目的:建立丹参-当归药对配伍前后HPLC指纹图谱及多指标成分含量测定方法，探讨丹参-当归配伍对主要化合物溶出的影响。方法:制备丹参、当归单煎及共煎溶液，采用Eclipse XDB-C 18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以0.1%磷酸水溶液-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 ml/min，柱温35 ℃，检测波长280 nm，建立丹参-当归药对配伍前后HPLC指纹图谱，求取指纹图谱共有模式，进行色谱峰归属；测定丹参素、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮Ⅱ A、阿魏酸、绿原酸、洋川芎内酯9种成分含量，分析配伍前后各成分溶出度变化。 结果:HPLC指纹图谱及含量测定方法精密度良好，溶液中各待测成分在48 h内稳定，各色谱峰 RSD值均<5.0%，9种成分在各自线性范围内均有良好的线性关系，回收率均符合相关规定，各样品指纹图谱相似度均>0.9；丹参-当归药对配伍后共标定出17个共有峰，其中10个成分来自丹参，7个成分来自当归，该色谱条件下未发现有新化合物生成；丹参-当归药对配伍共煎后，丹参中迷迭香酸、丹酚酸B及丹参素平均溶出度较丹参单煎组减少（ P<0.05或 P<0.01）；丹参中咖啡酸平均溶出度较丹参单煎组增加（ P<0.01）；当归中绿原酸及阿魏酸平均溶出度较当归单煎组增加（ P<0.05或 P<0.01）；当归中洋川芎内酯平均溶出度与单煎组比较差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:丹参-当归药对配伍共煎后HPLC指纹图谱特征峰均可归属于丹参与当归，该色谱条件下未发现新化合物生成，对指标性成分的溶出度有显著影响。

目的:建立基于标准汤剂三大质量指标的紫苏梗配方颗粒质量评价方法。方法:收集18批不同产地的紫苏梗药材，根据技术要求，制备18批紫苏梗标准汤剂及3批配方颗粒，计算出膏率；采用超高效液相色谱法（UPLC）测定咖啡酸和迷迭香酸含量、建立紫苏梗标准汤剂和配方颗粒的特征图谱，并计算二者特征图谱的相似度。结果:紫苏梗标准汤剂出膏率为（7.16±1.97）%。3批配方颗粒的出膏率分别为5.52%、5.25%和5.34%；标准汤剂的咖啡酸与迷迭香酸平均总含量为（12.06±3.37）mg/g；3批配方颗粒的咖啡酸与迷迭香酸总含量分别为5.52、5.82、5.77 mg/g。标准汤剂和配方颗粒特征图谱均标识出7个共有特征峰，指认出其中3个特征峰，分别为咖啡酸、 N-阿魏酰真蛸胺、迷迭香酸。配方颗粒与标准汤剂对照特征图谱的相似度分别为1.000、0.995、0.997。 结论:3批配方颗粒的质量指标与标准汤剂相一致，该方法可为紫苏梗配方颗粒质量标准的制定提供依据。

目的:建立基于标准汤剂3大质量指标的夏枯草配方颗粒质量评价方法。方法:收集14批不同产地的夏枯草药材，根据技术要求制备14批夏枯草标准汤剂及3批配方颗粒，计算出膏率；采用超高效液相色谱法（UPLC）建立夏枯草标准汤剂和配方颗粒指纹图谱，计算配方颗粒与标准汤剂指纹图谱的相似度，测定迷迭香酸含量并计算转移率。结果:标准汤剂平均出膏率为（12.59±2.32）%，3批配方颗粒的出膏率分别为11.14%、10.78%和10.39%；标准汤剂迷迭香酸平均含量为（18.99±9.74）mg/g；平均转移率为（60.58±7.87）%；3批配方颗粒含量分别为7.40、7.49、7.09 mg/g，转移率分别为52.06%、50.10%和50.40%。标准汤剂和配方颗粒指纹图谱均标识出9个共有指纹峰，通过对照品比对，指认其中2个指纹峰分别为迷迭香酸和咖啡酸。配方颗粒与标准汤剂对照指纹图谱的相似度分别为0.954、0.973和0.952。结论:3批配方颗粒的质量指标与标准汤剂一致，该方法可为夏枯草配方颗粒质量标准的制定提供依据。

目的:研究迷迭香酸(RA)对高糖诱导人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)血管形成及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路相关蛋白表达的抑制作用。方法:根据不同处理方法将体外培养的HRMEC分为对照组、高糖组、高糖+低浓度RA组、高糖+中浓度RA组、高糖+高浓度RA组，分别采用常规培养基、含30 mmol/L D-葡萄糖培养基、含30 mmol/L D-葡萄糖+25 μmol/L RA培养基、含30 mmol/L D-葡萄糖+50 μmol/L RA培养基和含30 mmol/L D-葡萄糖+100 μmol/L RA培养基进行培养。采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞增生情况；采用Transwell法检测细胞迁移能力；采用Matrigel法检测细胞管腔形成能力；采用Western blot法检测HRMEC中NLRP3炎症小体信号通路关键分子NLRP3、凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白表达；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测细胞培养上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-18的表达。结果:对照组、高糖组、高糖+低浓度RA组、高糖+中浓度RA组和高糖+高浓度RA组细胞增生率分别为(100.00±0.92)%、(163.56±1.46)%、(152.29±2.90)%、(147.72±2.22)%和(132.47±0.74)%，迁移细胞数分别为(37.67±9.02)、(117.33±7.23)、(78.67±4.04)、(65.33±4.16)和(52.67±6.81)个，细胞管腔形成数分别为(45.00±4.58)、(95.00±9.54)、(84.67±1.53)、(71.00±3.61)和(60.00±1.00)个，各组间细胞增生率、迁移细胞数及管腔形成数总体比较，差异均有统计学意义( F＝537.07、64.63、45.58，均 P<0.001)；与对照组相比，高糖组、高糖+低浓度RA组、高糖+中浓度RA组及高糖+高浓度RA组的细胞增生率明显升高，迁移细胞数及管腔形成数均明显增多，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与高糖组相比，各浓度RA组的细胞增生率明显降低，迁移细胞数和管腔形成数均明显减少，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；随着RA浓度的升高，细胞增生率明显降低，迁移细胞数和管腔形成数均明显减少，各浓度RA组间细胞增生率、迁移细胞数和管腔形成数比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。各组间细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量以及细胞培养上清液中IL-1β和IL-18质量浓度总体比较，差异均有统计学意义( F＝145.12、422.82、463.79、2 019.96、33 406.97，均 P<0.001)；与对照组相比，高糖组、高糖+低浓度RA组、高糖+中浓度RA组及高糖+高浓度RA组细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量以及细胞培养上清液中IL-1β和IL-18质量浓度均明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与高糖组相比，各浓度RA组上述蛋白和细胞因子表达水平均降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；随着RA浓度的升高，各蛋白和细胞因子表达水平均降低，各浓度RA组间各蛋白和细胞因子表达水平比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:RA可抑制高糖诱导的HRMEC增生、迁移、血管形成和NLRP3炎症小体信号通路活化。

目的 研究迷迭香酸(RosA)体外抗水痘-带状疱疹病毒(VZV)的作用及其机制.方法 采用不同浓度的RosA(400、200、100、50μmol/L)处理VZV感染的Vero细胞,采用细胞病变效应(CPE)法和MTT法评价RosA体外抗VZV的作用以及对细胞的毒性,采用RT-qPCR法检测RosA对VZV ORF36 mRNA表达的影响.结果 当RosA浓度为100、200、400μmol/L时,RosA对VZV的抑制率分别为55.88％、78.99％和98.19％,其抑制效果与RosA浓度呈正比.当RosA浓度为400μmol/L时,RosA对VZV的灭活率为85.44％,灭活作用的EC50为185.95μmol/L,RosA的CC50为2362.10μmol/L,EC50为63.02μmol/L,SI为37.48.当RosA浓度为100、200、400μmol/L时,VZV ORF36 mRNA的表达量分别下调了48.2％、85.9％、97.2％.结论 RosA在体外具有抗VZV的作用,其抗病毒作用与RosA抑制VZV ORF36的转录有关.

目的 制备20批不同产地的肾茶饮片标准汤剂,并建立其质量标准.方法 按标准汤剂制备方法和要求,制备20批肾茶饮片的标准汤剂.考察其出膏率、迷迭香酸含量及其转移率,并建立高效液相色谱(HPLC)特征图谱.结果 20批肾茶饮片标准汤剂的出膏率、迷迭香酸含量及其转移率分别为18.42%～22.38%,2.30～8.03 mg/g,36.89%～57.31%,拟定出膏率、迷迭香酸含量及转移率的标准分别为14.0%～27.0%,2.0～9.2 mg/g,31.0%～64.0%.HPLC特征图谱有7个共有峰,其中3个共有峰分别为咖啡酸、迷迭香酸和紫草酸,且特征图谱相似度均大于0.970.结论 本研究建立的肾茶饮片标准汤剂的质量标准准确、可靠,能为肾茶饮片配方颗粒及其相关制剂质量研究提供参考和依据.

丹参酚酸类化合物是丹参发挥保护心血管系统、抗肿瘤与抗纤维化等多种药理作用的一类关键物质基础.以合成丹酚酸A、丹酚酸B和迷迭香酸等丹参酚酸类化合物为目标的微生物细胞工厂的构建,可以实现丹参酚酸类化合物异源高效合成,缓解临床对丹参药材的用药压力.本文就丹参酚酸类化合物的合成生物学、生物合成关键催化酶及其代谢调控等研究现状进行了归纳分析,以期为丹参酚酸类化合物的高效合成与资源应用提供科学依据.

目的 构建唾液酸免疫球蛋白凝集素1(Siglec-1)原核表达载体,表达纯化Siglec-1重组蛋白,构建超滤亲和-液质联用技术(UF-LC-MS)筛选Siglec-1蛋白天然配体.方法 利用DNA重组技术构建Siglec-1重组蛋白原核表达载体,转化到BL21(DE3)感受态细胞中表达Siglec-1重组蛋白,通过Ni柱亲和色谱柱进行蛋白纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分析Siglec-1重组蛋白纯度.建立UF-LC-MS技术研究金银花、甘草、迷迭香、菊苣中6个主要组分绿原酸、迷迭香酸、阿魏酸、甘草酸、甘草次酸、菊苣酸对Siglec-1蛋白的亲和力,通过比较样品组和蛋白变性组超滤液中待测物的峰面积,计算各待测物特异结合率.结果 经双酶切及测序鉴定证明,重组表达质粒pET-22b-Siglec-1-His构建正确;纯化的人Siglec-1重组蛋白质量分数达90％以上;建立了UF-LC-MS筛选体系,筛选出甘草次酸可与Siglec-1蛋白特异性结合.结论 成功表达了高纯度、高产量的人Siglec-1重组蛋白,筛选出甘草次酸可与Siglec-1蛋白特异性结合.

目的 基于网络药理学及分子对接探讨养血清脑颗粒(四物汤加味)治疗高血压的作用机制.方法 以课题组前期对养血清脑颗粒的化学成分分析结果作为活性化合物筛选的基础,以口服生物利用度≥30%及类药性≥0.18 为筛选条件,结合文献补充入血成分.利用TCMSP平台、化学专业数据库和SWISS数据库预测养血清脑颗粒潜在活性化合物的作用靶点.通过GeneCards及DiGSeE数据库获得高血压疾病相关靶点.将高血压疾病相关靶点与养血清脑颗粒潜在活性化合物的作用靶点取交集(共同靶点),即为养血清脑颗粒治疗高血压的潜在作用靶点.将潜在作用靶点与养血清脑颗粒的潜在活性化合物进行匹配,得养血清脑颗粒的降压活性化合物.通过STRING数据库对养血清脑颗粒治疗高血压的潜在作用靶点进行PPI分析,并根据度值筛选出核心靶点.采用DAVID数据库对核心靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析.选择度值排前 6 位的核心靶点作为对接靶蛋白,分别与降压活性化合物进行分子对接验证.结果 得到养血清脑颗粒 32 个潜在活性化合物,161 个活性化合物作用靶点,1 539 个高血压疾病相关靶点,取交集后得到 88 个养血清脑颗粒治疗高血压的潜在作用靶点(共有靶点),涉及 29 个降压活性化合物.PPI分析筛选出 14 个核心靶点:PPARG、ACHE、IL4、CCL2、JUN、NOS3、APP、IL1B、CAT、PTGS2、CASP3、TP53、TNF、IL6,涉及 158 个GO条目、13 条信号通路.通过分子对接得到绿原酸、迷迭香酸、芍药苷、儿茶酸、芦荟大黄素等 5 个关键活性成分,分别与PTGS2、CASP3、TNF、CAT、TP53、IL6 结合稳定.结论 养血清脑颗粒可能通过绿原酸、迷迭香酸等关键活性成分,作用于PTGS2、CASP3 等核心靶点,调控TNF信号通路、MAPK信号通路、Toll样受体信号通路等关键通路,通过抗炎作用发挥治疗高血压的作用.

目的 对肾茶(Clerodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li)地上部分的化学成分进行研究,进一步丰富其物质基础.方法 采用加热回流提取法对肾茶的干燥地上部分进行提取,联合应用硅胶、ODS及高效液相色谱等多种色谱法对肾茶地上部分提取物的化学成分进行分离纯化,结合圆二色光谱、核磁、质谱等波谱技术以及化学反应的方法,鉴定化合物的结构,确定其绝对构型.结果 从肾茶地上部分分离鉴定了7 个丹参素衍生物,分别为(R)-迷迭香酸(1)、(R)-迷迭香酸甲酯(2)、(R)-迷迭香酸乙酯(3)、2R-羟基-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯(4)、2R-羟基-3-(3,4-二羟基苯基)丙酸(5)、2R-羟基-3-(3,4-二羟基苯基)丙酸甲酯(6)和 2R-羟基-3-(3,4-二羟基苯基)丙酸乙酯(7).结论 化合物4 为首次从肾茶属植物中分离得到.此外,发现对于α-羟基羧酸类化合物,即使是只有一个手性中心,也不能仅仅通过旋光值的比对确定其绝对构型.本文所提供的方法为该类成分构型的研究提供了借鉴.