血栓性血小板减少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)是一种血液系统危重症疾病,该病起病急、进展快、临床表现不一,目前中医药诊疗对该病的探讨尚甚少.本文总结2019年我院收治的一例因"神志异常伴发热8小时"入院的中年女性患者的中西医诊疗经过,通过结合其典型的TTP五联征临床表现、去整合素金属蛋白酶含血小板反应蛋白13型活性特殊实验室检查并逐步排除鉴别诊断,最终明确其西医诊断为获得性TTP.在及时给予血浆置换的同时,中医药治疗依据其全身皮肤多发出血点的主要临床表现将其归属于"血证""紫癜"范畴,通过辨证论治协同治疗,调和机体脏腑气血阴阳,对于减轻患者临床症状、预防TTP复发具有独特的优势.对于本病提出分期论治的中医辨治思路,且活血化瘀之法贯穿始终,前期辨证为邪阻络脉、伤营败血,治以凉血散血,解燃眉之急;中期辨证为湿热蕴结、气滞血瘀,治以清热化湿、行气活血,清弥留之邪;后期辨证为肝肾两虚、湿浊瘀阻,治以调补肝肾、化湿祛瘀,澄其源固其本,收效良好,为中西医结合诊疗该病提供可行思路.

目的:探讨去整合素样金属蛋白酶8(A disintegrin and metalloproteinase 8,ADAM8)对结肠癌细胞增殖和迁移的影响及其机制.方法:通过TCGA数据库分析ADAM8在结肠癌癌组织和正常组织中的表达水平.采用荧光定量PCR检测ADAM8在结肠癌细胞(CaCO-2、HCT8、HT29、HCT116、SW620、LOVO)中的相对表达.通过慢病毒稳转构建过表达ADAM8的结肠癌细胞系.通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测 ADAM8 的表达水平.通过CCK-8实验和集落克隆实验检测过表达ADAM8对结肠癌细胞体外增殖能力的影响.通过Transwell实验和划痕实验检测过表达ADAM8对结肠癌细胞体外迁移能力的影响.Western blot法检测EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin和E-cadherin以及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白STAT3和p-STAT3的相对表达水平.结果:与正常组织相比,ADAM8在结肠癌癌组织中表达升高(P＜0.001);ADAM8在结肠癌细胞HCT116和LOVO中相对表达量较低(P＜0.05);CCK-8实验和集落克隆实验结果显示过表达ADAM8促进了结肠癌细胞增殖能力(P＜0.05);Transwell和划痕实验结果显示过表达ADAM8促进了结肠癌细胞迁移能力(P＜0.001);Western blot结果显示过表达ADAM8能够下调EMT相关蛋白E-cadherin表达,上调Snail、N-cadherin和Vimentin表达并激活STAT3信号通路(P＜0.05).结论:ADAM8可通过激活STAT3信号通路促进结肠癌细胞的增殖和迁移,提示ADAM8可能是结肠癌治疗的潜在靶点.

目的 研究巨噬细胞去整合素金属蛋白酶8(ADAM8)过表达对血管平滑肌细胞去分化的影响.方法 利用生物信息学筛选小鼠腹主动脉瘤和人胸主动脉夹层差异表达基因.巨噬细胞转染ADAM8 过表达质粒,并收集巨噬细胞培养基处理血管平滑肌细胞.qPCR和Western blotting检测细胞ADAM8 表达水平;细胞划痕实验、Edu染色实验分别检测血管平滑肌细胞迁移能力和增殖能力.qPCR检测过表达ADAM8 的巨噬细胞培养基对血管平滑肌细胞分化标志基因表达水平的影响.结果 ADAM8 基因在人胸主动脉夹层和小鼠腹主动脉瘤病变过程中显著上调(P<0.05),且在脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应过程中也显著增加(P<0.05).巨噬细胞过表达ADAM8 诱导细胞炎症反应和基质金属蛋白酶(MMP)表达,同时过表达ADAM8 的巨噬细胞培养基促进血管平滑肌细胞的迁移和增殖能力,但显著抑制血管平滑肌细胞分化标志基因α-actin和α-tropomyosin的表达水平(P<0.05).结论 巨噬细胞ADAM8 促进炎症因子和MMP表达并诱导血管平滑肌细胞的去分化.

目的:配对盒基因6(paired box gene 6,PAX6)主要在胚胎发育中发挥调控作用,其异常表达与多种肿瘤的发生、发展有关,在不同肿瘤中可发挥促癌或抑癌的作用.本研究旨在观察过表达PAX6对肝癌细胞生长及自然杀伤(natural killer,NK)细胞对肝癌细胞杀伤能力的影响及其分子机制.方法:采用ELISA技术检测68例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者和10例健康人外周血的PAX6、可溶性主要组织相容性复合体I类样蛋白A(soluble major histocompatibility complex class I-like protein A,sMICA)和可溶性UL16结合蛋白2(soluble UL16 binding protein 2,sULBP2)的表达水平;体外培养肝癌细胞HepG2和LM3及人正常肝细胞LO2,将PAX6过表达质粒(PAX6-OE)和空载体(NC)转入HepG2和LM3细胞中构建稳定细胞株,分别采用real-time PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光等方法检测HepG2和LM3细胞中PAX6的表达水平;在HepG2和LM3细胞中过表达PAX6,采用CCK-8法和细胞划痕实验检测细胞生长和迁移能力,ELISA法检测其上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、去整合素样金属蛋白酶10(disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)的蛋白质表达水平;采用流式细胞术检测NK细胞对2种肝癌细胞的杀伤能力.结果:与健康人相比较,HCC患者血清中PAX6表达水平显著降低(P=0.002),而sMICA和sULBP2的表达水平显著增高(P=0.004和P<0.001).Real-time PCR、蛋白质印迹法结果显示:与正常肝细胞LO2相比,HepG2和LM3细胞PAX6的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05).免疫荧光结果亦可见肝癌细胞HepG2和LM3中PAX6的表达均低于正常肝细胞LO2.与NC组比较,PAX6-OE组肝癌细胞HepG2和LM3的增殖及迁移能力下降(均P<0.05);PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞中MMP2、MMP9、ADAM10的蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05),且PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平均显著低于NC组(均P<0.05).流式细胞术显示:与NC组比较,PAX6-OE组NK细胞对HepG2和LM3细胞的杀伤率显著增高(均P<0.05).结论:PAX6在HCC患者血清及肝癌细胞系中表达降低,过表达PAX6可抑制肝癌细胞生长,增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效率,其机制与PAX6抑制金属蛋白酶的表达、降低sMICA和sULBP2的分泌水平有关.

目的:探讨去整合素金属蛋白酶8(disintegrins metalloproteinase 8,ADAM8)、干扰素调控因子1 (interferon regulatory factor 1,IRF1)在支气管哮喘患儿外周血中的表达水平及其临床意义.方法:选取2015年3月至2017年3月在我院诊治的83例支气管哮喘患儿为研究对象,根据全球哮喘防治倡议(Global Initiative for Asthma,GINA)分为轻度持续组47例,中度持续组19例,重度持续组17例,同期选取35例健康儿童作为对照组.采用荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法检测各组儿童外周血中ADAM8,IRF1 mRNA水平;采用Western印迹检测各组儿童外周血中ADAM8,IRF1蛋白水平;采用肺功能仪检测各组儿童肺功能;分析ADAM8,IRF1蛋白水平与肺功能的相关性.结果:与对照组比较,哮喘患儿外周血中ADAM8,IRF1 mRNA和蛋白水平均显著上调(P＜0.05),中重度哮喘患儿外周血中ADAM8,IRF1 mRNA和蛋白水平明显高于轻度患儿(P＜0.05).哮喘患儿外周血中ADAM8与IRF1的表达呈正相关(r=0.815,P＜0.05).哮喘患儿外周血中ADAM8,IRF1蛋白表达水平与第1秒用力呼气量(forced expiratory volume in 1 second,FEV1)、第1秒用力呼气量与用力肺活量比值(forced expiratory volume in 1 second and forced vital capacityratio,FEV1/FVC)、用力呼气峰值流速(force expiratory peak velocity,PEF)等肺功能指标均呈负相关(P＜0.05).结论:ADAM8,IRF1在哮喘患儿外周血中高表达,与肺功能呈负相关,具有协同致炎作用,提示ADAM8,IRF1可作为临床上评估哮喘病情发展的参考指标,推测二者可作为治疗哮喘的新靶点.

目的 探讨含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的去整合素样金属蛋白酶(ADAMTS)18基因对人骨肉瘤细胞增殖与迁移作用及其机制.方法 将ADAMTS18过表达载体和空载体分别转染143B和U-20S人骨肉瘤细胞,细胞计数试剂盒(CCK)-8和Tr-answell小室实验研究过表达ADAMTS18基因对143B和U-20S细胞增殖和迁移作用,蛋白质Western印迹实验检测ADAMTS18和蛋白激酶B(AKT)蛋白表达水平.结果 与空载体转染细胞株比较,过表达ADAMTS18基因可显著抑制143B和U-20S细胞增殖和迁移能力,并下调143B和U-20S细胞AKT蛋白水平.结论 ADAMTS18经下调AKT通路活性而抑制人骨肉瘤细胞恶性表型.

目的观察T2DM大鼠早期认知功能改变及海马磷酸化N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 (p-NR2B)、Wnt3a和去整合素金属蛋白酶10(ADAM10)的表达变化.方法将40只健康雄性SD大 鼠采用随机数字表法分为对照组(Con,n=20),糖尿病组(DM,n=20).Con组以普通饲料喂养8周后单 次空腹腹腔注射柠檬酸缓冲液.DM组以高脂高糖喂养8周诱导IR后腹腔小剂量注射STZ 35 mg/kg, 3 d后测血糖,血糖≥16. 7 mmol/L确诊T2DM.造模成功后10、20 d分别通过Y迷宫、八臂迷宫检测认 知功能改变,17、21、28 d取大鼠海马,Western blot测定海马p-NR2B、Wnt3a和ADAM10的表达.结 果与Con组比较,DM组在Y迷宫自发活动次数为(6. 9±3. 2)次,自主选择率(SA％)为(42. 2± 29. 5)％,差异有统计学意义(P<0. 05);DM组在八臂迷宫的1、3、6 d测试时间分别为(459. 2±143. 5)s、 (357. 3±131. 7)s、(274. 0±145. 1)s,较 Con组延长(P<0. 05),记忆错误(WME)、参考记忆错误(RME) 和总记忆错误(TE)比较,差异无统计学意义(P>0. 05).与Con组比较,DM组各时间点海马中 p-NR2B、Wnt3a和 ADAM10的表达降低(P<0. 05).结论 T2DM大鼠海马中 p-NR2B、Wnt3a 和 ADAM10的表达减少可能参与其早期认知功能的下降.

目的 观察支气管哮喘急性发作期患儿外周血去整合素金属蛋白酶(disintegrins metalloproteinase,ADAM)8、干扰素调控因子(interferon regulatory factor,IRF)1的水平变化.方法 支气管哮喘急性发作期患儿91例(急性发作组),按照全球哮喘防治倡议标准将其分为轻度组27例、中度组35例、重度组29例,并于同期随机选取60例支气管哮喘缓解期患儿为缓解组,60例健康体检儿童为对照组.采用荧光定量PCR法检测各组研究对象外周血ADAM8 mRNA、IRF1 mRNA,Western blotting检测外周血ADAM8、IRF1蛋白,并检测各组肺功能指标,包括第1秒用力呼气量(forced expiratory volume in one second,FEV1)、用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、用力呼气峰流速(peak expiratory flow,PEF).结果 急性发作组中轻度组、中度组、重度组患儿外周血ADAM8 mRNA、IRF1 mRNA表达水平高于缓解组和对照组(P均<0.05),且轻度组、中度组、重度组患儿外周血ADAM8 mRNA、IRF1 mRNA表达水平逐渐升高(P均<0.05).急性发作组中轻度组、中度组、重度组患儿外周血ADAM8蛋白、IRF1蛋白水平高于缓解组和对照组(P均<0.05),且轻度组、中度组、重度组患儿外周血ADAM8蛋白、IRF1蛋白水平逐渐升高(P均<0.05).急性发作组患儿外周血ADAM8 mRNA与IFR1 mRNA水平呈正相关(r=0.793,P<0.05),ADAM8 mRNA水平与肺功能指标FEV1、FVC、FEV1/FVC、PEF呈负相关性(r分别为-0.659、-0.702,-0.683、-0.761,P均<0.05),IFR1 mRNA水平与肺功能指标FEV1、FVC、FEV1/FVC、PEF呈负相关性(r分别为-0.712、-0.735,-0.728、-0.756,P均<0.05).结论 支气管哮喘急性发作期患儿外周血ADAM8、IRF1水平升高,可能与小儿支气管哮喘的发生、发展有关,检测外周血ADAM8、IRF1有助于支气管哮喘急性发作期患儿病情判断.

目的 通过观察去整合素-金属蛋白酶8(ADAM8)与表皮生长因子受体(EGFR)在骨肉瘤中的表达特点,为骨肉瘤的靶向治疗研究或骨肉瘤发生、发展的调节机制奠定研究基础.方法 研究分别纳入骨肉瘤组织、骨软骨瘤组织、骨性关节炎组织及正常骨组织,采用组织芯片结合免疫组化法对上述组织中ADAM8与EGFR的表达情况进行观察对比,同时通过Spearman秩相关检验分析ADAM8与EGFR的相关性及与各病例的临床病理因素之间的关系.结果 骨肉瘤组织、骨软骨瘤组织、骨性关节炎组织及正常骨组织中,ADAM8阳性表达率分别为80.95％、36.36％、62.86％、24.14％,差异有统计学意义(P＜0.05);EGFR阳性表达率分别为66.67％、9.09％、40.00％、4.76％,差异有统计学意义(P＜0.05);Spearman秩相关检验显示ADAM8与EGFR呈正相关(r=0.379,P＜0.05).结论 ADAM8与EGFR在骨肉瘤组织中的表达明显增加,两指标联合检测能够作为临床诊断骨肉瘤的新选择.

[目的]检测结肠癌组织中去整合素样金属蛋白酶8 (ADAM8) 基因表达以及患者外周血中ADAM8蛋白表达的变化, 探讨了其相关的临床意义.[方法]收集2017年2月～2018年10月我院普外科治疗的结肠癌患者82例, 另取我院体检中心健康体检者30例作为正常健康对照.ELISA法检测外周血中ADAM8蛋白表达水平.荧光定量PCR检测ADAM8基因表达水平.[结果]结肠癌患者癌组织中ADAM8基因的2-△△Ct值为0.38±0.09, 显著高于癌旁组织的0.16±0.04 (P<0.01) .结肠癌患者外周血ADAM8蛋白表达水平为 (22.35±5.14) μg/L, 显著高于对照组的 (8.07±0.15) μg/L (P<0.01) .结肠癌患者癌组织中ADAM8基因2-△△Ct值和蛋白表达水平在肿瘤大小≥5 cm患者为 (0.44±0.12) 和 (25.24±5.65) μg/L, 显著高于<5 cm患者的 (0.31±0.06) 和 (18.32±4.52) μg/L (P<0.05), 在Ⅲ、Ⅳ期患者为 (0.43±0.11) 和 (25.50±5.76) μg/L, 显著高于Ⅰ、Ⅱ期患者的 (0.32±0.07) 和 (19.16±4.63) μg/L (P<0.05), 在淋巴结有转移患者为 (0.45±0.14) 和 (25.20±5.83) μg/L, 显著高于无转移患者的 (0.25±0.04) 和 (16.86±4.45) μg/L (P<0.01) .[结论]结肠癌患者肿瘤组织和外周血中ADAM8高表达, 高表达的ADAM8可能参与了结肠癌的发生、侵袭和转移过程.