目的:探讨基于二氢卟吩e6（chlorin e6，Ce6）的光动力疗法（photodynamic therapy，PDT）联合抗生素替硝唑（tinidazole，TNZ）对牙周炎大鼠的体内外抑制作用。方法:采用正畸钢丝结扎法对18只SD大鼠建立牙周炎模型，建模成功后按随机数字表法随机分为以下6组（每组3只）：阳性对照组、Ce6 组、TNZ 组、混合物Ce6/TNZ 组、Ce6加光照（Ce6+L）组、Ce6/TNZ加光照（Ce6/TNZ+L）组；采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）实验考察Ce6（质量浓度为0~20 mg/L）、TNZ（质量浓度为0~16.6 mg/L）及其混合物Ce6/TNZ对成纤维细胞L929的毒性；采用荧光探针法检测Ce6、TNZ和Ce6/TNZ及结合635 nm激光照射（功率0.5 W/cm 2，时间5 min）对牙周炎大鼠牙菌斑生物膜中活性氧生成的触发效应，评价Ce6的光动力性能；采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）实验和活菌/死菌染色法考察各种治疗的体外抗菌性能，并计算Ce6介导的PDT联合TNZ的合用指数（combination index，CI）。采用凋亡试剂盒流式检测各种治疗对鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的诱导效应。各组大鼠局部给药后行激光照射（功率0.5 W/cm 2，时间5 min），治疗结束后用显微CT评价PDT联合TNZ对牙周炎大鼠牙槽骨吸收的抑制效应。 结果:Ce6、TNZ、Ce6/TNZ在预设浓度范围内L929细胞存活率均在90%以上。激光照射后，Ce6与Ce6/TNZ的牙菌斑生物膜中呈现出非常显著的绿色荧光，触发了菌斑内活性氧大量生成；但在不同浓度下，Ce6/TNZ的牙菌斑存活率分别为（85.4±5.5）%、（76.0±8.9）%、（61.7±0.6）%、（56.3±2.6）%、（43.5±0.6）%，均显著低于Ce6和TNZ组（ P<0.01），且各药物浓度点对应的CI<1.0，具有显著的协同效应。Ce6+L与Ce6/TNZ+L具有显著强于Ce6与Ce6/TNZ的细胞凋亡诱导活性（ P<0.01）。牙周炎大鼠体内，Ce6/TNZ联合激光照射能有效抑制牙槽骨的吸收，牙槽骨体积、骨体积分数分别为（1.49±0.07）mm 3和（47.08±0.71）%，颊、腭侧釉质牙骨质界至牙槽嵴顶距离分别减小至（2.13±0.07）和（1.94±0.10）mm。 结论:基于Ce6的PDT联合抗生素TNZ对牙周炎大鼠有协同治疗作用，能有效杀伤牙菌斑，诱导巨噬细胞凋亡，抑制牙槽骨吸收。

目的:建立并优化人冠状病毒NL63参考株(HCoV-NL63-NC_005831)的体外富集方法。方法:以恒河猴肾细胞系(LLC-MK2)培养HCoV-NL63，以离心力135 000× g、分别离心病毒培养上清4 h、6 h、8 h、10 h和12 h以富集病毒，并以商品化PEG沉淀试剂盒富集方法作为对照。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、半数组织培养感染剂量(TCID 50)和空斑实验对原始病毒液、富集病毒液分别进行病毒核酸和病毒生物活性定量检测，评价病毒富集效果；通过透射电镜负染观测病毒富集前后的形态。 结果:经层超速离心法及经PEG沉淀法分别进行体积100∶1富集处理，两种方法获得的富集病毒液相较于原液的病毒核酸浓度及活病毒浓度均有提高( P<0.001)。超速离心方法富集前后，电镜下观察到的病毒颗粒呈正常的负染形态；4 h、6 h、8 h、10 h和12 h超速离心后活病毒浓度平均分别是原病毒液的(7.35±1.62)倍、(13.98±1.71)倍、(36.36±10.41)倍、(48.16±9.38)倍、(54.26±7.02)倍，PEG沉淀后活病毒浓度是原病毒液的(3.39±0.16)倍，经超速离心法获得的富集病毒液的核酸浓度及活病毒浓度显著高于PEG沉淀法( P<0.05)；8 h、10 h、12 h超速离心后病毒浓度显著高于4 h和6 h( P<0.05)，但8 h、10 h、12 h之间病毒含量差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:超速离心法相较于商品化的PEG沉淀法能更有效富集HCoV-NL63病毒；离心力为135 000× g时，选择8 h的超离时间可获得较优的体外富集效果。

目的:探讨miRNA-205在慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）患者血管钙化中的作用及诊断价值。方法:该研究分为体外细胞实验和回顾性队列研究。采用大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外实验，茜素红染色法、钙含量检测血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）的钙化情况，碱性磷酸酶检测试剂盒测定碱性磷酸酶活性，Western印迹检测VSMCs成骨转录因子Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2，Runx2）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及平滑肌22α蛋白（smooth muscle 22α，SM-22α）的蛋白表达水平，实时荧光定量PCR检测VSMCs中miRNA-205和Runx2的表达含量。双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-205与Runx2的靶向关系。回顾性选择2020年6月至2021年1月河北医科大学第四医院肾内科的CKD 3～5期非透析患者，并按照冠状动脉钙化积分（coronary artery calcium score，CACs）将患者分为无钙化组（CACs=0）、轻中度钙化组（0400）。采用Spearman相关分析法评价血清miRNA-205、Runx2与CKD患者血管钙化的相关性，Logistic回归模型及受试者工作特征曲线分析miRNA-205预测CKD患者血管钙化的价值。结果:（1）与对照组相比，高磷组VSMCs钙结节较多，钙含量、碱性磷酸酶活性、Runx2蛋白表达均显著较高，α-SMA、SM-22α蛋白及miRNA-205表达水平均较低（均 P<0.05）。过表达miRNA-205时，VSMCs钙化减轻，α-SMA和SM22α蛋白表达水平均升高，Runx2蛋白表达水平降低（均 P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，miRNA-205-5p过表达后野生型Runx2 3’端非编码区质粒荧光素酶活性降低。（2）纳入CKD患者80例，年龄（57.50±14.93）岁，其中男性49例（61.3%）。无钙化组（ n=26）、轻中度钙化组（ n=30）和重度钙化组（ n=24）患者miRNA-205和Runx2表达水平比较结果显示，钙化程度越高，miRNA-205表达水平越低，Runx2 mRNA表达水平越高（均 P<0.05）。血清miRNA-205与CACs呈负相关（ r=-0.50， P<0.01），Runx2与CACs呈正相关（ r=0.55， P<0.01）。多因素Logistic回归分析结果显示，miRNA-205（ OR=0.451，95% CI 0.122～0.873）是CKD患者发生血管钙化的独立影响因素。miRNA-205和miRNA-205联合Runx2预测血管钙化的受试者工作特征曲线下面积分别为0.796（95% CI 0.697～0.859）和0.924（95% CI 0.866～0.982）。 结论:miRNA-205通过靶向Runx2负向调控VSMCs成骨样表型转化进而抑制血管钙化，有望成为早期诊断CKD患者血管钙化的生物标志物。

B型利钠肽（BNP）及N末端B型利钠肽前体（NT-proBNP）是心脏功能生物标志物，同时也是心力衰竭诊断与鉴别诊断、病情严重程度及预后评估的首选生物标志物。但随着临床研究不断深入，以及新型心力衰竭治疗药物的广泛应用，BNP/NT-proBNP的实验室检测和临床应用面临诸多问题需进一步达成共识：（1）BNP和NT-proBNP，哪个更“好用”？是否需要同时开展BNP和NT-proBNP检测？（2）BNP/NT-proBNP体外稳定时间是否与其体内半衰期相同？（3）BNP或NT-proBNP各检测平台间的一致性如何？BNP与NT-proBNP检测结果是否可以相互换算？（4）影响BNP/NT-proBNP检测的因素众多，如何保证BNP/NT-proBNP检验质量？如何开展性能验证？（5）如何标准化报告BNP/NT-proBNP检测结果？解释BNP/NT-proBNP检测结果时需要考虑哪些影响因素？（6）是否需要建立中国人群BNP/NT-proBNP参考区间及医学决定水平？（7）排除和诊断心力衰竭的BNP/NT-proBNP界值是否适用于射血分数保留的心力衰竭？评估心力衰竭预后的BNP/NT-proBNP目标值是多少？预防心力衰竭的BNP/NT-proBNP干预界值是多少？如何确定心力衰竭患者BNP/NT-proBNP监测频率？（8）肾功能不全、肥胖等患者排除和诊断心力衰竭的BNP/NT-proBNP界值如何确定？（9）BNP/NT-proBNP均可用于奈西立肽、沙库巴曲/缬沙坦等新型心力衰竭治疗药物的疗效评价及相关患者的预后评估吗？（10）除心力衰竭外，BNP/NT-proBNP还可应用于哪些疾病？鉴于此，中国医师协会检验医师分会心血管专家委员会组织国内检验专家以及临床专家撰写了本共识，针对上述10个关键问题，从检验和临床两个角度分别阐述了BNP/NT-proBNP最新研究进展和国内现阶段应用要求，用以指导和规范BNP/NT-proBNP实验室检测与临床应用。

目的:制备靶向肿瘤血管生成的MR/CT双模态纳米探针t金@谷胱甘肽@钆(tAu@GSH@Gd)，探讨其性能及用于活体MR/CT成像的潜能。方法:以GSH为模板包载Au和Gd原子，共价偶联靶向多肽环状天冬酰胺－甘氨酸－精氨酸(cNGR)构建纳米探针tAu@GSH@Gd。建立荷乳腺癌(EMT－6)BALB/c小鼠皮下移植瘤模型30只，分为空白对照组(生理盐水)、对照组(Au@GSH@Gd纳米粒子)和实验组(tAu@GSH@Gd纳米探针)，每组10只，经尾静脉给药后于不同时间点行MR、CT成像及生物分布研究，根据小鼠肿瘤部位及主要脏器相对MR信号值与相对CT值评价成像效果和生物分布。成像实验后，取出小鼠肿瘤组织进行银染，研究Au@GSH@Gd纳米粒子及tAu@GSH@Gd纳米探针在肿瘤血管生成部位的聚集。2组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:tAu@GSH@Gd纳米探针水合粒径为(6.40±0.22) nm，T 1弛豫效率为(36.91±0.07) mmol·L －1·s －1，体外MR/CT成像效果良好。荷瘤小鼠注射tAu@GSH@Gd纳米探针后2 h，肿瘤MR/CT成像均明显强化，24 h达峰值，相对MR信号值由给药前的1.04±0.12增至1.84±0.26( t＝12.61， P＝0.006)，相对CT值由给药前的1.01±0.04增至1.95±0.05( t＝15.34， P＝0.004)。对照组小鼠给药后16 h，肿瘤强化达峰值，相对MR信号值为1.50±0.06，相对CT值为1.53±0.10，均低于实验组(1.84±0.26和1.95±0.05； t值：5.35和16.46，均 P<0.05)。生物分布结果显示，大部分tAu@GSH@Gd纳米探针经肾代谢。组织银染验证了该纳米探针对肿瘤血管生成的靶向作用。 结论:制备的tAu@GSH@Gd纳米探针具有肿瘤血管生成靶向和MR/CT双模态成像功能，为肿瘤血管生成的影像学评估提供了新的设计理念和基础。

目的:系统评价剖宫产史对体外受精-胚胎移植（ in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET）妊娠结局的影响。 方法:计算机检索PubMed、Web of Science、Cochrane Library、Embase、Ovid数据库、万方数据库、中国期刊全文数据库、维普中文科技期刊数据库及中国生物医学文献数据库，搜索关于剖宫产史患者进行IVF-ET助孕的文献，检索时间为建库至2022年8月。经文献筛选及资料提取后，采用Stata16.0软件进行meta分析。结果:纳入符合标准的文献共20篇，患者24 753例。剖宫产组患者IVF-ET的种植率、临床妊娠率及活产率显著低于顺产组降低（ OR=0.79，95% CI：0.66~0.95， P=0.013； OR=0.72，95% CI：0.63~0.83， P<0.001； OR=0.73，95% CI：0.64~0.83， P<0.001），而早期流产率高于顺产组，差异均有统计学意义（ OR=1.18，95% CI：1.07~1.30， P=0.001）。亚组分析结果显示，剖宫产后切口憩室（previous cesarean scar defect，PCSD）患者的种植率、临床妊娠率及活产率比顺产组显著降低（ OR=0.47，95% CI：0.31~0.73， P=0.001； OR=0.47，95% CI：0.30~0.72， P=0.001； OR=0.41，95% CI：0.26~0.65， P<0.001），而早期流产率显著增加（ OR=2.38，95% CI：1.12~5.09， P=0.023）。 结论:剖宫产史显著降低IVF-ET的种植率、临床妊娠率及活产率，增加早期流产率，且可能与PCSD相关。受纳入研究的质量和数量的限制，上述结论还需要更多大样本、高质量的研究予以验证。

目的:构建患者来源腮腺多形性腺瘤（PA）类器官模型，并对其组织学、相关标志物和功能进行初步表征。方法:收集大连大学附属中山医院口腔颌面外科术中取材新鲜肿瘤组织标本，采用头颈部肿瘤类器官培养体系进行体外培养，构建腮腺PA类器官。观察PA类器官的体外生长情况并进行光镜拍摄。对培养成功的类器官进行传代和冻存，并对冻存的PA类器官进行复苏再培养，观测其活性和PA类器官再形成能力。对比患者来源组织，对PA类器官进行组织学表征，相关标志和功能蛋白进行表征与检测，评价PA类器官对来源组织的复现性。结果:构建的腮腺PA类器官形成紧实致密球状结构，HE染色提示类器官与其来源组织形态相似，免疫组化可见类器官及其来源肿瘤组织钙调蛋白、细胞角蛋白7、上皮膜抗原胞质阳性，提示类器官与其来源组织的病理学特征一致；PA类器官过碘酸希夫（PAS）染色及淀粉酶消化后PAS染色呈阳性，阳性着色位于类器官球体内部及外周，提示PA类器官具有类似于腮腺的分泌功能。结论:成功构建患者来源PA类器官，该模型在组织形态和标志物上可高度复现来源组织情况，并具有黏液分泌的生物学功能，是研究腮腺肿物发生发展的良好体外模型。

目的:构建丝素蛋白（SF）、细菌纤维素（BCNR）、羟基磷灰石（HAp）复合骨再生支架并评价其促成骨活性的价值。方法:将HAp颗粒、BCNR和骨形态发生蛋白2（BMP2）依次加入SF水溶液中，搅拌均匀后倒入不同大小的模具，-25 ℃下处理24 h，冷冻成型，通过冻干机将复合支架冻干。将SF与BCNR不同质量比的复合支架设置为A组（2∶1）、B组（4∶1）、C组（6∶1），将未加入BMP2的无活性复合支架设置为D组。扫描电镜检测支架的表面形貌和孔隙结构；压汞仪检测支架的孔隙率；万能材料试验机压缩支架，获得应力-应变曲线，分析支架的压缩强度和杨氏模量。将永生化小鼠胚胎成纤维细胞（iMEF）接种到A组、B组、C组及D组复合支架上。细胞接种4、8 d后，细胞活/死染色检测各组活细胞和死细胞比例；细胞计数试剂盒8（CCK-8）实验检测各组细胞的增殖活性；碱性磷酸酶（ALP）染色检测各组染色阳性细胞；ALP活性检测观察各组细胞的ALP活性。选取15只雌性SD大鼠，构建大鼠肌袋异位成骨模型，植入不同SF与BCNR质量比的复合支架及未加入BMP2的无活性复合支架，分别为A′组（2∶1）、B′组（4∶1）、C′组（6∶1）和D′组，另设假手术组，每组3只。假手术组在切开皮肤、钝性分离股四头肌肌肉，于肌肉中形成肌袋后，仅缝合肌袋及皮肤，不植入支架，其他四组在肌袋内植入对应的支架，并缝合肌袋及皮肤。术后2、4周行X线片检查，观察各组骨形成情况。术后4周，收集植入的支架与组织复合物，进行病理组织切片、HE染色和Masson 染色，观察各组成骨情况。另对组织切片进行免疫组化染色，观察各组成骨标志物Ⅰ型胶原蛋白（COL1）和骨桥蛋白（OPN）的表达情况。结果:扫描电镜显示，相较于A组和C组，B组片层结构和微孔结构更加规则、均匀；孔隙率分析结果表明，B组和C组孔隙率分别为（89.752±1.866）%和（84.257±1.013）%，均高于A组的（81.171±1.268）%（ P<0.05或0.01），而C组孔隙率低于B组（ P<0.01）。力学性能检测结果显示，B组和C组压缩强度分别为（0.373±0.009）MPa和（0.403±0.017）MPa，均高于A组的（0.044±0.003）MPa（ P<0.01），B组和C组杨氏模量分别为（7.413±0.094）MPa和（9.515±0.615）MPa，均高于A组的（1.881±0.036）MPa（ P<0.01），而C组压缩强度和杨氏模量均高于B组（ P<0.05或0.01）。细胞活/死染色结果显示，细胞接种4 d后，B组死细胞明显少于A组、C组和D组；细胞接种8 d后，B组活细胞最多，死细胞最少。CCK-8实验结果显示，细胞接种4 d后，A组和B组细胞增殖活性分别为0.474±0.009和0.545±0.018，均高于D组的0.394±0.016（ P<0.01），C组细胞增殖活性为0.419±0.005，与D组差异无统计学意义（ P>0.05），而A组和C组细胞增殖活性均低于B组（ P<0.01）；细胞接种8 d后，B组细胞增殖活性为1.290±0.021，高于D组的1.047±0.011（ P<0.01），C组细胞增殖活性为0.794±0.032，低于D组（ P<0.01），A组细胞增殖活性为1.086±0.020，与D组差异无统计学意义（ P>0.05），而A组和C组细胞增殖活性均低于B组（ P<0.01）。ALP染色结果显示，细胞接种4、8 d后，相较于D组，A组、B组和C组有更多的阳性细胞，B组阳性细胞多于A组和C组。ALP活性检测结果显示，细胞接种4 d后，A组、B组和C组细胞ALP活性分别为1.399±0.071、1.934±0.011、1.565±0.034，均高于D组的0.082±0.003（ P<0.01），而A组和C组细胞ALP活性均低于B组（ P<0.01）；细胞接种8 d后，A组、B组和C组细胞ALP活性分别为2.602±0.055、3.216±0.092、2.145±0.170，均高于D组的0.101±0.001（ P<0.01），而A组和C组细胞ALP活性均低于B组（ P<0.01）。X线片检查结果显示，术后2周，假手术组、D′组、A′组和C′组均无明显骨形成，而B′组有明显骨形成；术后4周，A′组、B′组和C′组均有明显骨形成，B′组骨形成明显多于其他两组，而假手术组和D′组均无明显骨形成。HE染色和Masson染色结果显示，术后4周，B′组形成大量均匀分布的新生骨组织，而A′组和C′组只在局部有少量新生骨组织，D′组仅有部分组织长入，且无明显新生骨组织，B′组形成的新生骨组织的成熟度比A′组和C′组更高。免疫组化染色结果显示，B′组COL1和OPN阳性染色均较A′组和C′组更多。COL1和OPN表达强度分析结果显示，A′组、B′组和C′组COL1表达强度分别为2.822±0.384、22.810±2.435、12.480±0.912，OPN表达强度分别为1.545±0.081、5.374±0.121、2.246±0.116，B′组和C′组COL1、OPN表达强度均高于A′组（ P<0.01），而C′组COL1和OPN表达强度均低于B′组（ P<0.01）。 结论:基于SF、BCNR和HAp成功构建复合骨再生支架，其中SF和BCNR质量比为4∶1的复合支架具有均匀孔隙结构、高孔隙率、良好的力学性能和生物相容性、优异的体外促成骨性能，还具有优异的骨诱导性和骨传导性。

目的:探讨一氧化氮（Nitric Oxide，NO）缓释二氧化硅纳米颗粒（简称NO缓释剂）对内镜生物膜的清除效果及其临床应用评价。方法:选择院内临床使用中的消化内镜160件，随机分为两组：清洗剂组80件，采用清洗剂对内镜进行消毒处理；NO组80件，采用NO缓释剂对内镜进行消毒处理。另建模型组，采用铜绿假单胞菌生物膜模型，用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）处理，作为对照。先在体外层面，构建内镜管腔铜绿假单胞菌生物膜模型，经NO缓释剂处理后采用扫描电镜观察生物膜微结构，采用活菌计数法分析NO缓释剂对生物膜细菌的清除效果，再在临床层面，通过分析清洗后临床内镜的蛋白残留测定、菌落计数及ATP生物荧光检测评价NO缓释剂对内镜的实际消毒效果。结果:扫描电镜观察，模型组生物膜完整，NO组和清洗剂组生物膜表面可见散落杆菌。平均标准菌落数，与模型组［（4.86±2.67）×10 6菌落形成单位（colony-forming units，CFU）/mL］比，NO组［（1.37±0.61）×10 4CFU/mL］和清洗剂组［（1.31±0.21）×10 5CFU/mL］均显著降低（清洗剂组比模型组， P=0.009；NO组比模型组， P=0.008），且NO组比清洗剂组更低，组间差异有统计学意义（清洗剂组比NO组， t=9.53， P=0.000 6）。临床消化内镜层面，残留蛋白，NO组处理前后分别为（8.03±1.47）mg/mL、（0.50±0.37）mg/mL，清洗剂组处理前后分别为（8.01±1.51）mg/mL、（0.91±0.52）mg/mL，各组处理前后比较差异有统计学意义（ P<0.01），且NO组降低幅度更大。临床内镜分别经NO缓释剂与清洗剂处理，NO组与清洗剂组的消毒在合格范围内，但NO组的ATP生物荧光值［（78.56±42.59）RLU］、蛋白残留量［（0.50±0.37）mg/mL］与菌落计数量［（7.55±4.56）CFU］均显著低于清洗剂组［（120.80±54.00）RLU，（0.91±0.52）mg/mL，（11.50±4.75）CFU］，差异均有统计学意义（ P均<0.01）。 结论:NO缓释剂能够有效清除内镜生物膜，提高内镜消毒效果，可能对改善患者的诊疗效果及预后具有重要意义。

在体-离体生物感受细胞模型采用在体暴露评估、离体结局分析以及系统环境关键组分筛选的方法，评估环境污染物通过影响机体内环境稳态而导致的健康效应和毒作用机制。该模型整合了人群现场的真实暴露与实验室细胞分子机制研究，结合了体外和体内模型的优势，弥补了单一的毒理学评价模型的不足，从宏观人群研究和微观机制探索之间的介尺度层面，为环境污染物毒性测试和评价提供了新的视角和方法。