共计12个CpG位点的甲基化水平;提取血浆RNA,定量qPCR检测血浆miR-33a水平;分离血浆,采用全自动生化分析仪检测血浆中血脂、心肌酶、炎症相关因子等15项生化指标。通过Pearson和Spearman相关系数及多因素Logistic回归分析等统计学方法分析其相关性。结果:CAD患者SREBP-2启动子区F1-4 CpG位点(转录起始点上游-103bp)甲基化水平显著高于对照组(4.56%±0.70% vs 3.54%±0.72%, t=-3.864, P<0.001);F1-4位点的甲基化水平与血浆中miR-33a-5p水平和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平呈负相关( r=-0.318, P=0.001; r=-0.225, P=0.024)。此外,校正年龄、性别、高血压、高脂血症和糖尿病病史混杂因素之后,F1-4高甲基化是CAD的独立风险因素( OR=2.452,95 %CI=1.398~4.299, P=0.002)。 结论:DNA甲基化和miRNA可能协同调控CAD发病机制中异常的脂质代谢。
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编辑人员丨4天前
