目的:探讨运动训练联合地黄多糖对脑缺血再灌注大鼠神经功能恢复的影响及其作用机制。方法:选取SD大鼠60只，采用随机数字表法在60只大鼠中取10只大鼠作为假手术组，剩余50只均建立脑缺血再灌注损伤模型。将造模成功的50只大鼠采用随机数字表法分为模型组、运动训练组、地黄多糖10 mg组、地黄多糖20 mg组和地黄多糖40 mg组，每组10只大鼠。模型组、假手术组和运动训练组大鼠均每日喂服生理盐水，连续6周，运动训练组在此基础上增加为期6周的运动训练，地黄多糖10 mg组、地黄多糖20 mg组和地黄多糖40 mg组的运动方法同运动训练组，但将生理盐水替换为对应剂量的地黄多糖。干预6周后，评定6组大鼠神经功能缺损评分，并采用Morris水迷宫实验对6组大鼠进行学习和记忆能力评价，同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定6组大鼠血清中的白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，采用蛋白质定量(BCA)法测定蛋白含量，采用硝酸还原酶法检测NO含量，采用ELISA法检测SOD含量，采用硫代巴比妥酸(TBA)法检测MDA含量，采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB通路中磷酸化p65(p-p65)、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)蛋白的表达。结果:干预6周后，模型组、运动训练组和3个地黄多糖干预组(即地黄多糖10 mg组、地黄多糖20 mg组和地黄多糖40 mg组)的神经功能缺损评分较假手术组均显著升高( P<0.05)。与模型组比较，运动训练组和3个地黄多糖干预组大鼠的神经功能缺损评分均显著降低( P<0.05)。与运动训练组比较，3个地黄多糖干预组大鼠的神经功能缺损评分均显著降低( P<0.05)。干预6周后，模型组的学习能力潜伏期显著高于假手术组的(60.32±10.02)s，记忆能力潜伏期亦显著低于假手术组的( P<0.05)。运动训练组和3个地黄多糖干预组的学习能力潜伏期均显著低于模型组，记忆能力潜伏期均显著高于模型组( P<0.05)。且3个地黄多糖干预组的学习能力潜伏期均显著低于运动训练组，记忆能力潜伏期均显著高于运动训练组( P<0.05)。干预6周后，模型组大鼠血清中的IL-6、IL-1β、TNF-α水平均显著高于假手术组( P<0.05)。与模型组比较，运动训练组和3个地黄多糖干预组大鼠血清中的IL-6、IL-1β、TNF-α水平均有不同程度的下降( P<0.05)。3个地黄多糖干预组大鼠血清中的IL-6、IL-1β、TNF-α水平与运动训练组比较( P<0.05)。干预6周后，模型组大鼠的脑组织SOD活性较假手术组显著降低，而其NO和MDA水平则显著升高( P<0.05)。与模型组相比，运动训练组和3个地黄多糖干预组大鼠的脑组织SOD活性均显著升高，NO、MDA水平较模型组则显著降低( P<0.05)。3个地黄多糖干预组大鼠的脑组织SOD活性显著高于运动训练组，其NO、MDA水平则显著低于运动训练组( P<0.05)。干预6周后，与假手术组比较，模型组大鼠脑组织中的p-p65、p-IκBα蛋白水平显著增加( P<0.05)；与模型组比较，运动训练组和3个地黄多糖干预组大鼠脑组织中的p-p65、p-IκBα蛋白水平均显著降低( P<0.05)；3个地黄多糖干预组大鼠脑组织中的p-p65、p-IκBα蛋白水平较运动训练组均显著降低( P<0.05)。 结论:运动训练联合地黄多糖可修复脑缺血再灌注大鼠的神经功能，提高大鼠的学习和记忆能力，其作用机制可能与运动训练联合地黄多糖可降低氧化应激反应、抑制NF-κB通路激活和减缓炎症的进展有关。

目的:探讨地黄多糖(RPS)对血管钙化(VC)的作用及其作用机制。方法:将8周龄雄性SD大鼠按随机数目表法分配原则分为3组：正常对照组(Con)、VC、VC+RPS组，每组12只。采用维生素D3(VD3)和尼古丁制备大鼠VC模型。VC+RPS组在造模后第2d开始予RPS灌胃，Con和VC组每天给予同剂量生理盐水灌胃，4周后处死动物并取材。茜素红染色和原位缺口末端标记法(TUNEL)检测VC及凋亡；试剂盒检测血管中碱性磷酸酶(ALP)和钙离子含量；蛋白印迹法(Western blot)检测主动脉中Runx相关转录因子2(Runx2)、α-肌动蛋白(α-SMA)、B淋巴细胞瘤因子相关X蛋白(bax)、B淋巴细胞瘤2(bcl-2)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达水平。多组间均数比较采用单因素方差分析。结果:VC组ALP活性及钙含量高于Con组[(219.80±32.70) U/g、(197.32±28.30) μmol/g比(53.20±12.20) U/g、(20.46±5.30) μmol/g， F＝202.800、247.000， P<0.01]，VC+RPS组ALP活性及钙含量低于VC组[(122.00±21.50) U/g、(78.45±12.60) μmol/g比(219.80±32.70) U/g、(197.32±28.30) μmol/g， q＝16.630、20.720， P<0.01]；Tunel染色结果显示，VC组凋亡指数明显高于Con组[(62.30±7.40)%比(1.30±0.14)%， F＝197.700， P<0.01]，VC+RPS组凋亡指数低于VC组[(45.70±6.20)%比(62.30±7.40)%， q＝7.394， P<0.01]。VC组中α-SMA蛋白相对表达量低于Con组(0.74±0.03比1.00±0.03， F＝26.870， P<0.01)，VC+RPS组中α-SMA蛋白相对表达量高于VC组(1.01±0.25比(0.74±0.03， q＝9.037， P<0.01); VC组中Runx2表达高于Con组(1.75±0.08比1.00±0.05， F＝28.250， P<0.01)，VC+RPS组中Runx2表达低于VC组(1.44±0.07比1.75±0.08， F＝35.241， P<0.05)；VC组中bax蛋白相对表达量高于Con组(2.65±0.21比1.00±0.04， F＝113.400， P<0.01)，VC+RPS组中bax蛋白表达量低于VC组(1.51±0.12比2.65±0.21， q＝6.375， P<0.01)；VC组中bcl-2蛋白相对表达量低于Con组(0.51±0.05比1.00±0.02， F＝64.280， P<0.01)，VC+RPS组中bcl-2蛋白表达高于VC组(0.79±0.01比0.51±0.05， q＝9.061， P<0.01); VC组中Cleaved Caspase-3蛋白相对表达量高于Con组(5.92±0.38比1.00±0.03， F＝85.420， P<0.01)，VC+RPS组中Cleaved Caspase-3蛋白表达低于VC组(3.34±0.25比5.92±0.38， q＝9.695， P<0.01)。 结论:RPS可减轻VD3和尼古丁诱导的大鼠VC，其作用机制可能与RPS抑制血管细胞凋亡，从而阻止血管细胞成骨样转化及钙化有关。

目的 探讨地黄多糖对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及机制.方法 提取生、熟地黄水提物及多糖,并测定生、熟地黄多糖相对分子量及单糖组成.将70只ICR小鼠随机分为空白组、模型组(DSS组)、美沙拉嗪组(5-ASA组)、生地黄水提物组(RR组)、熟地黄水提物组(PR组)、生地黄多糖组(RRP组)、熟地黄多糖组(PRP组),每组10只.第1～7天,除空白组外,其余小鼠饮用3％的DSS;第8～14天,空白组和DSS组小鼠饮用无菌水,5-ASA组、RR组、RRP组、PR组和PRP组分别给予美沙拉嗪、生地黄水提物、生地黄多糖、熟地黄水提物及熟地黄多糖,给药剂量均为200 mg/kg.实验过程中每天记录小鼠的体质量、粪便硬度及直肠出血情况(疾病活动指数);测量小鼠结肠长度;采用HE染色法观察结肠组织病理形态变化;ELISA法测定结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)活性及LPS水平.结果 生、熟地黄多糖分子量均可分为约200 kD和4 kD.生地黄多糖由葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸、甘露糖、鼠李糖、木糖、岩藻糖7种单糖所组成,熟地黄多糖由葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸、甘露糖、木糖、岩藻糖6种单糖组成.与空白组相比,DSS组小鼠体质量明显下降(P＜0.000 1),DAI评分显著提高(P＜0.000 1),小鼠结肠长度缩短(P＜0.05),脾脏质量增加(P＜0.000 1),结肠组织中MPO酶活性和血清中LPS含量升高(P＜0.05).与DSS组相比,5-ASA组、RR组、RRP组和PR组疾病活动指数显著下降(P＜0.05);PRP组疾病活动指数评分最低(P＜0.000 1);PR组结肠长度显著增长(P＜0.05);5-ASA组、RR组、PR组脾脏指数显著下降(P＜0.01);多糖组(RRP和PRP组)下降最多(P＜0.001);RR组、RRP组、PR组和PRP组结肠中 MPO酶活性显著降低(P＜0.05);PR组血清中LPS含量显著降低(P＜0.05).结论 生、熟地黄多糖及水提物均能够改善结肠病理组织,且熟地黄水提物及多糖对结肠炎小鼠治疗效果较好.

目的 借助网络药理学和分子对接的方法探讨六味地黄丸异病同治老年性聋和阿尔茨海默病(AD)的共同分子机制,并采用细胞实验进行验证.方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、成分靶点数据库(SwissADME)获取六味地黄丸有效成分,并结合基因和化学物质相互作用预测数据库(STITCH)获取作用靶点.利用人类基因综合数据库(Genecard)、人类疾病相关基因与突变位点信息数据库(DisGeNET)获取老年性聋和AD靶点.使用Cytoscape 3.7.1 软件构建"中药-成分-靶点-疾病"网络,借助蛋白互作网络分析数据库(STRING)构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,获取核心靶点.利用富集分析数据平台(Metascape)对共有靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析.采用AutoDock Vina 1.1.2软件对核心靶点与相关成分进行分子对接.采用过氧化氢(H2O2)致PC12细胞氧化损伤模型,观察六味地黄丸的作用.采用细胞计数(CCK-8)法观察细胞存活率,活性氧(ROS)检测试剂盒检测ROS水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,Western blot法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化-蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达.结果 共获得六味地黄丸有效成分86种,主要来自薯蓣皂素、视黄醇、丹皮酚、软脂酸等化合物,六味地黄丸防治老年性聋和AD共有靶点49个,核心靶点为AKT1、TNF、IL-6、MMP-9等.GO分析表明这些共有靶点主要参与对氧化应激的反应、对脂多糖的反应等生物进程.KEGG通路分析显示,共有靶点主要涉及缺氧诱导因子-1(HIF-1)、核因子-κB(NF-κB)等信号通路.分子对接结果显示,TNF-α、IL-6、AKT1、MMP-9与相关成分均存在结合可能.细胞实验结果发现,六味地黄丸含药血清可以增强细胞存活率,降低细胞ROS、TNF-α、IL-6水平,增加MMP-9蛋白表达水平,降低p-AKT蛋白表达水平.结论 六味地黄丸异病同治老年性聋和AD具有物质基础,其共同的分子机制,可能是通过薯蓣皂素、视黄醇、丹皮酚等多种成分,作用于AKT、TNF-α、IL-6、MMP-9等核心靶点,抑制炎症反应和氧化应激,减少神经元死亡.

目的 确定生地黄Rehmanniae Radix的性味功效物质基础,阐明生地黄及其拆分组分的寒热药性归属以及中药药性的内部精细结构.方法 采用水煎煮法、水提醇沉法和色谱分离技术,对生地黄的主要化学成分进行拆分.在建立寒证大鼠模型的基础上,测定与能量代谢,和物质代谢密切相关的生理生化指标.同时,对大鼠尿液进行代谢组学分析,筛选出各给药组大鼠尿液中的差异代谢物,从而确定潜在的生物标志物和代谢通路.结果 水煎液、多糖、环烯醚萜苷对寒证模型大鼠呈现相同的药性作用倾向,均能降低肝组织Na+,K+-三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)酶活性和血浆中三碘甲状腺原氨酸(3,5,3'-triiodothyronine,T3)、甲状腺素(thyroxine,T4)、丙酮酸(pyruvic acid,PA)、多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)的水平及琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)活性,升高血浆中乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)活性.低聚糖对寒证模型大鼠呈现相反的药性作用倾向,能升高大鼠肝组织Na+,K+-ATP酶活性和血浆中T3、T4、PA、DA、NE的水平及SDH活性,降低血浆中AchE活性.结论 水煎液、多糖、环烯醚萜苷抑制能量代谢和物质代谢,具有寒凉性;低聚糖促进能量代谢和物质代谢,具有温热性.

骨质疏松症是导致骨骼弱化、易于骨折的重要原因,西医抗骨质疏松药物并不能逆转其进程,只能减少骨密度的流失,且长期应用伴随一定不良反应,而中医药注重辨证施治和整体观念,可弥补西医治疗的短板.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路参与骨细胞的生长、增殖和分化过程,与骨质疏松症的发生和发展密切相关.近年来,多种中药单体(如黄酮类、多糖类、生物碱类等)及中药复方(如补肾活血汤、六味地黄丸、二至丸等)被证明能够通过调节mTOR信号通路促进骨形成、抑制骨吸收、增强骨细胞自噬,进而延缓骨质疏松症的进展.基于此,本文总结了干预mTOR信号通路治疗骨质疏松症的中药单体及复方,以期为骨质疏松症的中医治疗提供用药思路.

目的:研究酒炖和清蒸炮制过程中地黄内在成分和外观性状的变化规律.方法:根据《中华人民共和国药典》2020 年版(一部)熟地黄项下方法测定浸出物、地黄苷D含量,利用水提醇沉法测定多糖含量,利用电子舌和分光测色计测定滋味和颜色,应用主成分分析法分析滋味、颜色与酒炖品、清蒸品炮制质量及内在成分之间的相关程度.结果:清蒸过程中浸出物含量随炮制时间延长不断下降,酒炖过程浸出物含量较为稳定;酒炖和清蒸过程地黄苷D含量均呈下降趋势,酒炖品中地黄苷D含量小于同一炮制程度的清蒸品;酒炖和清蒸过程多糖含量呈先上升后下降趋势,酒炖品中多糖含量大于同一炮制程度的清蒸品;通过电子舌和测色计,酒炖品和清蒸品可被明显区分;酒炖过程中地黄苷D含量与红绿值(a*)、黄蓝值(b*)、总色度值(E*)呈显著正相关(P<0.05),多糖含量与b*呈显著正相关(P<0.05),浸出物含量与滋味、颜色变量无明显相关性;清蒸过程中多糖含量与CTS(咸)、ANS(甜)、a*、b*和E*呈显著正相关(P<0.05),浸出物含量与CTS、ANS、a*和b*呈显著正相关(P<0.05),地黄苷D含量与CTS、ANS、明度值(L*)、a*、b*和E*呈显著正相关(P<0.05).结论:酒炖和清蒸工艺下地黄性状和内在成分变化趋势具有一定差异,电子舌、测色计与统计学分析方法可以实现地黄酒炖和清蒸炮制过程中的质量检测.

目的 探讨熟地黄多糖(RGP)调控长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因 3(MEG3)对碘乙酸钠(MIA)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡的影响.方法 培养大鼠软骨细胞,不同浓度MIA(0、1、2、4、8 μmol/L)诱导建立软骨细胞损伤模型,并给予不同浓度RGP(50、100、200、400、800 mg/mL)处理筛选合适的实验浓度.实验分为正常组、MIA组、RGP 组、RGP+si-NC 组、RGP+si-MEG3 组,Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测细胞活力;Hoechst 33258 染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中MEG3、金属蛋白酶 13(MMP-13)、Ⅱ型胶原α1(COL2A1)和蛋白聚糖(ACAN)mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇 3 激酶(PI3K)、p-PI3K、丝/苏氨酸激酶(AKT)、p-AKT、BAX、BCL-2、caspase3 蛋白表达水平.结果 MIA以剂量依赖性方式降低软骨细胞活力,诱导细胞凋亡,并降低MEG3 和COL2A1 mRNA、ACAN mRNA水平,升高MMP-13 mRNA水平(P<0.05).100、200、400、800 mg/mL RGP可升高软骨细胞活力及MEG3 水平(P<0.05).与正常组相比,MIA组细胞活力、MEG3、COL2A1 mRNA、ACAN mRNA和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、BCL-2蛋白水平降低,细胞凋亡率、MMP-13 mRNA和BAX、caspase3 蛋白水平升高(P<0.05);与MIA组相比,RGP 组细胞活力、MEG3、COL2A1 mRNA、ACAN mRNA 和 p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、BCL-2 蛋白水平升高,细胞凋亡率、MMP-13 mRNA和BAX、caspase3 蛋白水平降低(P<0.05);敲低MEG3 可减弱RGP 对MIA诱导的软骨细胞损伤的保护作用.结论 RGP可促进软骨细胞ECM合成,并抑制细胞凋亡,减轻MIA诱导的软骨细胞损伤,其作用机制可能与上调MEG3 表达,诱导PI3K/AKT通路活化有关.

目的 优化膝痹康颗粒的最佳提取工艺.方法 以膝痹康标准方剂为参比,以挥发油、地黄苷 D、益母草苷、毛蕊花糖苷、总多糖、阿魏酸、Z-藁本内酯、浸膏得率为评价指标.在挥发油提取优化方面,用正交实验考察加水量、浸泡时间、提取时间 3 个因素对挥发油得量的影响;在活性成分提取优化方面,用正交实验考察乙醇体积分数、溶剂倍数、提取时间对提取效果的影响,确定最佳提取工艺.结果 提取时间是影响挥发油提取量的关键因素(P＜0.05),挥发油的最佳提取条件为用 8 倍水浸泡 30 min、提取9h.在提取完挥发油后,再进行乙醇回流提取,乙醇体积分数、溶剂倍数、提取时间均为影响成分提取的关键因素(P＜0.05),地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、总多糖、阿魏酸、Z-藁本内酯、浸膏得率的最佳提取条件为加入 7 倍体积分数为 70%的乙醇回流提取 2h.挥发油、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、总多糖、阿魏酸、Z-藁本内酯、浸膏得率的 RSD值分别为 1.34%、1.92%、1.16%、2.68%、2.51%、1.18%、1.20%、3.08%,验证实验表明该工艺稳定,可获得稳定的挥发油和冻干粉末颗粒.结论 该方法稳定可行,可作为膝痹康颗粒的提取工艺.

目的:探究知柏地黄丸(Zhibai Dihuang Granule;ZDG)对阴虚"上火"证血清抗炎凝血蛋白的影响.方法:通过腹腔注射三碘甲状腺原氨酸(Triiodothyronine;T3)处理SD大鼠建立阴虚模型.在该模型基础上往大鼠牙龈出滴加牙龈卟啉单胞菌叠加口腔牙龈炎模型,建立阴虚"上火"证大鼠模型.用滋阴降火药知柏地黄丸对大鼠进行治疗,以iTRAQ-2DLC-MS/MS蛋白组学技术与生物信息学手段分析治疗前后阴虚"上火"大鼠血清差异性蛋白表达谱,探索知柏地黄丸治疗阴虚"上火"的生物学机制.结果:知柏地黄丸观察组大鼠血清凝溶胶蛋白(Gsn)、纤溶酶原(Plg)、纤维蛋白原α链(Fga)、胸腺素β4(Tmsb4x)比值显著上调(Fold Change>1.25);胶原蛋白α2-I型链(Col1a2)比值显著下调(Fold Change<0.8).Gsn是机动蛋白丝的切割蛋白,参与细胞凋亡、清除损伤组织、调节炎性介质等生物学功能;Plg是血液纤维蛋白水解酶无活性的前体,参与机体纤溶、细胞迁移、细胞外基质降解等多种生物过程;Fga是由肝脏合成的纤维蛋白前体,能在内源凝血因子或外源组织因子作用下生成纤维蛋白,参与机体的凝血过程;Colla2是由肝、巨核细胞合成的凝血蛋白酶,是活化Fga的凝血稳定因子,Fga在Colla2的作用下参与完成凝血过程;T-β4是由胸腺产生的淋巴生长因子,具有通过抑制巨噬细胞的迁移、增强抗原提呈细胞功能、抑制炎性因子、促进组织重塑、血管生成和伤口愈合修复等生物学功能.结论:知柏地黄丸通过对Gsn、Plg、Fga、Colla2、T-β4水平的调节,清除损伤组织,释放肌动蛋白、细菌脂多糖,抑制细胞凋亡作用;并且可以调节炎性因子,改变炎性反应部位血液流变动力学障碍,促进炎性反应损伤的愈合的作用.