目的:探究微小RNA-543(miR-543)通过抑制RNA结合蛋白47(RBM47)对胃癌细胞增殖和转移的影响和机制。方法:荧光实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测40例新鲜胃癌和癌旁组织中miR-543表达；检测正常胃上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株MKN45、NCIN87、AGS中miR-543的表达。分析miR-543表达与临床病理特征之间的关系。生物信息学分析miR-543的生物学功能和靶基因。双荧光素酶报告基因分析miR-543和靶基因RBM47之间调控关系。应用miR-543抑制物(inhibitor)干扰胃癌AGS细胞株中miR-543表达，细胞计数试剂盒(CCK-8)法、划痕实验、Transwell小室实验检测胃癌细胞株AGS增殖、侵袭、迁移能力；RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测AGS中人细胞周期素D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、RBM47、组织抑制剂1(TIMP1)表达。数据应用SPSS 25.0统计软件分析。结果:miR-543在胃癌组织中(2.476±0.812)的表达高于癌旁组织(1.165±0.295， t＝9.880， P<0.01)，在胃癌细胞株中的表达均高于GES-1(1.130±0.141， t＝9.842， P<0.05； t＝13.17， P<0.01； t＝35.07， P<0.01)，miR-543在AGS细胞株中表达量最高(5.120±0.545)。miR-543表达与胃癌患者淋巴结转移有关(阳性例数：27)。富集分析结果显示miR-543与多种生物学过程有关，RBM47基因是miR-543下游靶基因。RBM47基因在胃癌组织中表达(0.663±0.251)低于癌旁正常组织(1.604±0.613， P<0.01)，相关性分析结果显示RBM47基因与miR-543负相关( r＝－0.724)，双荧光素酶报告基因分析miR-543直接抑制RBM47表达。用miR-543 inhibitor转染AGS后，胃癌细胞增殖、侵袭、迁移能力明显下降( P<0.01)；Cyclin D1、MMP-9的mRNA和蛋白表达明显降低( P<0.01)，而RBM47、TIMP1的表达明显增高( P<0.01)。 结论:miR-543可通过抑制RBM47表达促进胃癌细胞的增殖和转移能力。

目的:研究微小RNA-543(microRNA-543,miR-543)在宫颈癌组织中的表达,以及miR-543对宫颈癌细胞转移及侵袭的影响.方法:应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测正常宫颈组织及宫颈癌组织中miR-543的表达水平.沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达后,应用划痕实验检测miR-543对宫颈癌细胞迁移距离的影响,应用Transwell实验检测miR-543对宫颈癌细胞转移和侵袭的影响.结果:miR-543在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织.沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达,宫颈癌细胞的迁移距离显著缩短、细胞转移及侵袭能力受到明显抑制.结论:miR-543在宫颈癌组织中表达升高,并可促进宫颈癌细胞转移与侵袭.

目的:探讨微小RNA-543(microRNA-543,miRNA-5431/miR-543)对大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞的可能作用及潜在机制.方法:采用膝关节内侧副韧带切断法建立大鼠OA模型,real-time PCR法检测OA模型大鼠软骨组织与正常大鼠软骨组织miR-543的表达差异.体外分离正常膝关节软骨细胞,IL-1β(10 ng/L)共培养24 h模拟体外OA状态,以miR-543 mimics转染软骨细胞,采用M T T、real-time PCR及Western印迹法观察miR-543过表达对IL-1β诱导下软骨细胞增殖及凋亡相关鼠双微体基因4(murine double minute 4,MDM4)、蛋白激酶B1(protein kinase B1,PKB1/Akt1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)和炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6)表达的影响.结果:OA模型大鼠软骨组织较正常大鼠软骨组织 miR-543表达明显下调(P<0.05).与正常软骨细胞相比,IL-1β诱导后软骨细胞存活率降低(P<0.05),MDM4表达上调,Akt1、Bcl-2表达下调(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6释放增加(P<0.05);转染miR-543 mimics后,IL-1β诱导的软骨细胞存活率明显升高(P<0.05),MDM4表达下调,Akt1、Bcl-2表达上调(P<0.05),炎症相关因子TNF-α、IL-6 mRNA表达降低(P<0.05).结论:OA大鼠软骨组织miR-543表达较正常软骨组织明显降低;上调miR-543表达体外可促进软骨细胞增殖,拮抗IL-1β诱导的软骨细胞损伤,可能与其下调MDM4表达、上调Akt1、Bcl-2表达,减少炎症因子(TNF-α、IL-6)有关.

目的 探讨miR-543在胶质瘤SHG-44细胞侵袭、迁移中的作用、分子靶点及可能的作用机制.方法 采用miR-543 mimic、inhibitor及各自NC序列转染胶质瘤SHG-44细胞,获得5组细胞,分别分为Control组(无转染)、mimic NC组(转染mimic NC片段)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC片段)、miR-543 mimic组(转染miR-543 mimic)、miR-543 inhibitor组(转染miR-543 inhibitor);Real-time PCR检测各组转染后miR-543表达水平;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;明胶酶谱实验检测细胞上清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性;Real-time PCR及Western blot检测细胞中微小RNA 543(miR-543)潜在作用靶点局部黏着斑激酶(FAK)、上皮间质转化调控蛋白(TWIST1)、多囊肾病蛋白2(PKD2)mRNA及蛋白水平的表达;Western blot检测细胞中蛋白激酶B(AKT)通路活化情况.结果 与Control组相比,mimic NC组及inhibitor NC组细胞的侵袭及迁移能力、FAK、TWIST1、PKD2、MMP-2、MMP-9表达及AKT的磷酸化水平差异均无统计学意义(P均>0.05);与mimic NC组相比,miR-543 mimic组能够有效抑制SHG-44细胞的迁移及侵袭能力,抑制MMP-2、MMP-9活性,抑制FAK、TWIST1、PKD2分子和蛋白水平的表达,抑制AKT的磷酸化(P均<0.01);与inhibitor NC组相比,miR-543 inhibitor组细胞迁移能力增强,侵袭能力升高,MMP-2、MMP-9活性增强,FAK、TWIST1、PKD2表达上调,AKT通路磷酸化水平升高(P均<0.05).结论 miR-543可能通过对下游靶基因的调节影响AKT通路活化,进而影响胶质瘤SHG-44细胞的迁移及侵袭.

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中微小RNA-423-3p(miR-423-3p)的拷贝数变异( CNV)和rs6505162位点单核苷酸多态性( SNP).方法 采用cBioPortal在线分析癌症基因组图谱TCGA数据库中NSCLC组织 miR-423-3p的CNV表现及与临床病理特征的关系;收集本院2017年1月至2018年12月经病理确诊的146例NSCLC患者( NSCLC组)和151例健康体检者(对照组)的外周血标本,采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性( PCR-RFLP)检测rs6505162位点SNP的基因分型并进行Hardy-Weinberg平衡检验,分析rs6505162等位基因A在不同遗传模型[等位基因模型(A vs. C)、纯合子模型(AA vs. CC)、杂合子模型(CA vs. CC)、显性遗传模型( CA+AA vs. CC)和隐性遗传模型( AA vs. CC+CA)]下与NSCLC易感性的关系.结果 经cBioPortal在线分析发现1144例组织的miR-423-3p CNV表现:缺失209例(Deep Deletion 1例+Shal-low Deletion 208例)、正常(Diploid)543例和扩增392例(Gain 384例+Amplification 8例). NSCLC组织中CNV分布与病理类型、性别和N分期有关(P＜0. 05),而与TNM分期、T分期、M分期和生存状况无关( P＞0. 05).两组rs6505162基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡. NSCLC 组携带基因型 CA、 AA 的频率高于对照组( 56. 16%、17. 81% vs. 49. 67%、11. 26%, P＜0. 05),携带等位基因A的频率高于对照组(45. 89% vs. 36. 09%,P＜0. 05). rs6505162位点的等位基因A在隐性遗传模型下与NSCLC的易感性无关(P＞0. 05),而在等位基因模型(OR＝1. 502, 95%CI: 1. 081～2. 087)、纯合子模型( OR＝2. 375, 95%CI: 1. 139～4. 952)、杂合子模型(OR＝1. 698, 95%CI: 1. 015～2. 839)和显性遗传模型( OR＝1. 823, 95%CI: 1. 113～2. 986)下可升高NSCLC的发病风险.结论 miR-423-3p CNV可能参与了NSCLC的发生发展且其rs6505162与NSCLC易感性有关,其中携带突变等位基因A的NSCLC发生风险升高,在肺癌易感人群筛查中有一定价值.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-502-5p对结肠癌细胞DLD-1功能的影响.方法 选取结肠癌细胞DLD-1分别转染miR-502-5p mimic(5 μl)、control mimic(5μl)、miR-502-5p inhibitor (10μl)与control inhibitor(10μl).实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-502-5p的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞的增殖能力;平板克隆实验检测细胞集落形成能力;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力.结果 转染miR-502-5p mimic与NC mimic后,DLD-1细胞中miR-502-5p的相对表达量分别为319.31±33.16和1.08±0.22,DLD-1细胞中miR-502-5p提高显著(P＜0.05);转染miR-502-5p inhibitor与NC inhibitor后DLD-1细胞中miR-502-5p的相对表达量分别为0.28 ±0.04和0.99 ±0.11,DLD-1细胞中miR-502-5p显著降低(P＜0.05);转染miR-502-5p mimic后DLD-1细胞的增殖能力:miR-502-5p mimic实验组[(125±9)个]与controlmimic组[(112±14)个]之间差异无统计学意义(P＞0.05),而迁移[(621±90)个比(174±32)个]与侵袭[(531±45)个比(132 ±34)个]能力显著提高(P＜0.05);转染miR-502-5p inhibitor后DLD-1细胞的增殖能力:miR-502-5p inhibitor实验组[(118±22)个]与control inhibitor组[(100±15)个]之间差异无统计学意义(P＞0.05),而迁移[(133±50)个比(543±84)个]与侵袭[(119±45)个比(458 ±57)个]能力显著降低(P＜0.05).结论 miR-502-5p可促进DLD-1细胞的迁移与侵袭能力,但是不影响增殖功能.

目的 通过生物信息学方法分析重型颅脑损伤(sTBI)病人外周血微小RNA(miRNA)的靶基因及功能.方法 从GEO数据库中检索获取sTBI病人和对照组外周血的基因芯片数据,应用生物信息学方法筛选差异表达的miRNA,并进行靶基因预测和生物学功能及信号通路分析,构建miRNA及靶基因的调控网络.结果 检索得到芯片GSE21854,筛选得到145个差异表达的miRNA,预测得到靶基因共580个.这些靶基因的功能主要为细胞增殖负性调控、转换生长因子β 受体信号通路负性调控等,主要分布在Ras信号通路、转换生长因子β 信号通路等.miRNA及靶基因的调控网络图显示hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-760、hsa-miR-217、hsa-miR-199a-3D、hsa-miR-543是调控核心.结论 sTBI病人外周血存在差异性表达的miRNA,hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-760、hsa-miR-217、hsa-miR-199a-3p、hsa-miR-543与sTBI的进展密切相关.

目的 筛选子宫内膜样腺癌(EEC)组织中差异表达的miRNA,并分析其与患者预后高危因素的关系.方法 收集手术治疗的79例EEC患者的临床病理资料,获得冰冻EEC组织和邻近正常子宫内膜组织.使用IllumiR?NA HiSeq 2000芯片筛选3对样品中差异表达的miRNA分子,利用qRT-PCR在17对样品中验证芯片筛选的异常变化的miRNA表达,并且在59对样品中进一步检测变化最为明显的miRNA的相对表达量.根据手术病理分期、组织分化程度、淋巴结转移和脉管间隙浸润等临床病理参数,进一步分析变化最为明显的miRNA表达水平与EEC患者预后的关系.结果 芯片结果提示,3对冰冻EEC组织和邻近正常子宫内膜组织存在40个显著差异表达的miR?NA,8个具有代表性(5个下调的miRNA分别为hsa-miR-369-3p、hsa-miR-136-3p、hsa-miR-451a、hsa-miR-493-5p和hsa-miR-543,3个上调的miRNA分别为hsa-miR-10b-5p、hsa-miR-143-3p和hsa-miR-145-5p).qRT-PCR验证结果显示,与邻近正常子宫内膜组织相比,EEC组织中hsa-miR-10b-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-145-5p的表达差异倍数分别为6.50±0.09、2.70±0.16、5.60±0.22,hsa-miR-369-3p、hsa-miR-136-3p、hsa-miR-451a、hsa-miR-493-5p、hsa-miR-543表达差异倍数分别为0.133±0.012、0.268±0.020、0.372±0.009、0.179±0.011、0.222±0.014,验证结果和芯片结果趋势一致,hsa-miR-369-3p下调最为明显.59对冰冻EEC组织和邻近正常子宫内膜组织中hsa-miR-369-3p的相对表达量分别为0.233±0.175、1,两者比较P<0.05.EEC组织中hsa-miR-369-3p的表达与患者不同手术病理分期、组织分化程度、有无淋巴结转移和脉管间隙浸润有关(P均<0.05).结论 利用芯片技术及qRT-PCR技术筛选出了EEC中差异表达的miRNA;hsa-miR-369-3p的表达与EEC患者预后高危因素有关,可能成为EEC患者预后评价的指标.

目的 探讨微小RNA对高血压相关性脑出血(HRICH)患者脑血管组织的影响.方法 回顾性连续纳入2018年9月至2019年12月四川绵阳四〇四医院神经外科自发性高血压脑出血住院患者9例为观察组,回顾性连续纳入同期四川绵阳四〇四医院神经外科因颅脑外伤需行颅内减压术且伴高血压病史的住院患者9例为对照组.术中取两组患者术区皮质造瘘口的少量脑血管标本,通过Trizol法提取标本总RNA,筛选差异表达的微小RNA.从微小RNA差异表达谱中随机选择3种微小RNA,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)技术验证结果的可靠性.采用TargetScan、miRDB、miRanda三种在线分析工具预测差异表达微小RNA的靶基因,并对靶基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,富集程度越高,相应的P值越小.结果 (1)与对照组标本比较,观察组患者脑血管组织细胞中有35种差异表达的微小RNA,其中15种微小RNA表达下调,即hsa-let-7g-3p、hsa-miR-103a-2-5p、hsa-miR-126-5p、hsa-miR-130a-3p、hsa-miR-210-3p、hsa-miR-214-3p、hsa-miR-28-5p、hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-4785、hsa-miR-549a-5p、hsa-miR-574-3p、hsa-miR-590-3p、hsa-miR-660-3pg表达降低(均P<0.05);20种微小RNA表达上调,即hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-1224-3p、hsa-miR-128-2-5p、hsa-miR-1298-3p、hsa-miR-137-5p、hsa-miR-139-3p、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-2682-5p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-433-3p、hsa-miR-485-5p、hsa-miR-541-3p、hsa-miR-543、hsa-miR-598-5p、hsa-miR-6505-5p、hsa-miR-668-3p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR-744-5p、hsa-miR-873-3p、hsa-miR-942-3p表达升高(均P<0.05).(2)对已知的差异表达微小RNA采用TargetScan、miRDB、miRanda三种在线分析工具进行基因预测,结果显示,共同交集预测得到的靶基因有87个交集.(3)随机抽取3种差异表达的微小RNA进行荧光定量逆转录PCR验证,结果显示,与对照组(颅脑外伤伴高血压病史者)比较,观察组(自发性高血压脑出血者)hsa-miR-145-5p、hsa-miR-28-5p表达降低(0.22±0.17比1.00±0.29,t=0.153;0.13±0.03比1.00±0.62,t=0.421),hsa-miR-139-3p表达升高(1.95±0.29比1.00±0.52,t=0.492),组间差异均有统计学意义(均P<0.05).(4)交集靶基因的KEGG富集分析结果显示,主要涉及Ras相关蛋白1信号通路、黏附斑激酶、肿瘤微小RNA、环磷酸鸟苷-环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、人乳头状瘤病毒、肿瘤蛋白聚糖、肿瘤通道蛋白,其中MAPK信号通路的富集程度较高(P<0.01).结论 微小RNA可能在调控HRICH的相关生物学功能中具有重要作用.

目的 探讨帕金森病(PD)病人血清微小RNA-543-3p(miR-543-3p)、微小RNA-124(miR-124)表达水平与胰岛素样生长因子1(IGF-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)水平的相关性.方法 收集2017年5月—2018年5月本院收治的PD病人80例为PD组,根据Hoehn-Yahr分级标准将PD病人分为1期16例,2期24例,3期13例,4期15例,5期12例,根据帕金森评定量表(UPDRS)评分将PD病人分为轻度27例,中度31例,重度22例,通过蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估认知功能并将病人分为轻度认知功能障碍(PD-MCI)33例与无认知功能障碍(PD-NCI)47例,同时选取50名健康体检者为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-543-3p、miR-124的表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IGF-1、BDNF、NGF水平;采用Pearson法分析PD病人血清miR-543-3p、miR-124与IGF-1、BDNF、NGF水平的相关性.结果 与对照组比较,PD组血清miR-543-3p表达水平明显升高(P<0.05),miR-124表达水平明显降低(P<0.05);与1期、2期比较,3期、4期、5期PD病人血清miR-543-3p的表达水平明显升高(P<0.05),miR-124表达水平明显降低(P<0.05);与轻度组比较,中度组、重度组病人血清miR-543-3p的表达水平明显升高(P<0.05),miR-124表达水平明显降低(P<0.05);与对照组比较,PD组血清IGF-1、BDNF、NGF水平明显降低(P<0.05);miR-543-3p与IGF-1、BDNF、NGF呈负相关(P<0.05),miR-124与IGF-1、BDNF、NGF呈正相关(P<0.05);与PD-NCI组比较,PD-MCI组血清miR-543-3p表达水平明显升高(P<0.05),miR-124表达水平明显降低(P<0.05).结论 PD病人血清miR-543-3p表达上调、miR-124表达下调,二者均与IGF-1、BDNF、NGF水平密切相关.