目的:探讨组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）介导蛋白包涵体-自噬-溶酶体途径（AALP）在百草枯（PQ）诱导多巴胺能神经元自噬障碍中的作用。方法:以人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）作为多巴胺能神经元的体外模型，将细胞分为对照组和PQ染毒组（不同浓度PQ处理）。用不同浓度PQ （0、25、50、100、200和400 μmol/L）处理细胞24 h，100 μmol/L PQ处理细胞不同时间（0、12、24、36、48、60和72 h），CCK-8法检测细胞增殖活性；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞HDAC6、α-突触核蛋白（α-syn）、动力蛋白中链（Dynein IC1/2）、微管相关蛋白轻链3（LC3）、自噬相关蛋白（Beclin1）、泛素结合蛋白（p62）和溶酶体相关膜蛋白-1（Lamp-1）的表达水平；免疫荧光双标法观察细胞HDAC6、α-syn、Dynein IC1/2、LC3、Lamp-1及γ-微管蛋白（γ-tubulin）在细胞中的表达及定位。结果:PQ呈剂量和时间依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖活性（ R=-0.950、-0.960， P<0.05）；与对照组比较，PQ染毒组HDAC6、α-syn、p62蛋白表达水平升高，差异有统计学意义（ P<0.05），而自噬标志蛋白（LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ）、Dynein IC1/2、Beclin1、Lamp-1表达水平降低（ P<0.05）；与对照组比较，PQ染毒组HDAC6与α-syn荧光信号增强，蛋白表达水平增高，而Dynein IC1/2、LC3、Lamp-1荧光信号减少，蛋白表达水平降低（ P<0.05）；PQ染毒诱导上述蛋白表达位置也发生变化，细胞质中的HDAC6由弥散状逐渐向细胞核聚集；α-syn、Dynein IC1/2、γ-tubulin、LC3、Lamp-1也逐渐由细胞质向细胞核聚集，并与HDAC6在细胞核共定位于核周区域。 结论:PQ可能通过诱导HDAC6介导蛋白包涵体-自噬-溶酶体途径障碍引起α-syn异常聚集。

目的:探讨动力蛋白轻链LC8-1型(DYNLL1)在肺腺癌(LUAD)中的表达、作用机制和临床价值。方法:本研究为实验研究。从TCGA数据库中收集539例LUAD组织和59例癌旁正常肺组织的DYNLL1 mRNA测序数据，收集GTEx数据库中的正常肺组织样本增加对照样本量(共347例正常肺组织)。收集LUAD患者的临床特征包括年龄、性别、吸烟史、TNM分期和临床分期。选取2020年1月至2022年12月于河北省胸科医院行手术切除的40例LUAD患者为研究对象，收集手术过程中切除的LUAD组织和癌旁正常肺组织用于免疫组织化学检测DYNLL1蛋白表达。通过最小 P值法确定DYNLL1的高表达组和低表达组。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，分析DYNLL1表达对LUAD患者总生存期(OS)、疾病特异性生存期和无进展生存期的影响。采用单因素和多因素Cox回归分析LUAD患者OS的影响因素。通过GEPIA基因表达谱动态分析数据库获取LUAD中与DYNLL1显著相关的前100个基因的表达情况，并进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析，进一步通过FunRich软件进行功能富集分析。应用TIMER数据库对DYNLL1进行免疫浸润分析和泛癌中的表达分析。通过TCGA数据库中LUAD的表达数据分析DYNLL1表达与甲基转移酶的关系。通过DiseaseMeth version 2.0在线数据库对DYNLL1在LUAD组织中的甲基化水平进行分析。利用MEXPRESS在线数据库分析DYNLL1相关甲基化位点。使用String数据库分析DYNLL1的蛋白质-蛋白质相互作用。 结果:相比正常组织，DYNLL1 mRNA在多种实体肿瘤组织中均高表达(均 P<0.05)。TCGA数据库、TCGA和GTEx数据库中，LUAD组织的DYNLL1 mRNA水平均高于正常肺组织(均 P<0.05)。免疫组织化学检测显示，DYNLL1主要定位于细胞质或细胞核。DYNLL1蛋白在LUAD组织中的高表达率高于癌旁正常肺组织[80.0%(32/40)比40.0%(16/40)， χ2＝13.33， P<0.001)]。男性、T分期为T2＋T3＋T4期、N分期为N1＋N2＋N3期、临床分期为Ⅲ期＋Ⅳ期LUAD患者的DYNLL1 mRNA表达水平高于女性、T分期为T1期、N分期为N0期、临床分期为Ⅰ期＋Ⅱ期患者(均 P<0.01)。DYNLL1高表达组和低表达组的总体生存曲线、疾病特异性生存曲线和无进展生存曲线显示，低表达组的生存状态均优于高表达组( HR分别为1.902、1.863、1.662，均 P<0.001)。多因素Cox回归分析显示DYNLL1是LUAD患者OS的影响因素( HR＝1.467，95% CI：1.041～2.068， P＝0.029)。GO富集分析、KEGG富集分析和FunRich软件功能富集分析显示，DYNLL1可能通过调节细胞周期调控LUAD的发生发展。DYNLL1 mRNA表达与B淋巴细胞( r＝－0.261， P<0.001)、CD8 ＋ T淋巴细胞( r＝0.105， P＝0.020)、CD4 ＋ T淋巴细胞( r＝－0.137， P＝0.002)和树突状细胞( r＝－0.178， P<0.001)具有相关性，与CD19、CD1C、CD2、CD3E、CD4、CD79A、HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQB1、HLA-DRA、ITGAX和NRP1具有相关性。3种甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)在高表达组和低表达组之间的差异均有统计学意义。LUAD组织中DYNLL1甲基化水平高于正常肺组织( P＝0.007)。在DYNLL1的DNA序列中发现了6个甲基化位点。与DYNLL1相互作用的蛋白质包括DYNLRB1、BCL2L11、DYNC1I2、DYNC1I1、WDR34、DYNLT1、DYNC1H1、WDR60、STRN4和MOB4。 结论:DYNLL1在LUAD组织中高表达，可能通过调节细胞周期、参与免疫细胞浸润过程和甲基化等对LUAD的发生发展产生影响，与患者的不良预后密切相关。

目的 探究肺心汤通过调控腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)大鼠的治疗作用及机制.方法 36 只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西地那非组以及肺心汤低、中、高剂量组.除正常组外,将其余 5 组置于氧气浓度为 10.0%±0.5%的低氧舱内造模 28 d,每天 8h,造模同时灌胃给药.4周后检测大鼠心肺血流动力学指标[右心室收缩压(right ventricular systolic pressure,RVSP),右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI),肺动脉加速时间/肺动脉射血时间(pulmonary acceleration time/pulmonary ejection time,PAT/PET)、三尖瓣环收缩期位移(tricuspid annulus plane systolic excursion,TAPSE)、右心室前壁厚度(right ventricular anterior wall thickness,RVAWT)];HE染色法检测肺动脉重塑;免疫荧光法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白共定位表达;透射电镜观察自噬溶酶体的数量;免疫组织化学法检测肺组织中p-AMPK、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-as-sociated protein light chain 3B,LC3B)、Beclin1 和p62蛋白阳性表达.结果 与正常组相比,模型组大鼠RVSP、RVHI及RVAWT显著升高(P<0.01),PAT/PET和TAPSE显著降低(P＜0.01);肺小动脉壁明显增厚,管腔狭窄,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比(the percentage of wall thickness of pulmonary arterioles to vascular diameter,WT%)显著升高(P＜0.01);α-SMA和PCNA共定位表达显著增加;自噬溶酶体数量增加;肺组织中p-AMPK、LC3B和Beclin1蛋白阳性表达上调(P＜0.01),p-mTOR及p62蛋白阳性表达下调(P＜0.01).与模型组相比,各给药组大鼠RVSP、RVHI及RVAWT 显著下降(P＜0.01),PAT/PET、TAPSE显著升高(P＜0.05,P＜0.01);肺小动脉壁增厚程度减轻,WT%显著降低(P＜0.01);α-SMA和PCNA共定位表达减少;自噬溶酶体数量减少;肺组织中p-AMPK、LC3B和Beclin1蛋白阳性表达显著下降(P＜0.05,P＜0.01),p-mTOR及p62蛋白阳性表达显著上调(P＜0.01).与西地那非组相比,肺心汤低、中剂量组TAPSE降低(P＜0.01);肺心汤低、中剂量组肺动脉中膜增厚程度增加,WT%增加(P＜0.01);肺心汤低、中剂量组p-AMPK蛋白阳性表达升高(P＜0.01),肺心汤高剂量组p-AMPK蛋白阳性表达降低(P＜0.05);肺心汤低剂量组p-mTOR蛋白阳性表达降低(P＜0.01).结论 肺心汤可能通过下调AMPK/mTOR信号通路抑制自噬,发挥改善HPH的作用.

目的 研究白藜芦醇对糖尿病合并心肌缺血再灌注损伤大鼠自噬通路表达及心肌梗死面积的影响,进一步明确其药理机制.方法 选取100只6～8周龄清洁级(SPF级)雄性SD大鼠为研究对象,随机分为4组,每组25只,分别为对照组、模型组、白藜芦醇组、三甲基腺嘌呤(3-MA)组,4组均采用高脂喂养结合腹腔注射链脲佐菌素法制备糖尿病模型,模型制备成功者给予药物干预.白藜芦醇组以10 mg/(kg·d)的白藜芦醇灌胃,3-MA组在白藜芦醇组的基础上尾静脉注射0.015g/(kg·d)自噬抑制剂3-MA,对照组和模型组给予等量生理盐水刺激;7d后,除对照组外,均采用冠状动脉结扎法制备心肌缺血再灌注模型.采用MedLab生物信号采集处理系统测定药物干预前(基线值)、心肌缺血前、心肌缺血30 min和再灌注2h的血流动力学数据,采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色实验测定心肌梗死面积,采用免疫蛋白印迹实验测定心肌组织自噬标志物蛋白表达.用SPSS 19.0统计软件进行t检验、方差分析和x2检验.结果 各组大鼠的左心室收缩压(LVSP)、左心室等容收缩期(+)心室压力上升的最大速率(+dp/dt)及左心室等容舒张期(-)心室压力上升的最大速率(-dp/dt)基线值差异均无统计学意义(P＞0.05);组别因素与时间因素对大鼠的LVSP、+dp/dt及-dp/dt水平均有影响(P＜0.05),且组别与时间之间无交互作用(P＞0.05).组间比较结果显示,心肌缺血前,白藜芦醇组LVSP、+dp/dt及-dp/dt水平较其他各组有所升高;心肌缺血30 min和再灌注2h,模型组和3-MA组LVSP、+dp/dt及-dp/dt水平低于对照组,白藜芦醇组LVSP、+dp/dt及-dp/dt水平高于模型组和3-MA组,差异均有统计学意义(P＜0.05).组内比较结果显示,心肌缺血前,白藜芦醇组LVSP、+dp/dt及-dp/dt水平高于基线值,差异均有统计学意义(P＜0.05),其他各组与基线值比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);心肌缺血30 min和再灌注2h时,模型组、白藜芦醇组和3-MA组LVSP、+dp/dt及-dp/dt水平低于心肌缺血前,差异均有统计学意义(P＜0.05),对照组的LVSP、+dp/dt及-dp/dt水平与心肌缺血前比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).再灌注2h后,模型组磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)和Beclin 1蛋白表达水平高于对照组,梗死面积增大;白藜芦醇组PI3K、LC3-Ⅱ和Beclin 1蛋白表达水平高于模型组,但梗死面积减小;3-MA组PI3K、LC3-Ⅱ和Beclin 1蛋白表达水平低于白藜芦醇组,梗死面积增大,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 白藜芦醇能够通过促进自噬来改善糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤,减小梗死面积.

目的 探讨微RNA(miR)-1249调控慢性间歇低氧(CIH)大鼠心肌细胞凋亡的可能机制.方法 采用随机数字表法将16只8周龄雄性SD大鼠分为常氧对照组、CIH组各8只.CIH组每天9:00-17:00时给予连续8周间歇低氧处理,常氧对照组同时给予相同频率的脉冲空气处理.实验结束时通过颈动脉插管测定大鼠血流动力学指标,实时荧光定量PCR测定心肌组织中miR-1249及微管相关蛋白轻链3(LC3)mRNA的相对表达量,Western印迹法检测心肌组织中LC3及活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况,TUNEL染色检测心肌凋亡情况.将大鼠心肌细胞株H9C2分为常氧组、间歇低氧(IH)组及转染miR-1249抑制剂并给予IH处理组(抑制剂组),实验结束时测定各组细胞LC3蛋白活化情况.结果 CIH大鼠左室舒张末压显著高于常氧对照组[(4.6±0.4)比(2.2±0.1)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)],而左室收缩压、左室内压最大下降速率、左室内压最大上升速率均显著低于常氧对照组[(92.7±4.1)比(135.3±3.2)mmHg、(4247±108)比(7626±235)mmHg/s、(3168±105)比(6028±81)mmHg/s](均P<0.001).CIH大鼠心肌组织miR-1249相对表达量显著高于常氧对照组,LC3 mRNA相对表达量显著高于常氧对照组(均P<0.001),且两者间呈正相关;CIH大鼠心肌组织中LC3及活化型Caspase-3蛋白相对表达量均显著高于常氧对照组(均P<0.001);CIH大鼠心肌细胞凋亡比例显著高于常氧对照组[(23.84±4.94)％比(2.93±0.73)％](P<0.001).抑制剂组心肌细胞LC3活化程度显著低于IH组,但高于常氧组.结论CIH可通过上调miR-1249表达诱导LC3蛋白表达,进而诱导凋亡蛋白Caspase-3活化,最终诱导大鼠心肌凋亡.

目的 :观察电针"足三里"对功能性消化不良(FD)大鼠胃排空、自噬标记物微管相关蛋白1轻链3(LC3)及自噬信号通路分子腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的影响,探讨电针改善FD胃肠动力障碍的机制.方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组,每组8只.采用多因素应激干预法建立FD模型.电针组电针双侧"足三里"穴,每日1次,连续7 d;抑制剂组大鼠予以Compound C腹腔注射(20 mg/kg),每日1次,连续7 d;电针+抑制剂组大鼠予以Compound C腹腔注射和电针干预.检测各组大鼠胃内残留率、小肠推进率;Western blot法检测胃窦组织酪氨酸激酶受体(c-kit)、LC3-Ⅱ/Ⅰ 、自噬基因Beclin 1、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-A M PK)、磷酸化自噬相关蛋白1(p-U L K1)的表达.结果:与空白组比较,模型组大鼠胃内残留率升高,小肠推进率降低(P<0.01),胃窦中的c-kit表达明显降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ 、Beclin 1、p-AMPK、p-ULK1表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组大鼠胃内残留率降低,小肠推进率升高(P<0.05,P<0.01),胃窦中的c-kit表达明显升高,LC3-Ⅱ/Ⅰ 、Beclin 1、p-AMPK、p-ULK1表达明显降低(P<0.01);与抑制剂组比较,电针组、电针+抑制剂组大鼠胃窦中的c-kit表达均明显升高(P<0.05,P<0.01),LC3-Ⅱ/Ⅰ 、Beclin 1表达明显降低(P<0.05),p-AMPK、p-ULK1蛋白表达明显降低(P<0.01).结论:电针"足三里"能够改善FD大鼠胃肠动力障碍,其作用机制可能是通过调控A M PK/U L K1信号通路进而抑制Cajal间质细胞过度自噬水平.

目的 探讨电针“足三里”治疗功能性消化不良的可能机制.方法 将32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、假电针组,每组8只.除空白组外,其余大鼠均采用多因素应激干预法建立功能性消化不良大鼠模型.电针组采用毫针直刺双侧“足三里”15～20 mm,后接韩式穴位神经刺激仪.假电针组采用安慰针灸针针刺双侧“足三里”后不连接电针仪.以上两组均每次干预20 min,每日1次,连续7天.空白组不施加干预措施,模型组仅抓取固定.干预结束后检测各组大鼠胃内残留率和小肠推进率,检测胃窦组织酪氨酸激酶受体(c-kit)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及自噬基因Beclin1蛋白及mRNA表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠胃内残留率升高,小肠推进率降低,胃窦组织c-kit蛋白及mRNA表达下调,微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/微管相关蛋白1轻链3 Ⅰ (LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)及LC3 mRNA、.Beclin1蛋白及mRNA表达增高(P＜0.01);与模型组比较,电针组胃内残留率降低,小肠推进率升高,胃窦组织c-kit蛋白及mRNA表达上调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及LC3 mRNA、Beclin1蛋白及mRNA表达下降(P＜0.05或P＜0.01);模型组与假电针组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、LC3 mRNA指标组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),其余指标组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 电针“足三里”能够改善功能性消化不良模型大鼠胃肠动力障碍,其作用机制可能是通过抑制胃窦Cajal间质细胞过度自噬从而恢复细胞数量发挥作用的.

目的 通过观测大鼠股四头肌细胞线粒体形态学、氧化磷酸化水平和线粒体动力学-自噬相关蛋白表达,探讨脾气虚骨骼肌细胞线粒体损伤的可能机制.方法 16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚证模型组(模型组),每组8只;取股四头肌组织,透射电镜观察线粒体形态学变化,ELISA法检测ATP和反应性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,JC-1法检测线粒体膜电位(△Ψm),Western blot法检测介导线粒体动力学-自噬机制相关蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组线粒体变小且排列松散,ATP和△Ψm水平明显下降,ROS水平显著上升,动力学相关蛋白1、线粒体分裂蛋白1和线融素1表达均明显增加,但PINK1、Parkin和微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅱ表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值均明显下降.结论 脾气虚股四头肌线粒体损伤与线粒体动力学-自噬机制异常有关.

目的:观察柴胡疏肝散对功能性消化不良(FD)模型大鼠胃动力、胃组织线粒体功能及线粒体自噬的影响,揭示柴胡疏肝散防治FD的作用机制.方法:将32只SPF级SD大鼠适应性喂养1周后随机分为正常组、模型组、柴胡疏肝散组(4.8 g·kg-1),多潘立酮组(4.5 mg·kg-1),每组8只.除正常组外,其余3组均采用改良夹尾刺激法复制FD大鼠模型.4周后,采用营养性半固体糊法观察FD大鼠胃排空率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清柠檬酸合成酶(CS),胃动素(MTL),胃泌素(GAS)含量,苏木素-伊红(HE)染色观察胃组织病理变化,透射电镜观察线粒体特征,免疫荧光共定位法观察胃组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)与电压依赖性阴离子通道蛋白1(VDAC1)表达,提取新鲜胃组织线粒体,生化试剂盒检测线粒体活性氧(ROS),丙二醛(MDA)水平,超氧化物歧化酶(SOD)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测线粒体LC3,自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),p62蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠胃排空率显著降低(P＜0.01),血清CS,MTL,GAS含量显著降低(P＜0.01),HE染色可见各组大鼠胃组织未见糜烂、溃疡等病理改变,透射电镜观察胃组织线粒体肿胀、扩张,出现空泡病变,LC3和VDAC1免疫荧光共定位表达显著增加(P＜0.01),线粒体ROS,MDA含量显著升高(P＜0.01),SOD含量显著降低(P＜0.01),LC3,Beclin1蛋白表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01),p62蛋白表达水平明显下降(P＜0.05);与模型组比较,柴胡疏肝散组和多潘立酮组大鼠胃排空率均明显升高(P＜0.05),血清CS,MTL,GAS含量明显升高(P＜0.05,P＜0.01),透射电镜观察胃组织线粒体核膜完整,内部嵴形态清晰,嵴密度较高,部分存在线粒体分裂融合现象,LC3和VDAC1共定位表达显著减少(P＜0.01),线粒体ROS,MDA含量均明显降低(P＜0.05,P＜0.01),SOD含量明显升高(P＜0.05),LC3,Beclin1蛋白表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),p62蛋白表达水平显著升高(P＜0.01).结论:柴胡疏肝散防治FD的作用机制可能与改善胃组织线粒体功能、抑制线粒体自噬有关.

目的:观察大鼠胃窦Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICC)自噬蛋白表达与凋亡,探讨电针改善糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis,DGP)大鼠胃动力的可能作用机制.方法:64只SD大鼠随机分为对照组和造模组,采用腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)及高脂高糖饲料不规则喂养制备DGP大鼠模型,8周后将造模成功大鼠随机分为模型组、电针组、胃复安组,另设对照组各每组10只.电针组选取"梁门"(ST21)"足三里"(ST36)"三阴交"(SP6)穴行电针治疗,并用0.9％氯化钠溶液灌胃(1 mL/100 g),胃复安组用1.7％胃复安药液灌胃(1 mL/100 g),模型组和对照组均用0.9％氯化钠溶液灌胃(1 mL/100 g),治疗前后测量大鼠血糖值,酚红灌胃法计算胃排空率,提取胃窦ICC原代细胞,采用Western blot法检测自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、家蚕隔离体蛋白1(sequestosome-1,p62)表达,流式细胞仪检测ICC细胞凋亡.结果:与对照组比较,模型组血糖值、自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅱ/Ⅰ)比值、P62相对表达量、ICC细胞凋亡率均显著升高(P<0.01),胃排空率显著下降(P<0.01).与模型组比较,电针组血糖值下降(P<0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、P62相对表达量、ICC细胞凋亡率均显著下降(P<0.01),胃排空率显著升高(P<0.01).结论:电针能提高DGP大鼠胃动力,改善大鼠血糖值,其机制可能与促进胃窦ICC细胞自噬并降低其凋亡率、调节自噬与凋亡的平衡有关.