目的:分析上皮性卵巢癌中拓扑异构酶Ⅱα（TOP2A）的表达与CD4 ＋T细胞数量及临床预后的相关性分析。 方法:使用基因信息数据库（GEPIA）、生存分析Kaplan-Meier Plotter和人类蛋白质谱数据库（The Human Protein Atlas）并采用独立样本 t检验和卡方检验研究了TOP2A信使RNA（mRNA）在正常卵巢组织和上皮性卵巢癌（EOC）组织中的表达情况，及与EOC患者Kaplan-Meier生存预后的关联；同时，在基因注释富集数据库中还对TOP2A的共表达基因及其在基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路中的富集情况进行了分析。此外，通过免疫相关分析数据库平台及pearson相关性分析研究了TOP2A基因与CD4 ＋T细胞及其亚群以及其他免疫细胞之间的关系。 结果:TOP2A在正常卵巢组织和CD4 ＋T细胞中表达差异无统计学意义（8.60比8.40， t＝1.225， P>0.05），但在EOC组织中显著高表达（4.78±2.63比0.44±1.22，|log2FC|>2， P<0.05； χ2＝14.548， P<0.05）；共表达基因的功能富集涉及在有丝分裂细胞周期、PID-E2F途径和转录调控TP53等，而KEGG主要富集在代谢调节过程、正/负反馈调控生物过程、细胞周期以及细胞的生长发育；TOP2A基因的表达与肿瘤细胞纯度以及CD4 ＋T细胞和多种免疫细胞的数量显著相关（ r＝0.123， P<0.05）；TOP2A组织中高表达不利于EOC患者的生存预后[40个月比48个月，风险比（ HR）＝1.21，95%可信区间（ CI）：1.06～1.38， P<0.05]。但仅有肿瘤微环境浸润CD8 ＋T细胞数量对EOC患者生存预后有显著影响[ HR＝1.40，95%可信区间（ CI）：0.98～2.02， P<0.05]。 结论:EOC组织中TOP2A mRNA表达与CD4 ＋T细胞数量呈正相关，且肿瘤浸润CD8 ＋T细胞的低分布不利于EOC患者的生存预后。

目的:探讨药物相关性分子靶标检测对儿童恶性实体肿瘤个体化治疗的指导作用。方法:回顾性分析2017年6月至2019年3月首都医科大学附属北京同仁医院40例恶性实体肿瘤患儿的临床资料。应用免疫组织化学、聚合酶链反应及测序方法对相关的肿瘤药物分子靶标的表达量及突变进行测定，比较不同靶标所对应的抗肿瘤药物对实体肿瘤的化疗有效率及毒副反应发生率。结果:40份肿瘤组织样本中，共检测出4个肿瘤药物相关靶点，分别为DNA拓扑异构酶-ⅡA(TOPOⅡA)、β 3-微管蛋白（Tubulinβ 3）、DNA拓扑异构酶-Ⅰ（TOPOⅠ）和二氢叶酸还原酶基因位点多态性[DHFR (C829T)]。铂类、甲氨喋呤、伊立替康、长春碱类和蒽环类化疗药物对儿童恶性实体肿瘤的化疗有效率分别为90.0% (36/40)、85.0% (34/40)、70.0% (28/40)、67.5% (27/40)、62.5% (25/40)。伊立替康、甲氨蝶呤、长春碱类对间叶源性肿瘤的化疗有效率分别为68.9%(20/29)、62.1%（18/29）、68.9%（20/29），显著高于非间叶源性肿瘤的18.2%（2/11）、36.4%（4/11）、36.4%（4/11），差异均有统计学意义（χ 2=5.487、15.345、17.278，均 P<0.05)，铂类药物对非间叶源性肿瘤的化疗有效率为72.3%（8/11），显著高于间叶源性肿瘤的58.6%（17/29），差异有统计学意义（χ 2=11.231， P<0.05)。毒副反应强度从大到小依次为蒽环类>铂类>甲氨喋呤>长春碱>伊立替康。 结论:对不同肿瘤药物相关分子靶标、不同源性肿瘤对同一抗肿瘤药物的敏感性及毒副反应进行了预测，为个体化治疗儿童恶性肿瘤提供了一定的理论基础与临床依据。

目的:通过在单细胞水平分析小鼠磨牙细胞间异质性，构建牙髓细胞发育的时空图谱，进一步揭示牙齿发育的过程和调控机制。方法:分别收集出生后0、3 d的C57BL/6小鼠下颌第一磨牙各10颗，制备单细胞悬液，采用单细胞转录组测序（single-cell RNA sequencing，scRNA-seq）技术进行测序。从本课题组前期研究中提取出生后7 d小鼠磨牙scRNA-seq数据，与0、3 d数据进行合并分析。使用Seurat程序对测序数据进行质控、标准化、降维和聚类分析；Monocle程序进行拟时序分析，预测发育轨迹；Scillus程序进行基因本体分析，对细胞功能进行注释。使用原位杂交技术对标记基因进行体内定位，明确不同亚群细胞的体内分布和时空变化。结果:Seurat分析显示小鼠磨牙细胞具有26个细胞亚群，可分为牙髓细胞、牙囊细胞、上皮细胞、免疫细胞、内皮细胞、管周细胞、胶质细胞和红细胞等八大类细胞，其中牙髓细胞包含5个亚群：成熟牙髓细胞，标记基因为柯萨奇病毒腺病毒受体（coxsackie virus and adenovirus receptor，Cxadr）；牙乳头细胞，标记基因为SPARC相关模块化钙结合蛋白2（SPARC related modular calcium binding 2，Smoc2）；周期细胞，标记基因为Ⅱ型DNA拓扑异构酶（DNA topoisomerase Ⅱ alpha，Top2a）；前成牙本质细胞，标记基因为棕榈酰蛋白羧酸酯酶（notum palmitoleoyl-protein carboxylesterase，Notum）；成牙本质细胞，标记基因为牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，Dspp）。随着牙胚发育，成熟牙髓细胞的比例逐渐增加，周期细胞和成牙本质细胞比例逐渐降低。原位杂交染色和基因本体分析结果显示，Cxadr+成熟牙髓细胞定位于牙冠上部，主要功能为成骨和“细胞外结构组织”；Smoc2+牙乳头细胞位于根尖，主要功能与“细胞外结构组织”和器官发育相关；Top2a+周期细胞位于牙冠下部，进行有丝分裂；Notum+前成牙本质细胞邻近上皮根鞘，和Dspp+成牙本质细胞的主要功能同为生物矿化。Monocle分析显示牙髓细胞有2条发育轨迹，从Smoc2+牙乳头细胞起始，经过Top2a+周期细胞，再分化为Cxadr+成熟牙髓细胞或成牙本质细胞。结论:scRNA-seq技术能在转录组水平充分揭示细胞间的异质性，为研究器官发育过程和调控机制提供了有力工具。

目的:探究拓扑异构酶Ⅱα（TOP2A）、人表皮生长因子受体2（ERBB2）在早期结直肠癌（CRC）中的水平及其诊断价值。方法:选取2019年1月至2022年4月石家庄市中医院收治的93例早期CRC患者为研究对象（CRC组），选取同期健康体检者93例作为健康组，同期诊治的结直肠息肉患者93例作为结直肠息肉组。检测并比较各组受试对象外周血单个核细胞（PBMC）中TOP2A、ERBB2 mRNA以及血清癌胚抗原（CEA）水平。采用受试者操作特征（ROC）曲线评估TOP2A、ERBB2 mRNA及血清CEA水平诊断早期CRC的价值。分析TOP2A、ERBB2 mRNA水平与早期CRC患者临床病理特征的关系。结果:健康组、结直肠息肉组、CRC组PBMC中TOP2A（1.04±0.35比1.72±0.57比2.83±0.71， F=246.73， P<0.001）、ERBB2 mRNA（1.01±0.34比1.64±0.55比2.75±0.71， F=234.80， P<0.001）及血清CEA水平（1.29±0.52比1.93±0.64比3.17±0.81， F=190.78， P<0.001）差异均有统计学意义。与健康组、结直肠息肉组相比，CRC组PBMC中TOP2A、ERBB2 mRNA及血清CEA水平均显著升高（均 P<0.05）；与健康组相比，结直肠息肉组PBMC中TOP2A、ERBB2 mRNA及血清CEA水平均升高（均 P<0.05）。ROC曲线分析显示，PBMC中TOP2A、ERBB2 mRNA及血清CEA水平诊断早期CRC的曲线下面积（AUC）分别为0.85、0.85、0.84，三者联合诊断早期CRC的AUC为0.96，大于TOP2A、ERBB2、CEA单独诊断（ Z=2.92， P=0.004； Z=3.16， P=0.002； Z=2.86， P=0.005）。三者联合诊断早期CRC的敏感性为94.64%，特异性为85.96%。不同分化程度早期CRC患者PBMC中TOP2A、ERBB2 mRNA水平差异有统计学意义（ χ2=6.21， P=0.013； χ2=10.49， P=0.001）。 结论:CRC患者PBMC中TOP2A、ERBB2 mRNA水平较高，PBMC中TOP2A、ERBB2 mRNA水平联合血清CEA水平有助于临床诊断早期CRC。

目的 探讨葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和拓扑异构酶Ⅱ A(TOP2A)在肾上腺嗜铬细胞瘤(PPGL)患者组织中的表达与临床特征及预后的相关性.方法 选取2014年3月至2020年6月于新疆维吾尔自治区人民医院行手术切除的120例PPGL组织作为实验组.另收集同期行手术切除的100例无功能肾上腺腺瘤的肾上腺组织作为对照组.采用免疫组织化学染色法检测组织中GLUT1和TOP2A表达情况.通过Cox回归分析PPGL患者预后的影响因素.结果 实验组中GLUT1的低表达率和TOP2A的高表达率均高于对照组[51.7％(62/120)比 14.0％(14/100)、52.5％(63/120)比 19.0％(19/100)],差异均有统计学意义(x2=34.225、31.829,均P＜0.001).GLUT1、TOP2A表达水平与镜下组织浸润和Ki-67有关(均P＜0.05).预后良好组中GLUT1高表达和TOP2A低表达比例均高于预后不良组,差异均有统计学意义(均P＜0.001).单因素分析结果显示,患者镜下组织浸润、Ki-67、GLUT1、TOP2A均是影响预后的因素(均P＜0.001).Cox多因素回归分析显示TOP2A、镜下组织浸润及Ki-67均是导致PPGL患者预后不良的危险因素,GLUT1为保护因素(均P＜0.001).结论 GLUT1在PPGL组织中呈低表达,TOP2A呈高表达,与患者预后不良有关.

[目的]考察生脉胶囊(SM)逆转小鼠结肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的作用和机制.[方法]利用中医药整合药理学研究平台获取生脉胶囊调节的靶基因(基因集1),在Gene Cards数据库检索到结直肠癌化疗抵抗相关基因(基因集2)和5-FU抗性相关基因(基因集3),取三者交集为研究对象,进行基因本体(GO)分析和京都基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;筛选5-FU耐药的CT26细胞(CT26/FU),构建小鼠移植瘤模型,将小鼠分为模型组、FU组(腹腔注射5-FU)和FU+SM组(腹腔注射5-FU,同时灌胃生脉胶囊).每天测量肿瘤大小,10 d后处死小鼠,称量移植瘤的质量,提取各组移植瘤的总RNA,通过Real time RT-PCR检测5-FU耐药相关基因胸苷酸合成酶(TYMS)、二氢嘧啶脱氢酶(DPYD)、DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)、尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)和糖皮质激素受体(NR3C1)的表达.[结果]网络药理学分析筛选出38个候选基因,富集到多条药物耐药通路上.实验表明,与模型组相比,FU组的肿瘤大小和质量没有差异,但FU+SM组肿瘤的大小和质量都明显降低.同时,与FU组相比,FU+SM组中TOP2A基因的表达降低.[结论]SM能够逆转CT26/FU的耐药性,其机制可能与下调TOP2A表达有关.

目的 基于基因表达综合(GEO)数据库和癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛选肺腺癌(LUAD)预后相关基因.方法 从GEO数据库中筛选出GSE118370、GSE10072、GSE115002 3个数据集,使用R软件筛选LUAD组织和相邻正常肺组织中的差异基因,对差异基因进行基因本体(GO)及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.应用STRING数据库构建与差异基因相关的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络.应用Cytoscape软件鉴定差异基因中的关键基因,采用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库分析关键基因在LUAD组织和正常肺组织中的表达,比较关键基因高表达与低表达LUAD患者的总生存期和无病生存期,比较不同临床分期LUAD患者关键基因的表达情况.应用UALCAN数据库对LUAD组织和正常肺组织中关键基因的表达情况进行分析.结果 共获得101个上调差异基因和213个下调差异基因.GO富集分析结果显示,上调差异基因主要富集在细胞外基质组织、有丝分裂细胞周期、上皮细胞分化等生物过程中,以及细胞黏附分子结合、蛋白激酶结合等分子功能方面;KEGG通路富集分析结果显示,上调差异基因主要富集在p53信号通路、松弛素信号通路等通路.GO富集分析结果显示,下调差异基因主要富集在血管发育、细胞对细胞因子刺激的反应等生物过程中,以及细胞外基质和膜筏等细胞组成中;KEGG通路富集分析结果显示,下调差异基因主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、神经活性配体-受体相互作用等通路中.最终筛选出8个关键基因,分别是BUB1有丝分裂检查点丝氨酸/苏氨酸激酶B(BUB1B)、ZW10相互作用着丝点蛋白(ZWINT)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)、泛素结合酶E2C(UBE2C)、细胞周期蛋白B2(CCNB2)、NIMA相关激酶2(NEK2)、纺锤体微管的装配因子(ASPM).这8个基因在LUAD组织中的表达水平均高于正常肺组织,且与LUAD患者的总生存期、无病生存期及临床分期有关.结论 BUB1B、ZWINT、CDK1、TOP2A、UBE2C、CCNB2、NEK2、ASPM基因在LUAD组织和正常肺组织中的表达具有差异,并且与LUAD患者的总生存期、无病生存期及临床分期有关.

目的 研究原发系统型间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)中TOP2A基因改变与TOP2A蛋白的表达,并阐述其临床病理学意义.方法 收集58例ALCL患者蜡块,运用免疫组化技术及免疫荧光原位杂交(FISH)技术分别检测TOP2A蛋白表达及TOP2A基因拷贝数的变化,并做相关统计.结果 TOP2A蛋白阳性表达者约70％(41/58例),TOP2A基因扩增者约50％(26/50例).TOP2A蛋白表达及TOP2A基因扩增同临床分期Ⅲ～Ⅳ、IPI评分高危组及Ki-67增殖指数较高组成正相关(P＜0.05).结论 TOP2A与ALCL的发生、发展及肿瘤的增殖密切相关,TOP2A蛋白阳性表达及TOP2A基因扩增的患者生存时间反而较长.

目的 分析P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽转移酶(GSTπ)联合拓扑异构酶Ⅱα(TOPOⅡα)检测对三阴性乳腺癌(TNBC)患者新辅助化疗(NAC)病理完全缓解(pCR)的预测价值.方法 本研究为一项回顾性、单中心、双盲法的试验,选取郑州大学第一附属医院自2020年3月至2022年10月,经纳入、排除标准共筛查135名TNBC患者作为研究对象,均为女性.采用SP免疫组化法检测P-gp、GSTπ、TOPOⅡα,分析TNBC患者NAC疗效,行单因素、多因素分析P-gp、GSTπ、TOPOⅡα表达与NAC pCR的关系,绘制ROC曲线分析P-gp、GSTπ、TOPOⅡα单一及联合检测对TNBC患者NAC pCR的预测价值.结果 NAC后,cCR者47例(34.81％),cPR者72例(53.33％),SD者12例(8.90％),PD者4例(2.96％),总有效率88.14％;pCR者21例(15.55％).经单因素分析,P-gp、GSTπ阳性表达pCR率低于P-gp、GSTπ阴性表达pCR率,TOPOⅡα阳性表达pCR率则高于阴性性表达pCR率,差异均有统计学意义(P<0.05).P-gp、GSTπ、TOPOⅡα表达与pCR具有显著相关性[OR(95％CI)分别为1.446(1.127～1.858)、1.640(1.304～2.063)、1.548(1.227～1.984),P<0.05].P-gp、GSTπ、TOPOⅡα联合检测对NAC pCR灵敏度、特异度分别为90.73％、86.73％,AUC(95％CI)为0.813(0.743～0.908),均高于上述指标单一检测(P<0.05).结论 P-gp、GSTπ和TOPOⅡα表达与TNBC患者NAC pCR有一定关联,且通过联合上述指标检测NAC pCR有着较高预测价值,有利于帮助临床医生为TNBC患者进一步制定更合适的治疗策略.

[目的]运用网络药理学联合生物信息学方法,探究黄芪四君子汤治疗肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)的潜在作用机制.[方法]利用中药系统药理学数据库和分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)数据库对中药的生物活性成分及其靶点进行鉴定.采用差异分析和加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression net work analysis,WGCNA)鉴定HCC的差异基因和模块基因,在此基础上构建中药成分-靶点网络.随后研究靶点的生物学功能,并构建蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络,识别药物治疗HCC的关键靶点.最后通过分子对接探索化合物与靶点之间的相互作用.[结果]共鉴定出5种草药的156种化合物和227个靶点,癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库数据集中差异基因2477和685个,WGCNA关联模块基因2 104和2 165个.构建了包含4种草药、85种化合物和9个靶点的中药成分-靶点网络.生物功能分析表明,9个靶点主要与细胞周期、p53信号通路、细胞衰老相关,筛选出山柰酚、槲皮素2个药物主要成分和细胞周期蛋白A2(cyclin A2,CCNA2)、雌激素受体1(estrogen receptor alpha,ESR1)、细胞周期蛋白 B1(cyclin B1,CCNB1)、细胞周期蛋白依赖性激酶 1(cyclin-dependent kinase 1,CDK1)、拓扑异构酶Ⅱ α(topoisomerase Ⅱ alpha,TOP2A)5个核心靶点.分子对接结果显示,山柰酚、槲皮素与对应的核心靶点具有稳定的结合能力.[结论]黄芪四君子汤可能通过调节细胞周期蛋白以及相关通路发挥对HCC的治疗作用,本研究为黄芪四君子汤治疗HCC提供了研究思路和理论支撑.