总结张发荣教授运用角药分期治疗甲状腺功能亢进症的经验.认为邪热耗伤气阴是甲状腺功能亢进症的病机关键,初期肝郁化火,邪热内盛,耗气伤阴;中期火热炽盛,痰瘀互结,气阴始亏;后期气阴两虚,病久及肾,肝肾亏虚.治疗时,注重扶正祛邪,顾护气阴,分期辨证施治,根据不同时期病机特点总结出8组角药.初期常以柴胡-香附-郁金疏肝解郁,龙胆草-黄芩-栀子清肝泻火;中期常以夏枯草-白花蛇舌草-半枝莲清热散结,黄药子-猫爪草-山慈菇化痰散结,丹参-玄参-苦参活血消瘿;后期常以党参-白术-薏苡仁健脾益气,麦冬-北沙参-五味子养阴宁心,黄芪-黄精-地榆养阴益肾.

目的 采用网络药理学和体外细胞实验探究夏枯草-半枝莲药对抗乳腺癌的作用机制.方法 运用中药系统药理学数据库与分析平台筛选出夏枯草-半枝莲药对的有效成分和靶点;利用GeneCards、OMIM数据库找到乳腺癌靶点,进而构建药物-活性成分-关键靶点网络和蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络;运用R语言进行GO功能和KEGG通路富集分析以及生存分析;将筛选出的活性成分和核心靶点进行分子对接验证;采用CCK-8法检测细胞活力;EdU、流式实验检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot法检测p-AKT1、AKT1、β-catenin和c-MYC的蛋白表达水平.结果 通过数据分析共筛选出有效成分36个,交集靶点105个,其核心成分是槲皮素、木犀草素、山奈酚、汉黄芩素、黄芩素;通过PPI和生存分析得出其关键靶点是AKT1、ESR1、CASP3、MYC;GO分析共包含4 303条富集结果,KEGG分析共包含232条通路;分子对接显示核心成分与关键靶点均具有较强的结合能力.细胞实验证明,核心活性成分槲皮素可以抑制乳腺癌细胞的增殖并促进其凋亡(P＜0.05),下调p-AKT1、β-cate-nin和c-MYC蛋白的表达水平(P＜0.05).结论 夏枯草-半枝莲药对中活性成分槲皮素可能通过AKT1/β-catenin信号通路来发挥作用,为其治疗乳腺癌的作用机制研究提供了科学参考.

目的 比较枯芩、条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子及转录因子维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响.方法 50只健康SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组、枯芩组、条芩组和美莎拉嗪组,每组10只.采用高脂高糖饲料喂养+高度白酒灌胃+5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)联合诱导法,建立湿热型UC大鼠模型;各组分别于造模第1天开始灌胃给药,枯芩组、条芩组给药剂量均为5.25 g·kg-1·d-1,美沙拉嗪组给药剂量为0.266 g·kg-1·d-1,正常组、模型组灌服等体积生理盐水.连续给药28 d.给药结束后,麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清,Elisa法检测大鼠血清白介素-6(IL-6)、IL-17A、IL-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;分离脾脏和结肠组织,采用流式细胞术检测脾脏Th17、Treg细胞比例,计算Th17/Treg比值;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3 mRNA表达水平;免疫蛋白印迹(western blot)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3 蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P＜0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β1、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.01);给药28 d后,与模型组比较,各给药组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的降低(P＜0.05或P＜0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β1、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的升高(P＜0.05或P＜0.01);与枯芩组比较,条芩组、美沙拉嗪组在降低IL-6、IL-17A,增加IL-10、IL-35、TGF-β1 水平,调节ROR-γt mRNA和蛋白表达方面(P＜0.05或P＜0.01)均优于枯芩组.结论 枯芩、条芩可能通过调控转录因子ROR-γt、Foxp3表达,恢复Th17/Treg免疫失衡,抑制炎症反应,从而保护肠道黏膜屏障受损,发挥治疗湿热型UC的作用.

目的:明确黄芩斑枯病病原菌多主棒孢Corynespora cassiicola的生物学特性,筛选高效安全的杀菌剂,科学防治黄芩斑枯病.方法:通过菌落生长速率法评价碳源、氮源、温度、培养基、pH、光照对多主棒孢菌落生长的影响,以及 5 种杀菌剂对病原菌的室内毒力.结果:多主棒孢最适生长条件为胡萝卜培养基外源添加可溶性淀粉和蔗糖作为碳源、蛋白胨作为氮源、pH为 6、温度为 30℃.菌丝致死条件为 51℃处理 10 min,孢子致死条件为 54℃处理 10 min.98%多菌灵对多主棒孢的毒力最强,半数效应浓度(EC50)为 0.07 mg·L-1;其次是 98%咯菌腈、98%咪鲜胺和 98%吡唑醚菌酯,EC50 分别为 0.10、0.18、3.06 mg·L-1;98%嘧菌酯对多主棒孢的毒力最弱,EC50 为 632.39 mg·L-1.结论:黄芩斑枯病病原菌适生范围较广,在多种碳源、氮源、培养基及pH条件下均可生长,在中性偏弱酸、较高温条件下生长速度较快.多菌灵和咯菌腈对多主棒孢表现出较强的抑制作用,可考虑将其用于黄芩斑枯病的田间防治.

目的 比较枯芩、条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型的药效学差异.方法 50只健康SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组、枯芩组、条芩组和美莎拉嗪组,每组10只.采用高脂高糖饲料喂养+高度白酒灌胃+ 5%葡聚糖硫酸钠(DSS)联合诱导法,建立湿热型UC大鼠模型;各组分别于造模第1天开始灌胃给药,枯芩组、条芩组给药剂量均为5.25 g·kg-1·d-1,美沙拉嗪组给药剂量为0.266 g·kg-1·d-1,正常组、模型组灌服等体积生理盐水.连续给药28 d.观察大鼠一般情况;评价大鼠体质量变化和疾病活动指数(DAI)评分;称取大鼠结肠质量,量取结肠长度,并计算结肠单位长度质量;进行大鼠结肠组织HE染色和PAS染色,观察大鼠结肠组织病理学变化;Elisa法检测大鼠血清白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β1(TGF-β1)炎症因子水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠的体质量显著降低,结肠长度显著缩短,DAI评分、结肠质量、结肠单位长度质量和血清IL-6、TNF-α、IL-1β水平均显著增加,TGF-β1 水平显著降低(P＜0.01);结肠组织上皮层发生脱落,边缘散乱,隐窝不清晰,黏膜层有水肿,炎症细胞浸润且入侵黏膜下层,肠腺紊乱.与模型组比较,枯芩组、条芩组、美沙拉嗪组大鼠上述指标和相关症状均有明显改善(P＜0.05,P＜0.01);与枯芩组比较,条芩组、美沙拉嗪组在增加结肠单位长度质量、降低DAI评分、改善炎症因子水平方面均优于枯芩组(P＜0.05或P＜0.01).结论 枯芩、条芩提取物对湿热型UC大鼠均有较好的改善作用,且条芩优于枯芩.

目的:分析不同类型的黄芩药材性状特征与其水溶性成分的相关性,寻找评价黄芩药材品质优劣的科学依据.方法:收集各地黄芩药材共 131 批次,采用性状观察、显微检测荧光强度以及紫外-可见分光光度法、HPLC法测定黄芩的浸出物、淀粉及核苷类水溶性成分的含量,分析各项检测指标之间的相关性.结果:黄芩药材可分为四种类型,各类型黄芩的性状差异明显.黄芩的荧光灰度值与淀粉、水溶性浸出物含量呈显著正相关;淀粉含量与水溶性浸出物呈强正相关;鸟苷含量与腺苷含量存在相关性.四种黄芩类型中,以子芩为主的山西型栽培黄芩核苷类成分含量最高;以枯芩为主的野生型黄芩的淀粉及水溶性浸出物含量最低,且枯芩从根头部到尾部淀粉含量逐渐降低.结论:红色荧光显微技术可以定性表征黄芩的淀粉含量;黄芩生长时间越久,环境越恶劣,枯芩越多,淀粉及水溶性浸出物含量越少;子芩型黄芩与枯芩型黄芩水溶性成分差异显著.该研究结果可为黄芩药材品质评价以及临床使用提供参考.

目的 探讨黄芩苷在保护2型糖尿病大鼠肠黏膜屏障损伤方面的作用机制.方法 将雄性SD大鼠随机分为正常对照组(给予低脂饮食,经口灌胃给予等量的0.9％NaCl)、模型组(高脂饮食联合30 mg·kg-1链脲佐菌素,经口灌胃给予等量的0.9％NaCl)和黄芩苷组(模型建立成功后经口灌胃给予50 mg·kg-1黄芩苷),给药4周.观察大鼠的代谢水平、肠黏膜屏障损伤、肠道微生物和炎症状态的变化.结果 对照组、模型组和黄芩苷组大鼠血糖水平分别为(6.38±0.37)、(20.62±0.73)和(14.89±8.62)mmol·L-1,血清胰岛素分别为(21.03±0.92)、(17.06±0.65)和(19.08±0.52)mU·L-1,总胆固醇(TC)分别为(0.95±0.16)、(1.63±0.28)和(1.12±0.13)mmol·L-1,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)分别为(0.76±0.13)、(1.03±0.05)和(0.85±0.02)mmol·L-1,白细胞介素-1β(IL-1β)分别为(22.61±3.15)、(108.37±13.45)和(61.82±3.37)pg·mL-1,白细胞介素-6(IL-6)分别为(57.47±9.78)、(212.61±36.77)和(110.34±13.27)pg·mL-1,模型组上述指标与对照组比较,黄芩苷组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与模型组比较,黄芩苷组大鼠肠道菌群中屎肠球菌、乳酸双球菌和拟杆菌属的细菌数量均显著增加,黄芩苷组枯草芽孢杆菌、棒状杆菌的细菌数量均显著减少(均P＜0.05).结论 黄芩苷可通过调节肠道微生物和抑制炎症来保护2型糖尿病大鼠的肠黏膜屏障,对于预防和治疗相关疾病具有潜在的临床应用价值.

"中枯而飘"是枯芩药材重要的性状鉴定特征,该文旨在利用多组学技术阐明枯芩"中枯而飘"性状特征的科学内涵.该研究运用代谢组学、转录组学技术并结合主成分分析(PCA)及偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)等多元统计方法,系统比较了枯芩韧皮部、外层木质部、近枯心木质部在化学成分和基因表达方面的差异.研究结果表明,三者的黄酮苷及苷元含量存在显著差异,相较于韧皮部和外层木质部,近枯心木质部中黄芩苷、去甲汉黄芩素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷等黄酮苷类成分含量显著较低,而 3,5,7,2',6'-五羟基二氢黄酮、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A等黄酮苷元类成分含量显著较高.三者的差异表达基因主要集中在苯丙烷代谢、类黄酮生物合成、ABC转运蛋白、植物MAPK信号转导通路等KEGG途径.该文系统地阐明了高年限黄芩"中枯而飘"性状特征的物质基础,即近枯心木质部的黄酮苷元含量明显升高,黄酮苷水解、木间木栓合成、程序性凋亡等代谢通路基因表达显著上调,为引导枯芩药材的高品质生产提供了理论依据.

目的 研究木蝴蝶治疗咽炎的物质基础,优化木蝴蝶的提取工艺.方法 利用网络药理筛选木蝴蝶治疗咽炎的有效成分,通过分子对接技术进行验证;采用设计空间法优化木蝴蝶的提取工艺;并按木蝴蝶的最佳提取工艺制备木蝴蝶提取物,通过96孔板法验证木蝴蝶提取物的抗菌活性.结果 经网络药理学获得槲皮素、黄芩素等有效成分,分子对接结合能均＜-5.0 kJ/mol;经设计空间法获得木蝴蝶的最佳提取工艺:加乙醇量为30倍、浸泡时间为30 min、乙醇浓度为30％～70％、提取时间为30～90min、提取次数为1～2次;经96孔板法获得木蝴蝶提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的MIC值为0.3～0.7 mg/mL,MBC值为10～40 mg/mL.结论 网络药理学表明木蝴蝶治疗咽炎的有效成分为黄酮类成分,分子对接构象稳定;设计空间法表明木蝴蝶的最佳提取工艺符合生产实际;96孔板法表明木蝴蝶提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌具有较强的抗菌活性,为进一步开发利用木蝴蝶提供思路.

目的:建立三草安神胶囊的质量标准.方法:采用TLC法对三草安神胶囊中缬草、夏枯草、黄芩、黄连进行定性鉴别;采用HPLC法对三草安神胶囊中的迷迭香酸进行定量分析.色谱柱:Hypersil ODS2 C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%三氟乙酸(B)(30:70),等度洗脱,流速:1.0 ml·min-1,柱温:25℃,检测波长:330 nm,进样量:20μl.结果:TLC鉴别色谱中斑点清晰,阴性无干扰;迷迭香酸进样量在0.105~2.104μg(r=0.9993)范围内线性关系良好,平均回收率为99.5%,RSD为0.80%(n=6).结论:该方法简便、准确、可靠,可用于三草安神胶囊的质量控制.