-
人脐带间充质干细胞通过GDF-15/FOXO3a治疗小鼠卵巢功能不全的研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)改善卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)小鼠的卵巢损伤及机制.方法:采用足底注射透明带3多肽(zona pellucida 3 peptide,pZP3)方法构建POI小鼠模型,将小鼠分为对照组、佐剂对照组、pZP3组和hUC-MSCs组,每组10只.以阴道涂片监测动情周期、以酶联免疫吸附测定检测血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和雌二醇(estradiol,E2)水平,以HE染色观察卵巢组织学,以蛋白质印迹(Western blotting)检测叉头框转录因子O3a(forkhead box O3a,FOXO3a)、p-FOXO3a、p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Bax表达水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测 POI 的标志物骨形态发生蛋白 15(bone morp hogenetic protein 15,BMP15)、抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、WNT、卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)以及促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β的表达水平,以RNA-seq检测生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)的表达水平.通过环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建体外模型.结果:①造模6周后,与对照组相比,pZP3组和hUC-MSCs组动情周期出现紊乱,且血清FSH水平升高,血清E2水平降低,表明模型构建成功.②相较于对照组,pZP3组闭锁卵泡增加,原始卵泡数目降低,hUC-MSCs干预后小鼠原始卵泡比例和数目均高于pZP3组(P<0.05).③与对照组相比,pZP3组卵巢中凋亡蛋白p53、Bax表达水平上调,hUC-MSCs干预后小鼠凋亡蛋白p53、Bax表达较pZP3组下调(均P<0.05);pZP3组体内Caspase-3变化与对照组差异无统计学意义(P>0.05).pZP3组炎症因子IL-1β、TNF-α表达上调,hUC-MSCs干预小鼠的IL-1β、TNF-α表达较pZP3组显著下调(均P<0.05).@pZP3组体内Treg细胞数量降低(P<0.01),hUC-MSCs干预后小鼠Treg细胞数量较pZP3组升高(P<0.000 1).pZP3组卵巢组织中BMP15、AMH、WNT以及FSHR的mRNA表达水平较对照组降低,hUC-MSCs干预后小鼠的表达水平较pZP3组升高(均P<0.05).⑤pZP3组FOXO3a磷酸化水平高于对照组(P<0.000 1),hUC-MSCs干预后,FOXO3a磷酸化水平较pZP3组下降(P<0.000 1).测序结果提示,pZP3组GDF-15表达上调,hUC-MSCs组中GDF-15表达较pZP3组下调.结论:POI小鼠体内GDF-15和p-FOXO3a表达上调,hUC-MSCs通过下调GDF-15的表达和降低FOXO3a的磷酸化水平,改善POI小鼠的卵巢组织形态,实现对POI小鼠的治疗作用.
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
吞噬和运动蛋白3在胰腺癌侵袭转移中的作用
编辑人员丨1周前
目的:观察吞噬和运动蛋白3(ELMO3)在胰腺癌组织中的表达及与预后的关系,探讨ELMO3对胰腺癌细胞增殖及迁移侵袭能力的影响。方法:选取郑州大学附属洛阳中心医院病理科2011年3月至2019年2月存档的蜡块,免疫组织化学法测定ELMO3在49例胰腺癌及相应癌旁组织中表达,分析其与胰腺癌临床病理特征及预后间的关系。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测胰腺癌细胞株PANC-1、SW1990、BXPC-3及正常胰腺导管上皮细胞株HPDE6c-7中ELMO3 mRNA表达。胰腺癌细胞株PANC-1重组腺病毒转染ELMO3短发卡RNA(shRNA)沉默基因,RT-qPCR检测转染。细胞计数试剂盒(CCK-8)法及平板克隆实验检测PANC-1细胞增殖能力及克隆形成能力,细胞划痕试验及Transwell实验检测细胞体外迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测PANC-1细胞株中细胞核增殖抗原(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达。采用单因素方差分析,组内比较采用LSD- t检验,组间比较采用配对或成组 χ2检验。 结果:ELMO3在胰腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织(73.5%比26.5%, χ2=6.773, P<0.05),其阳性表达与胰腺癌患者性别、年龄及肿瘤部位无相关( χ性别2=0.131, χ年龄2=1.838, χ肿瘤部位2=0.490, P值均>0.05),而与胰腺癌TNM分期、分化程度及肿瘤大小明显相关( χTNM分期2=4.410, χ分化程度2=11.769, χ肿瘤大小2=7.762, P值均<0.05)。ELMO3阳性表达的胰腺癌患者中位生存期(MST)明显低于阴性表达者(8.203个月比19.337个月, χ2=10.253, P<0.05)。3种胰腺癌细胞株中ELMO3表达水平分别为21.33±0.67、17.65±0.31、16.28±0.47,均高于HPDE6c-7细胞株中的2.01±0.10( FPANC-1=45.069, FSW1990=22.824, FBXPC-3=19.477, P值均<0.05),转染后PANC-1细胞内ELMO3表达量显著下降,细胞增殖能力、克隆形成能力及迁移侵袭能力均明显下降( P值均<0.05),且Ki-67、PCNA蛋白表达水平显著降低,而Caspase-3表达量却明显增高,差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:ELMO3在胰腺癌中表达上调,其高表达提示胰腺癌患者预后不良。沉默ELMO3可抑制胰腺癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
微小RNA-19a-3p调控核因子激活的B细胞的κ-轻链增强通路介导乳腺癌细胞微环境影响血管内皮细胞生长
编辑人员丨1周前
目的:构建共培养模型模拟乳腺癌的体内微环境,探讨微小RNA(miR)-19a-3p调控核因子-κB(NF-κB)通路介导乳腺癌细胞微环境影响肺血管内皮细胞表型的机制。方法:细胞计数试剂盒(CCK-8)检测筛选吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)(NF-κB信号通路的抑制剂)干预4T1细胞最佳浓度,构建4T1小鼠乳腺癌肺高转移细胞和小鼠肺微血管内皮细胞共培养模型,构建并转染miR-19a-3p mimics、NC,将细胞分为对照组、模型组、mimics-NC组、mimics组、mimics-NC+PDTC组、mimics+PDTC组,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组4T1细胞的miR-19a、NF-κB p65基因水平的表达,蛋白质印迹法(Western blot)法检测各组4T1细胞NF-κB p65及磷酸化蛋白水平的表达,CCK-8法检测各组MPVECs增殖能力,流式细胞术检测各组MPVECs凋亡,免疫荧光检测各组MPVECs中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。两组间比较采用非配对 t检验,组间比较采用单因素方差分析。 结果:PDTC最佳作用浓度为80 mol/L,模型组细胞增殖活力高于对照组(1.67±0.02比1.26±0.04, F=268.8, P<0.01),凋亡率和miR-19a-3p mRNA表达低于对照组[(4.96±0.03)%比(12.26±0.05)%,mRNA相对值:0.22±0.02比1.00±0.05, F=141.3、392.6, P<0.01],NF-κB p65的mRNA和蛋白表达高于对照组(mRNA相对值:3.80±0.07比1.00±0.04,灰度值比值:0.69±0.05比0.13±0.02, F=221.6、206.3, P<0.01),VEGF蛋白表达高于对照组(平均吸光度值:0.44±0.03比0.13±0.01, F=108.5, P<0.01)。miR-19a-3p mimic组细胞增殖能力低于模型组(1.60±0.04比1.67±0.02, F=268.8, P<0.01),凋亡率和miR-19a-3p mRNA表达高于模型组[(6.36±0.08)%比(4.96±0.03)%,mRNA相对值:0.60±0.03比0.33±0.01, F=141.3、392.6, P<0.05],NF-κB p65的mRNA和蛋白表达低于模型组(mRNA相对值:1.59±0.02比3.80±0.07,灰度值比值:0.50±0.02比0.69±0.05, F=221.6、206.3, P<0.01),VEGF蛋白表达高于模型组(平均吸光度值:0.24±0.02比0.44±0.03, F=108.5, P<0.01)。 结论:miR-19a-3p调控NF-κB通路,抑制NF-κB p65蛋白磷酸化,从而介导乳腺癌细胞微环境抑制血管内皮细胞生长。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
SELENBP1通过减轻氧化应激和炎症改善糖尿病视网膜病变
编辑人员丨1周前
目的:旨在结合转录组测序的结果,聚焦糖尿病视网膜病变中的氧化应激水平和炎症水平,探讨硒结合蛋白1(selenium binding protein 1,SELENBP1)在糖尿病视网膜病变中的作用。方法:对12周龄的db/m和db/db小鼠的视网膜组织进行转录组测序分析筛选差异基因。实验分为两组:db/m小鼠、db/db小鼠,对视网膜组织切片进行活性氧荧光染色,应用蛋白免疫印迹(Western-blot)检测小鼠视网膜组织中的氧化应激反应相关指标还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)2、NOX4、超氧化物歧化酶2(SOD2)和炎性反应相关指标核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β的变化趋势;用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western-blot和免疫组化(IHC)分析组织中SELENBP1的水平。在体外,应用高糖干预人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC),实验分为两组:正常糖组(NG组)、高糖干预组(HG组)检测活性氧水平及氧化应激和炎性因子的表达;在HRMEC细胞中转染SELENBP1质粒和SELENBP1小干扰RNA,分为正常糖对照组(NG+Vector)、SELENBP1质粒组(NG+SBP1)、高糖对照组(HG+si-NC)、SELENBP1小干扰RNA组(HG+si-SBP1),分析活性氧水平及氧化应激和炎性因子的表达水平。结果:与db/m小鼠相比,db/db小鼠视网膜组织中活性氧含量升高、氧化应激相关因子表达增加、抗氧化因子表达下降、炎性因子表达增加,且SELENBP1的mRNA和蛋白水平都明显升高。体外实验表明,高糖干预HRMEC细胞后,细胞中活性氧水平、氧化应激水平和炎症水平明显升高,SELENBP1的mRNA和蛋白表达均明显升高;在HRMEC细胞中过表达SELENBP1后氧化应激水平和炎症水平明显升高;在HRMEC细胞中敲低SELENBP1后氧化应激水平和炎症水平明显下降。结论:SELENBP1通过促进视网膜的氧化应激水平和炎症水平加重了糖尿病视网膜病变,抑制该基因的表达可能会成为减轻糖尿病视网膜病变的有效治疗靶点。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞的基因表达与胚胎发育潜能的相关性
编辑人员丨1周前
目的:探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的不孕患者卵巢颗粒细胞基因的转录表达差异与早期胚胎发育潜能的相关性。方法:选择3对年龄、体质指数、卵巢储备功能相近,并使用促性腺激素释放激素(gonadotrophin-releasing hormone,GnRH)拮抗剂治疗的PCOS不孕症患者,其中胚胎数少者为病例组( n=3),多者为对照组( n=3)。收集患者的卵巢颗粒细胞并提取总RNA,进行基因转录表达差异的显著性分析及功能富集分析。 结果:与对照组相比,病例组76个基因显著上调,110个基因显著下调。与进周期日相比,对照组人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,HCG)日的雌二醇(estradiol,E 2)水平显著升高。与对照组相比,病例组 KRT7基因表达显著上调, CCNYL2表达显著下调。基因本体条目富集差异表达基因发现,与染色体分离、调控细胞周期、脂肪酸代谢等相关的基因显著富集;调控细胞组装、细胞分化、负向调控细胞周期、负向调控发育、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)的ERK1和ERK2信号通路等相关基因表达显著下调。KEGG分析显示,与固醇激素生物合成相关的基因显著富集。 结论:接受GnRH拮抗剂治疗的PCOS不孕患者卵母细胞体外正常受精数及可用胚胎数存在显著差别,可能与卵巢颗粒细胞相关基因的表达差异有关。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
微小RNA-630靶向调控APC膜募集蛋白2/鸟嘌呤核苷酸交换因子促进膀胱尿路上皮癌细胞侵袭转移
编辑人员丨1周前
目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-630对膀胱尿路上皮癌侵袭转移的调控作用及其分子机制。方法:通过生物信息学预测,APC膜募集蛋白(Amer2)为miR-630下游靶基因。构建含miR-630结合位点的Amer2基因3’端非编码区(3’UTR)荧光素酶报告载体,检测miR-630与Amer2的3’UTR相互作用对荧光素酶活性的影响。miR-630模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)用脂质体(Lipofectamine) 2000在体外瞬时转染膀胱癌细胞株EJ,转染72 h后采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测Amer2、鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF-H1)的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测Amer2、GEF-H1蛋白的表达变化;细胞划痕实验、Transwell小室体外侵袭实验反映细胞增殖、转移潜能的变化,组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:转染miR-630 mimics后,Amer2荧光海肾素酶活性低于对照组,差异有统计学意义(13.885±1.624比22.182±1.354, t=-6.885, P<0.05);转染miR-630 mimics后,膀胱癌细胞株EJ中Amer2的表达量明显低于对照组(11.786±4.123比8.327±3.863, t=5.780, P<0.05),差异有统计学意义,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot结果显示GEF-H1基因及蛋白的表达水平明显高于对照组(9.886±5.422比13.565±4.476, t=5.420, P<0.05),差异有统计学意义;转染miR-630 inhibitor后,体外实验表明膀胱癌细胞的迁移活性[(42.320±4.183)%比(35.528±5.433)%, t=5.825]和侵袭能力[(49.180±5.677)%比(40.422±6.266)%, t=7.377, P<0.05]明显低于对照组,差异有统计学意义。 结论:MiR-630在膀胱尿路上皮癌中高表达,可能通过调控Amer2/GEF-H1通路增强肿瘤细胞增殖,诱导膀胱癌细胞侵袭转移。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
槲皮素抑制呼吸道合胞病毒的作用研究
编辑人员丨1周前
目的:研究槲皮素体外抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的作用,为新型抗呼吸道合胞病毒中药开发提供基础研究数据。方法:根据细胞毒性实验确定槲皮素的最大工作浓度,采用病毒滴度TCID 50检测法、细胞毒性检测法、Western blot和实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测槲皮素体外对RSV的增殖、蛋白表达和基因转录抑制效果。采用RNA干扰敲低HSP70表达水平,检测病毒的生长曲线。 结果:槲皮素对Vero细胞的毒性呈现明显的梯度依赖效应,最大无毒浓度为25 μM,且12 μM的槲皮素浓度下,细胞上清中病毒滴度抑制率达60%;同时Western blot结果显示槲皮素处理的细胞中病毒F蛋白受到显著抑制;qPCR对细胞中RSV G蛋白的转录本的检测结果表明槲皮素使病毒G蛋白的转录效率下降了85%以上。敲低HSP70的表达水平后,病毒的滴度下降了两个数量级。结论:槲皮素体外对RSV-A有较好的抗病毒作用,且可能是通过抑制其特异性底物HSP70实现的。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
新型冠状病毒标准物质研究进展
编辑人员丨1周前
新型冠状病毒(简称新冠病毒,2019n-CoV)标准物质是具有确定的新冠病毒序列和量值信息的一类足够均匀稳定的物质。国内外新冠病毒相关标准物质主要包括体外转录和基因组RNA标准物质、假病毒和灭活病毒标准物质,以及蛋白质类标准物质。它相当于一把"标尺",可用于新冠病毒检测试剂盒的量值溯源和方法验证、试剂盒性能评价和实验室能力验证,还可作为质控物质保证检测结果的准确性。此外,在确保全球新冠病毒测量的国际等效和国际互认中,新冠病毒标准物质也发挥了重要作用。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
miR-146a对高糖诱导人视网膜微血管内皮细胞凋亡的抑制作用及其机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨微小RNA-146a(miR-146a)对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:体外培养HRMECs,采用含5.5 mmol/L D-葡萄糖或25 mmol/L D-葡萄糖的培养液培养48 h,分别记为正常对照组和高糖组。另取正常培养的HRMECs采用脂质体转染法将miR-146a mimics或相应mimics对照转染至HRMECs,并采用含25 mmol/L D-葡萄糖的培养液培养48 h,分别记为高糖+miR-146a拟似物组和高糖+拟似物对照组。应用实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-146a的表达水平;采用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测各组细胞活力和凋亡率;采用Western blot法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及核转录因子-κB(NF-κB)信号相关蛋白NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达水平。结果:正常对照组、高糖组、高糖+拟似物对照组和高糖+miR-146a拟似物组细胞中miR-146a的相对表达水平分别为1.00±0.10、0.22±0.02、0.21±0.02和0.88±0.09,细胞活力分别为(100.00±10.06)%、(68.41±6.67)%、(67.91±6.74)%和(90.46±8.97)%,细胞凋亡率分别为(3.11±1.02)%、(27.28±3.56)%、(27.44±4.03)%和(7.29±2.11)%。高糖组细胞中miR-146a的相对表达水平和细胞活力值明显低于正常对照组,细胞凋亡率明显高于正常对照组;高糖+miR-146a拟似物组细胞中miR-146a的相对表达水平和细胞活力值明显高于高糖组和高糖+拟似物对照组,细胞凋亡率明显低于高糖组和高糖+拟似物对照组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。高糖组细胞中Bax和p-NF-κB p65蛋白表达水平明显高于正常对照组,Bcl-2蛋白表达水平明显低于正常对照组,差异均有统计学意义(均 P<0.05);高糖+miR-146a拟似物组细胞中Bax和p-NF-κB p65蛋白相对表达水平明显低于高糖组和高糖+拟似物对照组,Bcl-2蛋白相对表达水平明显高于高糖组和高糖+拟似物对照组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。各组间细胞NF-κB p65蛋白相对表达水平比较,差异无统计学意义( F=0.106, P=0.955)。 结论:过表达miR-146a可抑制高糖所致的HRMECs凋亡,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活有关。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
环状RNA circGPX1通过调节miRNA-150表达影响甲状腺癌细胞增殖和侵袭
编辑人员丨1周前
目的:探讨环状RNA(circRNA)circGPX1在甲状腺癌组织中的表达及体外circGPX1对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响和分子机制。方法:基于GeneCards数据库分析circGPX1在甲状腺癌组织和癌旁组织中转录水平表达差异,比较不同临床分期患者circGPX1表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circGPX1在人正常甲状腺上皮细胞株Nthy-ori3-1和甲状腺癌细胞株SW579、TPC-1、B-CPAP、TT中的表达。将circGPX1表达水平最高的TPC-1细胞转染载有干扰circGPX1小干扰RNA(siRNA)序列的质粒和载有阴性对照siRNA序列的质粒,分别为si-circGPX1组和si-NC组。采用CCK-8法和Transwell实验分别检测两组TPC-1细胞增殖(以吸光度值为细胞增殖能力)和侵袭能力。采用CircAtlas软件预测circGPX1与miRNA-150(miR-150)互补,应用双荧光素酶报告基因实验验证二者的靶向关系。qRT-PCR法检测两组TPC-1细胞中miR-150表达。蛋白质印迹法检测两组TPC-1细胞中Wnt/β-连接素(catenin)信号通路β-catenin、c-myc、p-GSK3β、细胞周期蛋白D蛋白表达。结果:GeneCards数据库中,与癌旁组织相比,甲状腺癌组织中circGPX1转录水平高表达,差异有统计学意义( P<0.01);甲状腺癌患者临床分期越高,circGPX1相对表达量越高,差异有统计学意义( P<0.01)。各甲状腺癌细胞株中circGPX1转录水平相对表达量均高于Nthy-ori3-1细胞,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。si-circGPX1组TPC-1细胞中circGPX1相对表达量较si-NC组低(1.2±0.4比6.1±0.5),差异有统计学意义( t=8.48, P=0.001)。铺板后36、48、60、72 h,si-circGPX1组TPC-1细胞的增殖能力均低于si-NC组,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。培养27 h,si-circGPX1组侵袭的TPC-1细胞数少于si-NC组[(40±6)个比(96±11)个],差异有统计学意义( t=4.30, P=0.005)。双荧光素酶报告基因实验显示,circGPX1-野生型与miR-150共转染的TPC-1细胞相对荧光素酶活性低于circGPX1-野生型与miR-150阴性对照共转染的TPC-1细胞,差异有统计学意义( t=5.32, P=0.002),提示circGPX1与miR-150之间存在互补序列。si-circGPX1组TPC-1细胞中miR-150相对表达量高于si-NC组,差异有统计学意义( t=5.55, P=0.001)。si-circGPX1组TPC-1细胞β-catenin、c-myc、p-GSK3β、cyclin D蛋白的相对表达量均低于si-NC组,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:circGPX1在甲状腺癌组织和细胞中高表达,体外敲减circGPX1可能通过调控miR-150/Wnt/β-catenin轴而抑制甲状腺癌TPC-1细胞的增殖和侵袭。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
