目的 建立门冬氨酸鸟氨酸原料药的生物安全性检验标准方法.方法 根据2020年版《中国药典》中通则方法进行异常毒性、降压物质、升压物质的生物安全性检验标准研究,设定检查限值,对3批门冬氨酸鸟氨酸原料药进行相关项目的检查验证.结果 3批门冬氨酸鸟氨酸原料药样品的半数致死量可信限下限的1/4分别为754.7、752.0、747.7 mg·kg-1,按25 mL·kg-来设置,门冬氨酸鸟氨酸的试验浓度限值为30 mg·mL-1;3批原料药给药333、267 mg·kg-1时,均未超过0.1μg·kg-1磷酸组胺对照品所致降压水平的1/2,符合结果判定规定的反应值范围,建议设定上限267 mg·kg-1为门冬氨酸鸟氨酸降压物质检查的限值;67 mg·kg-1给药剂量所致的反应值均小于0.45 IU·kg-1对照品,约为1/2,建议将临床用药剂量的1/5即67 mg·kg-1作为升压物质检查的上限值.3批原料药生物安全性检查的结果均符合规定.结论 所用方法可用于门冬氨酸鸟氨酸原料药异常毒性、降压物质和升压物质的检查.

鼻腔鼻窦睾丸核蛋白（nuclear protein in testis，NUT）癌临床相对罕见，且侵袭性高、致死性强。该病以中青年多见，好发于头颈部，其半数以上者原发于鼻腔鼻窦。因鼻腔鼻窦NUT癌缺乏特异性临床表现及典型组织学特征，故早期诊断困难，漏诊和误诊率较高。随着分子免疫学及高通量测序技术的革新，该病的检出率呈现上升趋势，但仍缺乏行之有效的治疗手段。如想达到较为理想的治疗效果，需采用多学科整合诊治模式，未来基因靶向药物及特异性免疫制剂的研发与应用有望更新疾病指南。基于此，本文重点归纳了鼻腔鼻窦NUT癌的疾病特点、鉴别诊断及治疗新进展，以期提升耳鼻咽喉科医生的整体诊疗水平，从而更好地指导临床实践。

目的:探讨阿魏酸钠对人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞（HSFb）增殖、凋亡的调控作用和信号机制。方法:采用实验研究方法。取第4~6代人皮肤HSFb用于后续实验。将HSFb分别与终质量浓度1、1×10 -1、1×10 -2、1×10 -3、1×10 -4、1×10 -5、1×10 -6 mg/mL阿魏酸钠共培养48 h，采用噻唑蓝法测定细胞吸光度值并采用线性回归法分析阿魏酸钠的半数致死浓度（LC50），样本数为6。将HSFb分别与终质量浓度0.1、0.2、0.3、0.4 mg/mL的阿魏酸钠共培养24、48、72、96 h后，采用噻唑蓝法测定细胞吸光度值并计算细胞增殖抑制率（样本数为3）。取细胞，按随机数字表法分为采用相应终质量浓度阿魏酸钠处理的0.300 mg/mL阿魏酸钠组、0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.003 mg/mL阿魏酸钠组和不进行任何处理的阴性对照组。培养72 h后，采用噻唑蓝法测定细胞吸光度值（样本数为5），采用透射电子显微镜观察细胞微观形态（样本数为3），采用原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡情况并计算凋亡指数（样本数为4），采用免疫组织化学法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶3（caspase-3）蛋白表达（样本数为4），采用蛋白质印迹法检测转化生长因子β 1（TGF-β 1）、磷酸化Smad2/3、磷酸化Smad4、磷酸化Smad7的蛋白表达（样本数为4）。对数据行单因素方差分析、Dunnett检验。 结果:阿魏酸钠的LC50为0.307 5 mg/mL。培养24~96 h，4个质量浓度阿魏酸钠处理的细胞增殖抑制率均呈先升高后降低的趋势，于培养72 h达到最高，选择72 h作为后续实验的处理时间。培养72 h后，0.003 mg/mL阿魏酸钠组、0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞吸光度值分别为0.57±0.06、0.53±0.04、0.45±0.05，均明显低于阴性对照组的0.69±0.06（ P<0. 01）。培养72 h后，与阴性对照组比较，用阿魏酸钠处理的3组细胞出现不同程度的核固缩或断裂、裂解，染色质丢失，胞质中可见线粒体肿胀、粗面内质网扩张，局部逐渐空泡化。培养72 h后，与阴性对照组比较，0.003 mg/mL阿魏酸钠组、0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞凋亡指数均显著升高（ P<0. 05或 P<0. 01）。培养72 h后，与阴性对照组比较，0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞Bcl-2蛋白表达量明显减少（ P<0. 01），0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞Bax蛋白表达量均明显增加（ P<0. 05），0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞caspase-3蛋白表达量显著增加（ P<0.01）。培养72 h后，与阴性对照组比较，0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞TGF-β 1、磷酸化Smad2/3、磷酸化Smad4蛋白表达量均明显减少（ P<0. 05或 P<0. 01），0.003 mg/mL阿魏酸钠组、0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞磷酸化Smad7蛋白表达量均显著增加（ P<0.01）。 结论:阿魏酸钠可通过阻断TGF-β/Smad信号通路上的关键蛋白的表达，协同激活线粒体凋亡途径共同发挥抑制人皮肤HSFb增殖和促进人皮肤HSFb凋亡的作用。

目的:确定G1、G3和G5三个基因型别的乙型脑炎病毒(乙脑病毒)国家标准株实验室鉴定评价指标，评价乙脑病毒国家标准株。方法:依据病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准，基于乙脑病毒研究工作中的应用，以形态学特征、生物学特征、分子生物学特征等数据为基础，鉴定G1型(NX1889株)、G3型(P3株)和G5型(XZ0934株)三个基因型别乙脑病毒株的特征。结果:乙脑病毒电镜下为球形颗粒，直径约为60 nm；感染BHK-21、Vero细胞后，细胞病变效应以细胞圆缩脱落为主，感染C6/36细胞后，表现为细胞融合和脱落；病毒滴度为10 5~10 7 PFU/ml，噬斑大小存在型别差异；G1、G3和G5型乙脑病毒三周龄小鼠腹腔攻毒的半数致死量为50.51 PFU、6.98 PFU、8.13 PFU，五周龄小鼠颅内攻毒的半数致死量为3 PFU、0.3 PFU、1.35 PFU；G1、G3和G5型乙脑病毒基因组全长分别为：10 967 bp、10 976 bp和10 983 bp。 结论:通过乙脑病毒电镜、细胞、动物和基因组等实验室指标的确定，鉴定与评价了三个基因型别乙脑病毒国家标准株，为其他病毒国家标准株的鉴定与评价提供了参考。

目的:观察TGX-221对人膀胱癌的抗肿瘤作用效果，并探究其作用机制。方法:选取人膀胱癌T24与5637细胞株作为研究对象。将T24及5637细胞分为PBS对照组、5和10 μmol/L TGX-221实验组，使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度的TGX-221抑制肿瘤细胞生长的半数抑制浓度(IC 50)值，并同时检测对细胞活力的影响；使用细胞划痕实验和Transwell实验检测TGX-221对肿瘤细胞侵袭、迁移能力的抑制；使用流式细胞仪检验TGX-221干预对膀胱肿瘤细胞周期与细胞凋亡的影响，利用蛋白印迹法探寻干预后膀胱肿瘤细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)相关通路蛋白变化情况，研究可能的作用机制。两组之间的比较使用独立样本 t检验，多组间比较使用单因素方差分析。 结果:TGX-221处理24 h后，5637、T24细胞株的半数致死浓度分别为15、30 μmol/L，实验组细胞增殖能力低于对照组[(66.81±4.12)%、(83.41±5.06)%比(100.00±5.65)%(5637细胞)；(78.71±5.75)%、(89.34±4.75)%比(100.00±4.50)%(T24细胞)]，实验组细胞迁移率显著降低[(34.10±3.29)%、(68.74±6.32)%比(100.00±1.52)%(5637细胞)；(69.78±6.06)%、(86.03±4.98)%比(100.00±6.55)%(T24细胞)]，实验组细胞侵袭能力显著降低[(18.44±5.17)个、(30.89±3.76)个比(51.22±4.84)个(5637细胞)；(50.33±6.26)个、(75.72±5.72)个比(101.11±8.91)个(T24细胞)]，细胞周期实验表明，实验组细胞周期大量停滞于G 0及G 1期[(72.40±2.22)%、(60.96±1.95)%比(45.00±3.15)%(5637细胞)；(65.88±3.05)%、(53.61±3.17)%比(43.61±1.26)%(T24细胞)]，实验组细胞凋亡率明显升高[(15.07±1.27)%、(9.93±0.97)%比(5.77±0.61)%(5637细胞)；(16.13±0.91)%、(11.06±1.19)%比(7.91±0.65)%(T24细胞)]，蛋白印迹实验中，实验组磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、波形蛋白(Vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)等蛋白含量明显下调，B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白含明显上调。 结论:TGX-221可以抑制人膀胱癌5637与T24细胞的增殖、侵袭及迁移能力，抑制其细胞周期，促进细胞凋亡，其抑制侵袭及迁移能力的机制与蛋白激酶B(Akt)/β-catenin信号通路有关。

目的:比较肠炎沙门菌制备的菌影(SE-ghost)通过肌肉注射(肌注)和口服不同免疫途径接种雌性BALB/c小鼠诱导体液和细胞免疫应答的功效。方法:用SE-ghost接种BALB/c小鼠，间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体水平和阴道灌洗液IgA抗体水平；流式细胞仪检测小鼠脾脏CD3 ＋CD4 ＋T、CD3 ＋CD8 ＋T细胞百分比变化和脾脏内细胞因子IL-4、IFN-γ分泌；三次免疫后所有小鼠口服半数致死量肠炎沙门菌进行强毒攻击。用SE-ghost刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)，流式细胞仪检测表面分子抗体APC-CD11c、FITC- MHC ClassⅡ、PE-CD40、FITC- CD86、PE-CD80表达量；双抗体夹心ELISA测定BMDCs上清液IL-1β、IL-6、IL-10和IL-12p70的产量。 结果:与PBS组相比，SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组小鼠体内肠炎沙门菌特异性抗体IgG和IgA水平明显增高；脾脏CD3 ＋CD4 ＋T细胞百分比上调、高分泌细胞因子IL-4 、IFN-γ。肌肉注射SE-ghost比口服可诱导更强的体液和细胞免疫应答。致病菌肠炎沙门菌强毒攻击后，SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组生存率高达80%。与对照组相比，BMDCs经SE-ghost刺激后高表达表面成熟分子抗体CD86、CD80、CD40、MHCⅡ，高分泌细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p70。 结论:通过肌肉注射SE-ghost进行免疫，可在小鼠中引发更强大的抗原特异性免疫应答，以防止沙门菌感染。SE-ghost是一种有用的沙门菌候选疫苗。

目的:探讨经赤芝菌发酵不同时间钩吻（赤芝钩吻）的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱与毒性的关系。方法:用赤芝菌对钩吻进行双向固体发酵炮制，取发酵9、11、13、15、17、19、21、23、25、27 d（第27天取样2次）共10批次（批号S1~S10）赤芝钩吻，采用自行建立的HPLC法测定指纹图谱。将100只无特定病原体级ICR小鼠随机分为10组（每组10只，雌雄各半），以发酵11 d赤芝钩吻对小鼠的半数致死剂量为毒性测定给药浓度配制S1~S10赤芝钩吻溶液，分别给10组小鼠灌胃，观察各组小鼠的死亡情况。根据灰色关联度计算公式计算S1~S10赤芝钩吻指纹图谱共有色谱峰与毒性（对小鼠的致死率）的关联度系数，分析赤芝钩吻毒性的主要贡献成分。结果:S1~S10赤芝钩吻指纹图谱共标定17个共有色谱峰；S1~S10赤芝钩吻对小鼠的致死率分别为1.00、1.00、0.80、0.70、0.60、0.60、0.50、0.40、0、0。灰色关联度分析显示，7、3、6、9、1、8、17、12号共有色谱峰与毒性的关联度系数分别为0.868、0.838、0.830、0.828、0.824、0.820、0.818和0.802，这8个色谱峰所代表的化学成分为赤芝钩吻毒性的主要贡献成分。结论:赤芝钩吻随发酵时间延长毒性逐渐降低，发酵27 d时毒性最低。发酵后钩吻的毒性是多成分共同作用的结果，毒性主要贡献成分的辨识可为发酵钩吻的质量控制和发酵工艺优化提供参考。

目的:探讨磷酸三（2-氯丙基）酯（TCIPP）和磷酸三正丁酯（TnBP）对斑马鱼胚胎的生长发育毒性及潜在分子机制。方法:以斑马鱼为模型，采用半静态法，将受精后2 h（hpf）斑马鱼胚胎暴露于TCIPP和TnBP（0.1、1、10、100、500和1 000 μmol/L）水溶液120 h，测定其生存率和孵化率，以及环境相关浓度（0.1和1 μmol/L）下120 hpf斑马鱼转录组的变化。结果:TCIPP和TnBP对斑马鱼胚胎的半数致死浓度分别是155.30和27.62 μmol/L（96 hpf）、156.50和26.05 μmol/L（120 hpf）。暴露于100 μmol/L的TCIPP和10 μmol/L的TnBP后斑马鱼72 hpf孵化率分别为（23.33±7.72）%和（91.67±2.97）%，与对照组相比均降低，差异有统计学意义（均 P<0.05）。转录组结果显示，TnBP暴露导致的差异基因数多于TCIPP，并呈现“剂量-效应”关系。IPA通路富集分析提示共富集32条通路，涉及氧化应激、能量代谢、脂质代谢和核受体相关通路等。TCIPP和TnBP共同富集到3条通路，分别为甲状腺激素受体/视黄酮X受体和组成型雄烷受体/视黄酮X受体通路等。TnBP单独富集到肝脏X受体/视黄酮X受体和氧化应激相关通路等。 结论:TCIPP和TnBP对斑马鱼均具有生长发育毒性，TnBP毒性效应更强，TCIPP和TnBP诱导斑马鱼生长发育毒性的作用机制有所不同。

目的:建立狂犬病病毒CVS-11以肌肉注射或脑内注射方式攻毒的BALB/c小鼠动物模型。方法:将由BSR细胞传代繁殖的滴度为2.7×10 7 FFU/ml的CVS-11毒株进行10 －1～10 －7倍系列稀释，分别以肌肉或脑内注射的方式对4周龄的雌性BALB/c小鼠进行攻毒，观察小鼠发病死亡情况，并对所有攻毒小鼠的脑组织进行直接免疫荧光试验(direct fluorescent assay, DFA)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测以确定小鼠死因。确定不同攻毒方式下小鼠的半数致死量(median lethal dose，LD 50)，建立小鼠模型。根据已建立的小鼠模型，评估4种国内市售狂犬病疫苗对CVS-11暴露后小鼠的免疫保护效果。 结果:BALB/c小鼠脑内攻毒后于第6～12天开始出现典型的神经症状并死亡，其LD 50为18.3/0.1 ml；肌肉注射攻毒的小鼠在第8～15天出现临床症状并死亡，LD 50为2.7×10 5/0.1 ml。DFA检测结果显示，所有死亡小鼠脑组织印片中均出现特异性黄绿色荧光，RT-PCR检测结果显示所有的扩增产物均出现大小约250 bp的明亮条带。以上结果提示狂犬病病毒感染是小鼠的致死原因。4种不同的市售狂犬病疫苗在无免疫球蛋白应用情况下的保护效果试验显示，接种其中1种疫苗暴露后小鼠的存活率为50%，接种其他3种疫苗小鼠的存活率为30%。以上结果表明，在无狂犬病被动免疫制剂使用的情况下，所选用的4种狂犬病疫苗对经CVS-11暴露后的小鼠提供了部分保护作用。 结论:本研究建立了狂犬病病毒CVS-11不同攻毒方式下的BALB/c小鼠动物模型，为狂犬病及狂犬病疫苗的相关研究提供了一个技术平台。

目的:探讨过量碘诱导绒毛膜滋养层细胞凋亡与早期妊娠稽留流产的相关机制。方法:选择2019年9月至2022年9月于天津市中心妇产科医院就诊的孕周≤12周的不明原因早期妊娠稽留流产患者（MA组， n = 43）和正常孕妇（对照组， n = 64）作为研究对象，采集绒毛组织，进行增殖细胞核抗原Ki67免疫组织化学检测和细胞凋亡检测；采集尿样，进行尿碘含量检测。另用不同剂量碘刺激培养人绒毛膜滋养层细胞株（HTR8/SVneo细胞）24 h，采用细胞计数试剂盒8（CCK8）检测细胞增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡情况。 结果:（1）对照组尿碘为159.70（114.21，218.73）μg/L，MA组为210.80（143.10，336.70）μg/L，二者比较差异有统计学意义（ Z = 2.26， P = 0.024）。（2）MA组绒毛组织Ki67免疫组织化学染色阳性和强阳性比例明显低于对照组（χ 2 = 37.00， P < 0.001）。（3）MA组绒毛组织细胞凋亡率明显高于对照组[（26.24 ± 1.06）%比（2.96 ± 1.97）%， t = 92.23， P < 0.001]。（4）50、100、300、500 μg碘组HTR8/SVneo细胞增殖率均明显低于0 μg碘组（均 P < 0.05），其中500 μg碘组低于半数致死量。（5）0、50、500 μg碘组细胞凋亡率分别为（8.79 ± 0.12）%、（9.56 ± 0.08）%、（19.86 ± 0.05）%，3组间比较差异有统计学意义（ F = 7.32， P = 0.007）；其中，50、500 μg碘组均高于0 μg碘组，且500 μg碘组高于50 μg碘组（均 P < 0.05）。 结论:早期妊娠稽留流产患者尿碘含量明显增高，过量碘摄入可能导致绒毛膜滋养层细胞的增殖活力下降，细胞凋亡增多。