目的:分析构建的负载局部缓释给药的唑来膦酸(ZOL)-明胶纳米微球(GNPs)聚多巴胺(PDA)涂层多孔钛合金支架对破骨细胞的生物学影响。方法:基于电子束熔融技术构建多孔钛合金支架，利用去溶剂化法制备不同ZOL浓度（0、1、10、50、100、500 μmol/L）的ZOL-GNPs，两者复合构建负载ZOL-GNPs的PDA涂层多孔钛合金支架并进行表征分析，并对3种不同状况支架（裸多孔钛合金支架、PDA涂层多孔钛合金支架、负载ZOL-GNPs的PDA涂层多孔钛合金支架）进行生物力学检测，分别在第1、4、7、14、21、28天利用高效液相色谱仪进行药物释放检测。将破骨细胞与上述不同ZOL浓度的新型支架相复合，利用实时定量（RT）-聚合酶链式反应（PCR）检测破骨细胞相关基因表达；利用Western-blot技术检测破骨细胞相关蛋白表达。结果:成功构建了负载ZOL-GNPs的PDA涂层多孔钛合金支架，电镜扫描显示GNPs成球性好，表面光滑，分散均一，粒径为（243.6±63.4）nm，ZOL-GNPs均匀复合于支架的表面及孔隙内，球形规整无粘连。生物力学实验结果显示3种不同状况下多孔钛合金支架的弹性模量分别为（1.81±0.12）、（1.80±0.23）、（1.81±0.15）GPa，差异无统计学意义( P> 0.05)；多孔钛合金支架在第1天的释药百分比明显较高，在随后的27 d中，药物释放逐渐缓慢增加。低浓度ZOL支架组中，细胞黏附增殖较多；50 μmol/L组中则出现球状细胞；随后随着浓度的升高，球状细胞增多，甚至发生凋亡。RT-PCR结果显示Ctsk基因和TRAP基因在随着ZOL浓度升高而升高，其中在50 μmol/L时表达最高，然后随浓度升高而降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。Western-blot结果显示Ctsk与TRAP的表达水平与其相关基因表达水平趋势相似。 结论:构建的一种负载ZOL-GNPs的PDA涂层多孔钛合金支架不但具有良好的机械性能，还具有局部药物缓释抗OP作用；当ZOL浓度为50 μmol/L时，更有利于抑制破骨细胞生成。

目的:探讨载P311微球的温敏壳聚糖水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法:采用实验研究方法。通过油包水乳化法制备聚乙烯醇/海藻酸钠微球（单纯微球）、P311微球及异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白（FITC-BSA）微球，于光学显微镜/倒置荧光显微镜下观察形貌。制备壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液和β-磷酸甘油二钠水合物混合制备单纯温敏水凝胶，在单纯温敏水凝胶中加入相应物质制备载单纯微球和载P311微球的温敏水凝胶，观察4种液体在37 ℃时倾斜状态下的形态变化，冷冻干燥后于扫描电子显微镜下观察微观形貌。取18只3~4周龄雄性SD大鼠，分为不进行任何处理的正常组及于背部脊柱两侧分别制作1个全层皮肤缺损创面并进行相应处理的敷贴组、壳聚糖组、单纯水凝胶组、载单纯微球水凝胶组、载P311微球水凝胶组，每组3只。取5组全层皮肤缺损大鼠，于伤后0（即刻）、5、10、15 d 观察创面愈合情况，计算伤后5、10、15 d创面愈合率；取5组全层皮肤缺损大鼠伤后15 d创面和创缘组织及正常组大鼠相同部位正常皮肤组织，行苏木精-伊红染色观察组织学变化，行免疫组织化学染色观测CD31及血管内皮生长因子（VEGF）的表达，采用蛋白质印迹法检测CD31及VEGF的蛋白表达。样本数均为3。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析及Bonferroni校正。结果:单纯微球呈球形，表面疏松多孔；P311微球及FITC-BSA微球表面光滑无孔隙，且FITC-BSA微球散发出均匀的绿色荧光；3种微球直径基本一致，为33.1~37.7 μm。在37 ℃时倾斜状态下，与壳聚糖溶液及单纯温敏水凝胶相比，载微球的2种水凝胶结构更稳定。载微球的2种水凝胶网状结构较壳聚糖溶液、单纯温敏水凝胶更致密，且其横断面可见直径约30 μm的微球。伤后15 d内，5组大鼠创面均不同程度愈合，其中载P311微球水凝胶组大鼠创面愈合情况最好。敷贴组、壳聚糖组大鼠伤后5、10、15 d创面愈合率分别为（26.6±2.4）%、（38.5±3.1）%、（50.9±1.5）%，（47.6±2.0）%、（58.5±3.6）%、（66.7±4.1）%，均明显低于载P311微球水凝胶组的（59.3±4.8）%、（87.6±3.2）%、（97.2±1.0）%， P<0.05或 P<0.01；单纯水凝胶组大鼠伤后10、15 d及载单纯微球水凝胶组大鼠伤后15 d创面愈合率分别为（76.0±3.3）%、（84.5±3.6）%、（88.0±2.6）%，均明显低于载P311微球水凝胶组（ P<0.05）。正常组大鼠正常皮肤中可见表皮、毛囊及皮脂腺，未见CD31和VEGF阳性表达；载P311微球水凝胶组大鼠伤后15 d创面已几乎完全上皮化，创面血管、毛囊、皮脂腺生成及CD31和VEGF阳性表达较其他4组全层皮肤缺损大鼠明显增加，CD31和VEGF蛋白表达均较其余5组大鼠明显增加（ P<0.01）。 结论:载P311微球的温敏壳聚糖水凝胶，可以缓释包载的药物，延长药物作用时间，并通过促进创面血管生成及再上皮化，促进全层皮肤缺损大鼠创面愈合。

目的:探究新型自组装多肽水凝胶RATEA16支架对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）增殖及其载血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）促进血管形成的作用。方法:制备RATEA16水凝胶，检测其可注射性、微观结构、降解性能及生物相容性等特性；与HUVEC体外三维培养，检测细胞形态及增殖情况；将HUVEC细胞与装载VEGF的RATEA16支架体外三维共培养，倒置显微镜下观察小管形成并通过实时荧光定量PCR检测VEGF-A、血管性假血友病因子（von Willebrand factor，vWF）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）和血小板内皮细胞黏附分子1（platelet endothelial cell adhesion molecule-1，PECAM-1）基因的表达，评估载VEGF支架体系对HUVEC分化的影响，并与HUVEC单独培养的阴性对照组进行比较。结果:RATEA16溶液在调节pH值达中性后5 min完成溶胶-凝胶转变；该凝胶可从注射器中轻松推出，具备可注射性；扫描电子显微镜下呈多孔及相互连接的内部结构，支架孔隙率为（67.3±9.4）%；在体外降解4周时剩余质量百分比仍为（82.354±0.006）%；HUVEC在RATEA16水凝胶浸提液中培养24 h后生长良好，与对照组相比HUVEC细胞活力差异无统计学意义（ P>0.05）；HUVEC在该水凝胶中三维培养时呈球形，且在14 d内呈持续增殖活力；装载VEGF的RATEA16支架与HUVEC体外三维培养可观察到血管样结构形成，VEGF-A和MMP-9表达是阴性对照组的1.5~2.0倍，vWF表达是阴性对照组的10倍左右，PECAM-1表达是阴性对照组的55倍左右，与阴性对照组相比差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:RATEA16水凝胶具有简便的凝胶化过程、良好的生物相容性、较慢的降解速率及可注射性；HUVEC可在RATEA16支架中生长和增殖；载VEGF的RATEA16支架体系可促进HUVEC在体外成血管分化。

目的:探讨乳酸乳球菌温敏水凝胶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其机制。方法:(1)按照菌与培养基体积比为1∶100用M17GS液体培养基培养约5×10 8集落形成单位/mL乳酸乳球菌(浓度下同)，分别于培养0(即刻)、2、4、6、8、10、12 h用酶标仪观测其生长情况。另取该菌菌落同前处理并于相同时间点收集培养基分离细菌培养上清液，用台式pH计测定pH值，并用L-乳酸检测分析试剂盒测定培养0(即刻)、2、4、8、12 h的L-乳酸浓度(样本数为3)。(2)将泊洛沙姆温敏聚合物与M17GS液体培养基按照质量与体积比为0.2 g∶1 mL充分混匀，制备单纯温敏水凝胶。按照菌与水凝胶体积比1∶100在单纯温敏水凝胶中加入乳酸乳球菌，充分混匀后制备乳酸乳球菌温敏水凝胶，分别在4、37 ℃孵育以及成胶后再4 ℃孵育观察其形态；通过流变仪测定乳酸乳球菌温敏水凝胶在10～40 ℃的储能模量与损耗模量，同时观察成胶温度；将乳酸乳球菌温敏水凝胶冷冻干燥后，通过扫描电子显微镜观察其表面及其中乳酸乳球菌的形态结构。(3)将小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞用终质量浓度分别为100、10 ng/mL内毒素/脂多糖与γ干扰素培养24 h刺激M1型极化，将细胞分为空白对照组(不做其他处理)、乳酸乳球菌温敏水凝胶组和乳酸组。乳酸乳球菌温敏水凝胶组细胞加入1 mL乳酸乳球菌温敏水凝胶，乳酸组细胞加入终物质的量浓度为30 mmol/L乳酸，37 ℃培养24 h后，通过实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测M2型巨噬细胞标志物精氨酸酶1、CD206的mRNA表达量(样本数为3)，采用免疫荧光法检测精氨酸酶1和CD206的蛋白定位与表达。(4)取15只8～10周龄雌性BALB/c小鼠，通过链脲佐菌素联合高糖高脂饲料的方法诱导为糖尿病小鼠模型后，在每只小鼠背部制作直径6 mm全层皮肤缺损创面，采用随机数字表法将小鼠分为空白对照组(不做其他处理)、单纯温敏水凝胶组和乳酸乳球菌温敏水凝胶组，每组5只。水凝胶处理2组小鼠伤后即刻分别滴加200 μL相应水凝胶至创面，每天更换水凝胶。水凝胶处理2组小鼠处理0(即刻)、3、6、9、12 d后，观察创面愈合情况，测量创面面积；处理12 d后，取创面组织，行苏木精-伊红染色观察肉芽组织厚度，采用免疫荧光法观测CD206、M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)阳性细胞。空白对照组小鼠于前述相同时间点进行相应观测。(5)取9只8～10周龄雌性BALB/c小鼠同实验(4)方法诱导糖尿病小鼠模型后，采用随机数字表法分为正常皮肤组(不做其他处理)、单纯创面组、乳酸乳球菌温敏水凝胶组，每组3只。单纯创面组与乳酸乳球菌温敏水凝胶组小鼠按照实验(4)方法制成全层皮肤缺损创面，前一组小鼠伤后不做其他处理，后一组小鼠伤后即刻滴加200 μL乳酸乳球菌温敏水凝胶至创面。水凝胶处理组小鼠处理1 d后，取创面组织，通过实时荧光定量RT-PCR法检测白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核因子κB mRNA表达量；眼球取血后，通过全自动血细胞分析仪检测外周血白细胞计数、淋巴细胞计数和单核细胞计数，通过L-乳酸检测分析试剂盒测定血清L-乳酸浓度。于前述相同时间点，取正常皮肤组小鼠相应部位正常皮肤组织、单纯创面组小鼠创面组织及2组小鼠血液进行相应检测。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、Tukey和Dunnett检验。 结果:(1)乳酸乳球菌于培养约6 h生长达到平台期。乳酸乳球菌培养上清液中，pH值逐渐降低，至培养8 h下降至最低值4.9左右；L-乳酸浓度逐渐升高，至培养8 h达到最高值约70 mmol/L。(2)乳酸乳球菌温敏水凝胶在4 ℃为液体溶胶态，在37 ℃为固体凝胶态，成胶后于4 ℃孵育后再次变为液体溶胶态；成胶温度约为25 ℃，成胶后储能模量约为3 000 Pa、损耗模量约为1 000 Pa。扫描电子显微镜下可见，乳酸乳球菌温敏水凝胶为疏松三维多孔结构，乳酸乳球菌为椭球形并被包裹在水凝胶内部。(3)培养24 h，与空白对照组比较，乳酸乳球菌温敏水凝胶组、乳酸组巨噬细胞中精氨酸酶1表达量显著升高( q＝11.620、15.250， P<0.01)、CD206 mRNA表达量显著升高( q＝16.770、19.030， P<0.01)，定位于细胞膜的CD206蛋白和定位于细胞质的精氨酸酶1蛋白表达明显升高；乳酸组巨噬细胞中精氨酸酶1、CD206 mRNA表达量与乳酸乳球菌温敏水凝胶组相近( q＝3.629、2.259， P>0.05)。(4)处理3～12 d后，与空白对照组和单纯温敏水凝胶组比较，乳酸乳球菌温敏水凝胶组小鼠创面愈合速度更快，创面面积明显缩小，创缘炎症减轻。乳酸乳球菌温敏水凝胶组小鼠处理3、6、9、12 d后创面面积[(25.8±5.9)、(21.2±4.6)、(16.0±2.4)、(8.4±2.4)mm 2]较空白对照组[(31.8±5.3)、(28.0±3.4)、(22.6±3.7)、(17.0±1.0)mm 2]显著缩小( q＝3.506、3.973、3.856、5.025， P<0.05或 P<0.01)，处理3、6 d后创面面积较单纯温敏水凝胶组显著缩小( q＝3.739、3.739， P<0.05)。处理12 d后，与空白对照组和单纯温敏水凝胶组比较，乳酸乳球菌温敏水凝胶组小鼠创面肉芽组织更厚，创面组织中iNOS阳性细胞明显减少且CD206阳性细胞明显增多。(5)处理1 d后，单纯创面组小鼠创面组织中IL-1β、TNF-α和核因子κB mRNA表达量显著高于正常皮肤组小鼠正常皮肤组织( q＝9.253、4.819、6.020， P<0.01)，与乳酸乳球菌温敏水凝胶组相近( q＝2.850、2.735、2.556， P>0.05)；单纯创面组小鼠外周血白细胞计数、淋巴细胞计数与单核细胞计数显著高于正常皮肤组( q＝3.523、5.373、5.279， P<0.05或 P<0.01)，与乳酸乳球菌温敏水凝胶组相近( q＝0.621、1.240、1.293， P>0.05)；3组小鼠血清L-乳酸浓度均保持在正常范围内且组间总体比较差异无统计学意义( F＝4.095， P>0.05)。 结论:乳酸乳球菌温敏水凝胶在糖尿病全层皮肤缺损小鼠创面局部使用安全，能够通过原位生产投递乳酸，促进巨噬细胞从M1型向M2型极化，重塑创面愈合微环境，促进创面的高效愈合。

目的:制备聚乙烯醇（PVA）/羟基磷灰石（HA）复合栓塞微球，并对其理化性能进行研究。方法:将PVA与HA的混合溶液作为分散相、含有失水山梨糖醇脂肪酸酯的液体石蜡作为连续相，以戊二醛为交联剂采用反相悬浮化学交联法，制备PVA/HA复合栓塞微球。采用光学显微镜和扫描电镜对PVA/HA复合栓塞的外观形貌、粒径分布以及微观形貌进行观察，采用傅里叶红外光谱对PVA/HA复合栓塞微球的化学结构进行表征，并对PVA/HA复合栓塞微球的弹性以及载药和释药等性能进行测试。结果:PVA/HA复合栓塞微球为内部多孔状圆形小球，粒径分布为50~300 μm，弹性性能为（13.6±0.145）kPa，为PVA微球的2.28倍，载药量达（76.80±1.22）mg/g，包封率为（38.4±12.7）%，7 d内最高累积释放率为（7.37±0.101）%，最高累积释药量为（256.2±9.8）μg。结论:PVA/HA复合栓塞微球具有良好的机械性能和载药释药性能，为其作为医疗器械提供了重要参考依据。

目的 研究负载槲皮素的明胶三维多孔(G-quercetin)微球作为骨组织材料的可行性.方法 利用乳化法制备负载槲皮素的多孔明胶微球,扫描电镜观察微球形态,通过免疫荧光染色、活死细胞染色和CCK-8、碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色检测微球的细胞毒性及其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)黏附、增殖及分化的影响,RT-PCR检测成骨相关基因Runx-2、ALP、OPN、OCN表达.结果 扫描电镜结果显示制备的载槲皮素明胶三维微孔材料具有多孔结构.细胞黏附检测显示细胞能够在微球表面铺展良好.与对照组相比,活死细胞染色、CCK-8 结果显示该微球无明显细胞毒性(P＞0.05);与G-quercetin微球共培养的MC3T3-E1 ALP表达和体外矿化增加;PCR结果显示 Runx-2、ALP、OCN、OPN表达明显增高(P＜0.05).结论 载槲皮素明胶微球具有良好的生物相容性,能够促进MC3T3-E1 体外成骨分化,有望作为新型骨组织工程生物材料应用于临床.

目的 制备运载双层抗原的CS-PLGA微球制剂,并对其进行相关表征鉴定.方法 通过复乳法结合溶剂挥发法制备得到多孔微球后,在4 ℃水浴条件下装载抗原,利用抗原浓度梯度介导的物理扩散促进抗原进入微球内部,并通过静电作用结合在微球外表面,形成内外双层抗原运载.根据聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)材料玻璃转化温度这一特性,促进多孔微球表面孔道在48 ℃条件下发生愈合,使其形成闭合的微球制剂,再将得到的微球制剂与壳聚糖溶液混悬镀层,进行阳离子修饰,逆转微球表面负性电位.通过扫描电子显微镜、动态光散射粒度仪等检测微球形态、粒径分布和电位变化,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定抗原是否装载至微球制剂中,采用荧光标记的BSA和荧光标记的PLGA材料进行激光共聚焦显微镜观察抗原装载后的分布情况,通过BCA法检测微球制剂的包封率和载药率.结果 扫描电镜和光学显微镜结果显示多孔微球成孔良好,粒径大小为(73.94±0.81)nm,多分散性指数为0.038±0.004.Zeta电位由负转正说明壳聚糖已被成功镀层至微球表面.经过SDS-PAGE、激光共聚焦显微镜等证实BSA已被成功运载.经micro BCA试剂盒检测后多孔微球包封率为(3.01±0.04)％,载药率为(1.50±0.02)％.结论 成功制备得到运载双层抗原的CS-PLGA制剂,为后续缓控释制剂研究提供新思路.

目的 探讨载成纤维生长因子10(FGF10)的多孔明胶微球(GMSs)对脊髓损伤大鼠神经保护作用的机制.方法 20只健康雄性SD大鼠(220～250 g)随机分为假手术组、脊髓损伤组、FGF10组、FGF10-GMSs组,每组各5只.假手术组只咬除T9～T10棘突及椎板等骨性组织,不造成脊髓损伤.其余3组造成脊髓损伤后,用Hamilton微量注射器向FGF10组大鼠的损伤注入20μL FGF10,向FGF10-GMSs组大鼠的损伤处注射20μL FGF10负载的多孔明胶微球,脊髓损伤组和假手术组的大鼠注射等量的生理盐水.收集大鼠胸椎(T9～T10)脊髓组织,分别采用离体释放试验评估FGF10-GMSs的持续释放.使用大鼠脊髓损伤评分(BBB评分)和斜坡测试评估FGF10-GMSs对SCI大鼠的运动功能改善效果.使用HE、Nissl染色、TUNEL试验及Western blot评估FGF10-GMSs的治疗效果.结果 离体释放实验结果显示,普通明胶微球会在短时间内迅速释放FGF10,多孔明胶微球持续而缓慢地释放FGF10,未在初始48 h内观察到显著的爆发释放模式.BBB评分结果显示,与脊髓损伤组(5分)相比,第21天FGF10-GMSs组(12分)和FGF10组(9分)的大鼠均表现出良好的运动功能恢复(P<0.05),斜坡测试结果与BBB评分结果一致,FGF10组和FGF10-GMSs组均获得了明显的行为改变.HE、Nissl染色结果显示FGF10-GMSs组内的坏死、核崩解和浸润性多核白细胞数量较少,在脊髓腔内坏死组织的比例显著降低.Western blot测定结果显示FGF10-GMSs组中的细胞凋亡抑制程度比FGF10组中更加明显.TUNEL试验也产生类似的结果,相比FGF10组和脊髓损伤组,FGF10-GMSs组具有更加明显的抑制细胞凋亡的作用.结论 FGF10-GMSs通过抑制神经细胞的凋亡,从而达到保护脊髓损伤大鼠神经细胞的作用,为脊髓损伤的治疗提供新的思路,对提高脊髓损伤的预后具有十分重要的意义.

目的 制备负载单宁酸的双层壳聚糖膜(CS@TA),测试其活性氧(ROS)清除能力、生物相容性及抗菌性能,研究其作为引导骨再生屏障膜的可行性.方法 采用自蒸发技术先制备出致密的单层壳聚糖(CS)膜,随后采用蒸发干燥、取向冷冻和冷冻干燥技术在单层CS膜上制备出多孔的CS层,从而得到双层CS膜,利用扫描电镜观察其微观结构.将制备好的CS双层膜先接枝 4-羧基苯硼酸形成中间体,按不同比例接枝单宁酸(TA),使用傅里叶红外光谱仪(FITR)分析TA与CS双层膜的相互作用.通过1,1-二苯基-2 苦基肼(DPPH)测试 ROS 清除能力,选取负载 TA 后 ROS 清除效率在 90%以上的双层膜进行后续体外细胞实验,利用CCK-8 及活死细胞染色测试其生物相容性,利用扫描电镜观察 MC3T3-E1 细胞在双层膜多孔面上的黏附情况,通过菌落计数测试其对金黄色葡萄球菌(E.coli)和大肠埃希菌(S.aureus)的抗菌性能.结果 CS@TA 双层膜一面光滑致密,另一面粗糙疏松多孔,截面呈垂直薄膜方向的有序多孔结构,随着TA的加入,双层膜的ROS清除能力先迅速增加后缓慢稳定,CCK-8 及活死细胞染色结果显示加入过多的 TA会明显影响双层膜的生物相容性,细菌稀释涂板计数结果显示加入适量TA的双层膜与未负载TA的双层膜相比,对E.coli和S.aureus具有一定抗菌能力.结论 负载适量TA的双层膜具有较强的 ROS 清除能力,良好的生物学性能,且对E.coli和S.aureus均具有一定的抗菌能力.

腹壁子宫内膜异位症(AWE)是一种罕见类型的盆腔外子宫内膜异位症,大多继发于剖宫产等盆腹腔手术,少数为自发性.AWE可以引起周期性腹痛、腹壁包块、肿胀出血等不适,发生机制主要有种植、内分泌、免疫、遗传和炎症等学说.超声和磁共振等影像学检查在AWE的早期诊断中具有较高价值,目前皮肤镜在AWE诊断中的应用较少,均匀红色色素沉着、活动性出血、红棕色球状结构等是镜下的典型特征.病灶切除术是AWE的标准治疗方案,包括开腹、腹腔镜(多孔或单孔)、机器人辅助腹腔镜等术式,根据病灶的浸润深度推荐不同入路.新型的高强度聚焦超声、经皮冷冻或微波消融等技术用于AWE保守性治疗的有效性和安全性已得到初步证实,未来值得进一步的探索.AWE的整体复发率低,病灶完全切除是预防复发的关键,术后联合使用激素的预防价值存在争议.关于AWE的管理,国内外尚无明确的专家共识和指南,临床上应做到早发现、早治疗和积极预防.