目的:观察灯盏细辛（EBHM）调控丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路对大鼠急性高眼压的影响及视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠60只，采用随机数字表法分为对照组、模型组、EBHM低剂量组（A组）、EBHM中剂量组（B组）、EBHM高剂量组（C组），每组均为12只；以左眼为实验眼。模型组、A组、B组、C组大鼠通过前房加压灌注生理盐水构建急性高眼压模型；对照组仅给予全身麻醉。建模后2~ 30 d，对照组、模型组大鼠灌胃生理盐水3 ml，1次／d；A组、B组、C组大鼠分别给予0.30、0.45、0.60 g/100 g EBHM灌胃，1次／d。建模前以及建模后1、14、30 d测量大鼠眼压，并统计高眼压模型比例。建模后30 d，苏木精-伊红（HE）染色观察视网膜组织病理变化；免疫荧光染色检测RGC数量变化；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组大鼠视网膜中p38MAPK、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 （Caspase-3）mRNA相对表达量；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠视网膜中p38MAPK、磷酸化p38MAPK （p-p38MAPK）、Caspase-3蛋白相对表达量。多样本间比较采用单因素方差分析；两两样本间比较采用 SNK-q检验。 结果:建模后1 d，对照组大鼠均未出现急性高眼压，其余各组均建模成功。与模型组比较，B组、C组建模后14 d急性高眼压率较低，差异有统计学意义（ χ2=98.701， P<0.05）；A组、B组、C组建模后30 d急性高眼压率均为0。A组、B组、C组建模后14、30 d之间急性高眼压率比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。HE染色结果显示，对照组大鼠视网膜结构完整，各层清晰可见；RGC计数未见异常，形态饱满圆润。模型组大鼠视网膜明显变薄；RGC数量大量减少，形态空泡化，排列稀疏。A组、B组、C组大鼠视网膜变厚，RGC数量增多，其中C组视网膜结构恢复程度更好。免疫荧光染色结果显示，A组、B组、C组大鼠RGC计数较模型组升高，差异有统计学意义（ F=297.514， P<0.05 ）；组间两两比较，A组低于B组、C组（ q=2.842、5.263），B组低于C组（ q=2.457 ），差异均有统计学意义（ P<0.05 ）。RT-qPCR、Western blot检测结果显示，与模型组比较，A组、B组、C组大鼠视网膜中Caspase-3 mRNA （ F=267.912）、蛋白（ F=692.279）相对表达量及p-p38MAPK蛋白相对表达量（ F=150.061）均降低，差异均有统计学意义（ P<0.05 ）。组间两两比较，C组大鼠视网膜中Caspase-3 mRNA （ q=6.977、15.642 ）、蛋白（ q=6.997、15.642）相对表达量及p-p38MAPK蛋白（ q=12.443、24.358）相对表达量低于A组、B组，B组低于A组（ q=11.678、12.471、10.204），差异均有统计学意义（ P<0.05 ）。 结论:EBHM可以显著降低急性高眼压模型大鼠眼压，提高RGC计数，减轻视网膜损伤；其调控机制可能与MAPK通路有关。

目的:探讨全反式视黄酸(ATRA)体外诱导人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞凋亡的信号途径。方法:采用不同浓度的ATRA处理ARPE-19细胞24 h、48 h，采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测其细胞活性；分别采用0、2.5、5、10、15和20 μmol/L ATRA处理ARPE-19细胞24 h，通过流式细胞术和Western blot法检测细胞凋亡水平和caspase相关蛋白相对表达量；分别采用0、2.5、5、10和20 μmol/L ATRA处理ARPE-19细胞24 h，通过流式细胞术检测其总活性氧簇(ROS)水平和多重半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(multicaspase)水平，通过实时荧光定量PCR法检测caspase相关基因mRNA相对表达量。其中0 μmol/L ATRA组作为空白对照。结果:CCK-8检测结果显示，ATRA处理ARPE-19细胞24 h和48 h后的半数抑制浓度(IC 50)分别为13.88 μmol/L和11.99 μmol/L，不同浓度ATRA处理ARPE-19细胞24 h和48 h后细胞存活率总体比较，差异均有统计学意义( F＝176.60、350.30，均 P<0.01)。细胞培养24 h时，2 μmol/L、6 μmol/L ATRA组细胞存活率较空白对照组高，12、14、16、18、20 μmol/L ATRA组细胞存活率较空白对照组低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。流式细胞术检测结果显示，不同浓度ATRA处理ARPE-19细胞后24 h，细胞凋亡、multicaspase及ROS水平总体比较差异均有统计学意义( F＝86.39、166.84、101.40，均 P<0.01)，其中2.5 μmol/L和5 μmol/L ATRA组细胞凋亡率较空白对照组下降，10、15和20 μmol/L ATRA组较空白对照组升高，2.5、5、10、20 μmol/L ATRA组multicaspase和ROS相对表达量较空白对照组升高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；Western blot检测结果显示，与空白对照组比较，2.5、5、10、15、20 μmol/L ATRA组caspase 9蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与空白对照组比较，2.5 μmol/L ATRA组caspase 12蛋白相对表达量升高，5、10、15、20 μmol/L ATRA组逐渐降低，2.5、15、20 μmol/L ATRA组与空白对照组比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与空白对照组比较，5、10、20 μmol/L ATRA组caspase 3蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与空白对照组比较，2.5、5、10、15、20 μmol/L ATRA组cleaved caspase 3蛋白相对表达量显著升高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示，与空白对照组比较，2.5、5、10、20 μmol/L ATRA组caspase 9、caspase 12 mRNA及5 μmol/L、10 μmol/L ATRA组caspase 3 mRNA相对表达量明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。ATRA浓度小于10 μmol/L时，caspase 9和caspase 12 mRNA的相对表达量呈浓度依赖性升高，当浓度达20 μmol/L时，其相对表达量显著降低，但仍高于空白对照组。 结论:ATRA体外诱导ARPE-19细胞凋亡是通过激活ROS及内源性caspase依赖性凋亡途径导致的。

目的:研究胎鼠肛门直肠发育过程中硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein，TXNIP)/NOD样受体家族含pyrin结构域3 (NOD-like receptor protein 3，NLRP3)轴在泄殖腔发育中的作用。方法:50只Wistar孕鼠被随机分为先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation，ARM)组和正常组，每组各25只，孕10 d分别按125 mg/kg给予乙烯硫脲(ethylene thiourea，ETU)及等量生理盐水灌胃，孕14 d、孕15 d和孕16 d剖宫取胎，显微镜下收集胎鼠的后肠组织。通过蛋白印迹法和免疫组织化学检测NLRP3炎性小体和TXNIP蛋白的表达量。进一步在IEC-6中转染si-NC/TXNIP，通过实时定量PCR和蛋白印迹法检测TXNIP在mRNA和蛋白水平的敲减效率，用蛋白印迹法、细胞免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测si-NC组和si-TXNIP组NLRP3炎性小体、β-catenin的蛋白变化及细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量。采用2 -△△CT法分析目的基因mRNA相对表达量变化，观察各组细胞目的基因表达量的变化趋势，Western blot条带和免疫组织化学图片用ImageJ软件进行半定量分析， P<0.05表示有统计学意义。 结果:与正常组相比，TXNIP和NLRP3炎性小体的蛋白表达在ARM胎鼠的孕15 d和孕16 d时增加( P＝0.0012、 P＝0.0081)；与si-NC组相比，si-TXNIP组NLRP3活化受到抑制( P＝0.0131)，cleaved-caspase-1的蛋白表达降低( P＝0.0386)，细胞上清液中的IL-1β和IL-18含量减少( P＝0.0035、 P＝0.0259)，以及β-catenin的蛋白表达量降低( P＝0.018)。 结论:TXNIP/NLRP3轴可能通过调控Wnt/β-catenin通路参与ARM的发生。

目的:探讨藻蓝蛋白改善肺动脉高压(PAH)大鼠肺血管重构的机制。方法:将30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，采用随机数表法分为3组：正常对照组(对照组)、PAH模型组(PAH组)、藻蓝蛋白治疗组(治疗组)，每组10只。腹腔注射野百合碱(MCT)建立PAH模型，治疗组在造模后第15天给予藻蓝蛋白灌胃，持续14d。测量右心室收缩压(RVSP)，计算右心室肥厚指数(RVHI)。苏木精-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察肺血管，蛋白印迹法(Western blot)检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、核转录因子-κB(NF-κB)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、天冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、α-肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)表达，免疫荧光定位α-SMA和PCNA。多组比较采用单因素方差分析。结果:治疗组RVSP、RVHI低于PAH组[(24.60±3.33) mmHg比(40.49±3.76) mmHg， F＝140.998， P<0.01；(32.23±2.99)%比(43.45±3.10)%， F＝90.774， P<0.01]，肺小动脉中膜厚度及中膜面积百分比低于PAH组(0.579±0.013比0.736±0.023， F＝251.494， P<0.01；0.574±0.063比0.917±0.036， F＝84.346， P<0.05，肺血管胶原沉积低于PAH组[(9.81±0.66)%比(23.23±2.05)%， F＝294.181， P<0.01]。治疗组TGF-β1、bcl-2、α-SMA和PCNA相对表达量、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)/NF-κB低于PAH组(0.813±0.077比1.097±0.056， F＝75.485， P<0.01；0.902±0.030比1.231±0.123， F＝52.224， P<0.01；1.089±0.044比1.283±0.049， F＝85.388， P<0.01；1.218±0.008比1.673±0.139， F＝33.825， P<0.05；0.463±0.025比0.875±0.013， F＝447.19， P<0.01)；bax、Caspase-3相对表达量高于PAH组(1.188±0.072比0.738±0.048， F＝63.635， P<0.01；1.750±0.028比1.432±0.017， F＝31.684， P<0.01)。治疗组α-SMA、PCNA荧光强度低于对照组。 结论:藻蓝蛋白可通过抑制肺血管胶原沉积，减少炎性因子表达，抑制细胞增殖，促进凋亡，减轻大鼠PAH肺血管重构。

目的:通过脂多糖（LPS）建立脓毒症相关性脑病（SAE）体外模型，探讨人髓样分化蛋白2（MD2）在LPS导致神经元死亡过程中的作用及内在机制。方法:选择健康C57BL/6J孕鼠，孕期14~18 d，取胎鼠脑皮质组织，用0（空白对照组）、1、5和10 g/L的LPS刺激神经元后24 h，检测乳酸脱氢酶（LDH）释放量，观察神经元死亡情况，并用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子白细胞介素（IL-6、IL-1β）水平，以确定建立SAE体外神经炎症模型的最佳LPS剂量。将细胞分为空白对照组和LPS组，用原位末端缺刻标记法（TUNEL）染色检测细胞凋亡情况，用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测相关蛋白标志物活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）表达、坏死性凋亡相关蛋白神经元受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3（RIPK3）及磷酸化RIPK3（p-RIPK3）水平，用免疫荧光化学染色检测p-RIPK3和微管相关蛋白2（MAP2）的表达，以评估细胞死亡类型及神经元死亡程度；用Western blotting法检测MD2表达，免疫荧光化学染色观察p-RIPK3及MD2在神经元中的表达和分布，以评估MD2是否参与炎症反应促进神经元死亡。此外，将细胞分为空白对照组、LPS组和MD2干扰肽组（LPS+TC组），检测IL-6、IL-1β、LDH水平，评估干扰MD2能否减轻LPS诱导的神经炎症。结果:10 g/L LPS可诱导明显的神经元死亡，该浓度刺激神经元24 h后LDH释放量较空白对照组明显增加（相对释放量：1.45±0.04比1.00±0.00， P<0.01），神经元发生凋亡及坏死性凋亡，炎症因子IL-6、IL-1β水平显著增加〔IL-6（相对水平）：1.94±0.04比1.00±0.00，IL-1β（相对水平）：1.53±0.09比1.00±0.00，均 P<0.01〕。与空白对照组比较，LPS组TUNEL检测细胞凋亡明显增多，活化caspase-3表达明显增加（活化caspase-3/GAPDH：1.55±0.10比1.00±0.00， P<0.01），p-RIPK3/RIPK3比值明显升高（相对值：1.54±0.06比1.00±0.00， P<0.05），神经元周围p-RIPK3表达显著增多，提示脓毒症环境下神经元发生显著凋亡及坏死性凋亡。同时，与空白对照组比较，LPS组MD2表达量显著增加（MD2/GAPDH：1.91±0.07比1.00±0.00， P<0.01），神经元周围MD2表达显著增多，提示LPS诱导的MD2上调可能在脓毒症神经炎症及诱导神经元死亡中发挥关键作用。此外，与LPS组比较，MD2干扰肽能够降低炎症因子IL-6、IL-1β的表达水平〔IL-6（相对水平）：1.16±0.08比1.94±0.04，IL-1β（相对水平）：1.15±0.05比1.75±0.09，均 P<0.01〕，减少LDH释放（相对释放量：1.09±0.01比1.44±0.04， P<0.05）。 结论:LPS刺激神经元通过MD2诱导神经元炎症反应，最终导致神经元发生凋亡和坏死性凋亡；干扰MD2功能可减轻炎症，抑制神经元死亡。

目的:评价TANK结合激酶-1(TBK1)在急性肾损伤小鼠肾纤维化中的作用及其与内质网应激的关系。方法:雄性野生型C57BL/6小鼠24只，8~10周龄，体重20~25 g。采用随机数字表法分为4组( n＝6)：对照组(CON组)、急性肾损伤组(AKI组)、对照+TBK1抑制剂组(CON-GSK组)和急性肾损伤+TBK1抑制剂组(AKI-GSK组)。AKI组和AKI-GSK组小鼠腹腔注射叶酸250 mg/kg制备AKI模型，叶酸注射后第1天开始，AKI组隔天腹腔注射1次1%二甲基亚砜20 ml/kg，AKI-GSK组隔天腹腔注射1次TBK1抑制剂GSK8612 1.5 mg/kg，共7次。CON组和CON-GSK组隔天分别腹腔注射1次1%二甲基亚砜20 ml/kg或GSK8612 1.5 mg/kg，共7次。叶酸注射后第14天，取小鼠眼球血标本检测血清BUN和Cr的浓度；并提取小鼠肾组织，行天狼星红染色、Masson染色和HE染色观察肾组织病理学结果，测定肾纤维化面积，并行肾小管间质损伤评分；采用免疫荧光法检测肾组织纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达；采用免疫印迹法检测肾组织磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、磷酸化真核细胞起始因子2α(p-eIF2α)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、磷酸化肌醇需求激酶1α(p-IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、凋亡调节信号激酶1(ASK1)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-12(caspase-12)和磷酸化c-Jun氨基末端蛋白激酶(p-JNK)的表达。 结果:与CON组比较，AKI组和AKI-GSK组血清BUN和Cr浓度升高，肾纤维化面积增大，肾小管间质损伤评分升高，肾组织纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP、p-IRE1α、TRAF2、ASK1、caspase-12和p-JNK表达上调( P<0.05)，CON-GSK组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与AKI组比较，AKI-GSK组血清BUN和Cr浓度降低，肾纤维化面积减小，肾小管间质损伤评分降低，肾组织纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP、p-IRE1α、TRAF2、ASK1、caspase-12和p-JNK表达下调( P<0.05)。 结论:TBK1参与AKI小鼠肾纤维化的过程，其机制可能与促进内质网应激有关。

目的:观察甲基化转移酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白（WTAP）在缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤中的调节作用及其分子机制。方法:①实验一：将H9C2心肌细胞分为空白对照组和H/R模型组。采用H/R诱导H9C2细胞建立心肌缺血/再灌注（I/R）损伤模型；空白对照组不进行处理。采用N6-甲基腺苷（m6A）RNA甲基化测定试剂盒检测m6A水平；分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测甲基化转移酶〔WTAP、甲基转移酶样蛋白（METTL3、METTL14）〕的基因和蛋白表达水平。②实验二：将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP组。H/R+sh-WTAP组转染sh-WTAP以敲降WTAP表达，其余各组制模方法同实验一。转染48 h后，采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Western blotting检测WTAP、活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、活化多聚二磷酸腺苷酸核糖聚合酶（PARP）、转录激活因子4（ATF4）、蛋白激酶RNA样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的蛋白表达水平；采用免疫荧光染色观察ATF4阳性表达情况。③实验三：将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP和H/R+sh-WTAP+ATF4组。H/R+sh-WTAP+ATF4组用过表达质粒ATF4转染H9C2心肌细胞，其余各组制模方法同实验二。采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Western blotting检测ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平。结果:①实验一：H/R模型组m6A甲基化水平较空白对照组显著上调。RT-qPCR检测结果显示，H/R模型组METTL3、METTL14和WTAP基因表达水平均较空白对照组显著上调，以WTAP上调最显著；Western blotting检测结果呈相同趋势。提示甲基化转移酶WTAP的表达水平在H/R诱导的心肌细胞中显著上调。②实验二：H/R+sh-WTAP组细胞凋亡水平较H/R+sh-NC组明显减少〔（14.16±1.58）%比（24.51±2.38）%， P<0.05〕。Western blotting检测结果显示，H/R+sh-WTAP组WTAP、活化caspase-3、活化PARP、p-PERK、ATF4和CHOP的蛋白表达水平均较H/R+sh-NC组显著下调。荧光显微镜下显示，H/R+sh-WTAP组ATF4阳性信号较H/R+sh-NC组显著减弱〔（19.36±1.81）%比（32.83±2.69）%， P<0.01〕。提示敲降WTAP可抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡和内质网应激。③实验三：H/R+sh-WTAP+ATF4组细胞凋亡水平较H/R+sh-WTAP组显著增加〔（26.61±2.76）%比（17.14±0.87）%， P<0.05〕。Western blotting检测结果显示，H/R+sh-WTAP+ATF4组ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平较H/R+sh-WTAP组显著上调。提示过表达ATF4可逆转sh-WTAP对H/R诱导的心肌细胞中内质网应激和细胞凋亡的抑制作用。 结论:甲基化转移酶WTAP可调节ATF4表达，介导细胞凋亡和内质网应激，促进H/R诱导的心肌细胞损伤。

目的:探讨自噬抑制剂Spautin-1对小鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后焦虑样行为的影响及其机制。方法:36只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为假手术组、TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组，每组12只。后2组小鼠采用改良的Feeney自由落体硬膜外撞击法建立TBI模型。造模后10 min，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠侧脑室注射2 μL Spautin-1溶液(10 mmol/L)，另外2组注射等量溶剂。造模后1、7、14 d采用神经系统症状评分(NSS)评估小鼠的运动、感觉和反射功能。造模后15、16 d分别采用旷场实验、高架十字迷宫实验评估小鼠的焦虑样行为。造模后16 d采用尼氏染色检测小鼠杏仁核区尼氏小体的数量，免疫荧光染色检测小鼠杏仁核区神经元特异性核蛋白(NeuN)阳性细胞数、白细胞介素(IL)-18及IL-1β阳性星形胶质细胞数，Western blotting实验检测小鼠杏仁核区自噬、焦亡相关蛋白的表达。结果:(1)造模后1、7 d，与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠的NSS评分增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)造模后15、16 d，与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠旷场实验的跨格次数、中央区停留时间百分比下降，高架十字迷宫实验的进入开放臂次数(OE)百分比、开放臂停留时间(OT)百分比下降；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠的跨格次数、中央区停留时间百分比、OE百分比、OT百分比升高，差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区尼氏小体、NeuN阳性细胞数减少；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区尼氏小体、NeuN阳性细胞数增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。(4)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区IL-1β、IL-18阳性星形胶质细胞百分比增加；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区IL-1β、IL-18阳性星形胶质细胞百分比减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。(5)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、成孔蛋白D-N末端片段(GSDMD-N)、泛素特异性肽酶(USP)13及B淋巴细胞瘤-2相互作用蛋白(Beclin1)的表达上调，微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ值升高；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区NLRP3、活化Caspase-1、GSDMD-N、USP13、Beclin1蛋白的表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:自噬抑制剂Spautin-1能够改善小鼠TBI后的焦虑样行为，其机制可能与抑制小鼠杏仁核区星形胶质细胞的自噬依赖性焦亡相关。

淋巴管平滑肌瘤病（LAM）是一种罕见的肺部疾病，以囊性肺破坏、进行性肺功能下降和肺衰竭为主要特征。LAM的病理特征是肺内异常平滑肌样LAM细胞过度增殖，LAM细胞异常表达多种蛋白酶［主要是基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9和组织蛋白酶K］，可能直接导致肺结构破坏和囊肿形成。雷帕霉素是LAM患者的主要治疗方法，但停药后疾病会继续进展。目前，肺功能检查［如第一秒用力呼气容积（FEV1）］是监测LAM患者疾病负担和治疗反应的标准方法，但FEV1水平易出现技术变异，且对治疗的反应较慢，因此急需定量、准确和快速反应的生物标志物来监测LAM患者疾病进展及治疗预后。基于活性的纳米传感器是一种新兴的生物传感器，可以检测体内失调的蛋白酶，并释放一个报告器来提供疾病的泌尿系统读数。由于LAM中存在广泛的蛋白酶调节失调，该研究开发了一种包括14种肽底物的纳米传感器面板，将其气管滴注到LAM模型小鼠肺内，收集尿液进行质谱测定纳米传感器裂解产物，监测LAM小鼠对雷帕霉素治疗的反应，通过机器学习区分健康与LAM小鼠、治疗与未治疗小鼠。结果发现，基于多活性的纳米传感器PP03（被MMP、天冬氨酸和半胱氨酸蛋白酶切割）（ P<0.001）和PP10（被丝氨酸、天冬氨酸和半胱氨酸蛋白酶切割）（ P=0.017）的切割信号在LAM小鼠和正常小鼠中存在显著差异，机器学习模型可进行强分类。在雷帕霉素治疗后的2 d内，LAM小鼠中PP03和PP10的切割信号恢复正常，机器学习模型使治疗反应的准确分类成为可能［未经治疗组曲线下面积（AUC）=0.94］。

目的:评价睡眠剥夺对脓毒症大鼠认知功能的影响及与神经细胞糖酵解同工酶磷酸果糖激酶-2/果糖-2，6-二磷酸酶3（PFKFB3）的关系。方法:将56只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为4组（ n＝14）：对照组（Con组）、脓毒症组（LPS组）、脓毒症+睡眠剥夺组（LPS+SD组）、脓毒症+睡眠剥夺+糖酵解抑制剂3-PO处理组（LPS+SD+3-PO组）。腹腔注射脂多糖（LPS）10 mg/kg建立脓毒症大鼠模型。LPS+SD组于注射LPS后24 h使用睡眠剥夺仪进行睡眠剥夺处理；LPS+SD+3-PO组注射LPS后24 h注射3-PO 50 mg/kg，随后进行睡眠剥夺处理。注射LPS后72 h进行新物体识别实验，随后收集血液、脑组织标本，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测脑组织乳酸（Lac）、活性氧（ROS）及血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、丙酮酸含量，并计算乳酸/丙酮酸比值；比色法检测脑组织Na +-K +-ATP酶活性；苏木素-伊红（HE）染色观察海马区病理改变；蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测脑组织PFKFB3、闭锁小带蛋白1（ZO-1）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）相对表达水平。 结果:与Con组相比，LPS组新物体识别指数降低，血清NSE、TNF-α、乳酸/丙酮酸比值及脑组织Lac、ROS、干湿重比明显升高，脑组织Na +-K +-ATP酶活性降低，脑组织PFKFB3、caspase-3表达上调、ZO-1表达下调，海马区神经细胞轻度变性。与LPS组相比，LPS+SD组新物体识别指数进一步降低〔（39.4±5.3）%比（54.5±7.6）%〕，血清NSE、TNF-α、乳酸/丙酮酸比值及脑组织Lac、ROS、干湿重比进一步升高〔NSE（μg/L）：3.21±0.42比2.55±0.36，TNF-α（ng/L）：139.4±19.7比92.2±13.5，乳酸丙酮酸比值：29.7±5.5比19.2±4.2，Lac（μmol/g）：19.51±2.33比11.34±1.52，ROS（kU/g）：117.4±18.7比78.2±11.8，干湿重比：（81.3±9.2）%比（64.3±6.6）%〕，脑组织Na +-K +-ATP酶活性进一步降低（mmol·L -1·h -1：1.88±0.34比2.91±0.39），脑组织PFKFB3、caspase-3表达进一步上调、ZO-1表达进一步下调（PFKFB3/β-actin：0.80±0.11比0.45±0.07，caspase-3/β-actin：0.71±0.09比0.37±0.05，ZO-1/β-actin：0.31±0.05比0.61±0.08），差异均有统计学意义（均 P<0.05），且海马区神经细胞变性明显增多。与LPS+SD相比，LPS+SD+3-PO组新物体识别指数升高〔（50.8±5.9）%比（39.4±5.3）%〕，血清NSE、TNF-α、乳酸/丙酮酸比值及脑组织Lac、ROS、干湿重比明显降低〔NSE（μg/L）：2.60±0.33比3.21±0.42，TNF-α（ng/L）：103.7±18.3比139.4±19.7，乳酸丙酮酸比值：17.4±5.1比29.7±5.5，Lac（μmol/g）：13.68±2.02比19.51±2.33，ROS（kU/g）：86.9±14.5比117.4±18.7，干湿重比：（67.7±6.9）%比（81.3±9.2）%〕，脑组织Na +-K +-ATP酶活性升高（mmol·L -1·h -1：2.82±0.44比1.88±0.34），脑组织PFKFB3、caspase-3表达下调、ZO-1表达上调（PFKFB3/β-actin：0.50±0.06比0.80±0.11，caspase-3/β-actin：0.43±0.06比0.71±0.09，ZO-1/β-actin：0.52±0.06比0.31±0.05），差异均有统计学意义（均 P<0.05），且海马区神经细胞变性明显减轻。 结论:睡眠剥夺可加重脓毒症大鼠神经炎症、细胞变性和凋亡，导致血脑屏障破坏和认知损害；3-PO处理可显著减轻脓毒症大鼠海马神经细胞损伤变性，抑制神经炎症和细胞凋亡，改善认知功能障碍，该作用可能与抑制糖酵解同工酶PFKFB3有关。