目的:分析中国流行的柯萨奇病毒A6型（coxsackievirus A6，CVA6）D3基因亚型中的D3a和D3b分支序列结构蛋白B细胞抗原表位氨基酸差异性来优化设计CVA6病毒样颗粒（virus-like particle，VLP）疫苗。方法:对GenBank下载的含有P1区核苷酸CVA6序列，使用MEGA.11.0软件基于VP1序列采用最大似然法构建进化树划分基因型及亚型。采用在线工具WebLogo并结合CVA6 B细胞抗原表位研究的相关文献，对D3a和D3b分支序列VP1-VP3区B细胞抗原表位氨基酸差异性分析，为筛选疫苗候选株进行CVA6 VLP的制备。结果:D3a与D3b分支序列在VP1 N末端P27位点分别是天冬酰胺（96.2%）和丝氨酸（92.9%）；在VP3 N末端P60位点为甘氨酸（98.8%）和丝氨酸（60.0%）。基于上述差异性选择具有D3a（VP3-N-P60）和D3b（VP1-N-P27）两分支序列共有的B细胞抗原表位D3a-JX2018（GenBank accession number：MN845862）作为疫苗候选株，并成功制备了CVA6 VLP。结论:本研究为疫苗候选株的选择提供了新的思路，为日后CVA6 VLPs疫苗和免疫诊断试剂的研发提供了基础。

目的:尿素酶B(UreB)是幽门螺杆菌疫苗设计的重点候选抗原，本研究拟探究UreB对巨噬细胞的免疫调控作用及潜在机制。方法:用重组UreB蛋白刺激小鼠骨髓来源M0型巨噬细胞，经流式细胞术和ELISA检测巨噬细胞凋亡、极化和抗原提呈分子表达；共培养试验、CFSE和流式细胞术检测CD4 +T细胞增殖及IFN-γ表达水平。构建UreB截短体，NanoBiT和免疫共沉淀检测UreB与TLR2结合表位。 结果:UreB可诱导巨噬细胞凋亡并逆转脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化，促进巨噬细胞向M2型极化。同时，UreB也能抑制巨噬细胞抗原提呈分子MHCⅡ和CD86的表达，并进而抑制CD4 +T细胞增殖和IFN-γ表达。分子机制研究表明UreB主要依赖于C端7个氨基酸残基与TLR2结合发挥以上调控作用。 结论:本研究证实UreB可通过C端7个氨基酸残基与TLR2结合发挥免疫负调控功能，有助于以UreB为基础的幽门螺杆菌疫苗设计及优化。

目的:通过基因序列设计及优化，构建质粒并表达纯化出4种呼吸道合胞病毒(RSV) PreF蛋白，对其免疫原性进行评价。方法:分别用Human和CHO密码子优化Coronin-1A和T4三聚体蛋白基因序列，并添加到RSV F蛋白序列后，将上述质粒转染Expi293F细胞进行蛋白质表达，收获上清经镍柱纯化后，制备出4种三聚体蛋白，并进行SDS-PAGE分析及Western blot鉴定。于0周和3周免疫动物，采血后进行结合抗体和中和抗体活性检测。结果:SDS-PAGE分析及Western blot鉴定结果表明，制备及表达的4种蛋白质具有稳定的三聚体结构；抗原抗体亲和力试验表明，4种三聚体蛋白与RSV特异性单抗8897、D25、Motavizumab、AM14和Palivizumab的亲和力均很强；免疫血清的结合抗体效价和中和抗体效价结果表明，初次免疫后，两种T4三聚体蛋白诱导的抗体水平更高，再次免疫后，Human密码子优化的三聚体蛋白抗体增长幅度较高。结论:两种不同的异源三聚体基序添加均可产生有效的三聚体PreF蛋白，并能在小鼠体内诱导出有效的结合抗体和中和抗体。

目的:建立乳腺癌原代细胞成瘤模型，探讨体内转染干扰中电导钙激动钾离子通道(KCa3.1)的表达在乳腺癌增殖、肿瘤新生血管中的效应。方法:收集随机选取的23例2018年至2019年于安徽医科大学第一附属医院乳腺外科手术切除的乳腺浸润性癌新鲜组织标本，分离并体外培养人乳腺癌原代细胞，建立22例裸鼠乳腺癌原代细胞成瘤模型；合成胆固醇修饰小干扰RNA(siRNA)并鉴定其转染效率，将成瘤裸鼠随机分为实验组(11例，siRNA干扰)及对照组(11例，阴性对照)，检测体内转染Chol-siRNA干扰KCa3.1对乳腺癌成瘤组织增殖及血管生成的影响。应用SPSS 18.0统计软件分析，组间采用 χ2检验及 t检验。 结果:预先设计的siRNA1与siRNA2均可对乳腺癌原代细胞中KCa3.1产生有效干扰，蛋白质印迹法(Western blot)检测其干扰效率为(71.03±9.97)%及(65.81±9.18)%( t＝21.034、20.883， P<0.05)，差异有统计学意义；成功建立22例乳腺癌原代细胞BALB/c裸鼠成瘤模型，成瘤率为70.96%；成瘤组织行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测KCNN4干扰效率，Chol-siRNA组中KCNN4 mRNA表达水平显著低于对照组( t＝6.541， P<0.05)，差异有统计学意义；免疫组织化学检测成瘤组织肿瘤细胞因子的表达，对照组中VEGF的阳性表达率为(43.42±7.89)%，siRNA组中的阳性表达率为(13.19±4.32)%( t＝11.146， P<0.05)，差异有统计学意义；对照组中CD31的阳性表达率为(17.49±4.15)%，siRNA组中的阳性表达率为(9.28±5.86)%( P<0.05)，差异有统计学意义；对照组中细胞核增殖抗原(Ki-67)的阳性表达率为(88.77±7.61)%，siRNA组中的阳性表达率为(58.17±9.62)%( t＝8.274， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:KCa3.1参与调控乳腺癌细胞的增殖及肿瘤血管生成，成功在体内成瘤模型中验证了干预KCa3.1对肿瘤形成的抑制作用。

人偏肺病毒是一种常见的呼吸道病毒，属肺炎病毒科偏肺病毒属，2001年首次发现于荷兰，全球广泛分布，能够反复感染婴幼儿、老年人及免疫功能低下者，并引起急性呼吸道感染。目前，尚无有效的预防性疫苗批准上市。本文主要概述人偏肺病毒的病毒学和流行病学特征，介绍其潜在疫苗关键免疫原融合蛋白的结构和抗原位点，以及基于融合蛋白设计的亚单位疫苗、减毒活疫苗和核酸疫苗研究的最新进展。

目的:探讨关节腔内注射雷公藤甲素纳米材料（TPNA）对抗原诱导的兔关节炎的治疗效果。方法:新西兰大白兔27只，采用完全随机区组设计法分配为4组，建立抗原诱导的关节炎模型后，TPNA组、雷公藤甲素组（TP组）和倍他米松组（BS组）分别于超声引导下向关节腔内注射TPNA、单纯TP、倍他米松，每组7只；对照组（6只）仅穿刺但不注射任何药物。观察关节肿胀度，滑膜炎及骨破坏等病理变化。统计学方法采用 t检验、重复测量的方差分析、Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis检验。 结果:①末次免疫1周后即治疗前TPNA组、TP组、BS组和对照组兔膝关节直径大小分别为（2.02±0.08）cm，（2.08±0.06）cm，（2.10±0.06）cm和（2.18±0.07）cm，在给药1周后上述各组膝关节直径分别为（1.85±0.06）cm、（1.89±0.07）cm、（1.93±0.08）cm和（2.15±0.08）cm，各个给药组关节肿胀均见明显改善。随着治疗的进行，TP组、TPNA组和BS组兔膝关节直径逐渐减小（ F=58.83， P<0.01； F=53.78， P<0.01； F=68.24， P<0.01），而且TP组、TPNA组和BS组兔膝关节直径明显小于对照组，差异有统计学意义（ F=63.83， P<0.01； F=71.94， P<0.01； F=140.79， P<0.01）。② TP组滑膜炎病理评分较对照组低（ Z=-2.082， P<0.05），以轻度滑膜炎为主，而TPNA组和BS组滑膜病理评分比TP组低（ Z=-2.082， P<0.05； Z=-2.687， P<0.05），大多无滑膜炎表现，BS组与TPNA组间差异无统计学意义（ Z=-1.000， P>0.05）。③ TPNA组、TP组以及BS组骨质破坏的病理评分均比对照组减轻（ Z=-2.505， P<0.05； Z=-2.216， P<0.05； Z=-2.505， P<0.05），TPNA组、TP组以及BS组间差异无统计学意义（ χ2=0.588， P>0.05）。 结论:关节腔内注射TPNA可以缓解关节肿胀，减轻滑膜炎，延缓骨破坏的形成。其效果与糖皮质激素相当，好于单纯TP。关节腔内注射TPNA有望成为治疗关节炎的有效手段。

目的:鉴定发热伴血小板减少综合征病毒的CD8 + T细胞表位，为了解抗病毒免疫机制和疫苗设计提供参考。 方法:基于生物信息学方法在SFTSV非结构蛋白中预测潜在表位，利用酶联免疫斑点吸附试验、胞内因子染色、四聚体染色验证表位的免疫原性，体外复性试验验证表位与人白细胞分化抗原的结合力。结果:NS-3多肽能刺激特异性CD8 + T分泌多种细胞因子，且诱导CD107a表达水平升高。康复病例中检测到NS-3表位特异性CD8 + T细胞分群。NS-3与HLA-A*3001能稳定结合。 结论:从SFTSV的NS蛋白中鉴定到首个人源HLA-A*3001限制性CD8 + T细胞表位NS-3，为疫苗开发提供依据。

目的:采用限制性抗原亲和力酶联免疫法（LAg-Avidity EIA）估算我国重点地区男男性行为人群（MSM）的HIV-1新发感染率，分析估算结果的偏差及影响因素，为提高估算结果准确性提供参考依据。方法:采用群组随机化社区干预对照研究设计，根据人口规模及MSM中HIV感染者数选择20个城市作为研究现场；基于MSM中HIV-1感染率（7%），估算样本量共700例（各城市HIV-1新发感染者35人）。通过MSM手机社交软件，建立检测预约和问卷填写系统，于2019年4-11月开展基线横断面调查并对符合新发感染检测条件的样本进行LAg-Avidity EIA检测；将试验所得参数代入WHO指南中估算公式，得到MSM的HIV-1新发感染率，根据实际情况对结果进行校正。同时梳理样本收集及检测流程，分析影响新发感染率的因素。结果:研究对象完成HIV-1初筛10 650例中，阳性反应799例，样本缺失198例。实际送检621例，排除误报样本后，完成LAg-Avidity EIA检测520例，其中判定为HIV-1新发感染155例。20个城市MSM的HIV-1新发感染率为4.06%（95% CI：3.27%~4.85%）；校正样本缺失后，HIV-1新发感染率为5.53%（95% CI：4.45%~6.60%）；同时校正缺失及误报情况后，HIV-1新发感染率为5.66%（95% CI：4.67%~6.65%）。20个城市MSM的HIV-1新发感染率实际值为4.06%~5.66%。 结论:样本缺失及误报可能导致HIV-1新发感染率的估算偏差。确保样本均来源于调查人群并对样本收集及检测各环节进行严格质控，可减小HIV-1新发感染率的估算偏差。

新型冠状病毒（2019-nCoV）感染暴发流行对全球公众健康构成了严重威胁，疫苗接种是有效预防病毒感染流行的手段。2019-nCoV与急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）和中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）同属于β-冠状病毒。基于对SARS-CoV和MERS-CoV的了解，科学家对2019-nCoV病毒特征的研究、候选抗原及表位的鉴定、动物模型的建立、免疫应答的检测，疫苗的设计等工作取得了快速进展。新型冠状病毒疫苗（新冠疫苗）的研发也取得了快速进展，新冠疫苗类型几乎涵盖了目前疫苗研究的所有形式，包括灭活疫苗、重组蛋白疫苗、病毒载体疫苗、核酸疫苗（mRNA疫苗与DNA疫苗）等。至2020年3月，已有2项新冠疫苗进入了Ⅰ期临床试验，分别为我国军事医学科学院联合天津康希诺生物股份公司研发的基于腺病毒载体的重组新冠疫苗和美国Moderna公司的mRNA 疫苗，两种疫苗均以2019-nCoV的刺突蛋白为抗原靶标。同时，新冠疫苗研发仍面临着许多未知的挑战，如2019-nCoV病毒抗原特征、抗原变异、机体的保护性免疫应答特征以及对老年及基础病人群是否具有保护，新冠疫苗量产的生产工艺等方面仍需要更多的研究。疫苗研发具有其固有规律，在加快速度的同时，保证疫苗的安全性、有效性是必须的前提。

目的:探讨不同CD8和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）表达特征间皮瘤患者的生存期及其死亡危险因素，为病情进展及其临床结局评价提供新线索。方法:于2016年11月，采用回顾性临床病例研究设计，选择经临床组织病理学确诊的47例间皮瘤及其组织标本为研究对象，采集临床病理资料、石棉接触史和生存信息；以苏木素伊红染色法和免疫组化染色法对组织标本进行淋巴细胞浸润程度、5-甲基胞嘧啶（5-mC）、CTLA-4、CD8和细胞核增殖抗原（Ki-67）指标的检测，分析不同CD8和CTLA-4蛋白表达特征患者生存期和死亡危险因素，并分析Ki-67表达对不同CD8和CTLA-4蛋白和基因表达特征间皮瘤患者生存期的影响。结果:47例患者中，63.8%（30/47）的病例以少或中等程度淋巴细胞浸润为主，CTLA-4、CD8、5-mC和Ki-67免疫组化分值分别为92.97（54.95，120.65）、72.41（36.62，89.82）、11.09（3.40，52.89）和5.88（2.41，11.48）。CD8 高表达CTLA-4 高表达患者的5-mC表达水平高于CD8 高表达CTLA-4 低表达组（ P<0.01）。27例随访信息完整间皮瘤患者的总体中位生存期为0.83±0.29年，CD8 高表达CTLA-4 高表达和CD8 高表达CTLA-4 低表达组患者的中位生存期分别为0.58±0.51年和0.83±0.30年（ P=0.521）。在CD8 高表达CTLA-4 低表达组患者中，Ki-67免疫组化分值≥5.88是间皮瘤患者独立死亡危险因素（ HR=8.40， P=0.01）。在不同CD8和CTLA-4蛋白表达特征下，在CD8 高表达CTLA-4 低表达组患者中，Ki-67高和低表达者的中位生存期分别为0.57±0.11年和2.31±0.46年，两组间差异有统计学意义（ P<0.01）。在不同CD8和CTLA-4 mRNA表达特征下，在CD8 高表达CTLA-4 低表达组患者中，Ki-67 mRNA高和低表达者的中位生存期分别为1.20±0.36年和3.38±0.43年，两组间差异有统计学意义（ P=0.018）。 结论:当CD8高表达伴随CTLA-4低表达时，间皮瘤病例可能伴随DNA去甲基化现象。随着Ki-67表达增强，其生存期缩短，死亡风险升高。