目的:使用preS1-tp融合蛋白作为新型的载体，介导针对乙型肝炎病毒（HBV）核心蛋白羧基端核定位信号(NLS)区的小干扰RNA(siRNA)进入感染HBV的肝细胞，从而抑制HBV复制和共价闭合环状DNA的形成。方法:以慢病毒感染系统为基础，建立表达人牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽的HepG2.2.15细胞；针对HBV NLS区设计合成siRNA；表达纯化preS1-tp融合蛋白，检测其进入细胞和与DNA结合的能力；以preS1-tp融合蛋白为载体，介导NLS siRNA递送至HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞中,观察其对HBV复制和共价闭合环状DNA水平的影响。多组间比较采用方差分析，计量资料用 t检验分析组间差异。 结果:成功构建HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞株并合成筛选出显著抑制HBV复制的HBV NLS siRNA。纯化并大量表达preS1-tp融合蛋白，以该融合蛋白为载体靶向输送HBV NLS siRNA，结果显示，融合蛋白可以有效靶向输送siRNA至HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞，不仅可有效抑制细胞中HBV mRNA，HBsAg和HBeAg表达，还能显著降低HBV DNA和共价闭合环状DNA的水平。结论:preS1-tp融合蛋白利用preS1与肝细胞HBV受体结合，tp与核酸结合的双功能特点，将针对HBV NLS的siRNA靶向至感染HBV的靶细胞，靶向阻断rcDNA转运入细胞核，使siRNA发挥抑制HBV复制和共价闭合环状DNA合成的作用，为HBV感染所致慢性乙型肝炎治疗提供新策略，为彻底清除体内HBV提供新的研究视角。

目的:开发一种新型递送策略，利用金属有机框架（MOF）负载针对整合素αv（ITGAV）的小干扰RNA siITGAV，以克服基质屏障，进而增强乳腺癌内药物递送及免疫可及性。方法:构建MOF@siITGAV颗粒，对其进行材料表征。通过细胞摄取实验观察乳腺癌4T1细胞对MOF@siITGAV的摄取情况，细胞计数试剂盒8法检测MOF@siITGAV的细胞毒性。设空白对照组、游离siITGAV组和MOF@siITGAV组，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组4T1细胞中ITGAV mRNA的表达，采用Western blot检测ITGAV蛋白的表达，采用酶联免疫吸附试验检测TGF-β1的含量。采用3D球体穿透实验观察MOF@siITGAV穿透4T1细胞球的能力。建立三阴性乳腺癌小鼠模型，观察MOF@siITGAV对移植瘤生长及小鼠心、肝、脾、肺、肾等主要脏器的影响，采用免疫组化染色检测肿瘤组织中Ⅰ型胶原蛋白和CD8的表达。结果:成功构建MOF@siITGAV颗粒，粒径为（198.0±3.3）nm，电位为-（20.2±0.4）mV。4T1细胞能有效摄取MOF@siITGAV，并触发siRNA的有效释放，MOF@siITGAV组细胞中ITGAV mRNA和蛋白表达水平、TGF-β1的表达水平均显著下调［相对于空白对照组，游离siITGAV组和MOF@siITGAV组4T1细胞中ITGAV mRNA相对表达水平分别为（109.9±19.0）%和（46.5±11.3）%；空白对照组、MOF@siNC组和MOF@siITGAV组TGF-β1浓度分别为（474.5±34.4）pg/ml、（437.2±16.5）pg/ml和（388.4±14.4）pg/ml］。MOF@siITGAV在4T1细胞球中的穿透能力更强，对4T1细胞无明显杀伤效应，0、10、20、40、80和160 μg/ml MOF@siITGAV分别处理4T1细胞24 h，细胞活性分别为（99.7±3.5）%、（98.2±5.2）%、（97.3±6.6）%、（92.1±8.1）%和（92.4±4.1）%。MOF@siITGAV能有效抑制小鼠乳腺癌移植瘤的生长，给药15 d后，空白对照组、MOF@siNC组和MOF@siITGAV组小鼠的肿瘤体积分别为（691.1±193.0）mm 3、（652.7±306.5）mm 3和（135.3±41.9）mm 3，MOF@siITGAV组小鼠的肿瘤体积小于空白对照组（ P=0.025）。与空白对照组和MOF@siNC组相比，MOF@siITGAV组小鼠肿瘤组织中Ⅰ型胶原蛋白的含量明显减少，CD8阳性细胞明显增多，心、肝、脾、肺、肾等主要脏器未见明显异常。 结论:ITGAV可以破坏乳腺癌的ECM，改善药物瘤内递送，促进免疫细胞浸润。

目的:构建一种基于超分子主客体化学组装的聚集诱导发光囊泡材料（AIE-HG-Vesicle）用于递送小干扰RNA（siRNA）及实现荧光成像功能，并探究其被肿瘤细胞摄取的效果及其基于siRNA对肿瘤细胞的杀伤效果。方法:通过合成聚乙烯亚胺树型分子修饰的β-环糊精（H-β-CD-dendrimer）作为主体化合物，同时合成含有四苯乙烯AIE基团的Bola型金刚烷（G-Ada-AIE）作为客体化合物，通过超分子主客体自组装过程制备得到AIE-HG-Vesicle囊泡材料用于负载siRNA。通过透射电子显微镜及动态光散射仪测试其形貌和尺寸，通过荧光分光光度计测试其聚集诱导发光性质，通过凝胶阻滞实验测试其对siRNA的负载效果，通过激光共聚焦显微镜测试负载siRNA的AIE-HG-Vesicle囊泡材料在肿瘤细胞内的递送效果，并通过MTT实验测试负载siRNA的AIE-HG-Vesicle囊泡材料对肿瘤细胞的杀伤效果。结果:AIE-HG-Vesicle具有囊泡状形态，直径约为100 nm，壁厚约为9 nm，且表面带正电荷可有效负载siRNA。负载于AIE-HG-Vesicle的siRNA表现出良好的稳定性，且负载siRNA后的AIE-HG-Vesicle可将siRNA递送到HeLa细胞内部，并可通过聚集诱导发光现象被观测到，负载siRNA后的囊泡对HeLa细胞有明显的杀伤效果。结论:构建了AIE-HG-Vesicle可用于递送siRNA，该材料具有荧光成像和基于siRNA的肿瘤细胞毒性作用，后期有望应用于肿瘤体内治疗。

急性肺损伤(acute lung injury, ALI)是一种致死率高的严重呼吸系统疾病，常表现为肺水肿、肺泡通透性增加、炎性细胞聚集和弥漫性肺泡损伤，其最终可导致急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS) [1,2]。过度的炎症反应是ALI进展的重要危险因素，浸润到肺组织的巨噬细胞和中性粒细胞释放大量细胞因子，诱导过度炎症反应，对肺泡上皮和内皮细胞的产生快速和严重损伤 [3]。迄今为止，尽管对ALI/ARDS进行了广泛的研究，然而并没有开发出有效的药物治疗这一疾病，目前针对ALI/ARDS的最佳治疗仍然是保护性通气，其病死率在大约40%左右 [4]。因此急需开发创新的ALI/ARDS治疗策略来降低其病死率。基因治疗因其精确化、个体化优势已成为目前非常有前景的潜在疾病治疗手段，通过沉默ALI发病机制中关键基因靶标，阻止甚至逆转疾病发展，为ALI/ARDS开辟了潜在的有效治疗策略。RNA干扰（RNA interference, RNAi）是一种古老的生物机制，用于防御外源基因入侵。从理论上讲，它可以以序列特异性方式沉默任何与疾病相关的基因，其中小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)是目前被认为最有临床应用前景的RNAi [5]。然而，单纯的siRNA经气道肺部给药面临着许多障碍，无法有效的传递到靶细胞，因此需要设计有效的递送系统以克服siRNA递送的缺点，从而推动siRNA疗法用于治疗ALI的临床可行性。

外泌体(exosomes)是细胞内源性的小囊泡，大多数哺乳动物细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。外泌体已成为细胞间通讯的重要介质，用于传递膜和细胞溶质蛋白、脂质和RNA的载体。近年来，小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)已经成为病理生理疾病治疗的潜在选择，但是不良的生物利用度限制了其治疗潜力。为了实现RNA药物的治疗潜力，必须开发有效的、组织特异性的和非免疫原性的递送技术。目前已经研究了几种载体，其中外泌体被认为是有效递送siRNA的可行的载体，这里将主要对外泌体及外泌体能作为siRNA递送的天然载体进行概述。

急性髓细胞白血病(AML)是常见的成年人白血病之一。虽然AML的标准治疗方案可以使大多数初诊患者获得完全缓解(CR)，但是其复发率高，并且复发后易对原化疗药物产生耐药。目前，AML患者的5年总体生存(OS)率仅约为25%，亟需寻找更为有效的治疗方法。CD123在白血病干细胞(LSC)及多种白血病细胞表面高表达，与AML患者预后不良及复发密切相关。因此，CD123可作为AML治疗的潜在靶点。笔者拟就单克隆抗体、抗体-化药偶联物、化疗药物或者小干扰RNA(siRNA)的靶向递送系统，以及嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法等，对CD123靶向抑制剂及其疗法的研究最新进展和临床应用进行介绍，旨在为CD123靶向疗法的研发及其在AML治疗中的临床转化应用提供参考。

阿尔茨海默病是一种起病隐匿的神经退行性疾病,现有的治疗药物仅能延缓疾病进展,缓解症状.小干扰RNA通过切割编码靶基因的mRNA,显示出治疗阿尔茨海默病的潜力,但将小干扰RNA稳定递送至病灶需要克服诸多挑战.本文描述了阿尔茨海默病的病理机制、现有药物靶点、小干扰RNA疗法的优点与挑战、跨血脑屏障递送系统的研究进展、新型小干扰RNA递送系统和正在进行的阿尔茨海默病药物临床试验等,力求为用于阿尔茨海默病的小干扰RNA疗法的相关研究提供借鉴和参考.

目的:构建共载吲哚菁绿(indo cyanine green,ICG)和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-re-lated factor 2,Nrf2)-短干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的多功能纳米载药粒子,并探究其联合光热疗法与抗氧化抑制作用增效的光动力疗法协同对抗口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的体外作用与机制.方法:利用超声乳化法和静电力吸附作用制备基于聚氨基酯/聚乳酸-羟基乙酸共聚物且共载ICG和Nrf2-siRNA的纳米粒子PPI-siRNA.表征PPI-siRNA纳米粒子的形貌、粒径大小和分布、表面电位及其载药情况;评价PPI-siRNA纳米粒子对ICG和Nrf2-siRNA的胞内递送以及Nrf2-siRNA逃逸溶酶体吞噬的性能;通过检测舌鳞状细胞癌细胞SCC-25随激光照射的升温效应、热休克蛋白60表达和活性氧生成水平考察PPI-siRNA纳米粒子的光热和光动力性能;考察细胞内Nrf2及其调控的下游基因谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰亚基和谷氨酸-半胱氨酸连接酶的表达水平,从而探究Nrf2-siRNA助力光动力效应的作用机制;运用噻唑蓝比色法考察PPI-siRNA联合激光照射对SCC-25的细胞毒性作用.结果:PPI-siRNA纳米粒子呈形貌规则的球状结构,粒径约为180 nm,并成功共载ICG与Nrf2-siRNA;PPI-siRNA纳米粒子可以高效递送ICG和Nrf2-siRNA入胞,且可以确保Nrf2-siRNA逃逸溶酶体吞噬,从而发挥基因沉默作用;PPI-siRNA纳米粒子具备良好的光热和光动力性能,Nrf2-siRNA可以通过下调抗氧化蛋白和基因的表达显著提升光学疗法的抗肿瘤效率.结论:PPI-siRNA纳米粒子可以联合光热疗法与基因沉默作用增效的光动力疗法并有效抑制SCC-25的体外生长,在OSCC的临床治疗方面具有广阔的应用前景.

目的 设计一种基于外泌体高效递送的方法,将治疗性核酸递送到肝癌组织治疗原发性肝癌.方法 构建靶向肝癌的融合表达SP94和CD47的质粒,转染至HEK293T细胞后提取分离外泌体.通过透射电子显微镜及纳米颗粒跟踪分析、蛋白质印迹法等方法对外泌体进行鉴定.小鼠经尾静脉分别注射200 μgDiD标记的未修饰外泌体和SP94修饰的外泌体,采用小动物活体成像仪检测并分析外泌体对肝癌组织的靶向作用.将未修饰外泌体和CD47修饰的外泌体分别与巨噬细胞RAW264.7、小鼠肝癌细胞Hepa1-6共孵育,验证细胞对修饰后外泌体的吞噬情况.通过电穿孔法将Polo样激酶1(PLK1)siRNA加载到不同修饰的外泌体中,再与Hepa1-6细胞共孵育,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平.原发性肝癌模型小鼠经尾静脉注射加载PLK1 siRNA的修饰外泌体,系统研究并分析其对原发性肝癌的治疗效果.结果 SP94修饰增强了外泌体对肝癌组织的靶向作用,CD47修饰减少了外泌体被巨噬细胞吞噬.SP94和CD47双修饰外泌体递送PLK1 siRNA促进了肝癌细胞凋亡.在原发性肝癌模型小鼠中,SP94和CD47双修饰外泌体加载PLK1 siRNA能有效抑制小鼠肝癌结节的生长,延长小鼠生存期.结论 SP94和CD47双修饰外泌体可以高效靶向肝癌递送治疗性核酸PLK1 siRNA,有效抑制肝癌的生长.

近年来基于RNA干扰(RNA interference,RNAi)的基因治疗技术在肿瘤治疗方面引起广泛关注.在常规药物治疗无效的情况下,RNAi为癌症患者带来了新的希望.但是,由于小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在体内存在易降解、难递送等问题,极大地限制了其临床转化潜力.纳米载体以其独特的尺寸效应和多样的修饰策略,能够介导高效、靶向的RNA递送,以实现其基因沉默.本文综述了RNAi在基因治疗中的作用机制以及体内递送siRNA的不同载体,介绍了载体体内递送siRNA的主要障碍和作用靶点,并比较了不同载体在siRNA递送中的优势和不足,为新载体的设计提供借鉴,推动RNA干扰疗法向临床的转化.