目的:观察灯盏细辛（EBHM）调控丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路对大鼠急性高眼压的影响及视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠60只，采用随机数字表法分为对照组、模型组、EBHM低剂量组（A组）、EBHM中剂量组（B组）、EBHM高剂量组（C组），每组均为12只；以左眼为实验眼。模型组、A组、B组、C组大鼠通过前房加压灌注生理盐水构建急性高眼压模型；对照组仅给予全身麻醉。建模后2~ 30 d，对照组、模型组大鼠灌胃生理盐水3 ml，1次／d；A组、B组、C组大鼠分别给予0.30、0.45、0.60 g/100 g EBHM灌胃，1次／d。建模前以及建模后1、14、30 d测量大鼠眼压，并统计高眼压模型比例。建模后30 d，苏木精-伊红（HE）染色观察视网膜组织病理变化；免疫荧光染色检测RGC数量变化；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组大鼠视网膜中p38MAPK、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 （Caspase-3）mRNA相对表达量；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠视网膜中p38MAPK、磷酸化p38MAPK （p-p38MAPK）、Caspase-3蛋白相对表达量。多样本间比较采用单因素方差分析；两两样本间比较采用 SNK-q检验。 结果:建模后1 d，对照组大鼠均未出现急性高眼压，其余各组均建模成功。与模型组比较，B组、C组建模后14 d急性高眼压率较低，差异有统计学意义（ χ2=98.701， P<0.05）；A组、B组、C组建模后30 d急性高眼压率均为0。A组、B组、C组建模后14、30 d之间急性高眼压率比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。HE染色结果显示，对照组大鼠视网膜结构完整，各层清晰可见；RGC计数未见异常，形态饱满圆润。模型组大鼠视网膜明显变薄；RGC数量大量减少，形态空泡化，排列稀疏。A组、B组、C组大鼠视网膜变厚，RGC数量增多，其中C组视网膜结构恢复程度更好。免疫荧光染色结果显示，A组、B组、C组大鼠RGC计数较模型组升高，差异有统计学意义（ F=297.514， P<0.05 ）；组间两两比较，A组低于B组、C组（ q=2.842、5.263），B组低于C组（ q=2.457 ），差异均有统计学意义（ P<0.05 ）。RT-qPCR、Western blot检测结果显示，与模型组比较，A组、B组、C组大鼠视网膜中Caspase-3 mRNA （ F=267.912）、蛋白（ F=692.279）相对表达量及p-p38MAPK蛋白相对表达量（ F=150.061）均降低，差异均有统计学意义（ P<0.05 ）。组间两两比较，C组大鼠视网膜中Caspase-3 mRNA （ q=6.977、15.642 ）、蛋白（ q=6.997、15.642）相对表达量及p-p38MAPK蛋白（ q=12.443、24.358）相对表达量低于A组、B组，B组低于A组（ q=11.678、12.471、10.204），差异均有统计学意义（ P<0.05 ）。 结论:EBHM可以显著降低急性高眼压模型大鼠眼压，提高RGC计数，减轻视网膜损伤；其调控机制可能与MAPK通路有关。

丹灯通脑软胶囊源于彝医验方,由丹参、灯盏细辛、川芎、粉葛 4 味药物组成,具有活血化瘀、祛风通络等功效,临床上多用于冠心病、脑中风、高血压、心绞痛等疾病的治疗.复方的组成药物中以黄酮类、醌类、有机酸类等化学成分为主,研究证实该药具有扩张周围毛细血管、促进心脑血管循环、增加冠状动脉血流量和缓解心肌缺血的功效,本文通过回顾近年来的相关文献,对丹灯通脑软胶囊的化学组成成分、质量控制和体内代谢研究方法进行总结,旨在为丹灯通脑软胶囊及相关组方的药效物质基础的研究提供参考依据.

目的 研究灯盏细辛Erigeron breviscapus的化学成分及其体外抗胶质母细胞瘤和结肠癌活性.方法 采用大孔树脂柱色谱、中压制备色谱、高压制备色谱等多种方法进行分离和纯化,利用 1D-NMR、2D-NMR、HR-ESI-MS、UV、IR等波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定,采用CCK-8 法对新化合物的活性进行筛选.结果 从灯盏细辛 80%甲醇提取物中分离得到 4 个化合物,分别鉴定为反式-4-咖啡酰氧基-3-羟基-6-咖啡酰氧甲基-7,8-二氧杂环[3.2.1]辛烷-1-羧酸(1)、异绿原酸A(2)、绿原酸(3)和新绿原酸(4);其中化合物1 对人胶质瘤U87 细胞和人结肠癌HT29 细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)分别为(13.31±0.77)、(14.83±0.92)μmol/L.结论 化合物 1 为新化合物,命名为新飞蓬酯乙;化合物 1 对肿瘤细胞的增殖具有一定的抑制作用.

研究灯盏细辛总咖啡酰奎宁酸(caffeoylquinic acid from Erigeron breviscapus,EBCQA)的抗衰老作用,并探讨其潜在作用机制.以线虫为模型,观察EBCQA对其寿命、氧化抗性、热抗性、运动能力、DAF-16入核、以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影响.腹腔注射D-半乳糖构建衰老大鼠模型,检测EBCQA对大鼠学习记忆能力、胸腺和脾脏系数、肝脏中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(Akt/protein kinase B,Akt)、磷酸化 Akt(phosphp-Akt,p-Akt)、叉头框蛋白 O3a(forkhead box class O3a,FOXO3a)、磷酸化 FOXO3a(phosphp-FOXO3a,p-FOXO3a)表达,以及肝脏和血清中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量的影响.结果显示,EB-CQA能够延长野生型线虫寿命,并提升其氧化抗性、热抗性和运动能力,但对线虫PI3K、Akt、FoxO3a同源体突变株寿命没有显著影响;EBCQA能促进DAF-16入核,通过DAF-16提升线虫的SOD、GSH-Px、CAT活性,降低MDA水平.在D-半乳糖诱导衰老大鼠中,EBCQA给药显著改善大鼠的学习记忆功能,提升胸腺和脾脏系数,降低PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO3a表达和MDA含量,增强SOD、GSH-Px、CAT活性.以上结果表明,EBCQA具有延缓衰老的作用,其机制可能与抑制PI3K和Akt激活、降低FOXO3a磷酸化、促进FOXO3a入核和转录活性、提升抗氧化酶活性和抑制氧化应激相关.

[目的]探讨灯盏细辛注射液(EBI)对脑卒中大鼠的神经保护作用及在该过程中对Janus激酶 2(JAK2)/信号转导子和转录激活子 3(STAT3)信号通路的调节机制.[方法]通过大脑中动脉闭塞(MCAO)建立缺血性脑卒中大鼠模型,然后将造模成功的大鼠随机分为模型组、尼莫地平组、EBI组、JAK2 抑制剂组(AG490 组)和EBI+JAK2 激动剂组(EBI+CA1 组),每组 20 只,另外选取 20 只大鼠只暴露颈动脉不进行结扎作为假手术组.利用神经功能缺损评分评估大鼠神经功能;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积;苏木精-伊红(HE)和尼氏(Nissl)染色检测大鼠脑组织的病理性形态;TUNEL染色检测大鼠脑组织中神经细胞凋亡情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠脑组织中Bax、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3 蛋白的表达.[结果]与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死面积增大,神经元细胞凋亡率增加,神经缺损评分、MDA水平、Bax蛋白表达及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3 比值均升高(P＜0.05),同时脑组织中神经元退化,神经元数量减少,SOD、GSH-Px活性及Bcl-2 蛋白表达降低(P＜0.05);与模型组相比,EBI组、尼莫地平组和AG490 组大鼠脑梗死面积减小,神经元细胞凋亡率减少,神经缺损评分、MDA水平、Bax蛋白表达及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3 比值均降低(P＜0.05),同时脑组织中神经元损伤减轻,神经元数量增加,SOD、GSH-Px活性及Bcl-2 蛋白表达升高(P＜0.05);进一步利用JAK2 激动剂进行回补实验发现,EBI对大鼠神经损伤的保护作用被逆转(P＜0.05).[结论]EBI能够通过抑制JAK2/STAT3 信号通路减轻脑卒中大鼠的神经损伤.

目的:通过网络药理-分子对接探讨灯盏细辛防治缺血性脑卒中的潜在分子作用机制.方法:通过中草药系统药理平台(TCMSP)数据库筛选灯盏细辛的活性成分及潜在作用靶点;通过在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、生物信息学和化学信息学数据库(DrugBank)、人类基因综合数据库(GeneCards)检索缺血性脑卒中相关靶点.蛋白质数据库(Uniprot)对靶点标准去重,导入韦恩(Venny)在线平台,得到两者交集靶点.通过基因间功能关联数据库(STRING)和Cytoscape 3.7.1软件对交集靶点进行蛋白相互作用(PPI)可视化分析;接着对交集靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析.AutoDock Vina1.5.6软件对关键活性成分与核心靶点进行分子对接验证并实现对接结果的可视化.结果:获取灯盏细辛11个有效成分及176个作用靶点;缺血性脑卒中相关靶点690个,二者的交集靶点69个.通过PPI网络可视化分析,根据度值大小筛选出肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、血管内皮生长因子A(VEGFA)等10个核心基因.KEGG富集到高级糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等.根据度值大小选取排名前三的有效活性成分及排名前五的靶蛋白,分子对接结果显示之间具有较好的结合能力.结论:灯盏细辛治疗缺血性脑卒中可能通过有效成分槲皮素、山奈酚、木犀草素,作用IL-6、IL-1β、TNF、VEGFA、AKT1等多靶点,通过IL-17、TNF等多条信号通路发挥作用,有着多成分、多靶点、多通路的特点.

目的 探讨灯盏细辛(erigeron breviscapus,EB)是否通过介导β型蛋白酶体亚基8(proteasome subunit β type 8,Psmb8)及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)轴抑制糖尿病肾病大鼠炎症反应.方法 随机选10只SPF雄性SD大鼠作为正常组,剩余大鼠用高脂饮食联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)构建糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型.成模大鼠共41只,随机剔除1只,将剩余大鼠随机分为模型组、EB低剂量组、EB中剂量组和EB高剂量组,每组10只.其中EB低剂量、EB中剂量和EB高剂量组分别灌胃EB 20、40、80 mg·kg-1·d-1,正常组和模型组大鼠给予等量生理盐水,持续给药8周.检测各组大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、肾脏指数(renal mass index,KI);用全自动生化分析仪检测24 h尿蛋白(urine protein,UPro)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;HE染色观察大鼠肾组织病理形态变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的含量;用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测Psmb8和NF-κB p65 mRNA相对表达量;用蛋白印迹(Western blotting)法检测Psmb8、NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白的相对表达量.结果 与正常组比较,模型组大鼠FBG、KI升高,体质量下降(P＜0.05),肾小球形态见明显病理改变,间质水肿并伴有大量炎性细胞浸润,血清TNF-α、IL-1β及IL-18含量升高,肾组织中Psmb8和NF-κB p65 mRNA及Psmb8、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的相对表达量升高(P＜0.05);与模型组比较,EB 低、中、高剂量组大鼠FBG和KI下降,体质量升高(P＜0.05),肾组织炎性病理情况见不同程度减轻,血清TNF-α、IL-1β及IL-18含量降低,肾组织中Psmb8和NF-κB p65 mRNA及Psmb8、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的相对表达量降低(P＜0.05);且EB对DN大鼠的炎症抑制作用呈剂量依赖性.结论 EB可抑制DN大鼠炎症反应,其作用机制可能与抑制Psmb8/NF-κB轴激活有关.

目的 探讨灯盏细辛(EB)对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制.方法 建立体外H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤模型.将体外培养的HL-1小鼠心肌细胞分为空白组(常规培养)、对照组(4 mg·L-1 EB 1 h)、模型组(800 μmol·L-1 H2O2 1 h)、实验组(4 mg·L-1 EB+800μmol·L-1 H2O2 1 h).用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞损伤情况;用流式细胞术检测活性氧(ROS)含量;用蛋白质印迹法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)和电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)蛋白表达水平;用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)含量;用钙黄绿素乙酰甲酯(Calcein AM)检测线粒体通透性转换孔(mPTP)的开放程度.结果 空白组、对照组、模型组和实验组的细胞活力分别为(93.58±7.33)％、(95.18±4.24)％、(52.20±6.98)％和(74.80±5.33)％;LDH 释放量分别为(44.18±6.36)、(46.16±5.01)、(689.60±124.00)和(365.60±87.79)U·L-1;ROS 释放量分别为 0.97±0.10、0.97±0.05、5.18±0.21 和 3.08±0.41;NLRP3 蛋白表达水平分别为 0.98±0.06、0.99±0.01、1.98±0.19 和 1.60±0.17;GSDMD 蛋白表达水平分别为1.00±0.07、1.00±0.05、1.97±0.09和1.46±0.10;IL-1β释放量分别为(25.39±5.35)、(2 5.02±2.37)、(2 14.8±35.90)和(117.50±23.66)pg·mL-1;VDAC1 蛋白表达水平分别为 1.00±0.04、1.01±0.05、3.18±0.15和 1.80±0.18;30 min 的 mPTP 孔开放水平分别为 1.22±0.02、1.22±0.01、1.14±0.02、1.17±0.01.模型组上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);实验组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 灯盏细辛减轻H2O2诱导的HL-1心肌细胞损伤,其机制可能与通过VDAC1调节ROS/NLRP3通路有关.

目的:探究灯盏细辛联合依帕司他对糖尿病肾病(DN)大鼠CAT、SOD、MDA表达的影响,探讨其抗氧化应激的作用.方法:将50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、灯盏细辛组、依帕司他组以及联合组,每组10只.除正常对照组外,其余各组采用喂养高脂高糖饲料、辅助一次性注射链脲佐菌素(STZ,55 mg/kg)的方法建立糖尿病肾病模型大鼠.造模成功后,依帕司他组给予依帕司他(100 mg/kg)灌胃,灯盏细辛组给予灯盏细辛(200 mg/kg)灌胃,联合组给予依帕司他(100 mg/kg)和灯盏细辛(200 mg/kg)灌胃,正常对照组和模型组给予5%CMC-Na混悬液灌胃,持续6周.记录造模前与治疗过程中各组大鼠的体质量、血糖以及24 h微量白蛋白(24 h UmAlb)含量;给药6周后处死大鼠,采用钼酸铵法检测肾皮质中过氧化氢酶(CAT)活性,采用WST1法检测大鼠肾皮质中超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用TBA法检测肾皮质中丙二醛(MDA)含量.结果:治疗后6周末,与模型组比较,联合组大鼠体质量与模型组比较,上升最显著(P<0.01),其次是依帕司他组,最后是灯盏细辛组,联合组与依帕司他组、灯盏细辛组比较具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);治疗后6周末,联合组的血糖,24 h UmAlb水平显著低于模型组、依帕司他组和灯盏细辛组(P<0.01,P<0.05);治疗后6周末,各组大鼠肾皮质氧化应激指标CAT、SOD和MDA水平比较,联合组大鼠肾皮质CAT和SOD水平明显高于模型组、依帕司他组和灯盏细辛组(P<0.01,P<0.05),MDA水平明显低于模型组、依帕司他组和灯盏细辛组(P<0.01,P<0.05).结论:灯盏细辛联合依帕司他能有效纠正糖尿病肾病肾损伤,延缓病情发展,其机制可能与其上调CAT、SOD活性,降低MDA含量,进而调控糖尿病肾病肾组织氧化应激有关.

目的 观察穴位注射治疗脾虚痰湿型糖尿病周围神经病变的临床疗效.方法 将 120 例糖尿病周围神经病变患者随机分为研究组和对照组,每组60 例.对照组给予西医基础对症治疗,研究组在西医基础对症治疗同时给予穴位注射灯盏细辛注射液治疗.观察两组治疗前后血Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)、高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、可溶性血管细胞黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-1,sVCAM-1)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GGT)、脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、血友病因子(von willebrand factor,vWF)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,γ-GABA)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)含量,检测腓神经及正中神经的运动神经传导速度(motor nerve conduction velocity,MCV)和感觉神经传导速度(sensory nerve conduction velocity,SCV),并比较两组临床疗效.结果 研究组血HMGB1、TLR2、sVCAM-1、ROS、γ-GGT、vWF、Hcy 含量较对照组降低(P＜0.05);研究组血 SOD、LXA4、γ-GABA、VEGF、IGF-1、NGF 含量较对照组升高(P＜0.05);研究组正中神经及腓总神经 SCV 和 MCV 较对照组升高(P＜0.05);研究组总有效率高于对照组(P＜0.05).结论 在西医基础对症治疗的基础上,穴位注射治疗脾虚痰湿型糖尿病周围神经病变疗效明显,可抑制机体炎症,改善氧化应激反应,减少血管内皮功能损伤,提升γ-GABA、NGF、IGF-1含量,改善神经传导速度.