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基于不同型别腺病毒标准品的呼吸道病原体核酸试剂最低检测限性能评价
编辑人员丨5天前
目的:利用不同型别呼吸道腺病毒核酸标准品对呼吸道病原体核酸检测试剂进行最低检测限性能评价。方法:选择已研制的1、2、3、4、5、7、55型呼吸道腺病毒核酸标准品,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)的EP17-A2文件,采用Probit回归方法对28种不同方法学原理的呼吸道病原体核酸检测试剂的最低检测限(Lod)进行评估,比较各试剂盒声称Lod和评估Lod之间以及对不同腺病毒型别检测Lod之间的差异。结果:28种试剂盒中能够准确评估Lod的比例为50%(12/24)。12种试剂盒的评估Lod与声称Lod一致性较好;12种试剂盒一致性较差,其中4种试剂盒差异较小(measured Lod<5×claimed Lod),8种试剂盒差异较大(measured Lod>5×claimed Lod),最大者可达24 000倍。不同试剂间评估的Lod浓度差异可达10 6数量级以上(最低和最高分别为20拷贝/ml和4.8×10 7拷贝/ml);同种试剂对不同型别腺病毒的检测Lod均不相同,其浓度差异最高可达10 4数量级(最低和最高分别为5.0×10 3拷贝/ml和4.8×10 7拷贝/ml)。 结论:部分呼吸道病原体核酸检测试剂检测腺病毒的最低检测限性能评估缺乏准确性,使用检测范围内的多种病原体型别或亚型进行性能评估尤为必要。
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编辑人员丨5天前
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呼吸道病原体多重核酸扩增在老年患者呼吸系统感染检测中的应用
编辑人员丨5天前
目的:了解多重RT-PCR方法检测13种常见呼吸道感染病原体,在老年患者呼吸系统感染病原体检测中的应用价值。方法:317例2016年6月至2017年5月在石家庄市第一医院老年科就诊的具有呼吸系统感染症状的老年患者,年龄60~98岁,采集其抽吸痰液,提取病毒DNA/RNA,利用多重RT-PCR技术扩增,通过毛细管电泳,同时检测13种呼吸道病原体;并以直接测序方法和荧光实时PCR法为标准,评价该试剂的临床性能。结果:使用直接测序和荧光实时PCR结果为参照,多重RT-PCR技术的准确性为99.93% (95% CI: 99.79%~99.98%),阳性预测值为99.24% (95% CI: 97.78%~99.74%),阴性预测值为100% (95% CI: 99.9%~100%),Cohen’s kappa值为0.9958 (95% CI: 0.965 2~1.026)。在317例老年患者中,呼吸道病原阳性检出率为75.7% (240/317),其中甲型流感病毒最高,为20.2% (64/317),主要为H3亚型(70.3% (45/64);其次为鼻病毒、腺病毒、肺炎支原体和乙型流感病毒,检出率分别为15.5% (49/317)、13.6% (43/317)、11.0% (35/317)和10.1% (32/317)。此外,同时检出2种以及2种以上病原体的老年患者为81例,检出率为25.6% (81/317)。 结论:多重RT-PCR方法能满足临床对呼吸道病原体检测的需求,并为老年患者呼吸系统感染的防治提供有效的临床资料。
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编辑人员丨5天前
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多重PCR技术和呼吸道病原体微流体芯片在诊断儿童急性呼吸道病毒感染中的应用
编辑人员丨5天前
目的:了解多重PCR技术(RespiFinder?SMART 22检测试剂盒)和呼吸道病原体微流体芯片技术(TaqMan array cards, TAC)在诊断儿童急性呼吸道感染(acute respiratory infection, ARI)中的应用价值。方法:从2018年8月份至2019年8月份采集的成都市儿童专科医院275例有ARI症状的患儿咽拭子样本中随机选择120份样本,分别使用RespiFinder?SMART 22和TAC进行呼吸道病毒核酸检测,比较2种检测方法的优缺点。结果:120份儿童ARI标本经RespiFinder?SMART 22和TAC检测,阳性率分别为88.33%和93.33%,混合感染率分别为26.67%和35%。在120份样本中,2种方法检测结果一致率为88.33%,其中阳性一致性106例,阴性一致性7例。结果不一致的有7例。结论:多重PCR技术和TAC技术在此次实验检测中检出阳性样本一致性较高,两者对于呼吸道病毒检测均具有良好的临床应用价值。
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编辑人员丨5天前
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基于一体化系统的呼吸道合胞病毒分型即时检验检测技术的建立及应用
编辑人员丨5天前
目的:研发一款一体化呼吸道合胞病毒(RSV)分型即时检验(point-of-care testing,POCT)检测试剂并评估其性能。方法:以RSV A和B亚型及ON1和BA9基因型的基因组保守序列设计特异性的引物和探针,优化PCR反应体系和条件,整合试剂玻璃化技术和多重检测平台,开发RSV分型POCT检测试剂,并对该产品的敏感度、特异度、重复性和临床性能进行评估。结果:一体化RSV分型POCT检测试剂敏感度可达500拷贝/ml,特异度好,与临床上表现相似的病原体无交叉反应,试剂批间和批内重复性Ct值的变异系数均<5%,具有较好的重复性,检测试剂应用于53例临床样本测试,检测结果与对比试剂具有较高的一致性和符合率,阳性符合率高达98.11%。结论:本研究开发的一体化RSV分型POCT检测试剂集成了"核酸提取-纯化-检测",实现了"样本进,结果出",操作简单,检测结果准确、可靠、稳定,可用于RSV A和B亚型的分型即时检验,为RSV的防控和诊疗提供助力。
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编辑人员丨5天前
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基于一体化系统流感病毒快速检测技术的建立
编辑人员丨5天前
目的:本研究旨在开发一种快速、准确的流感病毒一体化核酸检测方法。方法:设计了针对近年来国内流感病毒主要流行株的特异性引物和探针,将其与提取、扩增试剂和即时检测(point of care test,POCT)系统整合,实现针对流感病毒的核酸提取、反应体系配制、扩增反应和结果判读功能的快速一体化病毒核酸检测流程。使用培养的流感病毒对检测体系进行检测下限测试,并对检测体系进行特异性测试。结果:成功设计了甲型和乙型流感病毒的二重扩增引物和探针,实现了500拷贝/ml的检测下限,并通过特异性测试验证了检测试剂对腺病毒、呼吸道合胞病毒等其他呼吸道病原体无交叉反应。本研究建立的基于POCT技术的流感病毒核酸快速检测方法,可以实现在50 min内完成核酸提取、扩增和结果判读检测全流程,同时可以实现检测数据的实时上传。结论:开发的基于POCT技术的流感病毒快速检测试剂盒,实现了"样品进、结果出"的便捷操作,适合在基层医疗机构中快速检测流感病毒,具有重要的临床应用价值。
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编辑人员丨5天前
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基于环介导等温扩增和干式试剂技术的结核分枝杆菌快速检测方法的建立
编辑人员丨5天前
本研究使用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和干式试剂技术,研发一种可以常温存储的结核分枝杆菌快速检测试剂。LAMP核酸扩增技术基于4或6条特异性引物,依靠链置换DNA聚合酶,使DNA在恒定温度下不断合成。所研LAMP技术反应体系使用实时荧光检测方法在20 min内检出结核分枝杆菌IS6110靶基因,且灵敏度接近PCR法,但精密度不及PCR法(LAMP法变异系数18.9%,PCR法变异系数3.4%),故LAMP法更适合定性检测。LAMP体系对脑膜炎双球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、风疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道腺病毒(3 型)、呼吸道腺病毒(7 型)、呼吸道合胞病毒B和副流感病毒2型等10种病原体均无扩增,表现出较好的特异度。在此基础上,使用烘干和冻干技术,研发干式LAMP技术反应试剂。干式试剂在50 ℃环境下存储10 d性能无衰减,等效常温(25 ℃)可保存6个月以上。在临床样本测试中,干式试剂可20 min内有效检出结核分枝杆菌的核酸。综上,本文研发的常温存储快速检测试剂搭配等温扩增仪可对结核分枝杆菌进行快速鉴定。
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编辑人员丨5天前
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广州市2018—2019年呼吸道感染病毒性病原谱研究
编辑人员丨5天前
目的:使用Luminex NxTAG? RPP试剂盒检测广州地区呼吸道感染样本,总结近一年广州地区呼吸道感染病原谱,为呼吸道感染临床诊疗和疾病防控工作提供参考依据。方法:采集2018年12月到2019年11月广东省妇幼保健院和广东省第二人民医院共484例呼吸道感染样本,采用QIAamp MinElute Virus Spin Kit(50)进行总核酸提取,采用Luminex NxTAG? RPP试剂盒检测样本中的病原体;采用Excel 2016对数据进行作图,采用SPSS19.0软件进行统计分析。结果:在484份标本中,病原体核酸阳性样本有397份,总阳性率为79.96%,感染以甲型流感病毒2009型(influenza A H1N1pdm09 virus, H1N1 2009)、鼻病毒(rhinovirus, RhV)、偏肺病毒(metapneumovirus, MPV)为主。在年龄分布中,儿童组的H1N1 2009、合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)、副流感病毒(parainfluenza Virus, PIV)、MPV、RhV、博卡病毒(bocavirus,BoV)阳性率相对较高;成人组的乙型流感(influenza B virus,FLuB)阳性率相对较高。H1N1 2009、RSV、MPV、BoV在门诊患者中的阳性率较高;FLuB在住院患者阳性率相对较高。在不同症状的患者病原体检测中,咳嗽与咳痰症状患者的样本RSV阳性率较高;而鼻塞症状患者的样本冠状病毒(coronaviruses, CoV)、MPV、RhV阳性率较高。大多数病原体在冬春季检出率偏高。结论:H1N1 2009、RhV、MPV为2019年广州呼吸道感染的重要病原体,加强对这些病原体的研究与监测,可作为广州呼吸道感染性疾病的防控重点。
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编辑人员丨5天前
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基于离心式微流控技术的直扩PCR法在流感病毒分型检测中的应用
编辑人员丨2024/3/2
目的 建立一种基于离心式微流控技术的检测流感病毒分型的直扩PCR法.方法 设计特异性引物探针,采用离心式微流控芯片对流感病毒不同分型进行直扩荧光PCR检测,进一步评价该方法灵敏度、特异性、重复性和线性关系;用该直扩荧光PCR法检测576例临床标本,并用核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行验证.结果 离心式微流控直扩PCR法的总体最低检出限为500 copies/mL;与常见呼吸道病原体无交叉反应;精密度均小于4.34%;具有良好的线性关系(R2均>0.98);576例临床标本中检出甲型流感病毒通用型75例,其中H1N126例,H3亚型49例;乙型流感病毒通用型74例,均为Victoria系.与对照试剂比较,离心式微流控PCR法在流感病毒不同分型的灵敏度、特异性、总符合率均高于92.9%,两种方法检出阳性率(IAV、H1N1、H1、H3、IBV和IBV-V)差异均无统计学意义(χ2值分别为3.200、0.500、0.500、1.333、2.250、2.250,P均>0.05),具有极好的一致性(Kappa值均>0.96).结论 建立的离心式微流控直扩PCR法操作简便,灵敏度和特异性较高,可为流感病毒的临床诊断和流行病学调查提供有效的检测工具.
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编辑人员丨2024/3/2
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两种多病原检测技术在呼吸道感染病原学检测中的对比研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 比较两种不同多病原检测技术在呼吸道感染病原检测中的应用.方法 选取2018年4月至2018年6月广东省疾病预防控制中心哨点医院收治的62例急性呼吸道感染病例鼻咽拭子样本作为研究材料,分别采用单管多重呼吸道病原体核酸检测试剂(RespiFinder 2SMART,方法1)及呼吸道病原体微流体芯片(RESP_TRIAL CARD V1,方法2)对样本进行平行检测.比较不同方法病原检出情况及方法间检测一致性及kappa值.结果 方法1和方法2病原检测阳性率分别为70.97%和80.65%,这种检出率的差异主要由检测病原种类不同引起.针对两种方法共同检测病原种类,方法1和方法2检测阳性率分别为:70.97%和66.31%.两种方法对博卡病毒、冠状病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒及偏肺病毒检测结果一致性好,符合率介于93.5%~ 100.00%之间,kappa值均>0.6;而对肺炎支原体、百日咳杆菌及嗜肺军团菌的检测一致性较差.结论 两种方法检测结果符合性较好,可依据实际检测需求应用于呼吸道病原检测.
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编辑人员丨2023/8/6
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一种新的核酸自动化提取方法在病原体检测中应用的评价
编辑人员丨2023/8/6
目的 评价一种新的核酸自动化提取方法在病原体检测中的应用.方法 分别用试剂盒(QIAamp Viral RNA Mini Kit)和核酸自动提取仪Genolution NX-48平行提取同一批104份临床咽拭子样本,利用商业化的RespiFinder SMART22多重荧光PCR检测试剂盒和甲型流感病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒,比较两种核酸提取方法对不同病原体检出率及甲型流感病毒最低检测限的影响.结果 临床咽拭子样本经两种方法提取核酸后用于呼吸道多病原检测,结果具有高度一致性(Kappa>0.60).可检出19种呼吸道病原,包括DNA病毒、RNA病毒及非病毒病原,其中检出率较高的病原为鼻病毒/肠道病毒(rhinovirus/enterovirus,Rhino/Entero)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、甲型流感(influenza A,InfA)病毒及腺病毒(adenovirus,Adeno).QIAamp Viral RNA Mini Kit及核酸自动提取仪Genolution NX-48提取的甲型流感病毒的最低检测限为1.36×100和1.41×101PFU/mL,差异无统计学意义(P>0.05).结论 核酸自动提取仪Genolution NX-48应用性能良好,提取核酸省时、快捷、成本低,结合RespiFinder SMART22多重荧光PCR检测试剂盒,可进行临床和实验室大量样本的核酸快速提取及呼吸道多病原检测.
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编辑人员丨2023/8/6
