目的:检测初治多发性大动脉炎（TAK）患者血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，分析其在TAK发病机制中的可能作用。方法:选2020年6月至11月北京协和医院风湿免疫科确诊的初治TAK患者10例，另选与之年龄性别匹配的健康对照者5例，分别通过RNA测序和蛋白质谱技术检测血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，筛选出差异表达的微小RNA和蛋白，并对其进行层次聚类分析、功能、信号通路和结构域富集分析，最终筛选出与血管炎有关的微小RNA和蛋白，探究其在TAK发病机制中的可能作用。统计学采用Fisher精确概率检验或 χ2检验。 结果:TAK患者血浆外泌体携带的差异表达的微小RNA 29个，其中miR-101-3p、miR-122-5p、miR-143-3p、miR-185-3p、miR-192-5p、miR-194-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20b-5p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-335-5p、miR-34a-5p、miR-3613-5p、miR-548ad-5p、miR-590-3p、miR-7-5p表达上调，miR-1249-3p、miR-141-3p、miR-199a-5p、miR-199b-5p、miR-200a-3p、miR-200c-3p、miR-204-5p、miR-29c-5p、miR-335-3p、miR-381-3p、miR-4433b-5p、miR-584-5p表达下调。差异表达的蛋白357个，其中236个表达上调，121个表达下调，最终筛选前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白。结论:血浆外泌体携带的miR-34a-5p、miR-200c-3p、miR-143-3p、miR-22-3p、miR-21-5p、前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白可能通过调节血管生理过程、炎症反应、自身免疫等过程参与TAK的发病机制，具有作为TAK生物标志物和治疗靶点的潜在作用。

目的:构建基于微小RNA(miRNA，miR)表达量的肺腺癌预后列线图风险模型，研究其对肺腺癌患者生存的预测价值。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载获取肺腺癌miRNA表达数据，包括miRNAseq和临床数据。应用R 3.6.2软件中的edgeR包筛选肺腺癌组织和正常肺组织的差异基因，以│logFC│>2， P<0.05为筛选条件。应用单因素回归分析、LASSO回归分析、多因素Cox回归分析筛选与预后明显相关的miRNAs，建立风险评分(risk score)方程，构建列线图模型。应用内部验证法和图像校准法、受试者工作特征曲线(ROC)评价模型的特异性和敏感性。通过风险评分及生存曲线对患者进行生存分析。分析miRNAs在各种族表达差异。 结果:识别127个差异miRNA，下调16个，上调111个。单因素回归分析得到14个与预后相关的miRNAs，LASSO回归分析得到13个与预后相关的miRNAs( P<0.05)。多因素回归分析结果显示hsa-miR-1293、hsa-miR-450a-1、hsa-miR-5571、hsa-miR-3189、hsa-miR-490、hsa-miR-142、hsa-miR-31、hsa-miR-548v是显著的预测因素( P<0.05)。应用这8个miRNA构建列线图模型，Concordance值(0.701)及图像校准显示该列线图预测能力较好。1、3、5年曲线下面积(AUC)为0.721、0.748、0.733。生存分析结果显示高风险组较低风险组生存率低( P<0.05)，随着风险评分数值的升高，死亡人数增多。KM生存曲线显示hsa-miR-1293、hsa-miR-5571、hsa-miR-490、hsa-miR-142、hsa-miR-31、hsa-miR-548v与肺腺癌生存预后相关( P<0.05)。另外这8个miRNAs表达种族差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:成功构建基于miRNAs表达预测肺腺癌预后的列线图模型，其预测准确性较高。

目的 探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中hsa_circ_0013058的作用及其促进ESCC细胞侵袭和迁移的机制.方法 收集75例患者的ESCC组织及癌旁正常组织.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和RNA原位杂交技术(RISH)检测hsa_circ_0013058表达情况,并分析其与ESCC患者临床病理资料的关系.采用划痕实验和Transwell实验检测ESCC细胞侵袭和迁移能力.采用生物信息学方法预测hsa_circ_0013058的靶基因.采用Rescue实验检测hsa_circ_0013058对下游基因的调控及对ESCC细胞侵袭、迁移的影响.结果 qRT-PCR结果显示,ESCC组织中hsa_circ_0013058表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(t=5.078,P＜0.05).ESCC细胞株KYSE70中hsa_circ_0013058表达量高于人正常食管上皮细胞Het-1 A,差异有统计学意义(P＜0.05).在 RNA 水平上,hsa_circ_0013058 与 miR-548p 呈负相关(r=-0.254 2,P＜0.05).ESCC组织中,hsa_circ_0013058 RNA阳性表达率为72.00％,高于癌旁正常组织的17.33％,差异有统计学意义(x2=6.862,P＜0.05).hsa_circ_0013058阳性表达与肿瘤浸润深度、分化程度和淋巴结转移均密切相关(P＜0.05).划痕实验结果表明,过表达hsa_circ_0013058增强KYSE70细胞的迁移能力(P＜0.05);敲低hsa_circ_0013058表达减弱KYSE70细胞的迁移能力(P＜0.05).过表达hsa_circ_0013058后,ESCC细胞侵袭和迁移细胞数目增加,敲低hsa_circ-0013058表达后,侵袭和迁移细胞数目下降(P＜0.05).qRT-PCR实验证实,hsa_circ_0013058可调控微小RNA-548p(miR-548p)表达.双荧光素酶报告基因实验表明,miR-548p与LPAR3为特异性结合,LPAR3是miR-548p的直接靶基因.Rescue实验结果表明,hsa_circ-0013058通过miR-548p/LPAR3信号轴调控ESCC细胞的侵袭、转移.结论 ESCC中,hsa_circ_0013058抑制miR-548p表达,进而激活LPAR3信号通路,促进ESCC细胞的侵袭、迁移..

目的:探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)淋巴结转移(lymph node metastasis,LNM)患者在高碘及正常碘水平下的血清外泌体微小RNA(microRNA,miRNA)差异表达谱,为不同碘水平下PTC LNM的早期鉴别诊断提供参考依据.方法:选取高碘及正常碘PTC LNM+组与PTC LNM-组各5例样本,提取血清外泌体miRNA进行高通量测序,筛选不同碘水平下PTC LNM+组共有的差异表达miRNA.并进行靶基因预测、GO富集分析和KEGG富集分析.结果:高碘和正常碘PTC LNM+组共有的差异表达外泌体 miRNA 有 5 个,其中 hsa-miR-7113-5p、hsa-miR-873-3p、hsa-miR-548q 在不同碘水平下表达情况相反,hsa-miR-616-3p、hsa-miR-5189-5p均表达上调.差异外泌体miRNA调控HIF-1信号通路、神经活性配体-受体的相互作用和GnRH信号通路.结论:血清外泌体hsa-miR-7113-5p、hsa-miR-873-3p、hsa-miR-548q用于筛选PTC LNM时,应区分高碘及正常碘水平;hsa-miR-616-3p、hsa-miR-5189-5p 可用于一般人群 PTC LNM 的早期诊断.

目的 探讨微小RNA-548ah(miRNA-548ah)调控组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)对乙型肝炎病毒(hepati-tis B virus,HBV)复制和表达的影响及其在肝组织中的表达与相关性.方法 选择2015年-2017年泰州市人民医院诊治的慢性HBV感染患者18例为研究对象,其中慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者9例,乙型肝炎肝硬化(LC)患者9例,荧光定量PCR检测三种不同肝癌细胞株及CHB患者肝组织中miRNA-548ah和HDAC4分子的表达,应用miRNA-548ah模拟剂和抑制剂转染Huh7细胞、HepG2细胞和HepG2,2,15细胞,检测细胞培养上清中HBsAg、HBeAg、HBV DNA的表达水平;Pearson相关分析CHB患者肝组织中miRNA548ah和HDAC4表达与临床指标的相关性.结果 miRNA-548ah和HDAC4在Huh7细胞、HepG2细胞和HepG2,2,15细胞的表达差异具有统计学意义(P<00.01);转染pHBV13.质粒的HepG2细胞、Huh7细胞、HepG2,2,15细胞中,与对照组比较,miRNA-548ah模拟剂组HBsAg、HBeAg和HBV DNA的表达均升高,miRNA-548ah抑制剂组HBsAg、HBeAg和HBV DNA表达均降低(P<00.01);CHB患者肝组织中miRNA548ah的表达为(09.0±05.6),低于乙肝LC患者的表达(16.2±07.1)(P<00.5);CHB患者肝组织中miRNA548ah和HDAC4的表达呈负相关(r=-07.46,P=00.21),肝组织中HDAC4的表达水平与血清ALT的水平呈正相关(r=07.33,P=00.25).结论 miRNA-548ah可通过靶向HDAC4调控乙型肝炎病毒的复制与表达,并且影响CHB的病情进展.

目的 对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者外周血血清miRNA差异表达分析,为筛选出T2DM发生发展有关的miRNA分子标记物奠定基础,从而为T2DM预防、早期诊断和治疗方案提供指导.方法 采用Gene-ChipTM miRNA 4.0 Array筛选3组受试者外周血血清(T2DM组、T1DM组、对照组)的差异miRNA,并对差异miRNA进行靶基因预测和靶基因信号通路富集分析(KEGG).结果 T2DM组分别与对照组,T1DM组相比,hsa-miR-505-3p和hsa-miR-548an均上调,hsa-miR-296-3p,hsa-miR-3160-5p,hsa-miR-33a-5p,hsa-miR-572和hsa-miR-96-5p均下调.通过靶基因预测和Pathway分析,筛选出5个miRNA(hsa-miR-505-3p,hsa-miR-548an,hsa-miR-296-3p,hsa-miR-3160-5p,hsa-miR-33a-5p,hsa-miR-572和hsa-miR-96-5p)、7个基因(MTOR,SLC2A2,PRKCE,IRS2,IRS1,MAPK8,MAPK10)可能与2型糖尿病胰岛素抵抗相关.结论该研究筛选出的5个miRNA和7个基因,可为2型糖尿病胰岛素抵抗的研究提供理论基础.

目的:探索血浆及外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA (miRNA)在精神分裂症(SZ)诊断中的价值. 方法:根据文献报道筛选出与SZ相关的7种miRNA(has-miR-449a,has-miR-34a-5p,has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-432-5p,has-miR-548d-5p和has-miR-572);提取35例初诊的SZ患者(患者组)及15名健康体检者(对照组)的抗凝全血的血浆及PBMC中的RNA,采用实时逆转录聚合酶链式扩增反应技术测定血浆及PBMC中这7种miRNA水平,计算其相对表达量. 结果:患者组血浆及PBMC中4种miRNA(miR-652-3p,miR-564,miR-432-5p和miR-548d-5p)相对表达量较对照组明显增加(P均＜0.05);患者组7种miRNA的相对表达量血浆明显高于PBMC(P均＜0.05);多变量ROC曲线显示,患者组血浆miRNA(has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-548 d-5p)ROC曲线下面积为98％,灵敏度为90.9％,特异度为95.4％;PBMC miRNA(has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-432-5p以及has-miR-548 d-5p) ROC曲线下面积为86％;灵敏度为88.2％,特异度为78.3％. 结论:SZ患者血浆及PB-MC中的miRNA(miR-652-3p,miR-564,miR-432-5p和miR-548d-5p)相对表达量明显增高;血浆miRNA更有潜力成为SZ的分子诊断标志物.

目的 分析血清miR-27与老年2 型糖尿病下肢血管病变及25(OH) D3 水平的关系.方法 选取2017年10月—2019年5月河北省沧州市人民医院内分泌科确诊老年2型糖尿病患者86例为T2DM组,并以有无下肢血管病变分为下肢血管病变 (LLPAD)亚组44例和非下肢血管病变( Non-LLPAD) 亚组42例;选择同期医院门诊健康体检者76例为对照组,测定比较各组血清miR-27 mRNA表达及TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c、FPG、25(OH)D3 、hs-CRP、Fib水平.结果 T2DM组miR-27 mRNA、TC、TG、LDL-C、Fib、HbA1c、hs-CRP、FPG水平高于对照组,25( OH) D3 、HDL-C水平低于对照组( t =13. 371、13. 036、25. 364、19. 698、29. 326、38. 489、95. 524、66. 547,66. 241、8. 698, P均=0. 000);LLPAD 亚组 miR-27 mRNA、TC、TG、LDL-C、Fib、 HbA1c、 hs-CRP、 FPG 水平高于 Non-LLPAD 亚组,25 (OH)D3 、HDL-C水平低于Non-LLPAD亚组(t=5. 275、13. 541、26. 541、8. 965、20. 146、14. 548、14. 369、23. 654、7. 711、9. 491,P均=0. 000);miR-27 mRNA与25(OH)D3 、HDL-C呈负相关(r= -0. 486、-0. 483,P=0. 039、0. 039),与TC、TG、LDL-C、Fib、HbA1c、hs-CRP、FPG呈正相关(r=0. 651、0. 572、0. 494、0. 747、0. 438、0. 523、0. 591,P均＜0. 05);高水平的miR-27 mRNA、TC及低水平的25(OH)D3 均为老年2型糖尿病合并下肢血管病变发生的危险因素(OR=2. 437、4. 268、13. 625,P＜0. 05);miR-27 mRNA、25(OH)D3 两者的AUC相近,均小于TC;miR-27 mRNA、25( OH) D3 诊断老年2型糖尿病下肢血管病变的敏感度、特异度相近(P＞0. 05),均小于TC(P＜0. 05).结论 老年2型糖尿病下肢血管病变患者血清miR-27 mRNA水平升高,与25(OH)D3 呈负相关;miR-27、25(OH)D3 诊断2型糖尿病下肢血管病变具有较高的敏感度、特异度,可作为判定2型糖尿病下肢血管病变的生物学标志物.

目的 探讨微小RNAs(miRNAs)对肺癌细胞系侵袭、迁移及凋亡的影响.方法 通过hsa-mir-933、hsa-mir-4700-3p、hsa-mir-3144-3p、hsa-mir-3972和hsa-mir-548a-5p感染目的细胞,流式细胞术检测5种miRNAs对肺癌细胞系的细胞凋亡的影响;Transwell分析5种miRNAs对肺癌细胞系的细胞侵袭效果;划线分析5种miRNAs对肺癌细胞系的细胞迁移的影响;Real-time PCR检测miRNA表达情况.结果 与感染空载体组和无感染的对照组相比,感染了hsa-mir-933、hsa-mir-4700-3p、hsa-mir-3144-3p、hsa-mir-3972和hsa-mir-548a-5p的细胞凋亡明显增加,其中NCI-H460和A549均以转染hsa-mir-4700-3p凋亡率最高;5种miRNAs对肺癌细胞的侵袭数目明显减小;5种miRNAs对肺癌细胞的细胞的迁移效果减弱;Real-time PCR检测hsa-mir-933、hsa-mir-4700-3p、hsa-mir-3144-3p、hsa-mir-3972和hsa-mir-548a-5p处理后相应miRNA的水平表达均相应增加.结论 5种miRNAs能够促进肺癌细胞系的凋亡,降低肺癌细胞系的高侵袭性,抑制肺癌细胞系的迁移,增加对应miRNA的表达.

目的 分析肝细胞癌(HCC)组织中微小RNA 548c-3p(miR-548c-3p)、三基序蛋白59(TRIM59)mRNA的表达及意义.方法 运用实时荧光定量PCR检测114例HCC组织及癌旁组织中的miR-548c-3p、TRIM59 mRNA;分析miR-548c-3p、TRIM59 mRNA表达与患者临床病理特征的关系;随访5年,采用Kaplan-Meier法分析不同miR-548c-3p、TRIM59 mRNA表达患者的生存差异.结果 HCC组织中miR-548c-3p的相对表达量低于癌旁组织,而TRIM59 mRNA表达高于癌旁组织(P均<0.05).HCC组织中miR-548c-3p、TRIM59 mRNA表达与TNM分期、淋巴结转移和分化程度有关(P均<0.05).HCC组织中miR-548c-3p与TRIM59 mRNA表达呈负相关(r=-0.735,P<0.05).Kaplan-Meier生存分析结果显示,miR-548c-3p低表达者5年总体生存率(OS)低于miR-548c-3p高表达者;TRIM59 mRNA高表达者OS低于TRIM59低表达者(P均<0.05).结论 HCC组织中miR-548c-3p表达降低,TRIM59 mRNA表达升高,两者与TNM分期、淋巴结转移、分化程度及预后有关,有可能成为新的HCC诊治及预后的分子标志物.