目的:探讨肌源性分化蛋白1(Myod1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的SH-SY5Y细胞增殖抑制和凋亡的影响,并阐明其作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常对照组研究对象和缺血性脑梗死组患者外周血及正常培养的SH-SY5Y细胞(对照组)和OGD细胞模型(OGD组)细胞中Myod1和长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)mRNA表达水平.分别采用 si-Myod1、pcDNA3.0-Myod1、si-SNHG15、pcDNA3.0-SNHG15、si-NC、空载质粒(Vector)、miR-NC和miR-24-3p模拟物(miR-mimics)质粒转染SH-SY5Y细胞后,进行OGD处理,将SH-SY5Y细胞分为对照组、OGD组、OGD+Vector组、OGD+Myod1组、OGD+si-NC组、OGD+si-Myod1 组、OGD+si-SNHG15 组、OGD+si-SNHG15+Vector 组、OGD+si-SNHG15+Myod1 组、OGD+miR-NC 组、OGD+miR-mimics 组、OGD+miR-mimics+Vector 组和 OGD+miR-mimics+SNHG15组.采用CCK-8法检测各组细胞活性,采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色法检测各组EdU阳性细胞率,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组TUNEL阳性细胞率,采用W estern blotting法检测各组细胞中裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平.染色质免疫共沉淀(CHIP)法评估Myod1和SNHG15之间的关联.双荧光素酶报告基因实验评估Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p的靶向关系.结果:与正常对照组比较,缺血性脑梗死组患者外周血中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均升高(P＜0.05).与对照组比较,OGD组细胞中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均明显升高(P＜0.05).与OGD组比较,48和72 h时OGD+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均降低(P＜0.01),TUNEL阳性细胞率升高(P＜0.01);OGD+si-Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P＜0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P＜0.01).Myod1可与SNHG15的启动子序列结合.SNHG15 可吸附 miR-24-3p,Myod1 与 SNHG15 及 SNHG15 与 miR-24-3p 存在靶关系.敲低 SNHG15后,与OGD组比较,48和72h时OGD+si-SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P＜0.01),TUNEL 阳性细胞率降低(P＜0.01),细胞中 Bax、cleaved caspase-3 和 cleaved caspase-9 蛋白表达水平降低(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P＜0.01);与OGD+si-SNHG15组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P＜0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P＜0.05),细胞中 Bax、cleaved caspase-3 和 cleaved caspase-9 蛋白表达水平升高(P＜0.05),Bcl-2的蛋白表达水平降低(P＜0.05).过表达miR-24-3p和SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics组细胞活性和EdU阳性细胞率升高(P＜0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P＜0.01),细胞中 Bax、cleaved caspase-3 和 cleaved caspase-9 蛋白表达水平降低(P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达水平升高(P＜0.01);与 OGD+miR-mimics 组比较,48 和 72h 时OGD+miR-mimics+SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P＜0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P＜0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:Myod1可通过与SNHG15启动子区结合进而吸附miRNA-24,促进OGD诱导的SH-SY5Y细胞的增殖抑制和细胞凋亡.

目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因12(SNHG12)调控miR-138-5p/低氧诱导因子-1α(HIF-1α)轴改善缺氧/复氧(H/R)人血管内皮细胞损伤的作用.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),随机分为对照组、H/R模型组、H/R+LncRNA SNHG12过表达组、H/R+miR-138-5p mimics组、H/R+共转染组、H/R+共转染阴性对照组,各转染组分别进行转染处理,除对照组外,其余各组给予5 h缺氧,再进行复氧1 h处理,诱导细胞模型,然后通过CCK-8实验检测各组细胞活力情况;通过流式细胞实验检测各组细胞凋亡情况,比较各组细胞凋亡率;通过试剂盒测量各组细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)及炎症因子IL-6、IL-17、IL-18水平;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验测定各组细胞miR-138-5p及HIF-1α mRNA表达;通过免疫印迹实验检测各组细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及HIF-1α蛋白表达.结果:与对照组相比,H/R模型组细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞HIF-1α mRNA和蛋白水平、细胞caspase-9、Bax及HIF-1α蛋白水平升高(P<0.05),细胞活力、miR-138-5p水平降低(P<0.05).与H/R模型组、H/R+共转染组相比,H/R+LncRNA SNHG12过表达组细胞活力、细胞HIF-1α mRNA及蛋白水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞caspase-9与Bax蛋白水平、miR-138-5p水平降低(P<0.05);H/R+miR-138-5p mimics组细胞活力、细胞HIF-1α mRNA及蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞cas-pase-9与Bax蛋白水平升高(P<0.05).与H/R模型组相比,H/R+共转染阴性对照组、H/R+共转染组细胞各指标水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:LncRNA SNHG12可通过下调miR-138-5p表达,上调HIF-1α表达,抑制H/R诱导的HUVECs炎症与氧化应激,减轻细胞损伤及凋亡.

目的 探究急性脑梗死(ACI)病人血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(lncRNA SNHG1)、微RNA-329-3p(miR-329-3p)表达水平变化及其与疾病发生风险的关系.方法 选取2020年9月至2021年9月在南京市江宁医院收治的162例ACI病人作为观察组,根据病人美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)分为轻度ACI组60例(NIHSS≤7分)、中度ACI组56例(8分≤NIHSS≤13分)和重度ACI组46例(NIHSS≥14分),另选取同时期在南京市江宁医院体检的165例健康志愿者作为对照组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清lncRNA SNHG1、miR-329-3p水平;采用Spearman法分析lncRNA SNHG1、miR-329-3p与NIHSS评分的关系;采用Pearson法分析lncRNA SNHG1与miR-329-3p水平的关系;采用ROC曲线分析lncRNA SN?HG1、miR-329-3p对ACI的诊断价值;多因素logistic回归分析影响ACI发生的危险因素.结果 与对照组(1.03±0.04、1.01±0.03)相比,观察组病人血清lncRNA SNHG1表达水平(0.34±0.08)显著降低(P<0.05),miR-329-3p水平(2.15±0.70)明显升高(P<0.05);lncRNA SNHG1表达水平随疾病严重程度增加而显著降低(0.43±0.09、0.35±0.08、0.21±0.07)(P<0.05),miR-329-3p水平随疾病严重程度增加而明显升高(1.51±0.50、2.20±0.69、2.92±0.97)(P<0.05);ACI病人血清lncRNA SNHG1水平与NIHSS评分呈负相关(P<0.05),miR-329-3p水平与NIHSS评分呈正相关(P<0.05),lncRNA SNHG1与miR-329-3p表达呈负相关(P<0.05);ROC曲线分析表明,与lncRNA SNHG1单独诊断相比,二者联合诊断ACI发生的ROC曲线下面积(AUC)差异无统计学意义(Z=1.33,P=0.920),与miR-329-3p单独诊断相比,二者联合诊断ACI发生的AUC更高(Z=2.93,P=0.003);多因素logistic回归分析显示,lncRNA SNHG1低水平、miR-329-3p高水平是影响ACI发生的危险因素(P<0.05).结论 ACI病人血清lncRNA SNHG1表达水平降低,miR-329-3p表达水平升高,且与病人病情严重程度有关.

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体中长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因12(SNHG12)对心肌细胞的影响及其机制.方法 贴壁法分离培养BMSCs并传代.取传3代BMSCs,转染SNHG12 48 h,分离外泌体并鉴定.取H9c2细胞,随机分为阴性对照(NC)外泌体组与SNHG12外泌体组,分别转染NC外泌体、SNHG12外泌体;SNHG12外泌体 + miR138-5p抑制剂组与SNHG12外泌体 + NC抑制剂组,分别转染SNHG12外泌体 + miR138-5p抑制剂及SNHG12外泌体 + NC抑制剂;SNHG12外泌体 + SH-NC组与SNHG12外泌体 + SH-SIRT1组,分别转染SNHG12外泌体 + SH-NC及SNHG12外泌体 + SH-SIRT1.制备缺氧溶液,将上述各组细胞与缺氧溶液共孵育6 h,建立体外缺氧细胞模型.收集各组细胞培养液,离心留取上清液.采用ELISA法检测上清液IL-1β、IL-18含量.收集各组细胞,采用Western blotting法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、剪切的半胱氨酸蛋白酶1(Cleaved-Caspase-1)、剪切的焦孔素D(Cleaved-GSDMD)蛋白表达,采用CCK-8法检测细胞活力,采用TUNEL法检测细胞凋亡率.结果 经鉴定,成功获取BMSCs来源外泌体.在体外缺氧细胞中,SNHG12外泌体组细胞凋亡率以及NLRP3、ASC、Cleaved-Caspase-1、Cleaved-GSDMD蛋白表达和上清液IL-1β、IL-18水平均低于NC外泌体组(P均<0.05),细胞活力高于NC外泌体组(P<0.05).下调miR-138-5p表达后,BMSCs来源外泌体中SNHG12可导致NLRP3、ASC、Cleaved-Caspase-1、Cleaved-GSDMD蛋白表达降低,细胞活力升高、细胞凋亡率降低(P均<0.05);下调SIRT1表达后,BMSCs来源外泌体中SNHG12可导致NLRP3、ASC、Cleaved-Caspase-1、Cleaved-GSDMD蛋白表达升高,细胞活力降低、细胞凋亡率升高(P均<0.05).结论 BMSCs来源外泌体中lncRNA SNHG12可能通过调节miR-138-5p/SIRT1轴抑制心肌细胞炎症反应及心肌细胞焦亡和凋亡,从而发挥对心肌细胞的保护作用.

目的 探讨正常机采血小板储存过程中伴随储存时间延长长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因9(SNHG9)的表达变化及意义.方法 收集符合临床血小板输注治疗标准的正常机采血小板32份,保存于专用(22±2)℃恒温振荡保存箱内,在不同储存时间(1、3、5、7、9 d)通过外观、血小板计数、红细胞残留量计数、白细胞残余量计数、pH值及细菌培养检测血小板质量;用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNHG9在同一机采血小板样本不同储存时间的表达量,分析其对血小板储存损伤(PSL)的影响及意义.结果 在第1、3、5、7、9天SNHG9表达量伴随储存时间延长逐渐增高,数据总体存在统计学差异(H=93.073,P＜0.001),差异有统计学意义(P＜0.05).进一步对不同天数之间SNHG9表达量进行两两多重比较,第1天与第3天校正后的P值是0.144,差异无统计学意义(P＞0.05):第1天和第5天,第1天和第7天,第1天和第9天校正后的P值均小于0.001,差异有统计学意义(P＜0.05);第3天和第5天(P=0.031),第3天和第7天,第3天和第9天(P＜0.001)校正后差异有统计学意义.结论 用于临床治疗的正常机采血小板伴随储存时间延长,第5、7、9天样本中SNHG9表达量比第1天明显增高,SNHG9对血小板储存条件敏感,有可能成为PSL潜在的生物学标记物.

目前发现长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)小核仁RNA宿主基因7(small nucleolar RNA host gene 7,SNHG7)在多种肿瘤中高表达,发挥原癌基因效应,但是其在舌癌中的功能尚未研究.qRT-PCR结果证实,SNHG7在舌癌组织和细胞中均下调.在舌癌细胞中,过表达SNHG7抑制舌癌细胞增殖,敲低SNHG7促进舌癌细胞增殖.生物信息学分析及双荧光素酶报告基因实验证实,miR-9-5p与SNHG7结合且下调其表达.过表达SNHG7,miR-9-5p表达量降低而自噬/苄氯素1调节因子1(autophagy/Beclin 1 regulator 1,Ambra1)的表达增加.敲低SNHG7,上调miR-9-5p,且降低Ambra1的表达.临床组织标本随访资料统计发现,SNHG7、Ambra1与舌癌患者预后正相关,而miR-9-5p与舌癌患者预后负相关.提示SNHG7/miR-9-5 p/Ambra1可作为舌癌预后的潜在标志物.

目的 探讨长链非编码(lnc)RNA核仁小分子RNA宿主基因(SNHG)1在胃癌中的表达水平及其对胃癌细胞增殖和侵袭过程的影响.方法 实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG1在胃癌细胞SGC7901、BGC823和正常胃上皮细胞NGEC中的表达水平及采用SUHG1的小干扰RNA(si-SNHG1)干扰后SNHG1的表达水平;噻唑蓝(MTT)法检测沉默SNHG1对SGC7901、BGC823细胞增殖的影响,Transwell小室检测沉默SNHG1对SGC7901、BGC823细胞侵袭能力的影响.Western印迹法检测沉默SNHG1前后增殖标志物Ki67和侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9在SGC7901、BGC823中的表达变化.结果 SNHG1在胃癌细胞株中的表达显著高于正常胃上皮细胞株(P<0.05);沉默SNHG1能显著抑制Ki67、MMP-2、MMP-9的表达.结论 lncRNA SNHG1在胃癌细胞中高表达,沉默SNHG1对胃癌细胞的增殖、侵袭起抑制作用,SNHG1可能成为治疗胃癌的一个有效靶点.

目的:探讨核仁小分子RNA宿主基因1(SNHG1)对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖、侵袭、迁移的影响及分子机制.方法:用Lipofectamine2000将SNHG1 shRNA(sh-SNHG1组)或阴性对照shRNA(sh-NC组)分别转染入SK-N-SH细胞中,以未转染细胞为空白对照.转染24 h后,qRT-PCR法检测细胞中SNHG1的表达,CCK-8测定细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot法测定细胞中MMP-9、MMP-2蛋白的表达.利用在线靶基因预测软件Starbase预测SNHG1与miR-145的结合位点,双荧光素酶报告实验鉴定两者的靶向关系.将SNHG1 shRNA、miR-145抑制物共转染到SK-N-SH细胞中(sh-SNHG1+anti-miR-145组),将SNHG1 shRNA、抑制物阴性对照共转染到SK-N-SH细胞中(sh-SNHG1+anti-NC),测定细胞增殖、侵袭、迁移能力,以及细胞中miR-145、MMP-9和MMP-2蛋白的表达.结果:与空白对照、sh-NC组比较,sh-SNHG1组细胞增殖、侵袭和迁移能力,细胞中SNHG1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平下降(P<0.05).双荧光素酶报告实验结果证实SNHG1靶向负调控SK-N-SH细胞中miR-145的表达.与sh-SNHG1+anti-NC组比较,sh-SNHG1+anti-miR-145组细胞miR-145表达水平降低(P<0.05),MMP-2和MMP-9表达增强,细胞增殖、侵袭和迁移能力增强(P<0.05).结论:SNHG1可通过靶向负调控miR-145的表达,促进神经母细胞瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力.

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因6(small nuclear RNA host gene 6,SNHG6)促进食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞侵袭和转移的作用及其分子生物学机制.方法:使用实时定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测36例ESCC组织及其癌旁组织(标本收集自河北医科大学第四医院2019年2月至8月外科手术的ESCC患者)中SNHG6表达水平;使用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测ESCC细胞系(TEl、Yes-2、Eca9706和Kyse150)中SNHG6表达水平,选用SNHG6高表达的TE1细胞,通过转染SNHG6-siRNA敲低该细胞中SNHG6表达;通过集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测SNHG6敲低前后TEl细胞克隆形成、迁移和侵袭能力的变化;采用蛋白质免疫印迹法(Westem blotting)检测SNHG6敲低前后TE1细胞中锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1(zinc finger E-box binding homeobox factor 1,ZEB1)、MMP-2和MMP-9蛋白表达的变化.结果:SNHG6在ESCC组织和细胞系中均呈高表达状态(均P＜0.01),且在TE1细胞中高表达最为显著.转染SNHG6-siRNA后TE1细胞中SNHG6表达水平显著降低(P＜0.01),si-SNHG6-1和si-SNHG6-2组TE1细胞的克隆形成、迁移和侵袭能力均显著低于对照组(均P＜0.01),两组细胞中MMP-2、MMP-9和ZEB1表达水平均显著低于对照组(均P＜0.05).结论:ESCC组织中呈高表达的SNHG6可促进TE1细胞的恶性生物学行为,其机制可能涉及ZEB1表达的上调.

目的:检测食管鳞癌肿瘤组织中长链非编码核仁小RNA宿主基因7(LncRNA SNHG7)表达水平,并探究其与食管鳞癌患者预后的关系.方法:选取2011年6月至2014年9月本院收治的食管鳞癌患者52例,采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测食管鳞癌肿瘤组织及癌旁组织中LncRNA SNHG7表达水平.结果:食管鳞癌肿瘤组织LncRNA SNHG7表达水平显著高于癌旁组织(P＜0.05);LncRNA SNHG7表达水平与患者临床分期、肿瘤分化程度、肿瘤体积、淋巴结转移有关(P＜0.05),与患者性别、年龄、肿瘤浸润深度无关(P＞0.05);LncRNA SNHG7高表达者术后生存率显著低于LncRNA SNHG7低表达者(P＜0.05);LncRNASNHG7表达和肿瘤TNM分期是影响患者预后的独立危险因素.结论:LncRNA SNHG7在食管鳞癌肿瘤组织中高表达,是食管鳞癌术后不良预后的生物指标.