目的:探讨苯磺酸瑞马唑仑用于无痛胃肠镜检查对患者精神运动功能恢复的影响。方法:选择拟接受择期无痛胃肠镜检查的患者120例，ASA分级Ⅰ、Ⅱ级，年龄18~70岁，按随机数字表法分为丙泊酚组（P组）、苯磺酸瑞马唑仑组（R组）、苯磺酸瑞马唑仑联合丙泊酚组（S组），每组40例。患者诱导均采用静脉注射瑞芬太尼0.2 μg/kg，P组静脉注射丙泊酚1.0~2.0 mg/kg、R组静脉注射苯磺酸瑞马唑仑0.2 mg/kg、S组静脉注射苯磺酸瑞马唑仑7 mg复合丙泊酚0.5 mg/kg进行麻醉。各组患者恢定向力后进行精神运动功能测试：①采用Romberg试验，评估并记录恢复定向力5 min后能独立坐起且10 min后能稳定站立的患者例数；②患者恢复定向力15 min后依次进行手指轻叩试验、选择反应时（choice reaction time, CRT）测试、数字符号转换试验（digit-symbol substitution test, DSST）、数字连接试验（numberal connection test-A, NCT-A），且各项测试每5 min进行1次，直至测试结果恢复至基线水平，记录各项测试指标恢复时间。记录患者检查时间、苏醒时间、离院时间、不良反应（呼吸抑制、低血压）及追加药物次数>3次的患者例数。结果:R组、S组患者手指轻叩试验、CRT测试、DSST、NCT-A的恢复时间短于P组（ P<0.05）；S组患者CRT测试、DSST、NCT-A的恢复时间短于R组（ P<0.05），手指轻叩试验恢复时间长于R组（ P<0.05）。S组恢复定向力5 min后能独立坐起且10 min后能稳定站立的患者例数多于P组和R组（ P<0.05）。与P组比较，R组患者苏醒时间延长、离院时间缩短（ P<0.05），S组患者苏醒时间、离院时间缩短（ P<0.05）；与R组比较，S组患者苏醒时间缩短（ P<0.05），离院时间差异无统计学意义（ P>0.05）。与P组比较，R组、S组患者呼吸抑制、低血压的发生率降低（ P<0.05）；与R组比较，S组、P组追加药物次数>3次的患者例数减少（ P<0.05）。 结论:苯磺酸瑞马唑仑用于无痛胃肠镜检查，患者精神运动功能恢复速度略快于丙泊酚，苯磺酸瑞马唑仑联合丙泊酚应用时患者精神运动功能恢复速度最快。

目的:利用静息态功能磁共振成像（resting-state functional magnetic resonance，rs-fMRI）技术探讨轻度和重度尼古丁成瘾对大脑伏隔核（nucleus accumbens）定向功能连接的影响，并探究这种异常连接与尼古丁成瘾临床特征之间的关系。方法:回顾性收集71例尼古丁成瘾者［依据尼古丁依赖检测量表（Fagerstr?m Test for Nicotine Dependence，FTND）分为轻度尼古丁成瘾组（35例）和重度尼古丁成瘾组（36例）］以及40名健康志愿者（健康对照组）的rs-fMRI数据，采用格兰杰因果分析（Granger causality analysis，GCA）方法，选择双侧伏隔核作为种子点检测与全脑的效应连接，比较3组的有效连接值，并将其与尼古丁成瘾临床特征进行Spearman相关分析。结果:与健康对照组相比，尼古丁成瘾组左侧伏隔核到左侧眶部额上回、右侧伏隔核到左侧尾状核、双侧眶部额上回/左侧额中回到左侧伏隔核、右侧眶部额上回/右侧顶下回到右侧伏隔核的效应连接减弱；左侧伏隔核到左侧顶下回、左背外侧额上回，右侧小脑下叶到左侧伏隔核的效应连接增强。与轻度尼古丁依赖组相比，重度尼古丁成瘾组左侧伏隔核到左侧顶下回、左背外侧额上回、左额中回的效应连接增强。在校正年龄、教育程度及灰质体积后，左侧伏隔核到左侧顶下回、左背外侧额上回的GCA值与FTND评分呈正相关（ r=0.433， P<0.001； r=0.492， P<0.001）。左侧伏隔核到左背外侧额上回的GCA值与吸烟指数呈正相关（ r=0.311， P=0.013）。 结论:尼古丁成瘾者伏隔核和额顶叶的功能连接改变，且这种改变与尼古丁成瘾者的依赖程度相关。

目的:利用静息态功能磁共振（fMRI）技术探讨慢性耳鸣患者大脑伏隔核（NAc）的异常定向功能连接，并确定这种连接程度与耳鸣临床特征之间的关系。方法:回顾性收集2017年1月至2020年1月在南京市第一医院耳鼻喉科就诊的40例慢性双侧耳鸣患者［男12例，女28例，年龄26~63（50.6±11.6）岁］以及同期体检的40名听力正常的健康志愿者［男16例，女24例，年龄26~70（45.9±12.4）岁］的静息态fMRI数据，采用格兰杰因果分析（GCA）方法，选择双侧NAc作为种子点检测与全脑的定向功能连接，然后比较两组间的有效连接值，并计算其与耳鸣特征的相关性。结果:与健康对照组相比，慢性耳鸣患者左侧NAc到左侧额中回的有效连接值增强 ［（1.0±0.2）比（0.6±0.3）］，右侧NAc到左侧额下回的有效连接值增强［（0.9±0.3）比（0.6±0.4）］，右侧颞中回到左侧NAc的有效连接值增强［（1.0±0.2）比（0.5±0.3）］，右侧额中回到右侧NAc的有效连接值亦增强［（0.9±0.2）比（0.6±0.4）］（均 P<0.05）。在校正年龄、性别、教育程度及灰质体积后，左侧NAc至左侧额中回增强的有效连接值与耳鸣残疾问卷得分呈正相关（ r=0.386， P=0.020），右侧额中回至右侧NAc增强的有效连接值与耳鸣病程亦呈正相关（ r=0.390， P=0.019）。 结论:慢性耳鸣患者大脑NAc与前额叶皮层之间定向功能连接增强。

中医药历史悠久,数千年来凭借其特有优势与疾病抗争并延续至今.在"还原论"无法阐述的领域,分析中医药多成分多靶点的作用机制,探究"整体观"所蕴含的特殊意义,将进一步助力新药发现,实现中医药的现代化.网络药理学是连接"整体观"与"还原论"的纽带,善于从整体把握局部,近年来在中医药研究中得到广泛应用,相关文章的数量逐年上升.然而,快速发展的同时也暴露出了许多不可忽视的瓶颈问题.第一,临床基础不扎实.中药尤其是中药复方,其价值在于其临床有效性.在众多以中药复方为研究对象的网络药理学研究中,研究者常忽略中药复方在如今医疗环境下的临床有效性.中药种类众多,在配伍理论的指导下中药复方更是千变万化,有意义的研究要从临床出发,并以临床为根本探究其背后的道理.第二,网络分析基础不实.应用网络分析进行的研究一般包括数据挖掘、网络构建与分析、结果的分析与验证等过程.中药化合物数量众多,物理化学性质复杂,到目前虽已有多个中药数据库,但由于数据的来源不同,含有信息不同,更新频率不同,使得没有一个"完美"的数据库可供统一使用.第三,网络方法缺乏创新性.较之湿实验,归类于干实验下的网络分析部分受到越来越多研究者的青睐.现有许多研究均是基于网络分析,辅以湿实验验证,这类研究中,前端的网络分析占据了很重要的部分.然而,现阶段的诸多研究囿于固定的网络体系,诸如蛋白互作网络构建与分析、通路富集分析、GO功能富集分析等,一定程度上缺乏创新性,颇有流水线产品的味道.开发新方法要避免陷入工具主义,我们应首先聚焦问题并为之设计合理的解决方案,避免仅仅是软件或算法的堆叠.第四,网络分析结果的验证问题.基于网络分析所得到的结果仍属于干实验结果,其是否有效,是否值得进一步研究,仍需要经过验证,这一重要环节也往往由于各种原因被遗漏.若是验证诸如化合物对靶点产生的效应这类微观的结果,可通过设计湿实验增强研究力度,而若是一些相对宏观的研究,如探索一个方剂对某一疾病或不同疾病靶点的影响,也可以结合文献或计算等方法进行辅助验证.网络药理学作为一种新兴学科,不仅可用于中药或中药方剂的作用机制探索,也可为其他难以解决的问题提供新的思路,以下简要举几个我们课题组的例子.在中西药合用方面,目前被广泛关注的是心血管疾病领域,在医生给予患者一定量的抗血小板或抗凝药物时,患者自己有可能同时摄入具有相同功效的中药产品,如丹参,这可能会引发新的出血风险.此背景下,课题组通过结合西方药物靶点网络与丹参-川芎药对的靶点网络,应用虚拟分子对接与斑马鱼实验,在分子水平上进一步揭示了这种潜在风险(Pharmacol Res,2020,159:104963).此外,课题组创建了一个名为ChemGenerator的网络服务器,用于定向生成针对某个靶标的化合物分子,该服务器模型采用长短时记忆-自编码神经网络算法,通过训练700万个分子SMILES数据成功生成有效的化合物分子,然后通过引入迁移学习实现了针对不同靶点的定向生成,通过EGFR进行验证,为进一步探索寻找新的生物活性分子奠定基础(Brief Bioinform,2020,DOI:10.1093/bib/bbaa407).网络药理学尚处于快速发展的阶段,尤其在中药研究方面,研究者迫切希望网络分析能帮助解释科学内涵,因此在该阶段出现各种问题也是必然的.我们应该抓住这个关键期,做研究的同时要逐步发现并解决暴露出的各个问题,也要在基于现有问题的基础上打开思维拓宽思路,使用新方法新技术解决不同的问题.

目的 观察虚拟现实(VR)技术对轻度认知功能障碍(MCI)患者的治疗效果,并从神经电生理角度探讨相关机制,为其临床应用奠定试验基础.方法 选取 2020年 7月至 2022年 2月于成都医学院第二附属医院·核工业四一六医院神经内科首次就诊的以记忆障碍为主诉的 40例MCI患者为研究对象,将患者随机分为常规组及VR组,每组 20例.常规组接受常规认知训练,VR组接受VR认知训练,30 min/d,每周持续 5 d,疗程均为4周.治疗前、后由专业人员分别对两组患者行蒙特利尔认知评估量表(MoCA)测评,记录MoCA量表总分及各分量表分值(包括视空间执行能力、命名、注意力、语言流畅性、抽象思维、延迟回忆和定向力),并采集工作记忆状态下的脑电信号,计算各频带导联间相干值,比较治疗前、后MoCA量表评分及各频带导联间脑电信号相干值.结果 治疗后,两组患者MoCA量表总分均较同组治疗前提高(P<0.05),且VR组总分(25.25±1.83)分高于常规组(24.73±1.95)分(P=0.004);治疗后,常规组工作记忆状态下各脑区之间相干值与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05),而VR组脑电信号θ、α频带在左侧半球内额-顶(F3-P3)及右侧半球顶-枕(P4-O2)相干值较治疗前增加(P<0.05),且治疗后上述脑区间相干值均高于常规组(P<0.05).结论 VR认知训练可不同程度增强MCI患者半球内认知脑区间功能连接,改善其注意力、记忆力等,且疗效优于传统认知训练.

隧道纳米管(tunneling nanotubes,TNTs)是主要以肌动蛋白为骨架形成的细胞间管道结构,相当于连接细胞之间的桥梁.作为新发现的细胞间通信机制,TNTs能够实现细胞间长距离的通信与物质的定向运输,介导细胞器、核酸、小分子蛋白等物质在细胞间转移.TNTs借助自身的通讯与运输功能影响神经退行性疾病、癌症等疾病的发生发展,同时也为相关疾病的治疗提供一些新思路、新靶点.本篇综述详细介绍了TNTs的形态结构、形成机制、形成相关调节因子、功能特性以及生理学意义.

构建靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体并检测其基因敲除功能.设计2个gRNA,分别靶向人ezrin增强子关键区的上、下游.合成gRNA寡核苷酸序列,连接至质粒pX459构建重组质粒pX459-sgRNA-EL和pX459-sgRNA-ER.将鉴定正确的CRISPR/Cas9重组质粒共转染至食管癌EC109细胞中,提取细胞基因组DNA,针对gRNA靶位点两侧进行PCR扩增和亚克隆测序分析.经限制性内切酶酶切和测序鉴定表明,CRISPR/Cas9重组质粒构建正确.在共转染重组质粒的细胞基因组DNA中检测到ezrin增强子关键区的缺失.成功构建了靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体,能够实现目标序列的定向敲除.

目的 Sj16蛋白是从日本血吸虫分泌物中分离出的一种具有免疫调节功能的蛋白质,具有诱导器官移植免疫耐受的潜力.但是,在用传统方法合成时,其表达量低,可溶性较差,影响了其生物活性.该实验拟优化Sj16AA的合成方法,为进一步研究其功能提供条件.方法 在Sj16蛋白的DNA序列基础上,进行特定位点的突变修饰,同时针对大肠杆菌表达系统优化密码子.将修饰后的Sj16AA基因定向克隆入pMal-c2X质粒,转入BL21(DE3)菌表达,摸索不同条件下Sj16AA的表达情况.结果 成功制备目的基因片段与载体的连接产物pMal-c2X-Sj16M,转化后的BL21/DE3菌经IPTG诱导可表达与MBP融合的蛋白(约58 kDa),抗MBP抗体能特异性识别该蛋白.结论 相较于传统合成方法,经优化的Sj16AA蛋白表达量较高,可溶性较好,能够更好地应用于器官移植免疫相关的基础和临床研究.

目的 构建人ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体,为研究ABO血型基因及亚型基因的功能奠定基础.方法 从已知ABO基因分型的标本中(A101,B101)提取总RNA,将其逆转录合成cDNA,经特异性引物扩增目的基因片段,将其定向连接到pcDNA3.1(+)真核表达载体;采用定点突变PCR的方法构建CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体,通过测序鉴定其序列正确.将ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体分别转染Hela细胞系,通过免疫荧光和Western印迹检测各ABO基因在细胞中的表达.结果 测序结果显示扩增到的A101及B101 cDNA以正确序列和方式插入载体,CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体的测序结果显示相应位点均成功突变;免疫荧光和Western印迹结果显示A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型在Hela细胞中均有表达.结论 成功构建了ABO血型基因及亚型基因真核表达载体,体外转染Hela细胞成功表达糖基转移酶,为后续研究奠定了基础.

中枢神经损伤的修复是当今社会的一大难题.随着纳米技术的发展,逐渐出现一些能产生导电性的生物材料如碳纳米管和石墨烯等,它们在一定程度上能促进神经的功能性恢复,但其本身对机体也有一定的毒性,甚至有时引起神经细胞凋亡.神经损伤过程往往出现神经轴突的断裂,断裂的神经轴突无法与次级神经元发生突触连接,导致神经的修复再生障碍.神经轴突导向因子netrin-1是神经发育过程中的重要分泌蛋白,可定向牵引神经轴突的生长和迁移,导致突触形成,从而促进神经损伤的修复但是它在纳米材料修复神经损伤中的分子调节机制尚不明确.本文综述了netrin-1在纳米材料促进神经再生中的作用 它对神经元的轴突导向生长和神经迁移具有促进作用,抑制纳米材料造成的神经损伤和凋亡,为其应用于纳米材料修复神经损伤且诱导神经再生提供重要理论依据.