目的:探讨长链非编码核旁斑装配转录物1(Lnc NEAT1)靶向微小RNA(miR)-506-3p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法:收集河南省人民医院手术切除的结肠癌组织标本和癌旁正常组织标本各82例，采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测结肠癌组织和癌旁组织中Lnc NEAT1的mRNA表达水平；构建miRNA-Control、miR-506-3p和短发卡RNA(shRNA)-Control、shRNA-Lnc NEAT1慢病毒结肠癌细胞株，采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析Lnc NEAT1和miR-506-3p的靶向关系；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell分别检测shRNA-Control和shRNA-Lnc NEAT1细胞的增殖、迁移能力；蛋白质印迹法(Western blot)检测shRNA-Control和shRNA-Lnc NEAT1细胞中LAMC1的蛋白表达水平。两组均数比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:Lnc NEAT1在结肠癌组织(1.93±0.18)中的mRNA相对表达水平显著高于癌旁组织(0.52±0.06， t＝33.337， P<0.05)。过表达Lnc NEAT1-WT后，miR-506-3p细胞的相对荧光素酶活性(0.39±0.04)较miRNA-Control组显著下降(1.50±0.12, t＝26.405， P<0.05)。shRNA-Lnc NEAT1细胞48 h(0.69±0.03比1.15±0.03， t＝20.129， P<0.05)和72 h(0.82±0.07比1.48±0.06， t＝12.651， P<0.05)的增殖活力明显低于shRNA-Control。shRNA-Lnc NEAT1细胞的迁移细胞数明显低于shRNA-Control(47.67±5.81比155.33±12.51， t＝13.649， P<0.05)。shRNA-Lnc NEAT1细胞中LAMC1的蛋白表达水平较shRNA-Control显著下降(0.48±0.04比1.39±0.11， t＝30.883， P<0.05)。 结论:Lnc NEAT1可能通过负向抑制miR-506-3p的表达，增强LAMC1的表达，从而促进结肠癌细胞的增殖和迁移。

目的:探索微小RNA-506(miR-506)对胰腺癌肿瘤相关巨噬细胞及肿瘤微环境的影响。方法:使用Panc02细胞建立原位成瘤模型。将C57BL/6荷瘤小鼠分为miR-ctrl C57组和miR-506 C57组，每组15只，成瘤后分别通过腹腔注射二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)脂质体包被的miR-ctrl(miR-ctrl/DOPC)或miR-506(miR-506/DOPC)，测量肿瘤重量和体积，以流式细胞术检测肿瘤浸润性免疫细胞亚群变化，并监测小鼠生存期。将荷瘤裸鼠分为miR-ctrl nude组和miR-506 nude组，每组5只，成瘤后分别通过腹腔注射miR-ctrl/DOPC或miR-506/DOPC，用以排除免疫系统影响。将C57BL/6荷瘤小鼠分为清除对照组和巨噬细胞清除组，每组10只，成瘤后两组分别通过腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)或氯膦酸二钠脂质体(Clo)，用以排除巨噬细胞影响，2周后各组再分为miR-ctrl PBS组、miR-506 PBS组、miR-ctrl Clo组和miR-506 Clo组。 结果:miR-506 C57组小鼠的肿瘤体积(1.04±0.23)×10 3 mm 3和肿瘤重量(0.51±0.10)g均小于miR-ctrl C57组[(1.92±0.34)×10 3 mm 3和(0.99±0.19)g]，M2/M1比例低于miR-ctrl C57组[(1.19±0.46)比(2.85±0.40)]，差异具有统计学意义( P<0.01)。生存曲线显示，miR-506 C57组小鼠总生存期好于miR-ctrl C57组小鼠，差异具有统计学意义( P<0.01)。BALB/c裸鼠成瘤模型中miR-506 nude组小鼠的肿瘤体积和肿瘤重量与miR-ctrl nude组比较，差异无统计学意义( P>0.05)。C57BL/6荷瘤小鼠模型免疫微环境中miR-506 PBS组较miR-ctrl PBS组肿瘤调节性T细胞的比例更低[(4.70±1.86)%比(12.00±2.24)%]，细胞毒性T细胞的比例更高[(10.54±1.89)%比(4.54±1.25)%]，凋亡细胞毒性T细胞的比例更低[(14.00±4.00)%比(26.80±4.27)%]，细胞毒性T细胞产生干扰素-γ的浓度更高[(89.60±14.69)比(28.00±13.69)ng/g]，差异均具有统计学意义( P<0.05)；但经过Clo清除巨噬细胞后，miR-506 Clo组和miR-ctrl Clo组上述指标差异均无统计学意义( P>0.05)。 结论:MiR-506通过巨噬细胞依赖的方式抑制胰腺癌的进展并纠正其免疫抑制性肿瘤微环境。

目的:探讨LINC00963调节微小RNA(miRNA，miR)-506-3p/层粘连蛋白γ1(LAMC1)轴对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选取2022年12月至2023年12月沧州市中心医院、华北医疗健康集团峰峰总医院和廊坊市人民医院收治的98例胃癌和癌旁组织样本作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析LINC00963和miR-506-3p的表达水平；采用慢病毒建立LINC00963敲低和miR-506-3p过表达细胞系，分别为长链非编码RNA(lncRNA)对照组、LINC00963 KD组、miRNA对照组、miR-506-3p组，分别采用细胞计数试剂测定细胞的增殖能力；采用划痕实验和Transwell分析细胞的迁移和侵袭能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析LINC00963和miR-506-3p的关系。分析miR-506-3p靶基因，并采用蛋白质免疫印迹分析LINC00963和miR-506-3p对靶基因表达的影响。组间计量数据比较采用独立样本 t检验。 结果:癌旁组织LINC00963表达水平(1.03±0.17)明显低于胃癌组织表达水平(1.65±0.15)，差异有统计学意义( t＝27.210， P<0.05)。癌旁组织miR-506-3p表达水平(0.92±0.20)明显高于胃癌组织表达水平(0.60±0.14)，差异有统计学意义( t＝12.760， P<0.05)。lncRNA对照组细胞吸光度值、迁移数量和侵袭数量[(1.71±0.09)、(87.67±5.47)个、(117.67±12.27)个]明显高于LINC00963 KD组细胞[(1.08±0.18)、(54.67±5.28)个、(86.50±6.95)个]，差异有统计学意义( t＝7.556、10.640、5.412， P<0.05)。miRNA对照组细胞吸光度值、迁移数量和侵袭数量[(1.87±0.07)、(81.67±9.63)个、(113.17±8.87)个]明显高于miR-506-3p组细胞[(1.13±0.09)、(60.67±8.04)个、(85.50±5.13)个]，差异有统计学意义( t＝16.070、5.596、6.605， P<0.05)。LINC00963和miR-506-3p存在结合位点。LAMC1是miR-506-3p的靶基因。lncRNA对照组细胞LAMC1蛋白表达水平(0.99±0.11)明显高于LINC00963 KD组细胞(0.53±0.07)，差异有统计学意义( t＝8.552， P<0.05)。miRNA对照组细胞LAMC1蛋白表达水平(1.08±0.08)明显高于miR-506-3p组细胞(0.48±0.09)，差异有统计学意义( t＝12.540， P<0.05)。 结论:LINC00963在胃癌组织中呈高表达，通过调节miR-506-3p/LAMC1轴，进而促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭等细胞生物学行为。

目的:阐明人类微小RNA(hsa-miR)-92a-2-5p可通过抑制HEATR1基因对胃癌细胞生物学作用。方法:采用在线生物信息学工具(Target Scan)以及文献调研进行统计筛选，选择结合较好的5种微小RNA(miRNA)：hsa-miR-92a-2-5p、hsa-miR-20a-2-3p、hsa-miR-183-5p、hsa-miR-506-3p和hsa-miR-556，通过蛋白质印迹法(Western blot)对5种miRNAs在两种胃癌细胞株(AGS、MGC803)检测目的基因的蛋白的表达变化。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、PI-FACS细胞周期实验、克隆形成实验检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测细胞凋亡、迁移及侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力，组间比较采用 t检验。 结果:hsa-miR-92a-2-5p被证明与HEATR1存在较好的调控关系。过表达hsa-miR-92a-2-5p后，AGS、MGC803细胞中转染组克隆形成能力低于阴性对照组(83.000±2.646比150.667±7.638， t＝14.500， P<0.01；264.667±9.713比288.333±6.658， t＝3.481， P<0.05)。在培养96 h及120 h后，CCK-8实验显示转染组增殖能力低于阴性对照组，AGS细胞(0.380±0.032比0.612±0.019， t＝10.621， P<0.01；0.912±0.093比1.590±0.008， t＝12.585， P<0.01)，MGC803细胞(0.588±0.042比0.967±0.025， t＝13.691， P<0.01；1.052±0.028比1.559±0.013， t＝28.550， P<0.01)。细胞凋亡实验显示，AGS、MGC803细胞细胞中转染组凋亡率高于阴性对照组(12.667±0.950比5.727±0.482， t＝11.279， P<0.01；16.133±2.937比5.560±1.361， t＝5.658， P<0.01)。AGS和MGC803细胞侵袭、转移能力转染组均低于阴性对照组，AGS细胞中(360.000±7.937比550.667±10.017， t＝25.840， P<0.01；265.333±12.503比455.667±9.292， t＝21.163， P<0.01)，MGC803细胞中(139.667±6.110比241.000±5.568， t＝21.232， P<0.01；61.333±9.292比218.333±4.619， t＝26.207， P<0.01)。 结论:hsa-miR-92a-2-5p可以敲减HEATR1基因的表达，抑制胃癌细胞增殖、侵袭、转移，并促进胃癌细胞的凋亡。

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系.方法 体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平.构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体,设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组,根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞.将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养,Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1(Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平.通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能,利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA).结果 与正常组相比,OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P<0.0001).测序比对结果正确,成功构建cir-cHIPK3过表达慢病毒载体.感染RM细胞最佳MOI=80,以2μg/ml嘌呤霉素筛选得到稳定过表达circHIPK3的RM细胞.RT-qPCR结果显示,OE组细胞中circHIPK3表达水平较NC组显著增高(P<0.01).Western blot结果显示,在OGD/R培养条件下,OE组细胞中Iba-1和CD40蛋白表达水平较NC组显著降低(P<0.05).蛋白翻译分析显示,cir-cHIPK3具有2个内部核糖体进入位点(IRES)和1个开放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽.miRNA结合分析显示,circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合:hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p.结论 过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能,可能通过海绵miRNA发挥功能.

目的 检测膀胱癌患者ATP结合盒转运蛋白C4(ABCC4)和微小RNA-506-3p(miR-506-3p)的表达水平,并探讨其与患者预后的关系.方法 选取2015年5月至2017年5月该院收治的78例膀胱癌患者作为研究对象,术中收集所有患者膀胱癌组织及癌旁组织(距离癌组织边缘≥3 cm).采用免疫印迹法或实时荧光定量PCR技术检测各组织ABCC4蛋白、mRNA及miR-506-3p的表达水平,分析ABCC4蛋白和miR-506-3 p表达的相关性、靶向调控关系,以及二者与膀胱癌患者临床病理特征、术后4年总生存率的关系;COX回归分析影响膀胱癌患者预后的危险因素.结果 膀胱癌组织ABCC4蛋白和mRNA的表达水平均明显高于癌旁组织(P＜0.05),而膀胱癌组织miR-506-3p的表达水平明显低于癌旁组织(P＜0.05).膀胱癌组织中ABCC4蛋白与miR-506-3p表达呈负相关(P＜0.05),且miR-506-3p可靶向调控ABCC4;膀胱癌组织ABCC4蛋白的表达水平与肿瘤分期、肿瘤最大径和是否发生淋巴结转移有关(P＜0.05),miR-506-3p表达水平与肿瘤分期有关(P＜0.05).ABCC4蛋白高表达组患者总生存率明显低于低表达组(P＜0.05),miR-506-5p高表达组总生存率明显高于低表达组(P＜0.05);肿瘤分期及膀胱癌组织ABCC4蛋白、miR-506-3p表达是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素(P＜0.05).结论 ABCC4在膀胱癌组织中表达上调,而miR-506-3p在膀胱癌组织中表达下调,且二者呈负相关.ABCC4、miR-506-3p均具有作为膀胱癌预后标志物和治疗靶点的潜力.

目的 探讨微小RNA-20b(miR-20b)对胃癌MGC-803细胞侵袭和迁移的影响.方法 采用脂质体Lipo-fectamine 2000法向MGC-803细胞分别转染miR-20b抑制剂(inhibitor转染组)和miR-20b抑制剂阴性对照(NC组),设不行转染的细胞为未转染组;采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测各组转染48 h后的miR-20b水平以评估转染效率,分别采用Tran-swell实验和划痕实验比较各组细胞的侵袭和迁移情况,Western blotting检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、磷酸化信号转导激活转录因子-3(p-STAT3)和磷酸化酪氨酸蛋白激酶-1(p-JAK1)的表达情况.结果 QPCR结果显示,未转染组、NC组和inhib-itor转染组的miR-20b水平分别为1.054±0.123、0.987±0.085和0.506±0.092,与未转染组和NC组相比,inhibitor转染组的miR-20b水平降低(P ＜0.05);未转染组、NC组和inhibitor转染组的划痕愈合率分别为(60.21±1.16)％、(62.57±2.06)％和(25.17±2.69)％,穿膜细胞数目分别为(448±39)个、(415±33)个和(196±29)个,与未转染组和NC组相比,inhibitor转染组的划痕愈合率和穿膜细胞数目均降低(P ＜0.05).转染miR-20b抑制剂可降低MMP-9、p-JAK1和p-STAT3的表达水平(P＜0.05).结论 下调miR-20b水平可抑制胃癌细胞侵袭和迁移能力,可能与降低MMP-9表达及抑制JAK/STAT信号通路活性有关,在胃癌靶向治疗中有一定应用前景.

目的 探讨微小RNA-506-3p(miR-506-3p)通过调控含PHD及指环结构域的类泛素蛋白1(UHRF1)的表达,进而影响大肠癌细胞转移能力的机制.方法 利用生物信息学的方法预测并筛选UHRF1上游可能发挥调控作用的miRNA-506-3p;在大肠癌细胞及组织中分别检测miR-506-3p及UHRF1的表达水平并分析其相关性;运用荧光素酶报告基因技术检测miR-506-3p与UHRF1 3'非翻译区(3'UTR)特异性结合的情况;荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测大肠癌细胞转染miR-506-3p类似物(mimics)后对UHRF1表达水平的影响;构建UHRF1过表达的大肠癌稳转细胞株,分别转染miR-506-3p mimics及其对照序列(mimics control)后,利用Transwell实验检测处理前后大肠癌细胞转移能力的变化.结果 相对于正常大肠上皮细胞及癌旁组织而言,miR-506-3p在大肠癌细胞及组织中的表达均下调(均P＜0.05),且与UHRF1的表达水平呈负相关(r=-0.456,P=0.044);miR-506-3p通过其“种子序列”与UHRF1 3'UTR特异性结合(P＜0.01),并减少了UHRF1的mRNA及蛋白表达(均P＜0.01);转染miR-506-3p mimics抑制了大肠癌LoVo细胞的转移能力(P＜0.01),而在此基础上增加UHRF1的表达则逆转了miR-506-3p的抑制作用(P＜0.01).结论 miR-506-3p通过调控UHRF1抑制了大肠癌细胞的转移能力,在大肠癌中发挥抑癌基因的作用.

目的 通过网络数据分析PEG3基因在肺腺癌中的表达及预后意义.方法经TCGA数据库分析PEG3 mRNA在肺腺癌组织中的表达情况.利用LinkedOmics和KM-Plotter分析PEG3表达与肺腺癌临床病理特征的相关性及对患者生存的影响,进一步分析肺腺癌中PEG3启动子的甲基化水平,并预测与PEG3相关的微小RNA(miRNA).结果PEG3 mRNA在肺腺癌中较正常肺组织显著低表达,PEG3的表达与肿瘤T分期相关(P=0.003,n=512),与PEG3低表达的肺腺癌患者相比,PEG3高表达的肺腺癌患者获得更高的总生存率[HR=0.3(95％CI:0.21～0.43),P<0.001],PEG3基因的启动子甲基化水平在肺腺癌中显著增高.与PEG3相关的miRNA有miR-124-3p.2/506-3p、miR-124-3p.1、miR-9-5p等.结论PEG3在肺腺癌中呈低表达,PEG3表达高的患者预后好,相关甲基化分析及miRNA预测将为今后的基础研究提供理论依据.

目的 探讨miR-183-5p对大肠癌(CRC)细胞增殖、迁移能力的影响及机制.方法 应用miRDB数据库,根据重组人抑制蛋白-2(PFN2)基因序列预测筛选的miR-183-5p;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测CRC组织及细胞系中miR-183-5p和PFN2 mRNA表达并分析其相关性;荧光素酶报告基因技术检测miR-183-5p与PFN23'非翻译区(3'UTR)特异性结合情况;应用qRT-PCR及Western blotting法检测转染miR-183-5p模拟物(mim-ics)后CRC细胞株PFN2表达情况;应用CCK8法及划痕实验检测转染miR-183-5p mimics后CRC细胞系的增殖、迁移能力.结果 与正常大肠上皮细胞系及癌旁组织相比,PFN2在CRC细胞系及癌组织中的表达均下调(P均<0.05),miR-183-5p在CRC细胞系及癌组织中的表达均上调(P均<0.05),且二者表达呈负相关(r=-0.398,P=0.042);miR-183-5p可与PFN23'UTR特异性结合;转染miR-183-5p mimics后,CRC细胞系PFN2 mRNA及蛋白的表达受到抑制,CRC细胞增殖、迁移能力增强(P<0.05).结论 miR-183-5p可促进CRC细胞的增殖、迁移,其机制可能通过靶向下调PFN2表达实现.