目的:通过生物信息学分析探究儿童神经母细胞瘤中与MYCN(N-myc)基因相关的共表达基因。方法:下载TARGET数据库神经母细胞瘤表达数据共179例，WGCNA分析筛选MYCN扩增共表达基因模块；针对目标基因模块个基因行GO、KEGG富集分析筛选MYCN扩增相关基因可能参与生物过程及信号通路；以MYCN扩增状态将神经母细胞瘤表达数据分为扩增组65例、非扩增组114例，行差异表达基因分析；筛选的差异表达基因同MYCN扩增相关基因取交集后运用K-M法行生存分析(log-rank检验)，筛选预后相关基因，Logistics回归探究MYCN扩增状态同预后基因的关系。结果:WGCNA分析提示MEgreenyellow模块同MYCN基因扩增状态相关性最强( R＝0.46， P<0.05)，为共表达基因，包含基因1 216个，富集分析提示MYCN扩增共表达基因多参与RNA相关通路(RNA的转运、剪切、修饰，RNA相关酶的活性等过程)；差异表达基因分析显示，MYCN扩增组相较于非扩增组，基因表达上调47个，表达下调123个；WGCNA分析同差异表达基因取交集筛选出22个关键基因，行生存分析显示同预后相关的基因( P<0.05)有12个，其中DDX1与其他关键基因相关性相对较弱，或为神经母细胞瘤独立预后因素。 结论:LINC00839、ATP结合盒亚家族C4(ABCC4)、亚甲基四氢叶酸脱氢酶(NADP +依赖)2(MTHFD2)、磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)、序列相似性家族13 A(FAM11A)、磷酸丝氨酸转氨酶1 (PSAT1)、假尿苷酸合酶7(PUS7)、DEAD-box解旋酶1(DDX1)、溶质载体有机阴离子转运蛋白家族5A1(SLCO5A1)、Junctophilin 1(JPH1)、溶质载体家族16 1(SLC16A1)、MYCN Opposite Strand(MYCNOS)为神经母细胞瘤中MYCN扩增的共表达基因，与较差的预后相关，是神经母细胞瘤潜在的治疗靶点及预后指标。

目的:探究微小RNA-543(miR-543)通过抑制RNA结合蛋白47(RBM47)对胃癌细胞增殖和转移的影响和机制。方法:荧光实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测40例新鲜胃癌和癌旁组织中miR-543表达；检测正常胃上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株MKN45、NCIN87、AGS中miR-543的表达。分析miR-543表达与临床病理特征之间的关系。生物信息学分析miR-543的生物学功能和靶基因。双荧光素酶报告基因分析miR-543和靶基因RBM47之间调控关系。应用miR-543抑制物(inhibitor)干扰胃癌AGS细胞株中miR-543表达，细胞计数试剂盒(CCK-8)法、划痕实验、Transwell小室实验检测胃癌细胞株AGS增殖、侵袭、迁移能力；RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测AGS中人细胞周期素D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、RBM47、组织抑制剂1(TIMP1)表达。数据应用SPSS 25.0统计软件分析。结果:miR-543在胃癌组织中(2.476±0.812)的表达高于癌旁组织(1.165±0.295， t＝9.880， P<0.01)，在胃癌细胞株中的表达均高于GES-1(1.130±0.141， t＝9.842， P<0.05； t＝13.17， P<0.01； t＝35.07， P<0.01)，miR-543在AGS细胞株中表达量最高(5.120±0.545)。miR-543表达与胃癌患者淋巴结转移有关(阳性例数：27)。富集分析结果显示miR-543与多种生物学过程有关，RBM47基因是miR-543下游靶基因。RBM47基因在胃癌组织中表达(0.663±0.251)低于癌旁正常组织(1.604±0.613， P<0.01)，相关性分析结果显示RBM47基因与miR-543负相关( r＝－0.724)，双荧光素酶报告基因分析miR-543直接抑制RBM47表达。用miR-543 inhibitor转染AGS后，胃癌细胞增殖、侵袭、迁移能力明显下降( P<0.01)；Cyclin D1、MMP-9的mRNA和蛋白表达明显降低( P<0.01)，而RBM47、TIMP1的表达明显增高( P<0.01)。 结论:miR-543可通过抑制RBM47表达促进胃癌细胞的增殖和转移能力。

目的:采用RNA干扰技术下调DJ-1基因在肺鳞癌细胞HTB-182中的表达，采用串联亲和纯化质谱(TAP-MS)技术寻找DJ-1在HTB-182细胞系中的相互作用蛋白。方法:构建靶向DJ-1基因siRNA慢病毒载体，感染HTB-182细胞(DJ-1 siRNA组)，并设立慢病毒载体对照组(Control siRNA组)及空白对照组，采用Western blot法检测DJ-1蛋白表达水平，建立内源性的DJ-1蛋白表达沉默的si-DJ-1-HTB-182细胞。设计DJ-1的特异性引物，构建带有链霉素结合肽标签(SBP)、钙调蛋白结合肽标签(CBP)的DJ-1表达质粒pNTAP-DJ-1，用脂质体稳定转染细胞系DJ-1 siRNA HTB-182，G418筛选阳性克隆，Western blot进行验证，TAP-MS技术寻找DJ-1的相互作用蛋白。结果:DJ-1 siRNA干扰组中DJ-1的蛋白质表达明显低于空质粒(NC)组和空白对照(BC)组( P<0.05)；成功构建了稳定表达pNTAP-DJ-1质粒的HTB-182细胞系；TAP-MS筛选到DJ-1相互作用的三个蛋白质：细胞角蛋白1(Keratin 1)、细胞角蛋白10(Keratin 10)和NADPH氧化酶活化蛋白P47(P47 Px)。 结论:Keratin 1、Keratin 10和P47 Px可能是DJ-1蛋白的相互作用蛋白。

目的:探讨微小 RNA（microRNA，miRNA）在子宫内膜异位症（endometriosis，EMS）患者异位内膜组织中的表达特征。方法:收集2018年4月至2019年10月期间于厦门大学附属第一医院妇产科就诊EMS 患者异位内膜组织和对照组在位内膜组织开展实验。利用Illumina平台的miRNA测序检测内膜组织中 miRNA的表达情况。通过生物信息学分析差异表达的miRNAs及其潜在靶基因在EMS发生、发展中的作用。结合文献挑选6个具有显著差异的miRNAs（miR-98-5p、let-7c-5p、miR-495-3p、miR-200b-3p、miR-200c-3p、miR-148b-3p），应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）进行验证，并在构建miRNA-基因调控网络后初步验证其潜在靶基因。结果:测序结果显示，相比对照组，EMS患者异位内膜组织中有69个miRNAs出现差异表达（差异倍数>1.5， P<0.05），其中表达上调22个，表达下调47个。基因本体分析显示，差异表达的miRNAs所调控的靶基因在生物学过程中集中在与蛋白质修饰、发育调控、细胞代谢和形态结构等相关。KEGG pathway分析显示，靶基因富集于蛋白质功能、自噬、AGE-RAGE及MAPK信号通路中。qRT-PCR结果显示miR-98-5p、let-7c-5p、miR-200b-3p、miR-200c-3p的表达情况与测序结果一致。miRNA-基因共表达网络显示 miRNAs与所预测的靶基因间的相互关系。miRNAs潜在靶基因的qRT-PCR验证结果显示，miR-200b-3p、miR-200c-3p与 ZEB2呈负相关，miR-98-5p与 PGRMC1呈负相关，miR-98-5p、let-7c-5p与 ADIPOR2呈正相关。 结论:miR-98-5p、let-7c-5p、miR-200b-3p和miR-200c-3p在EMS患者异位内膜组织中存在显著差异表达，可能参与EMS的发生、发展。

目的:观察RNA结合蛋白6(RBM6)对喉癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:收集2016年6月到2018年8月驻马店市中心医院喉癌组织和癌旁组织47例，采用蛋白质印迹法(Western blot)分析RBM6蛋白的表达水平。构建RBM6过表达慢病毒载体，包装慢病毒，感染Hep-2细胞，构建RBM6过表达细胞株和对照组细胞株(RBM6组和对照组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖；采用划痕实验分析两组细胞的迁移；采用流式细胞术分析两组细胞增殖；采用异体移植瘤实验分析肿瘤细胞在体内的生长。应用SPSS 13.0统计软件分析，计量数据采用均值±标准差( Mean± SD)表示，组间比较采用 t检验。 结果:与癌旁组织RBM6蛋白水平(1.01±0.23)比较，喉癌组织中RBM6蛋白表达水平(0.34±0.12)显著下调，差异有统计学意义( t＝2.913， P<0.05)。与对照组细胞比较，RBM6组细胞增殖能力显著下降，差异有统计学意义( F＝3.019， P<0.05)。与对照组细胞划痕愈合率[(84.18±8.32)%]比较，RBM6组细胞愈合率[(30.11±6.89)%]显著下降，差异有统计学意义( t＝4.319， P<0.05)。与对照组细胞凋亡水平[(35.61±7.01)%]比较，RBM6组细胞凋亡水平[(5.23±2.12)%]显著增加，差异有统计学意义( t＝2.192， P<0.05)。体内增殖实验结果显示，对照组细胞在裸鼠体内增殖速度明显高于RBM6组细胞，差异有统计学意义( F＝2.908， P<0.05)。 结论:RBM6抑制喉癌细胞的增殖和迁移，促进肿瘤细胞凋亡。

目的:观察微小RNA(miR)-5787在乳腺癌组织及多种乳腺癌细胞系中的表达，分析过表达miR-5787对乳腺癌细胞侵袭和增殖的影响并探讨其可能的作用机制。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-5787在47例乳腺癌组织及癌旁组织、4种乳腺癌细胞系及正常乳腺上皮细胞中的表达。选择miR-5787表达最低的乳腺癌细胞系，分别转染miR-5787模拟物(实验组)和对照NC模拟物(对照组)。qRT-PCR检测两组细胞中miR-5787的表达。Transwell侵袭实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)分别检测过表达miR-5787对乳腺癌细胞侵袭和增殖的影响。生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-5787可配对结合的靶基因。qRT-PCR和Western blot检测靶基因mRNA及蛋白的表达。结果:与癌旁组织(5.05±0.82)相比，乳腺癌组织miR-5787的表达(1.32±0.33)明显降低( P<0.01)。与正常乳腺上皮细胞相比，4种乳腺癌细胞系miR-5787的表达均降低( P<0.05)，HCC1937细胞中的表达最低( P<0.01)。转染miR-5787模拟物后，实验组HCC1937细胞中miR-5787的表达明显高于对照组( P<0.01)，表明转染成功。过表达miR-5787可抑制乳腺癌HCC1937细胞的侵袭( P<0.05)和增殖( P<0.05)。生物信息学软件预测miR-5787的靶基因可能是硫酸乙酰肝素糖蛋白2(HSPG2)，miR-5787可配对结合HSPG2 mRNA( P<0.01)。qRT-PCR和Western blot结果显示，过表达miR-5787可明显抑制HSPG2蛋白和mRNA的表达( P<0.01)，波形蛋白(Vimentin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)表达明显降低( P<0.05)。 结论:乳腺癌组织和细胞系中miR-5787均呈低表达，过表达miR-5787通过靶向干扰HSPG2基因的表达，抑制乳腺癌HCC1937细胞的侵袭和增殖。

目的 探究脂蛋白1(lipin1,LPIN1)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型大鼠病情进展的影响及其调控的可能分子机制.方法 采用6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine hydrobromide,6-OHDA)注射大鼠单侧的内侧前脑束构建PD大鼠模型,并稳定转染LPIN1过表达腺病毒,评估大鼠行为学变化;检测大鼠脑组织中Fe2+和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量及酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白水平;HE染色观察大鼠脑组织病理变化.构建体外PD细胞模型,检测细胞中TH,α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn),LPIN1蛋白水平及细胞活力;转染LPIN1小干扰siRNA序列和过表达载体及过氧化物酶增殖物激活受体A(peroxisome proliferator-activated receptor A,PPARA)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和过表达载体,或用铁死亡诱导剂Erastin处理细胞24 h,后用6-OHDA 处理细胞 48 h.检测各组细胞中 Fe2+含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、GSH和炎症因子水平以评估铁死亡;CCK-8检测细胞增殖活力,Western blot法检测铁死亡相关蛋白表达.通过STRING数据库预测LPIN1的互作蛋白PPARA,利用Co-IP分析进行验证;JASPAR生物信息学网站预测PPARA与溶质载体蛋白家族47成员A1(solute carrier family 47 member 1,SLC47A1)启动子的结合位点,利用Ch-IP分析进行验证.结果 模型组大鼠皮毛悚立,表现出身体持续震颤、动作迟缓、活动能力减弱等PD症状;LPIN1组大鼠运动行为及PD症状较模型组改善/减轻.与假手术组相比,模型组大鼠运动总路程缩短、平均速度降低、步长减小、总静止时间延长、步宽增宽、步态变异率增大,差异具有统计学意义(t=6.816,7.026,26.556,7.454,8.503,7.971,均P＜0.05);模型组大鼠脑组织中Fe2+含量升高,GSH含量及TH蛋白表达降低,差异具有统计学意义(t=8.305,13.305,7.709,均P＜0.05).LPIN1组大鼠行为学评估、各指标水平及脑组织病理改变较模型组明显改善/减轻.6-OHDA呈剂量依赖性降低PC-12细胞活力及TH,LPIN1蛋白水平,升高α-syn蛋白水平,差异具有统计学意义(F=31.023,7.350,9.124,15.841,均 P＜0.05).沉默 LPIN1 加剧了 6-OHDA 对 PC-12 细胞活力的抑制作用(t=2.209,P＜0.05),过表达LPIN1 则可抵消 6-OHDA 的作用(t=4.989,P＜0.05).过表达 LPIN1 降低 IL-1β,IL-6 分泌,升高 SLC47A1 和 GPX4蛋白水平,降低Fe2+,MDA含量和ROS水平,升高GSH含量(t=3.013～11.639,均P＜0.05);Erastin可逆转LPIN1过表达对铁死亡的抑制作用,降低PC-12细胞活力(t=3.087～7.581,均P＜0.05).LPIN1与PPARA蛋白互作并促进PPARA表达,PPARA与SLC47A1启动子结合并促进SLC47A1转录激活.过表达PPARA可抵消LPIN1沉默对PC-12细胞的影响.结论 过表达LPIN1可能通过抑制PPARA/SLC47A1轴介导的铁死亡,减少神经元细胞凋亡,进而缓解PD模型大鼠的病情进展.

目的 本研究旨在探究长链非编码 RNA(lncRNA)ADAMTS9 反义 RNA 2(ADAMTS9-AS2)靶向调控微小RNA-1290(miR-1290)和囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的表达及对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 ADAMTS9-AS2 在乳腺癌组织和细胞系(MCF-7、MDA-MB-453、T47D、MDA-MB-468、MDA-MB-231 和 SK-BR-3)中的表达情况.培养 MDA-MB-231 细胞,分为:对照组(空白)、pcDNA组(阴性对照)和 ADAMTS9-AS2 过表达组.MTT法、划痕实验和 Transwell 实验分别检测 MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移和侵袭.双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR 和 Western blot 验证 ADAMTS9-AS2 和 miR-1290 靶向关系.结果 ADAMTS9-AS2 在乳腺癌组织(0.444±0.045)中的相对表达水平低于癌旁组织(1.000±0.062)(P＜0.01).与癌旁正常乳腺组织相比(1.000±0.092),miR-1290 在乳腺癌组织中相对表达水平更高(1.504±0.104)(P＜0.01).AD-AMTS9-AS2 在乳腺癌细胞 MCF-7、MDA-MB-453、T47D、MDA-MB-468、MDA-MB-231 和 SK-BR-3 相对表达量低于正常乳腺上皮细胞(MCF-10A),miR-1290 在乳腺癌细胞 MCF-7、MDA-MB-453、T47D、MDA-MB-468、MDA-MB-231 和SK-BR-3 中相对表达量高于 MCF-10A细胞,其中 MDA-MB-231 的 ADAMTS9-AS2 相对表达量最低,miR-1290 相对表达量最高.ADAMTS9-AS2 过表达组MDA-MB-231 细胞增殖(48h和 72h)、迁移(12h和 24h)和侵袭(24h)能力均低于对照组和 pcDNA组,CFTR的mRNA和蛋白表达水平均高于对照组和 pcDNA组(均P＜0.05).ADAMTS9-AS2 可靶向结合miR-1290.结论 ADAMTS9-AS2 可能调控 miR-1290 和 CFTR 表达,抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,提示ADAMTS9-AS2 可能是三阴性乳腺癌治疗的潜在靶点.

背景:骨骼肌再生能力较低,一旦缺损后治疗手段有限,是困扰整形科和骨科医师的难题.脂肪干细胞来源充足,获取简便,产量高,增殖能力强,能旁分泌各种细胞因子,在特定条件下可分化为骨骼肌成肌细胞.基于脂肪干细胞的细胞疗法和肌肉组织工程为骨骼肌损伤的修复提供了新的思路.目的:总结脂肪干细胞向骨骼肌成肌细胞分化的过程,分析影响脂肪干细胞成肌分化的因素和机制,讨论脂肪干细胞的肿瘤安全性及限制其临床应用的主要瓶颈.方法:于2017年6月10日在PubMed中以"((myogenic[Title]) OR myogenesis[Title]) AND adipose stem cell[MeSH Terms]"作为检索式检索,在SinoMed中以"((("脂肪"[标题:智能]) AND"干细胞"[标题:智能]) AND "肌"[标题:智能]) AND "分化"[标题:智能]"作为检索式检索.在所有检索文献中,纳入脂肪干细胞向骨骼肌分化或修复骨骼肌损伤的相关文献,并从其参考文献中再次筛选,排除重复文献.结果与结论:PubMed中符合条件的文献47篇,其中近5年文献26篇.SinoMed中符合条件的文献47篇,其中脂肪干细胞向心肌细胞分化34篇,向平滑肌分化6篇,剩余文章7篇.最终纳入中英文文献共50篇.脂肪干细胞在定向诱导下向骨骼肌成肌细胞分化是多种基因、蛋白和信号通路交互作用的复杂过程.除传统的化学诱导外,利用条件培养基或与肌细胞共培养也可促进脂肪干细胞向骨骼肌成肌细胞分化.化学元素、生物力学因素、成肌调节因子、生长因子、microRNA 及某些长链非编码 RNA 均可以影响脂肪干细胞的成肌分化.脂肪干细胞可通过直接分化为骨骼肌细胞或旁分泌各种细胞因子,调控炎症反应,抑制细胞凋亡,保护受损骨骼肌细胞,促进血管形成,招募内源性干细胞,促进骨骼肌功能和形态的修复.综合利用各种细胞因子和生长因子,结合三维支架,促进脂肪干细胞的增殖和成肌分化,构建组织工程肌肉是未来的研究方向.

目的:探讨2型糖尿病前期患者循环血清中微小RNA(miR)-103b的表达变化与临床意义,并分析其靶基因生物信息学功能.方法:收集糖尿病前期患者(n=48)、糖尿病无并发症患者(n=47)及正常健康人群(n=50)的血清标本,用real-time PCR检测各血清样本中miR-103b的表达水平,并比较3组miR-103b表达水平的差异与临床病理特征之间的相关性,运用受试者工作特征(ROC)曲线评估诊断效率及特异性.利用生物信息学技术,对hsa-miR-103b的特征、进化保守性、靶基因功能以及GO信号通路等进行深入分析.结果:Real-time PCR结果显示,与健康人群相比,循环血清中miR-103b在糖尿病前期及糖尿病无并发症患者的表达显著降低(P<0.05).ROC曲线分析结果显示,糖尿病前期患者血清中miR-103b的ROC曲线下面积(AUC)达到0.877,提示miR-103b是糖尿病前期具有较高灵敏性和特异性的临床诊断标志物.生物信息学分析结果表明,hsa-miR-103b定位于人染色体5q34,并在10个物种间具有高度的保守性.靶基因预测共获得53个潜在的功能性靶向基因.进一步应用DAVID数据库和GO数据库进行靶基因功能富集分类,结果显示miR-103b靶基因功能主要涉及蛋白质氨基酸的磷酸化、RNA聚合酶II启动子转录调控和DNA依赖的转录调节,参与细胞周期、细胞生长增殖和细胞凋亡,调节功能蛋白结合并与PIP3结合激活下游信号通路.这些功能因子主要富集于MAPK、Wnt、胰岛素和Ras等信号通路,少量因子参与调节细胞周期和脂肪酸代谢等生理过程.结论:2型糖尿病前期患者血清中低水平miR-103b可能是潜在的2型糖尿病早期超前诊断标志物和治疗靶点.