目的 探讨不同时间高浓度氧对肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)内质网自噬与肺泡表面活性物质产生功能之间的关系.方法 将大鼠RLE-6TN细胞分为对照组(C组,21％O2常规培养72 h)、高氧H1、H2、H3、H4组(95％O2分别培养12、24、48、72 h).实时荧光定量PCR法检测内质网自噬受体ATL3、CCPG1、FAM134B、RTN3、SEC62的mRNA水平,Western blot法检测内质网自噬相关蛋白ATL3、CCPG1、FAM134B、RTN3、SEC62的水平,ELISA法检测各组二棕榈酰卵磷脂(DPPC)水平.结果 与C组相比,H1组ATL3、SEC62的mRNA水平、CCPG1的蛋白水平、DPPC 产量下降(P＜0.05),CCPG1、FAM134B、RTN3 的 mRNA 水平、ATL3、FAM134B、RTN3、SEC62 的蛋白水平显著下降(P 均＜0.01);H2 组 ATL3、CCPG1、FAM134B、RTN3、SEC62 的 mRNA 水平、ATL3、CCPG1、FAM134B、RTN3、SEC62的蛋白水平差异无统计学意义(P均＞0.05),DPPC产量增高(P＜0.05);H3、H4组ATL3、CCPG1、FAM134B、RTN3、SEC62 的 mRNA 水平、ATL3、CCPG1、FAM134B、RTN3、SEC62 的蛋白水平、DPPC 产量显著下降(P均＜0.01).与H1组相比,H2组CCPG1、FAM134B的mRNA水平、ATL3、RTN3的蛋白水平、DPPC产量显著增高(P＜0.01),SEC62的蛋白水平增高(P＜0.05);H3组ATL3、SEC62的蛋白水平显著下降(P＜0.01),RTN3的mRNA水平、RTN3的蛋白水平下降(P＜0.05);H4组ATL3的mRNA水平、CCPG1的蛋白水平下降(P＜0.05)、RTN3的mRNA水平、ATL3、RTN3、SEC62的蛋白水平显著下降(P＜0.01).与H2组相比,H3组、H4组ATL3、CCPG1、FAM134B、RTN3 的 mRNA 水平、ATL3、RTN3、SEC62 的蛋白水平、DPPC 产量显著下降(P均＜0.01);H4组 SEC62 的 mRNA 水平下降(P＜0.05);H3 组 CCPG1、FAM134B 的蛋白水平下降(P＜0.05);H4 组 CCPG1、FAM134B的蛋白水平显著下降(P＜0.01);与H3组相比,H4组ATL3、RTN3、SEC62的蛋白水平显著下降(P＜0.01);其余各组差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 高氧12 h AECⅡ内质网自噬水平、DPPC产量下降;高氧24 h AECⅡ内质网自噬水平恢复到基础值,DPPC产量达到峰值,48 h后内质网自噬水平、DPPC产量再次下降,72 h后AECⅡ内质网自噬水平、DPPC产量衰减仍保持较低水平,AECⅡ内质网自噬与其功能密切相关.

目的 制备雷公藤红素、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡA磺酸钠脂质体,并评价制备工艺和包封材料对其包封率的影响.方法 分别以薄膜分散法和逆向蒸发法制备3种成分脂质体,以50％大豆卵磷脂、80％蛋黄卵磷脂、92％大豆卵磷脂和复合磷脂(二棕榈酰磷脂酰胆碱与50％大豆卵磷脂比例5∶1)为包封材料,测定所得脂质体的平均粒径和多分散系数,再计算其包封率.结果 雷公藤红素和丹参酮ⅡA磺酸钠脂质体采用逆向蒸发法制备时的包封率均高于薄膜分散法,而且雷公藤红素高于丹参酮ⅡA磺酸钠,并分别以80％蛋黄卵磷脂和92％大豆卵磷脂包封时最高.丹参酮ⅡA脂质体采用薄膜分散法制备,并以50％大豆卵磷脂包封时的包封率最高,但远低于其他2种脂质体.结论 含有多氢键的脂溶性雷公藤红素和不含氢键的水溶性丹参酮ⅡA磺酸钠适合逆向蒸发法制备其脂质体,而无氢键的脂溶性丹参酮ⅡA适合薄膜分散法.

目的 探讨不同时间点应用肺表面活性物质(主要成份为二棕榈酰卵磷脂和结合蛋白)与经鼻持续气道正压通气(NCPAP)联合治疗对早产儿呼吸窘迫综合征(RDS)疗效的影响.方法 选取2013年1月至2016年8月于黄山市人民医院住院治疗的RDS早产儿100例,按随机数字表法分为观察组和对照组,每组50例.对照组给予NCPAP辅助通气,观察组在NCPAP辅助通气治疗的同时,应用气管插管复苏囊注入固尔苏(肺表面活性物质),依据接受治疗时间不同将观察组患儿分为早期亚组(出生8h内)和晚期亚组(出生8～12h).观察并比较各组患儿治疗前后血气分析结果、NCPAP参数及临床疗效.结果 观察组患儿治疗后血气分析、NCPAP参数及治疗有效率较对照组均有改善,差异有统计学意义(P＜0.05);早期亚组血气分析、NCPAP参数及治疗有效率改善情况均优于晚期亚组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 早期应用肺表面活性物质联合NCPAP治疗可显著提高早产儿RDS的疗效.

目的 制备F7热敏脂质体, 对其物理化学性质进行表征, 并考察其体外抗肿瘤活性.方法 以二棕榈酰磷脂酰胆碱、肉豆蔻酰溶血卵磷脂和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000为膜材, 采用pH梯度主动载药法制备F7热敏脂质体;HPLC法测定F7热敏脂质体包封率、载药量;差示扫描量热仪考察脂质体相变温度;原子力显微镜表征脂质体形态;利用透析方法检验脂质体的热敏释放;采用激光粒度仪考察脂质体粒径与电位的分布情况;MTT法测量F7及F7热敏脂质体细胞毒性;利用Design-expert软件优化F7热敏脂质体的冻干工艺.结果 F7热敏脂质体的包封率为 (97.56±0.22) ％, 载药量为 (1.51±0.01) ％;其相变温度为39.9℃, 呈电负性, 电位为 (-15.10±0.85) mV, 粒径为 (86.94±1.21) nm, 多分散系数为0.17±0.01.F7热敏脂质体与F7普通注射液相比, 对肺癌细胞H1299和乳腺癌细胞MCF-7具有更强的生长抑制作用, 且具有浓度依赖性.脂质体冻干后复溶, 状态良好, 包封率仍达95％, 粒径约为130 nm.结论 pH梯度主动载药法制备F7热敏脂质体包封率高, 稳定性好, 方法简便易行, 为后续F7制剂研发提供依据.

目的 为解决白藜芦醇口服生物利用度低的问题,研制白藜芦醇二棕榈酰卵磷脂(DPPC)脂质粉雾剂.方法 采用薄膜分散法制备白藜芦醇DPPC脂质体,冷冻干燥得粉雾剂.采用正交试验设计优化处方,并对其粒径、包封率、电位、体外释放及肺部沉积进行研究.采用肉汤稀释法进行体外抗菌活性评价并测定最低抑菌浓度.结果 DPPC与胆固醇的质量比3∶1、药物与DPPC的物质的量比1∶3、水化时间15min、甘露醇与DPPC质量比2∶1制备得到白藜芦醇DPPC脂质粉雾剂,其包封率为(69.8±1.6)％,载药量为(2.4±0.9)％,粒径为(191.5±4.5)nm,Zeta电位为(12.4±1.5)m V.粉雾剂的空气动力学粒径为(3.2±0.2)μm,体外肺部沉积率为28.1％.对金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、肺炎链球菌和铜绿假单胞菌进行体外抗菌活性评价,测得白藜芦醇原料药组对金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肺炎链球菌均无抗菌活性,而白藜芦醇DPPC脂质粉雾剂组对金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌有抗菌活性,最低抑菌浓度分别为4.0、2.0mg/mL.结论 制备的白藜芦醇DPPC脂质粉雾剂粒径小、分布均匀、稳定性良好,肺部沉积率高,体外对金黄色葡萄球菌和鲍曼不动杆菌有抗菌活性,有望成为替代传统抗生素治疗细菌性肺炎的有效制剂.

肺泡表面活性物质肺泡表面活性物质指由肺泡Ⅱ型上皮细胞分泌的一种复杂的脂蛋白,其主要成分为二棕榈酰卵磷脂(dipalmitoyl phosphatidylcholine,DPPC)和表面活性型蛋白质(surfactant protein,SP),前者约占60％以上,后者约占10％.分布于肺泡液体分子层表面,具有降低肺泡表面张力的作用,能维持大、小肺泡容量的相对稳定,阻止肺泡毛细血管中液体向肺泡内滤出.天然SP具有SP-A、SP-B、SP-C和SP-D 4种类型[1].其中大分子亲水性蛋白质SP-A和SP-D是宿主防御的C型凝集素家族成员.

研究矿物药青礞石对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)大鼠肺组织代谢物及代谢通路的干预情况.采用烟熏结合肺炎克雷伯菌感染的方法复制AECOPD痰热证大鼠模型.利用UPLC-Q-TOF-MS测定,通过SPSS 18.0、SIMCA 13.0等软件进行统计学处理,经文献查找以及在线数据库比对鉴定差异代谢物,分析可能的代谢通路.给药15 d对各组大鼠肺组织 样品进行PLS-DA分析,结果显示各组大鼠肺组织代谢轮廓图均能很好的分离,说明青礞石和氨茶碱对AECOPD大鼠肺部代谢轮廓起到了显著的干预作用,且青礞石代谢轮廓与正常组更接近,干预效果优于氨茶碱.最终鉴定出15种潜在的差异代谢物:植物鞘氨醇(phytosphingosine)、二氢鞘氨醇(sphinganine)、十四酰肉碱(tetradecanoylcarnitine)、L-棕榈酰肉碱(L-palmitoylc-arnitine)、反油肉碱(elaidic carnitine)、溶血卵磷脂 lysoPC[18∶2(9Z,12Z)]、溶血卵磷脂 lysoPC(16∶0)、溶血卵磷脂 lysoPC[18∶1(9Z)]、溶血卵磷脂 lysoPC(18∶0)、硬脂酸(stearic acid)、溶血卵磷脂 lysoPC(15∶0)、花生四烯酸(arachidonic acid)、二十二碳五烯酸(docosapentaenoic acid)、亚油酸(linoleic acid)、棕榈酸(palmitic acid).其中,青礞石能显著改善植物鞘氨醇、十四酰肉碱、L-棕榈酰肉碱、反油肉碱、lysoPC[18∶2(9Z,12Z)]、lysoPC(16∶0)、lysoPC[18∶1(9Z)]、硬脂酸、lysoPC(15∶0)、棕榈酸10种差异代谢物的水平(P＜0.05),且干预效果优于氨茶碱.代谢通路分析显示,可能影响的代谢通路有8条,其中最为重要的代谢通路(pathway impact＞0.1)有3条:亚油酸代谢(linoleic acid metabolism)、花生四烯酸代谢(arachidonic acid metabolism)和鞘脂类代谢(sphingolipid metabolism).青礞石对AECOPD大鼠肺组织相关代谢物及代谢通路具有明显的干预作用,且作用优于氨茶碱.