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脊髓DMT1亚硝基化修饰与瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏机制的关系
编辑人员丨1周前
目的:探讨脊髓二价金属离子转运体1(DMT1)亚硝基化修饰与瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏机制的关系。方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠40只,2~3月龄,体质量240~260 g,采用随机数字表法分为4组( n=10):对照组(C组)尾静脉输注生理盐水0.1 ml·kg -1·min -1 60 min;瑞芬太尼组(R组)尾静脉输注瑞芬太尼1.0 μg·kg -1·min -1 60 min;L-NAME组(C+L组)腹腔注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME 30 mg/kg,10 min后尾静脉输注生理盐水0.1 ml·kg -1·min -1 60 min;瑞芬太尼+L-NAME组(R+L组)腹腔注射L-NAME 30 mg/kg,10 min后尾静脉输注瑞芬太尼1.0 μg·kg -1·min -1 60 min。分别于静脉输注前24 h、输注结束后6、24和48 h(T 0~3)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。最后一次测定痛阈后麻醉状态下处死大鼠,取L 4~6脊髓标本,采用实时定量PCR法检测脊髓nNOS和DMT1 mRNA的表达;生物素转化法提取亚硝基化蛋白质,Western blot法检测nNOS、总体DMT1和亚硝基化DMT1的表达;分光光度法测定脊髓NO含量;原子吸收分光光度计法测定脊髓铁含量。 结果:与C组比较,R组T 1~3时MWT降低,TWL缩短,R组和R+L组脊髓nNOS及其mRNA和亚硝基化DMT1表达上调,NO和铁含量升高( P<0.05);C+L组各指标差异均无统计学意义( P>0.05);与R组比较,R+L组T 1~3时MWT升高,TWL延长,脊髓nNOS及其mRNA和亚硝基化DMT1表达下调,NO和铁含量降低( P<0.05);与C+L组比较,R+L组T 1~3时MWT降低,TWL缩短,脊髓nNOS及其mRNA和亚硝基化DMT1表达上调,NO和铁含量升高( P<0.05);各组脊髓DMT1 mRNA和总体DMT1表达比较差异均无统计学意义( P>0.05)。 结论:脊髓nNOS激活引起NO生成增加,介导DMT1亚硝基化修饰,可能与瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏的机制有关。
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编辑人员丨1周前
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工作场所空气中8种N-亚硝胺化合物测定的GC-MS/MS法
编辑人员丨1周前
目的:建立工作场所空气中N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基二乙胺、N-亚硝基甲基乙胺、N-亚硝基二丁胺、N-亚硝基正丙胺、N-亚硝基吗啉、N-亚硝基二苯胺和N-亚硝基吡咯烷8种N-亚硝胺化合物的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法。方法:于2023年1至8月,以ThermoSorb/N柱采集工作场所中空气中8种N-亚硝胺,用4 ml甲醇-二氯甲烷(体积比1∶1)溶液解吸,VF-624 ms毛细管色谱柱分离,多反应监测模式检测,外标法定量,并对方法的检出限和精密度等指标进行分析。结果:8种N-亚硝胺测定方法的线性范围为1.0~20.0 μg/L,相关系数0.999 3~0.999 9,方法检出限0.051~0.132 μg/L,最低定量浓度0.030~0.078 μg/m 3(以空气体积22.5 L,解吸液体积4.0 ml计),批内精密度2.05%~6.89%,批间精密度2.41%~8.26%,解吸效率67.20%~102.60%;样品在4 ℃条件下至少可保存7 d。 结论:GC-MS/MS测定工作场所空气中8种N-亚硝胺方法的灵敏度高、精密度好,可准确测定工作场所空气中8种N-亚硝胺含量。
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编辑人员丨1周前
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高温条件下盐酸雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺及其前体化合物二甲胺和亚硝酸盐研究
编辑人员丨3周前
目的 考察盐酸雷尼替丁原料药中的N-亚硝基二甲胺(NDMA)及其前化合物二甲胺(DMA)和亚硝酸盐(NO2-)在高温条件下含量变化.方法 盐酸雷尼替丁原料药分别置于有氧和无氧环境中,在40℃和60 ℃的条件下破坏5、10和30d.采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)、阳离子和阴离子色谱法,分别测定破坏后样品中NDMA、DMA和NO2-的含量.结果 建立的3种检测方法的专属性、灵敏度、线性、回收率和重复性均满足要求.在有氧和无氧环境中,60℃破坏的盐酸雷尼替丁样品中3种物质的含量均高于40℃;另外,在有氧条件下,3种物质的含量也明显高于相应的无氧条件,其中第30日,60℃有氧条件下NDMA、DMA和NO2-分别增长至1.92、55.50和44.76 μg·g-1.结论 温度和氧气是盐酸雷尼替丁产生NDMA及其前体化合物DMA和NO2-的重要因素;同时,间接验证盐酸雷尼替丁产生NDMA可能的机制为首先降解生成DMA和NO2-,并进一步反应生成NDMA.本研究可为盐酸雷尼替丁贮存条件设置和质量标准提升提供参考.
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编辑人员丨3周前
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基于4%中性甲醛固定肝组织的大鼠肝微核实验方法的建立与验证
编辑人员丨2024/7/20
目的 建立并验证基于4%中性甲醛固定肝组织制备肝细胞的大鼠肝微核实验(LMNT)方法(甲醛固定-LMNT法).方法 ①SD大鼠分为雌性和雄性组,然后分别随机分为溶剂对照组和肝微核阳性化合物N-亚硝基二乙胺(DEN)12.5 mg·kg-1组,每组5只,分别ig给予生理盐水和DEN,每天1次,连续14d后取肝组织,同时用胶原酶消化-LMNT法和甲醛固定-LMNT法检测微核化肝细胞数量和处于有丝分裂期肝细胞数,分别计算肝细胞微核率和有丝分裂指数,肝细胞微核率>0.07%判定为阳性结果.②雄性SD大鼠分为喹啉(30,60和120 mg·kg-1)组、N-亚硝基吡咯烷(NPYR,25,50和100 mg·kg-1)组、各自溶剂对照组(NPYR,去离子水;喹啉,玉米油)及阳性对照DEN(12.5 mg·kg-1)组,每组5~6只,连续ig 15 d.每日记录体重,实验结束取肝记录肝总重,计算肝系数.自动生化分析仪检测肝功能相关血清生化指标谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性和血清总胆红素(T-BIL)、直接胆红素(D-BIL)的水平.采用胶原酶消化-LMNT法和甲醛固定-LMNT法测定肝细胞微核率,用外周血微核实验和肝彗星实验评价喹啉和NPYR遗传毒性.结果 ①与各自溶剂对照组的肝细胞微核率(0.069%和0.030%)相比,甲醛固定-LMNT法测得的DEN组雄性大鼠肝细胞微核率为1.10%,雌性大鼠为0.82%,均显著升高(P<0.05);与各自溶剂对照组(0.060%和0.030%)相比,胶原酶消化法-LMNT法测得的DEN组雄性大鼠肝细胞微核率为1.45%,雌性大鼠为0.46%,均显著升高(P<0.05),判定为阳性.2种方法中雄性大鼠的肝细胞微核率均显著高于雌性(P<0.05).与各自溶剂对照组相比,2种方法测得的DEN组雄性和雌性大鼠肝细胞有丝分裂指数均无明显差异.②与溶剂对照组相比,NPYR 50和100 mg·kg-1组大鼠体重在ig第 7~14天显著降低(P<0.01),DEN组在ig第8~14天显著降低(P<0.01);喹啉120 mg·kg-1组大鼠在ig第4~14 天显著降低(P<0.01),DEN组在ig第10~14天显著降低(P<0.05).与溶剂对照组相比,NPYR 100 mg·kg-1组(P<0.01)和DEN组(P<0.05)的肝重和肝系数均显著降低;喹啉60和120 mg·kg-1组肝重(P<0.01)和肝系数(P<0.05)均显著增加.与溶剂对照组相比,DEN组大鼠血清T-BIL水平显著升高(P<0.01),NPYR 100 mg·kg-1组GPT、GOT活性和D-BIL、T-BIL水平均显著升高(P<0.01),NPYR 25,50 mg·kg-1和喹啉各剂量组则均无显著差异.甲醛固定-LMNT法测得的NPYR组肝细胞微核率较胶原酶消化-LMNT法略高,均判定为阳性;与溶剂对照组相比,2种方法测得的NPYR组肝细胞微核率均显著增加(P<0.05),喹啉组结果相当,均判定为阳性;2种方法测得的喹啉组肝细胞微核率均显著增加(P<0.05).2种方法测得的NPYR和喹啉组肝细胞微核率相关性较好(R2分别为0.8614和0.9279).NPYR组外周血微核实验为阴性,彗星实验结果为阳性;喹啉组外周血微核实验和彗星实验结果均为阴性.结论 初步建立并验证了甲醛固定-LMNT法,且该方法检测肝致癌物的灵敏度与胶原酶-LMNT法相近.
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编辑人员丨2024/7/20
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平胃胶囊对恶变后GES-1细胞氧化应激的抑制作用及机制研究
编辑人员丨2024/3/16
目的:观察平胃胶囊对亚硝酸胺类化合物N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-ni-trosoguanidine,MNNG)诱导的胃癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer,PLGC)细胞模型的影响,并初步探讨其作用机制.方法:制备空白血清和平胃胶囊含药血清备用;MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞系GES-1制备PLGC细胞模型,采用倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光法检测增殖细胞相关抗原Ki67的表达水平,进行模型评价.CCK-8法筛选含药血清最佳干预浓度及时间;采用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;ELISA检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用相关试剂盒检测超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性;采用新型荧光探针JC-10检测细胞线粒体膜电位的变化;采用实时荧光定量PCR检测Ki67和黑色素瘤分化相关基因7(melanoma differentiation-associated gene-7,MDA-7)的mRNA表达水平;采用Western blot法测定Ki67、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和MDA-7的蛋白表达水平.结果:与正常组相比,模型组和空白血清组ROS和MDA含量显著升高(P<0.01),SOD和GSH-Px的活性显著降低(P<0.01),线粒体膜电位显著下降(P<0.01),Ki67和IL-6蛋白表达显著升高(P<0.01),MDA-7蛋白表达显著下降(P<0.01);与空白血清组相比,模型组ROS和MDA含量,SOD和GSH-Px活性,Ki67和MDA-7 mRNA表达水平,Ki67、IL-6和MDA-7蛋白表达水平,以及线粒体膜电位均无显著差异(P>0.05);与空白血清组相比,平胃胶囊含药血清组中ROS和MDA含量显著降低(P<0.01),SOD和GSH-Px活性显著上升(P<0.05),线粒体膜电位显著升高(P<0.01),Ki67和IL-6蛋白表达水平显著下降(P<0.01),MDA-7的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01).结论:平胃胶囊可显著减轻MNNG诱导的胃黏膜上皮细胞氧化应激损伤和炎症反应,调控促癌基因和抑癌基因的表达,从而发挥防治PLGC的作用.
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编辑人员丨2024/3/16
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一氧化氮与肺动脉高压及基于一氧化氮信号通路的肺动脉高压治疗药物研究进展
编辑人员丨2023/11/25
一氧化氮(NO)是一种重要的血管舒张因子,具有调节血管平滑肌舒张、抑制血管平滑肌细胞增殖及减少血小板聚集和血栓形成的功能,参与调节肺动脉高压的发生发展,改善肺动脉高压.为实现NO持续、受控释放和靶点特异性,大量研究致力于开发纳米载体系统递送NO供体,用于肺动脉高压的日常给药治疗.本文概述了体内NO来源及其舒血管作用机制,总结了目前针对NO信号通路的3种肺动脉高压靶向治疗药物(磷酸二酯酶5抑制剂、鸟苷酸环化酶激动剂和吸入性NO),介绍了代表性的NO供体(如有机硝酸盐、金属亚硝基化合物、亚硝酸盐和N-重氮鎓二酸盐)以及治疗肺动脉高压的纳米载体制剂(直接递送NO气体的纳米粒子、基于亚硝酸盐的NO递送系统和基于N-重氮鎓二酸盐的NO递送系统)的研究进展.
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编辑人员丨2023/11/25
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微生物来源的缩肽类化合物enopeptin A的研究(Ⅰ):菌种选育及发酵工艺研究
编辑人员丨2023/8/6
Enopeptin A是一种缩酚酸肽类化合物,具有抗菌、抗病毒等生物活性.以本实验室保藏的链霉菌SIIA-H7264为出发菌,通过紫外(Uy)照射、甲基磺酸乙酯(EMS)诱变、亚硝基胍(NTG)诱变以及常压室温等离子体(ARTP)诱变,获得l株高产突变株A-21,其发酵产物Enopeptin A的产量较出发菌株提高了3倍.对发酵条件、发酵培养基组分进行单因素及响应面优化试验,最终EnopeptinA的产量达到1750μg/mL,较初始工艺提高了2.98倍.
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编辑人员丨2023/8/6
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胃上皮细胞经亚硝基化合物MNNG短时刺激后细胞形态、功能特性的变化
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察胃上皮细胞GES-1经亚硝基化合物N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)短时间刺激后细胞所发生形态和功能特性的变化.方法 将MNNG刺激GES-1细胞0、4、8、12 h后,应用显微镜观察细胞形态学变化,平板克隆形成实验观察细胞增殖能力,Transwell迁移实验观察细胞迁移能力(穿膜细胞数),Western blotting法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin和N-cadherin.结果 GES-1细胞随着MNNG刺激时间延长,细胞边缘变得不清晰,细胞变细长、变大.GES-1细胞经MNNG刺激0、4、8、12 h时,其细胞克隆数分别为(82.00±1.16)、(89.67±3.28)、(81.33±1.76)、(85.67±1.45)个,各时点GES-1细胞克隆数比较差异无统计学意义;穿膜细胞数分别为(83.00±2.89)、(149.00±5.20)、(265.70±6.06)、(491.00±8.74)个,刺激时间越长穿膜细胞数越多(P均<0.05);随着MNNG刺激时间延长,GES-1细胞E-cadherin表达逐渐降低而N-cadherin表达逐渐升高(P均<0.05).结论 以亚硝基化合物MNNG短时刺激能使胃上皮细胞的形态和迁移能力发生一定变化,并且促使胃上皮细胞发生EMT.
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编辑人员丨2023/8/6
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铁皮石斛水提物对胃癌前病变作用的尿液代谢组学分析
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究铁皮石斛水提物对胃癌前病变大鼠尿液内源性代谢物的影响.方法:将Wistar大鼠随机分为正常组、铁皮石斛水提物(DOE)组、模型组及N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)+DOE低、中、高剂量组.DOE组和MNNG+DOE低、中、高剂量组大鼠预防性给予DOE2周后开始给予自由饮100 mg·L-1 MNNG水溶液,边给药边造模,并在前6周,每3d灌胃给予10% NaC1 1 mL诱导.造模7个月后代谢笼收集大鼠尿液并处死大鼠取胃组织.采用UPLC-Q-TOF-MS检测大鼠尿液代谢谱的变化.结果:对比各组胃组织病理结果发现DOE能够减少肠化生,使病理程度停留在轻度至中度异型增生和轻度肠化生阶段.在正、负离子模式下分别筛选出6个和15个差异性标志化合物;代谢产物主要与卟啉代谢、色氨酸代谢、叶酸和蝶呤生物合成代谢、半乳糖代谢和花生四烯酸代谢有关,其中以卟啉代谢最为相关.结论:DOE能够阻断胃癌前病变的恶化,其机制可能与卟啉代谢、色氨酸代谢、叶酸和蝶呤生物合成代谢、半乳糖代谢和花生四烯酸代谢有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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大鼠体内多终点实验评价N-亚硝基二乙胺的遗传毒性研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:采用N-亚硝基二乙胺(DEN)作为阳性化合物建立大鼠肝微核实验方法,同时结合彗星实验及外周血微核实验终点于同一个实验中,综合评价其遗传毒性.方法:实验设置阴性对照组(生理盐水)、DEN低(3.13 mg·kg-1)、中(6.25 mg· kg-1)、高(12.5 mg·kg-1)剂量组、Comet阳性对照组(EMS,100mg· kg-1)共5个给药组,每组5只雄性SD大鼠,连续ig给药,在d 14给药后约21 h进行末次给药,在末次给药后约3h进行外周血采样,进行微核实验,采用流式细胞术测定网织红细胞微核率,并麻醉动物进行彗星和肝微核实验肝脏的取样、处理,最后分别通过Comet Assay软件和荧光显微镜获得结果.结果:肝微核实验中,中、高剂量DEN染毒组肝脏的微核率与阴性对照组相比均显著增加,且呈剂量反应关系(r=0.98,P<0.01);彗星实验中,所有DEN染毒组肝脏的尾DNA百分含量与阴性对照组相比均显著增加,且呈剂量反应关系(r =0.91,P<0.05);外周血微核实验中,所有DEN染毒组与阴性对照组相比,外周血网织红细胞微核率均没有明显的升高.结论:本实验初步建立了大鼠肝微核重复剂量实验方法,在同一实验中进行肝微核实验、外周血微核实验以及彗星实验多终点的联合检测,不仅可节省实验动物数量,而且可提高实验效率,大大增加遗传毒性实验结果对致癌性的预测性.
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编辑人员丨2023/8/6
