目的:探讨聚富马酸丙二醇酯（PPF）/β-磷酸三钙（β-TCP）制备新型可吸收骨水泥的配方及其应用于小牛椎体标本压缩性骨折椎体成形术的生物力学性能研究。方法:采用两步法制备PPF，使用凝胶渗透色谱仪测量PPF的数均分子量、重均分子量及聚合度分布指数，使用MR氢谱对PPF进行结构分析。将制备好的PPF与β-TCP按照10∶1、5∶1、3∶1、2∶1配制不同热交联反应体系，制备4种不同配方的PPF/β-TCP可吸收骨水泥，选择抗压强度和压缩模量均较高的骨水泥进行后续实验。选取2~3岁健康小牛腰椎L 1~L 4节段标本4具，分离出16个椎体，使用牙托粉填平每个椎体的椎板凹陷部位，测量每个椎体的受力面积。选择椎体受力面积相近的10个椎体，按数字表法随机分为PPF/β-TCP组和甲基丙烯酸甲酯（PMMA）组，每组5个。PMMA组和PPF/β-TCP组椎体使用MTS-858力学机器制备压缩性骨折模型，对比2组完成模型制备时的椎体高度、抗压强度和刚度。PPF/β-TCP组和PMMA组分别使用PPF/β-TCP骨水泥和标准PMMA骨水泥对压缩骨折模型行椎体成形术，对比2组骨水泥注入量，术后椎体高度、椎体恢复百分比，椎体抗压强度、刚度。 结果:PPF数均分子量为1 637±55，重均分子量为1 741±68，聚合分布指数为1.06。MR氢谱结构分析提示反应产物为PPF。配方1~4 PPF/β-TCP可吸收骨水泥抗压强度分别为（53.5±1.5）、（63.2±0.4）、（97.9±5.5）、（100.8±3.2）MPa，压缩模量分别为（0.97±0.04）、（1.05±0.05）、（1.10±0.10）、（0.45±0.18）GPa。选取压缩模量与抗压强度均高的配方3 PPF/β-TCP可吸收骨水泥用于椎体成形术。PPF/β-TCP组和PMMA组小牛椎体标本的椎体体积、高度、受力面积差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。PPF/β-TCP组和PMMA组的椎体压缩性骨折后高度、椎体成形术后椎体高度以及椎体高度恢复百分比差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。组内比较：PPF/β-TCP组椎体压缩性骨折椎体成形手术前后椎体抗压强度分别为（2 282±341）N和（1 848±219）N，椎体刚度分别为（215±27）N/mm和（182±15）N/mm，差异均无统计学意义（ t=2.14、2.13， P值均>0.05）；PMMA组压缩性骨折椎体成形手术前后抗压强度分别为（2 350±289）N和（3 105±452）N，椎体刚度分别为（221±26）N/mm和（296±37）N/mm，差异均有统计学意义（ t=2.81、3.21， P值均<0.05）。组间比较：PPF/β-TCP组与PMMA组术中骨水泥注入量差异无统计学意义（ P>0.05）；PPF/β-TCP组与PMMA组发生压缩性骨折时椎体抗压强度和刚度差异均无统计学意义（ P值均>0.05），椎体成形术后椎体抗压强度和刚度PMMA组均大于PPF/β-TCP组，差异均有统计学意义（ t=4.99、5.61， P值均<0.05）。 结论:PPF与β-TCP按照3∶1配制的可吸收骨水泥具有与人椎体力学性能相近、交联温度低等特点。在治疗小牛椎体压缩性骨折模型时，PPF/β-TCP可吸收骨水泥与PMMA骨水泥术中注入量相近，两者恢复椎体高度的效果相当；且PPF/β-TCP可吸收骨水泥注入后椎体力学性能优于注入PMMA骨水泥者，具有替代PMMA骨水泥治疗椎体压缩性骨折的潜力。

目的 本研究对忍冬花中均一多糖结构和抗新生血管生成活性进行研究,为忍冬的活性物质基础研究提供新的理论数据.方法 水提醇沉并结合阴离子交换色谱和凝胶渗透色谱法获得忍冬均一多糖LF-02-2,并通过分子量检测、单糖组成分析、糖残基连接方式分析、部分酸水解、糖醛酸还原结合核磁共振数据推导出LF-02-2的结构.同时,运用人微血管内皮细胞管腔形成实验测定其体外抗新生血管活性.结果 对LF-02-2的结构解析表明,均一多糖LF-02-2的重均分子量为74.1 kDa,其单糖组成由鼠李糖(Rha)、半乳糖(Gal)、半乳糖醛酸(GalA)和阿拉伯糖(Ara)组成,摩尔比分别为10.43∶14.94∶6.66∶67.97.其主链由1,4-连接的α-Galp A、1,2-连接的α-Rhap和1,2,4-连接的α-Rhap组成.分支由末端连接和1,4,6-连接的β-Galp,末端连接和1,5-连接的α-Araf连接,取代发生在1,2,4-连接的α-Rhap的O-4位.管腔形成实验结果表明LF-02-2能显著抑制人微血管内皮细胞(Human Microvascular Endothelial Cell,HMEC)的管腔形成.结论 忍冬花中一种类RG-I型果胶多糖LF-02-2具有显著抗血管生成活性,具有开发为抗血管生成药物的潜力.

目的 阐明桑叶中具有降血糖活性的多糖结构基础,为桑叶的开发和利用提供理论基础.方法 采用水提醇沉法获得桑叶粗多糖,经离子交换色谱和凝胶渗透色谱分离纯化获得SY02、SY02-3、SY02-3A及SY02-3B等多糖组分,并测定均一多糖的理化性质;联合单糖组成分析、糖残基连接方式分析和核磁分析对桑叶多糖进行结构鉴定;采用棕榈酸(Palimitate,PA)诱导INS-1细胞凋亡模型、Caspase3/7活性试剂盒测定桑叶多糖对INS-1E细胞凋亡的保护作用,并运用Western blot法检测桑叶多糖对INS-1E细胞凋亡关键蛋白Cleaved Caspase 3表达的影响.结果 采用水提醇沉法获得桑叶粗多糖SY,经离子交换树脂柱分离再由凝胶柱纯化得到SY02-3,再次纯化后得到均一酸性多糖SY02-3A与蛋白多糖SY02-3B,两者分子量分别为3.7×104 Da和1.03×104 Da.单糖组成分析结果表明SY02-3A含有鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖、阿拉伯糖,摩尔比分别为23.97∶33.85∶11.73∶5.04∶25.41,得率为0.32%;SY02-3B由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖与阿拉伯糖组成,其摩尔比19.83∶10.34∶45.42∶9.01∶2.23∶13.17,得率为2.00%;SY02-3B含有14种氨基酸,其中天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和甘氨酸含量相对较高.生物活性研究表明SY02-3可以保护PA诱导的INS-1E细胞凋亡,这种作用可能与降低 Caspase 3 活性和下调 cleaved Caspase 3 蛋白表达有关.结论 桑叶中含有酸性肽聚糖(SY02-3A)和蛋白聚糖(SY02-3B)的桑叶多糖SY02-3具有抑制PA诱导的INS-1E细胞凋亡的作用.

以牛蒡根多糖(Arctium lappa polysaccharide,ALP)为原料,通过高效凝胶渗透色谱法、紫外分光光度法、气相色谱-质谱联用法与核磁共振的方法,解析ALP结构.通过研究ALP对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH·)自由基和羟基(hydroxyl radical,·OH)自由基的清除能力,对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性,以及对黄嘌呤氧化酶的抑制率,研究ALP的体外抗氧化活性、体外降血糖活性和体外降尿酸活性.结果表明:ALP相对分子量为1941 Da,具有果糖和葡萄糖的结构特点,ALP有较强的抗氧化能力、体外降血糖和降尿酸作用.研究结果可为牛蒡根作为功能性食品与医药保健品的开发提供科学依据.

目的:研究3个最佳酸水解条件对茯苓佐剂多糖PCP-Ⅱ进行水解,以期获得3个不同相对分子质量的多糖片段产物[重均分子量(Mw)接近1.0 ×104,5.0 × 103和2.5 × 103],并进行理化性质测定.方法:首先进行不同三氟乙酸(TFA)浓度、不同水解温度和不同水解时间的单因素考察.采用L9(34)正交设计进行三因素和三水平的实验和综合分析,最终确定3个最合适的酸水解条件.采用Sephadex凝胶柱色谱对水解产物进行分离和纯化,获得3个相对分子质量均一多糖片段(PCP-Ⅱ-hy-1,PCP-Ⅱ-hy-2和PCP-Ⅱ-hy-3);采用薄层色谱法分析水解产物中的单糖组成变化.采用高效凝胶渗透色谱法得到多糖相对分子质量及相对分子质量分布.采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生和毛细管电泳法测定3个多糖片段的单糖组成.结果:3 种酸水解条件(0.25 mol·L-1 TFA,80 ℃,2 h,0.25 mol·L-1 TFA,80℃,3 h 和 0.25 mol·L-1 TFA,80℃,6h)可用于3种目标水解产物的制备;多糖片段PCP-Ⅱ-hy-1的Mw为9.51 × 103,单糖组成摩尔比为岩藻糖∶甘露糖∶半乳糖=1.00∶1.54∶9.05;PCP-Ⅱ-hy-2的Mw为6.39 × 103,单糖组成摩尔比为岩藻糖∶甘露糖∶半乳糖=1.00∶2.04∶14.36;PCP-Ⅱ-hy-3的Mw为1.80×103,单糖组成摩尔比为岩藻糖∶甘露糖∶半乳糖=1.00∶4.55∶27.59.结论:3种酸水解条件适合目标多糖片段的产生.3个多糖水解片段随着相对分子质量的减少甘露糖和半乳糖比例逐渐增大,特别是PCP-Ⅱ-hy-3主要由半乳糖组成,推测PCP-Ⅱ骨架结构可能是半乳聚糖.

用于白及多糖(Bletilla striata polysaccharide,BSP)提取主要有溶剂提取法、辅助提取法等;分离纯化主要有活性炭或双氧水脱色,Sevage法脱蛋白,柱色谱法分离等;含量测定中通常使用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法;分子量采用高效液相色谱法、红外光谱、凝胶渗透色谱等方法来进行测定;结构表征主要采用液相色谱,红外光谱或核磁共振法来进行测定.白及多糖为葡甘聚糖,具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节和促进伤口愈合等多种生物活性,在生物医药领域有广泛的应用前景.BSP有良好的药理活性,目前其研究大部分为粗多糖,药理活性仍在细胞阶段.因此对其提取分离纯化、结构鉴定、生物活性的研究仍是社会关注的热点.主要综述了 BSP的提取分离纯化、结构组成及生物活性的研究进展并对其进行系统分析,为BSP的深度开发利用以及后续的研究提供了理论基础.

目的 从罗汉果Siraitiagrosuenorii根中分离纯化多糖组分,初步分析其结构特征并研究其免疫调节作用.方法 干燥罗汉果根经95％乙醇脱脂,用70 ℃水提醇沉得到粗多糖,再经Cellulose DE-52纤维素阴离子交换柱、Sephadex LH-20凝胶柱分离纯化,得到均一多糖LGP-A.采用高效凝胶渗透色谱法(high performance gel permeation chromatography,HPGPC)与PMP柱前衍生化法测定其相对分子质量和单糖组成;通过傅里叶红外光谱(FT-IR)、核磁共振波谱(NMR)、刚果红实验、扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)等方法对LGP-A的初步结构进行分析.利用CCK法、ELISA试剂盒、中性红实验对RAW264.7细胞的增殖、一氧化氮(NO)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)及吞噬能力进行检测,评价LGP-A的免疫活性.结果LGP-A的相对分子质量为1.83 × 106,主要由半乳糖(Galp,51.23％)和阿拉伯糖(Araf,44.68％)组成.红外光谱及核磁波共振波谱对其结构分析证明,LGP-A可能主要含有 T-α-L-Araf(A)、→3)-α-L-Araf-(1→(B)、→5)-α-L-Araf-(1→(C)、→3,5)-α-L-Araf-(1→(D)、→3)-β-D-Galp-(1→(E)、→3,6)-β-D-Galp-(1→(F)、→6)-β-D-Galp-(1→(G)和→3)-α-D-Galp-(1→(H)片段.质量浓度在 0.625～5.0 μg/mL时,LGP-A能促进RAW264.7细胞的增殖,并能明显促进细胞分泌NO、IL-6和TNF-α,提高细胞吞噬率,表明LGP-A具有显著的免疫调节活性.结论LGP-A是从罗汉果根中得到的天然均一多糖,其初步结构和活性的研究为罗汉果根资源的开发提供了一定的依据.

目的 探究一贯煎多糖(YGJP-W)的基本结构特征以及其改善四氯化碳(CC14)诱导小鼠肝纤维化的活性,分析YGJP-W抗肝纤维化活性与其调节肠道菌群结构变化关系.方法 采用水提醇沉和弱阴离子交换色谱制备一贯煎多糖组分YGJP-W,依次采用苯酚-硫酸法、间羟基联苯法、BCA蛋白定量分析试剂盒、高效凝胶渗透色谱法(high performance gel permeation chromatography,HPGPC)、FT-IR、离子色谱仪及扫描电镜法(scanning electron microscope,SEM)对一贯煎多糖的总糖含量、糖醛酸含量、蛋白含量、相对分子质量分布、官能团、单糖组成及形貌特征进行表征,采用CCl4诱导的小鼠模型,检测YGJP-W(50、100 mg/kg)干预3周后的小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肝组织羟脯氨酸水平,并通过HE染色和天狼猩红染色观察肝脏组织学变化,评价YGJP-W改善肝纤维化活性;采用16SrDNA测序技术评价YGJP-W对小鼠肠道菌群的影响;采用抗生素联合YGJP-W干预,评价YGJP-W是否通过调节肠道菌群发挥药效作用.结果YGJP-W总得率为11.60％,总糖质量分数为92.48％,至少由相对分子质量为1.74×105和5.6×103的2种多糖组成,单糖组成包含半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖,其物质的量比为1.0∶2.8∶1.4∶1.6.YGJP-W干预3周后,能够显著改善CC14引起的肝功能异常、肝组织病理损伤、胶原沉积和纤维化.YGJP-W在改善肝纤维化的同时能够引起小鼠肠道菌群结构变化,在门水平上,YGJP-W显著性降低拟杆菌门丰度[(57.4±14.6)％vs(79.3±8.1)％,P＜0.01],增加变形菌门[(10.4±4.7)％vs(2.1±1.9)％,P＜0.01]和放线菌门[(3.7±2.4％)％vs(0.3±0.1)％,P＜0.01)]丰度,在属水平上,YGJP-W增加狄氏副拟杆菌属Parabacteroides、埃希氏菌-志贺氏菌属Escherichia-Shigella、活泼瘤胃球菌属Ruminococcus_gnavus_group、萨特氏菌属Sutterella、毛螺菌属NK4A136组Lachnospiraceae_NK4A136_group和梭杆菌属Fusobacterium共6个菌属的丰度(LDA score＞3,P＜0.01),降低拟普雷沃氏菌属Alloprevotella),肠鼠杆菌属Muribaculum,普雷沃氏菌属UCG-001 Prevotellaceae_UCG-001和另枝杆菌Alistipes共4个菌属的丰度(LDA score＞3,P＜0.01).抗生素联合YJGP-W干预,YJGP-W抗肝纤维化的活性显著减弱.结论 多糖类成分YJGP-W是一贯煎抗肝纤维化的重要物质基础,YJGP-W发挥抗肝纤维化的作用可能与其调控肠道菌群相关.

目的:从竹节参中分离纯化均一多糖,对其进行结构表征和体外免疫活性研究.方法:采用水提醇沉法制备粗多糖,经Sevag法脱蛋白得到精制的竹节参多糖(PJPS),通过乙醇分步沉淀法、DEAE-52 和Sephacryl S-400柱色谱法分离纯化得到均一多糖PPS,采用高效凝胶渗透色谱HPGPC-RID测定PPS的相对分子量,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生HPLC法测定单糖组成,GC-MS分析甲基化产物,IR、一维和二维核磁等方法对PPS进行结构表征,并采用小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7 细胞株,观察了PJPS和PPS对细胞活力、NO释放、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)表达的影响.结果:PPS是一种葡聚糖,相对分子质量为 3.3 kDa,PPS的主链为α-D-(1→4)-连接的葡聚糖,每 5 个Glcp糖基的 6 位与α-t-Glcp连接形成侧链.PPS能促进RAW 264.7 细胞增殖,PJPS和PPS能促进细胞分泌NO、TNF-α和 IL-6.结论:PPS为从竹节参中分离得到的均一多糖,具有一定的免疫活性,对PPS结构和活性的研究可为竹节参的深入开发和利用提供参考.

[目的]为明确元蘑多糖的结构特征,并探究其调节巨噬细胞免疫活性机制.[方法]采用水提醇沉法获得元蘑多糖粗提物,并通过DEAE-52 离子交换层析及Sephacryl S-400 葡聚糖凝胶过滤层析对该多糖粗提物进行分离纯化,获得多糖组分SEP-0a.分别采用高效凝胶渗透色谱法、离子交换色谱法、傅立叶红外光谱法检测了SEP-0a的理化性质.进一步采用CCK-8 法、ELISA法、qPCR法、Western blot等方法考察了元蘑多糖SEP-0a对巨噬细胞RAW264.7 的免疫调节作用及机制.[结果]元蘑多糖SEP-0a由半乳糖、甘露糖、葡萄糖和岩藻糖组成,相对分子量为 4.23×104 Da,并且具有α构型与β构型.体外免疫活性结果表明,元蘑多糖SEP-0a可显著增强RAW264.7 细胞增殖和吞噬能力,促进该细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)、一氧化氮(nitric oxide,NO)的分泌,提高肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6 的表达,Western blot检测发现,该多糖可显著提高核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路p65 蛋白磷酸化表达.[结论]元蘑多糖SEP-0a可通过NF-κB信号通路调控巨噬细胞的免疫活性.