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丙泊酚通过Fox O1/TXNIP信号通路介导自噬对高糖诱导心肌细胞损伤的作用
编辑人员丨6天前
目的 探讨丙泊酚(Pro)通过叉头盒蛋白O1(Fox O1)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)信号通路介导自噬对高糖(HG)诱导心肌细胞损伤的影响.方法 将H9c2细胞分为空白组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)、高葡萄糖(HG)组(30 mmol·L-1葡萄糖)、HG+Pro 组(30 mmol·L-1 葡萄糖+25 μmol·L-1Pro)、HG+Pro+阴性对照(OE NC)组(先转染 OE NC,再以 30 mmol·L-1 葡萄糖+25 μmol·L-1Pro处理)、HG+Pro+Fox O1过表达质粒(Fox O1-OE)组(先转染Fox O1-OE,再以30 mmol·L-1葡萄糖+25 μmol·L-1 Pro处理).用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、透射电镜、蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞存活率、凋亡率、上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平以及自噬体、Fox O1/TXNIP及自噬蛋白表达水平变化.结果 空白组、HG组、HG+Pro组、HG+Pro+OE NC 组、HG+Pro+Fox O1-OE 组细胞活力分别为(100.00±0.00)%、(48.15±4.82)%、(79.66±7.98)%、(78.89±7.91)%和(49.22±4.93)%,凋亡率分别为(12.04±1.21)%、(42.34±4.25)%、(26.22±2.63)%、(27.02±2.71)%和(38.29±3.86)%,SOD 水平分别为(62.24±6.25)、(28.21±2.85)、(55.37±5.58)、(55.09±5.53)和(30.66±3.08)U·mg-1 pro,MDA 水平分别为(0.38±0.04)、(1.43±0.15)、(0.67±0.07)、(0.72±0.08)和(1.34±0.14)U·mg-1 pro,自噬体数量分别为(6.24±0.63)、(13.05±1.32)、(8.31±0.84)、(8.55±0.86)和(12.22±1.23)个,磷酸化 Fox O1(p-Fox O1)/Fox O1 比值分别为 0.34±0.04、0.86±0.09、0.48±0.05、0.43±0.05 和0.74±0.08,TXNIP 表达分别为 0.24±0.03、0.62±0.08、0.38±0.04、0.36±0.04和 0.58±0.06,Bcelin-1 表达分别为 1.12±0.12、0.53±0.06、1.02±0.11、1.05±0.11 和 0.62±0.07,p62 表达分 别 为 0.56±0.06、1.56±0.16、0.82±0.09、0.86±0.09 和 1.44±0.15.HG 组的上述指标与空白组比较,HG+Pro组的上述指标与HG组比较,HG+Pro+Fox O1-OE组的上述指标与HG+Pro+OE NC组比较,在统计学上差异均有统计学差异(均P<0.05).结论 Pro通过抑制Fox O1/TXNIP信号通路抑制自噬,改善HG诱导心肌细胞损伤.
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编辑人员丨6天前
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高糖诱导沉默信息调节因子1的氧连乙酰葡萄糖胺糖基化促进心肌细胞凋亡的机制研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)的氧连乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化修饰介导的核因子(NF)-κB信号通路对心肌细胞损伤的调节作用。方法:为了分析O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)对SIRT1功能的影响,将H9c2细胞分为正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG,30 mmol/L)组、HG+对照小干扰RNA(HG+siNC)组、HG+OGT siRNA(HG+siOGT)组、HG+对照质粒(HG+vector)组、HG+OGT过表达质粒(HG+OGT)组,每组6个复孔。为了分析O-GlcNAc糖基化对SIRT1蛋白功能的影响,将H9c2细胞分为NG组、HG组、HG+二甲基亚砜(HG+DMSO)组、HG+OGT抑制剂(HG+Ac-5SGlcNAc)组和HG+OGA抑制剂(HG+NButGT)组,每组6个复孔。为了分析O-GlcNAc修饰位点突变对SIRT1功能的影响,将H9c2细胞分为NG组、HG组、HG+Vector组、HG+SIRT1 WT组和HG+SIRT1 S549A组,每组6个复孔。采用Western blotting检测细胞中SIRT1蛋白表达和O-GlcNAc糖基化修饰水平,以及NF-κB信号通路表达水平,使用2′,7′-二氯荧光素和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测试剂盒检测细胞活性氧(ROS)和凋亡水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平。两组间比较采用 t检验,多组间比较采用单因素方差分析。 结果:与NG组相比,HG组H9c2细胞中SIRT1蛋白降低( P<0.001),OGT的表达水平升高( P<0.001),同时H9c2细胞ROS和凋亡水平增加( P<0.05),NF-κB信号通路介导的炎症反应被激活( P<0.05);与HG+siNC组和HG+DMSO组比较,HG+siOGT组和HG+Ac-5SGlcNAc组H9c2细胞中SIRT1的O-GlcNAc修饰水平均降低( P<0.001),细胞内ROS和凋亡水平降低( P<0.05),NF-κB信号通路介导的炎症反应被抑制( P<0.05);与HG+Vector组和HG+DMSO组比较,HG+OGT组和HG+NButGT组H9c2细胞中SIRT1的O-GlcNAc修饰水平增加( P<0.05),细胞ROS和凋亡水平增加( P<0.05),NF-κB信号通路介导的炎症反应被激活( P<0.05)。与HG+SIRT1 WT组比较,HG+SIRT1 S549A组中H9c2细胞增殖能力降低( P<0.01),细胞ROS和凋亡水平均增加( P<0.01),NF-κB信号通路水平增加( P<0.001)。 结论:高浓度葡萄糖通过增加SIRT1蛋白的O-GlcNAc糖基化修饰水平,抑制SIRT1的蛋白水平和功能,并导致细胞内NF-κB信号通路的激活,增加高糖诱导的细胞炎症反应,促进心肌细胞损伤。
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编辑人员丨6天前
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精神分裂症与端粒的研究进展
编辑人员丨6天前
端粒是存在于真核细胞染色体末端的特殊结构,具有维持染色体完整性和稳定性的重要作用。近年来,端粒常被用来作为整个生物体衰老的标志,且端粒功能障碍与精神分裂症发病相关。有研究显示,精神分裂症患者较健康人白细胞端粒长度缩短,端粒酶活性下降,且已有研究者发现了与精神分裂症相关的端粒酶基因。本文就精神分裂症与端粒长度、端粒酶活性及端粒酶基因的关联研究进行综述,以探讨相关的遗传病理机制。
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编辑人员丨6天前
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端粒酶反转录酶启动子突变在放射性碘难治性甲状腺乳头状癌中的意义
编辑人员丨6天前
目的:通过检测端粒酶反转录酶(TERT)启动子在放射性碘难治性甲状腺乳头状癌(RAIR-PTC)中的突变频率,探讨该基因突变对RAIR-PTC的摄碘特征及碘治疗疗效的影响。方法:对2005年1月至2020年6月在江苏省原子医学研究所附属江原医院进行放射性碘治疗的RAIR-PTC[37例,其中男15例,女22例,年龄(49.8±16.1)岁]和碘治疗有效[40例,其中男13例,女27例,年龄(39.8±10.9)岁]PTC患者的TERT启动子突变及B-Raf原癌基因丝/苏氨酸蛋白激酶(BRAF) V600E突变情况进行回顾性研究,分析不同基因突变类型的摄碘特征及碘治疗疗效差异。采用Fisher确切概率法及两独立样本 t检验进行数据比较。 结果:RAIR-PTC中,TERT启动子突变率为40.54%(15/37),高于碘治疗有效组(0,0/40; P<0.001),均为C228T位点突变,未发现C250T突变;而BRAF V600E突变率(64.86%,24/37)与碘治疗有效组(72.50%,29/40)比较差异无统计学意义( P=0.858)。TERT启动子突变患者年龄更大( t=3.76, P=0.001),远处转移灶不摄碘率更高( P=0.037)。启动靶向治疗者及死亡病例中TERT启动子突变患者分别占2/3和3/4。35例甲状腺球蛋白抗体(TgAb)阴性患者中,11/14的TERT启动子突变者刺激性甲状腺球蛋白(sTg)升高,而无突变组该比例为57.1%(12/21),但差异无统计学意义( P=0.357)。 结论:RAIR-PTC患者中TERT启动子突变率增高,临床工作中可将该基因突变作为预测碘难治的指标之一。
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编辑人员丨6天前
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慢性肾衰竭幼鼠胫骨生长板软骨细胞线粒体自噬增强对软骨细胞凋亡的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)幼鼠胫骨生长板软骨细胞线粒体自噬水平及对细胞凋亡的影响。方法:雄性4周龄Sprague-Dawley(SD)幼鼠40只,按照随机数字表法分为正常对照组(蒸馏水灌胃)和CRF组(腺嘌呤150 mg·kg -1·d -1灌胃),连续灌胃6周后处死幼鼠,X线测量胫骨长度,组织学切片测量比较胫骨生长板宽度,应用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测生长板软骨细胞凋亡率;体外培养正常对照组和CRF组幼鼠胫骨生长板软骨细胞至第3代,应用TUNEL技术检测软骨细胞凋亡率,应用荧光双染技术观测软骨细胞线粒体与自噬溶酶体共定位情况,应用Western印迹法检测线粒体标志蛋白线粒体外膜转位酶(translocase of the outer mitochondrial membrane-20,Tom-20)和自噬标志轻链蛋白-3(light chain-3,LC-3)表达情况,应用透射电镜观察软骨细胞线粒体自噬情况。 结果:与正常对照组相比,CRF组幼鼠胫骨长度较短[(27.32±5.81)mm比(35.43±3.61)mm, t=5.226, P<0.001],生长板相对宽度较窄(0.56±0.19比1.00±0.21, t=6.744, P<0.001),软骨细胞凋亡率较高(17.2%±4.8%比5.1%±3.4%, t=6.505, P<0.001)。CRF组体外培养生长板软骨细胞凋亡率高于正常对照组(11.8%±6.2%比3.1%±1.2%, t=4.357, P<0.001),荧光双染技术结果显示CRF组软骨细胞线粒体与自噬溶酶体出现明显的共定位现象,CRF组软骨细胞LC-3蛋白( t=8.944, P<0.001)及Tom-20蛋白( t=6.708, P<0.001)表达均少于正常对照组,电镜结果显示CRF组软骨细胞内出现较多的自噬囊泡吞噬线粒体并降解的现象。 结论:CRF幼鼠胫骨生长板软骨细胞线粒体自噬水平出现增高现象,导致线粒体减少,引起软骨细胞凋亡、数量减少,最终导致胫骨发育不良。
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编辑人员丨6天前
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尿苷基转移酶通过调节miR132 /212簇的尿苷化影响食管上皮细胞放射敏感性
编辑人员丨6天前
目的:验证末端尿苷基转移酶(TUT4)通过影响miR132/212簇的尿苷化作用影响食管上皮细胞(HEEC)的放射敏感性。方法:本研究通过PCR的方法检测0、2、4、6和8 Gy X射线照射后0、6、18、24和48 h HEEC中TUT4的表达。将细胞分为阴性对照组、下调TUT4表达组(shTUT4组)、单纯6 Gy照射组(6 Gy组)、6 Gy照射+下调TUT4表达组(6 Gy+shTUT4组)分别检测TUT4对细胞放射敏感性、细胞增殖、细胞周期、线粒体损伤、氧自由基产生的影响;通过PCR检测下调TUT4表达对miR132/212尿苷化的影响;克隆形成和增殖实验检测过表达miR132/212及miR132/212+UUU(末端添加3个尿嘧啶的miR132/212)时HEEC的放射敏感性;增殖实验检测在下调TUT4表达且过表达miR132/212及尿苷化miR132/212时HEEC的增殖情况。结果:PCR结果显示,2、4、6和8 Gy X射线照射后TUT4表达增加,差异有统计学意义( t=12.84、62.06、27.86、32.43, P<0.05)。下调TUT4表达可增加HEEC的放射敏感性, D0、 Dq、 SF2值分别为0.79、1.61、0.47,与对照组比较差异有统计学意义( t=13.2、5.85、7.31, P<0.05),放射增敏比(SER D0)为1.41;且经6 Gy照射后,低表达TUT4组细胞增殖减少( t=7.12、13.63, P<0.05)、S期细胞增加( t=11.98, P<0.05)、线粒体损伤增加( t=11.98, P<0.05)、氧自由基产生增加( t=15.65, P<0.05)。进一步研究结果表明,下调TUT4表达可使miR132/212表达增加,miR132/212+UUU表达减少( t=27.90、60.99, P<0.05);而过表达miR132/212和miR132/212+UUU也可影响HEEC的放射敏感性,SER D0分别为1.20、0.71。双重转染实验证明,TUT4低表达且miR132/212过表达细胞的增殖能力较单纯TUT4低表达时更弱( t=4.76、7.65, P<0.05);同时TUT4低表达且过表达miR132/212+UUU时细胞增殖能力较单纯TUT4低表达更强,差异有统计学意义( t=7.22, P<0.05)。 结论:X射线可增加HEEC中TUT4的表达,TUT4可降低HEEC放射敏感性、减轻放射损伤,其机制与miR132/212的尿苷化相关。
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编辑人员丨6天前
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T淋巴母细胞性淋巴瘤/髓系肉瘤合并朗格汉斯细胞组织细胞增生症的临床病理分析
编辑人员丨6天前
目的:探讨T淋巴母细胞性淋巴瘤(T-LBL)/髓系肉瘤(MS)合并朗格汉斯细胞组织细胞增生症(LCH)的临床病理学特征、免疫表型及预后。方法:收集中山大学附属佛山医院和首都医科大学北京友谊医院2013年12月至2019年4月间6例T-LBL/MS合并LCH患者临床及病理资料,采用HE染色、免疫组织化学EnVision法、原位杂交法进行染色分析,检索文献并复习。结果:6例患者中,男性2例,女性4例。4例为T-LBL合并LCH,1例为T-LBL/MS合并LCH,1例为MS合并LCH。患者年龄5~77岁,中位年龄59岁。3例为多发淋巴结内病变,另3例为多发淋巴结及皮肤/肝脾病变。5例显示淋巴结结构破坏,3例可见数个残留萎缩的滤泡。瘤细胞有2种形态,一种为体积中等大小的淋巴样细胞,呈片巢状分布。核圆形、卵圆形,这类细胞主要分布于残留的滤泡旁和副皮质区。另一种为组织细胞样细胞,体积大,胞质丰富淡染或嗜双色性。核卵圆形、不规则形,呈折叠状,主要分布于淋巴结边缘窦、髓窦和滤泡间区。所有病例的背景嗜酸性粒细胞浸润不明显。中等大小淋巴样细胞表现为末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)、CD99、CD7阳性,不同程度表达CD34、髓过氧化物酶(MPO)、CD2、CD3,Ki-67阳性指数多在30%~50%之间。而组织细胞样细胞表现为CD1a阳性、S-100蛋白阳性、Langerin表达不一,不同程度表达CD163/CD68,不表达T和B细胞标志物,Ki-67阳性指数多在10%~20%之间。所有病例均无EB病毒感染。随访4例(随访时间6~63个月,中位时间18.5个月),其中1例死亡,3例带病生存。结论:T-LBL/MS合并LCH是一种少见的混合型幼稚淋巴造血系统疾病,多发生于皮肤、淋巴结,临床进展凶猛,预后差,故充分认识同一组织内两种病变成分有助于精准诊断与治疗。
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编辑人员丨6天前
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分化型甲状腺癌相关基因的研究进展
编辑人员丨6天前
近年来,随着高分辨率超声和甲状腺细针抽吸细胞学检查技术的应用,甲状腺癌的检出率逐渐升高。虽然分化型甲状腺癌(DTC)患者多数预后较好,但也有部分患者易发生颈部淋巴结转移或肺、骨、脑等远处转移,甚至出现病灶的失分化,从而导致预后不良。目前,国内外许多研究结果表明,基因突变在DTC的发生、发展以及预后等方面发挥着重要的作用,且相关基因的抑制剂可以为一些病灶失分化的患者带来新希望,对临床医师的决策具有重大指导意义。笔者对目前DTC中常见的基因突变的机制及其临床意义进行综述。
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编辑人员丨6天前
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汞致肾病综合征大鼠肾损伤及细胞凋亡
编辑人员丨6天前
目的:探究汞致肾病综合征大鼠肾损伤与细胞凋亡的关系,分析其可能的发病机制。方法:将48只健康雄性SPF级BN(Brown-Norway)大鼠采用随机数字表法分成对照组和染毒组,染毒组分别于第1、3、5、7、11、13天以1 mg/kg体重腹部皮下注射HgCl 2(1mg/ml)造成肾病综合征模型,对照组注射与染毒组等体积的NaCl。于第14、21、28、35天处死部分大鼠,进行血清肾损伤指标尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)的检测,肾组织汞含量检测;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫荧光检测细胞色素C(Cyt C)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测线粒体通路凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)]、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白[p38MAPK、细胞外调节蛋白激酶(ERK)]的表达。 结果:与对照组比较,染毒组7、21、28 d大鼠血清中BUN含量明显增加,21d CRE含量明显增加,28、35 d CRE含量明显降低,14~35 d脏器系数和肾汞含量明显升高,差异均有统计学意义( P<0.05)。与对照组比较,染毒组14~35 d大鼠均出现肾小球基质增多、肾小管扩张等病变及明显的肾细胞凋亡,染毒组14、21 d大鼠肾细胞Cyt C表达明显,多位于肾小管。与对照组比较,染毒组21 d大鼠BAX含量明显升高,14、21 d大鼠Caspase 3含量明显升高,35 d大鼠p38 MAPK含量明显升高,差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:HgCl 2可能通过细胞凋亡的线粒体通路致肾细胞损伤,并引起肾病综合征,而MAPK信号通路可能调控该过程,发挥抑制凋亡作用。
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编辑人员丨6天前
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老年呼吸窘迫综合征患者相关急性肾损伤危险因素分析
编辑人员丨6天前
目的:探讨老年急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者急性肾损伤(AKI)的发生、危险因素及预后。方法:回顾性分析2016年7月至2019年7月在连云港市第二人民医院呼吸内科、急诊及老年科诊治的发生ARDS老年患者的临床资料,根据改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)诊断标准分为AKI组和无AKl组,比较两组患者临床指标差异。采用二元Logistic回归分析其相关危险因素,采用Kaplan-Meier曲线分析不同分期AKI对ARDS患者预后的影响,COX比例风险模型分析影响ARDS患者预后不良危险因素。结果:共纳入432例ARDS老年患者,年龄(74.7±8.8)岁,其中129例(29.9%)发生AKI。AKI组与无AKI组单因素分析发现AKI组年龄偏高,合并高血压史、糖尿病史、房颤病史比例高,意识障碍、行机械通气发生率高,平均动脉压偏低(均 P<0.05)。ARDS中-重度患者AKI发生率升高( P<0.001)。AKI组基础肌酐、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、N末端B型利钠肽原(NT-pro-BNP)水平较高(均 P<0.01),炎症指标中性粒/淋巴细胞比值(NLR)( P=0.003)及D-2聚体( P<0.001)、超敏C反应蛋白(hsCRP)( P=0.040)升高明显。AKI组尿蛋白( P<0.001)、低射血分数( P= 0.040),胸片或CT检查示胸腔积液( P= 0.003)阳性率升高。Logistic回归分析提示高血压( OR:1.789,95% CI:1.105~2.894, P=0.018)、糖尿病( OR:1.976,95% CI:1.076~3.628, P=0.028)、意识障碍( OR:2.531,95% CI:1.203~5.251, P=0.014)、机械通气( OR:3.421,95% CI:1.521~7.694, P=0.003)、基础肌酐( OR:1.014,95% CI:1.002~1.027, P=0.024)、AST>40 U/L( OR:2.495,95% CI:1.431~4.348, P=0.001)及NLR( OR:1.015,95% CI:1.001~1.029, P=0.042)是ARDS-AKI独立风险因素。Kaplan-Meier生存曲线显示不同AKI分期对预后影响总体比较差异有统计学意义( χ2=19.790, P<0.001);组间比较显示,与无AKI组比较,AKI(1期)患者预后不良差异无明显统计学意义( χ2=2.188, P= 0.139)。与无AKI组、AKI(1期)比较,AKI(2-3期)患者预后不良风险增加(分别为 χ2=18.268, P<0.001; χ2=6.347, P= 0.012)。多变量Cox比例风险模型分析结果表明,AKI( HR:1.858,95% CI:1.207~2.861, P=0.005)和中-重度ARDS( HR:1.815,95% CI:1.167~2.822, P=0.008)是老年ARDS预后不佳独立危险因素。 结论:在老年ARDS患者中高血压、糖尿病、意识障碍、机械通气、AST、基础肌酐值、NLR是ARDS-AKI独立风险因素,中-重度ARDS、AKI(2-3期)患者预后不良风险增加。
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编辑人员丨6天前
