目的:探讨人乳头瘤病毒（HPV）16早期基因E2和E6与核不均一核糖核蛋白（hnRNP）E2在宫颈癌变中的作用及其交互效应。方法:研究对象来源于课题组在山西省介休市建立的"自然人群宫颈病变队列"，以2014年6—9月经病理学确诊的正常宫颈（NC）女性、低度宫颈上皮内瘤变（CIN Ⅰ）、高度宫颈上皮内瘤变（CIN Ⅱ/Ⅲ）以及同期在山西医科大学第二医院确诊的宫颈鳞状细胞癌（SCC）病例为研究对象。共纳入257名研究对象，NC、CINⅠ、CIN Ⅱ/Ⅲ、SCC组分别为67名（26.07%）、69例（26.85%）、68例（26.46%）、53例（20.62%）。采用问卷调查收集人口学特征、生活卫生习惯及宫颈病变相关信息，并采集宫颈脱落细胞和宫颈活检组织，检测HPV16的感染、hnRNP E2、HPV16 E2和E6的蛋白表达水平。根据NC组的hnRNP E2、HPV16 E2、E6蛋白表达量及E2/E6比值的 M值，将研究对象分为高、低表达组/比值组，采用多因素logistic回归模型分析HPV16早期基因E2和E6、hnRNP E2与宫颈癌变的关联，并应用广义多因子降维模型（GMDR）评价其交互作用。 结果:NC、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ/Ⅲ、SCC组的年龄分别为（47.00±9.07）、（47.64±7.35）、（46.37±8.67）和（51.26±8.03）岁。多因素logistic回归模型分析结果显示，HPV16 E2低表达、E6高表达及E2/E6低比值可导致CIN Ⅱ/Ⅲ[ OR（95 %CI）值分别为11.11（1.63~75.56）、8.00（1.28~50.04）、9.75（1.22~77.72）]和SCC[ OR（95 %CI）值分别为14.22（2.11~95.88）、10.33（1.67~64.00）、12.38（1.56~97.91）]的患病风险增加；hnRNP E2低表达可导致CIN Ⅱ/Ⅲ、SCC风险增加[ OR（95 %CI）值为3.35（1.39~8.10）、5.53（1.54~19.88）]。GMDR模型交互作用分析结果显示，hnRNP E2低表达、HPV16 E2低表达、HPV16 E6高表达在CIN Ⅱ/Ⅲ和SCC组均存在交互作用（ P值均<0.05）。 结论:HPV16早期基因的异常表达和hnRNP E2低表达均可能增加宫颈癌变的发病风险，且在宫颈癌变的发生发展中存在交互作用。

目的:探讨水通道蛋白3（AQP3）在皮肤光老化过程中的作用及机制。方法:将正常人皮肤成纤维细胞（NHDF）分为NHDF组（未转染）、AQP3 cDNA组（转染AQP3 cDNA）、AQP3 siRNA组（转染AQP3 siRNA）、核内不均一核糖核蛋白Q（hnRNPQ）cDNA组（转染hnRNPQ cDNA）、hnRNPQ siRNA组（转染hnRNPQ siRNA）、AQP3-hnRNPQ cDNA组（转染AQP3 cDNA和hnRNPQ cDNA）、AQP3-hnRNPQ siRNA组（转染AQP3和hnRNPQ siRNA）、cDNA空载体组（转染cDNA空载体）、siRNA空载体组（转染siRNA空载体）。用长波紫外线（UVA，10 J·cm -2·d -1）连续照射已经转染或未转染的NHDF 3 d来建立细胞衰老模型，同时以未接受UVA照射的NHDF作为对照。用细胞计数法评估各实验组细胞增殖活性，衰老相关-β半乳糖苷酶染色试剂盒对各实验组进行染色来评估HDF的衰老水平，用荧光素酶报告基因技术检测p53转录调控活性，用Western印迹分析NHDF中AQP3、hnRNPQ及衰老相关蛋白p53、p21的表达水平。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用ANOVA检验。 结果:用UVA连续照射各组NHDF 3 d后，NHDF中p53、p21的表达水平和β半乳糖苷酶阳性细胞百分率明显高于未照射的对照组（ P<0.05），但是AQP3的表达水平和照射后第5、6、7天细胞增殖活性明显低于对照组（ P<0.05）。在接受UVA连续照射3 d后，AQP3 siRNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型较siRNA空载体组明显加重，两组间p53、p21、hnRNPQ的表达水平和β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性、细胞增殖活性差异均有统计学意义（均 P<0.05），进一步沉默hnRNPQ能够逆转上述反应。与siRNA空载体组相比，hnRNPQ siRNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型明显减轻，两组间p53、p21表达水平、β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性和细胞增殖活性差异均有统计学意义（均 P<0.05）。在接受UVA连续照射3 d后，cDNA空载体组中p53、p21、hnRNPQ的表达水平、β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性和细胞增殖活性分别为0.56 ± 0.08、0.70 ± 0.07、0.92 ± 0.03、（81.53 ± 7.62）%、7.16 ± 0.25、（2.15 ± 0.23）× 10 6/ml，而AQP3 cDNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型明显轻于cDNA空载体组，其上述指标分别为0.25 ± 0.06、0.23 ± 0.06、0.82 ± 0.09、（31.23 ± 6.54）%、2.52 ± 0.36、（2.93 ± 0.33）× 10 6/ml，两组比较，差异均有统计学意义（均 P<0.05），进一步过表达hnRNPQ能够逆转上述效应。在接受UVA连续照射3 d后，hnRNPQ cDNA组中p53、p21的表达水平、β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性和细胞增殖活性分别为1.41 ± 0.09、1.42 ± 0.06、（91.06 ± 4.24）%、12.35 ± 0.88、（1.23 ± 0.41）× 10 6/ml，与cDNA空载体组相比，hnRNPQ cDNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型明显加重，两组比较，上述指标差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:AQP3可能通过调控hnRNPQ下调p53的表达来减缓UVA诱导的NHDF衰老。

目的:探讨hnRNP E1对HPV16早期基因E2、E6表达的调控及宫颈癌细胞生物学功能的影响。方法:采用体外细胞实验方法，对HPV16阳性人宫颈鳞癌SiHa细胞株采用hnRNP E1cDNA质粒上调hnRNP E1表达，于上调前、后采用Real-time PCR和Western blot分别检测各组细胞HPV16 E2、E6 mRNA和蛋白表达水平，同时，应用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、周期及凋亡。采用SPSS 22.0和Graphpad Prism 7.0软件进行相关资料分析。结果:随着转染时间的增加（24、48、72 h），hnRNP E1过表达组的SiHa细胞活性及处于增殖状态的细胞数逐渐减少（ P<0.05），而G0/G1期细胞比例增高，S、G2/M期细胞比例及增殖指数降低（ P<0.05），晚期凋亡率和细胞总凋亡率逐渐增加（ P<0.05）。hnRNP E1过表达组HPV16 E6 mRNA和蛋白表达水平低于空白组和空质粒组，差异有统计学意义（ P<0.05），且随着HPV16 E6 mRNA和蛋白表达水平的降低，SiHa细胞增殖指数下降，而总凋亡率有增加趋势。3组间HPV16 E2 mRNA表达量差异无统计学意义（ P=0.427），HPV16 E2蛋白未被检测到。 结论:hnRNP E1可抑制HPV16 E6的转录和翻译，进而抑制宫颈癌细胞增殖，促使凋亡，hnRNP E1可作为抑制宫颈癌变的潜在靶标。但本研究未发现hnRNP E1与HPV16 E2在SiHa细胞中的关系。

目的:采用细胞实验评价核转运蛋白β2 (Kapβ2)介导的核不均一性核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)核转位与七氟烷脑神经毒性的关系。方法:采用小鼠海马细胞系HT22细胞，以2×10 5/孔和1×10 6/孔的密度接种于共聚焦培养皿和六孔培养板，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：携带绿色荧光蛋白(GFP)空载腺病毒转染的对照组(GFP-C组)、携带GFP空载腺病毒转染的七氟烷组(GFP-Sev组)、Kapβ2基因过表达腺病毒转染的对照组(Kapβ2-C组)和Kapβ2基因过表达腺病毒转染的七氟烷组(Kapβ2-Sev组)。细胞常规培养48 h后，转染携带GFP的空载腺病毒(GFP-C组和GFP-Sev组)和Kapβ2基因过表达的腺病毒(Kapβ2-C组和Kapβ2-Sev组)。转染48 h后GFP-C组和Kapβ2-C组继续常规培养48 h；GFP-Sev组和Kapβ2-Sev组采用3%七氟烷孵育3 h，随后常规培养48 h。采用Western blot法测定细胞Kapβ2、突触素(SYP)、突触后密度蛋白95(PSD95)、hnRNPA2/B1表达，并计算hnRNPA2/B1核质比。采用免疫荧光实验进行hnRNPA2/B1亚细胞定位。 结果:与GFP-C组比较，GFP-Sev组SYP、PSD95表达下调，hnRNPA2/B1核质比降低，细胞质hnRNPA2/B1表达上调，Kapβ2-C组Kapβ2表达上调( P<0.05)；与Kapβ2-C组比较，Kapβ2-Sev组SYP、PSD95表达下调，hnRNPA2/B1核质比降低，细胞质hnRNPA2/B1表达上调( P<0.05)；与GFP-Sev组比较，Kapβ2-Sev组Kapβ2、SYP、PSD95表达上调，hnRNPA2/B1核质比升高，细胞质hnRNPA2/B1表达下调( P<0.05)。 结论:Kapβ2介导的hnRNPA2/B1核转位可能是七氟烷脑神经毒性的内源性保护机制。

核内不均一核糖核蛋白属于RNA结合蛋白中的一类，具有高度保守的结构。其中，核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)参与转录、翻译等多种过程。近年来，神经退行性疾病研究领域发现，hnRNPA2/B1促进细胞质内纤维蛋白聚集，参与神经元内应激颗粒形成，调节多种认知功能相关过程，与肌萎缩侧索硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病等神经退行性疾病存在密切联系。本文综述相关研究，对hnRNPA2/B1在神经退行性疾病中的重要作用与机制进行总结，为未来神经退行性疾病诊断及治疗提供帮助。

目的 检测妊娠期糖尿病患者血清中miR-873-5p、核内不均一核糖核蛋白K(hnRNPK)的表达,分析二者与糖脂代谢和妊娠结局的关系.方法 回顾性选取2018年4月至2020年4月青岛市妇女儿童医院接收的80例妊娠期糖尿病患者为研究组,另选取年龄相仿、孕周相近的健康孕妇80名为对照组.采用qRT-PCR法检测血清miR-873-5p表达水平,酶联免疫吸附试验检测hnRNP K表达水平,同时检测并比较两组孕妇空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分析孕妇血清miR-873-5p、hnRNP K与糖脂代谢指标和不良妊娠结局的相关性.ROC曲线分析血清miR-873-5p和hnRNP K联合对妊娠期糖尿病患者不良妊娠结局的评估效能.结果 研究组的空腹血糖、HbA1c、甘油三酯、总胆固醇、LDL-C、FINS、HOMA-IR、血清miR-873-5p水平均高于对照组,血清HDL-C和hnRNP K水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).妊娠期糖尿病患者血清miR-873-5p表达与空腹血糖、HbA1c、甘油三酯、LDL-C、FINS、HOMA-IR以及不良妊娠结局呈正相关(P＜0.05),与血清hnRNP K和HDL-C呈负相关(P＜0.05).血清hnRNP K与空腹血糖、HbA1c、甘油三酯、LDL-C、FINS、HOMA-IR以及不良妊娠结局呈负相关(P＜0.05),与HDL-C呈正相关(P＜0.05).血清miR-873-5p预测不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)为0.765,灵敏度59.09％,特异度91.67％,血清hnRNP K预测的AUC为0.862,灵敏度93.18％,特异度77.78％,二者联合预测的AUC为0.882,灵敏度86.36％,特异度83.33％.结论 妊娠期糖尿病患者血清miR-873-5p水平升高,血清hnRNP K水平降低,二者与糖脂代谢及不良妊娠结局关系密切.

目的 探讨老年结直肠癌患者组织黑色素瘤缺乏因子 2(AIM2)、核不均一核糖核蛋白AB(hnRNP AB)和血清癌胚抗原(CEA)及病理参数的相关性.方法 采集2017 年6 月至2020 年6 月收治的78例老年结直肠癌患者的癌组织及癌旁正常组织标本.采用免疫组化SP法检测癌组织及癌旁正常组织标本中的AIM2、hnRNP AB阳性表达情况,采用电化学发光法检测患者术前血清CEA水平.收集患者的临床病理参数,分析结直肠癌组织组织中AIM2、hnRNP AB表达及术前血清CEA与临床病理参数的关系.采用Ken-dall相关分析结直肠癌组织中AIM2、hnRNP AB表达与术前血清CEA的相关性.结果 免疫组化显示,AIM2主要分布于肿瘤组织细胞质内,hnRNP AB 主要分布于细胞核内;78 例肿瘤组织中 AIM2 阳性 29 例(37.18%),明显低于癌旁组织的63 例(80.77%),hnRNP AB阳性55 例(70.51%),明显高于癌旁组织的 17例(21.79%),术前CEA水平阳性34 例(43.59%),明显高于癌旁组织的 5 例(6.41%),差异均有统计学意义(P<0.05).结直肠癌组织中AIM2、hnRNP AB表达及术前血清CEA水平均与性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、分化程度、大体分型、远处转移等无关(P>0.05),而与浸润程度、TNM分期、淋巴结转移等有关(P<0.05).Kendall相关分析显示,结直肠癌组织中AIM2 表达与术前血清CEA水平呈负相关(r =-0.211,P<0.01),而结直肠癌组织中hnRNP AB表达与术前血清CEA水平呈正相关(r =0.291,P<0.01).结论 老年结直肠癌患者组织AIM2、hnRNP AB表达与血清CEA水平密切相关,浸润程度越深,TNM分期越晚,发生淋巴结转移的结直肠癌组织中AIM2 表达降低、hnRNP AB表达升高,AIM2、hnRNP AB可能成为结直肠癌靶向治疗的新靶点.

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)血管生成的影响,并阐明其潜在的分子机制.方法:采用生物信息学方法预测MALAT1、不均一核糖核蛋白K(hnRNPK)和血管内皮生长因子A(VEGFA)的结合位点.HBMECs进行OGD/R处理构建脑缺血细胞模型,分为对照组、OGD/R模型组、OGD/R+siNC组、OGD/R+沉默MALAT1(OGD/R+siMALAT1)组和OGD/R+siMALAT1+过表达VEGFA(OGD/R+siMALAT1+VEGFA)组.采用小干扰RNA(siRNA)沉默MALAT1的表达,采用pcDNA载体构建VEGFA过表达载体,将构建的siMALAT1和pcDNA VEGFA载体分别或同时转染至HBMECs中.利用管形成实验检测各组细胞血管形成能力,Western blotting法检测各组细胞中VEGFA蛋白表达水平.6周龄健康雄性C57BL/6 J小鼠20只,随机分为假手术组、大脑中动脉闭塞(MCAO)模型组、MCAO+NC空载体(MCAO+NC)组和MCAO+过表达MALAT1(MCAO+MATAL1)组,每组5只,除假手术组外,其余各组小鼠利用线栓法构建MCAO小鼠模型,MCAO+NC组和MCAO+MATAL1 组小鼠右脑室内分别注射NC空载体和MALAT1过表达载体.采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组小鼠脑梗死面积百分率,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中VEGFA蛋白表达水平.结果:生物信息学预测,MALAT1与hnRNPK及hnRNPK与VEGFA均存在结合位点.管形成实验和Western blotting法检测,与对照组比较,OGD/R模型组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与OGD/R模型组比较,OGD/R+siMALAT1组细胞成管数明显减少(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与OGD/R+siMALAT1 组比较,OGD/R+ siMALAT1+VEGFA组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01).在MCAO模型小鼠实验中,TTC染色和Western blotting法检测,与假手术组比较,MCAO模型组小鼠脑梗死面积百分率和脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与MCAO模型组比较,MCAO+MALAT1组小鼠脑梗死面积百分率明显降低(P<0.01),脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01).结论:LncRNA MALAT1可增强靶基因VEGFA的稳定性并上调其表达,进而促进缺血性脑卒中小鼠的脑血管生成,为缺血性脑卒中的治疗提供了新的思路.

目的:研究核内不均一性核糖核蛋白A1基因(heterogeneous nuclear ribonucleoproteins A1,hnRNP A1) mRNA水平在消化系统肿瘤组织中的表达及其临床意义.方法:利用TCGA数据库全基因组mRNA测序资料分析hnRNPA1在消化道肿瘤与正常组织间表达的差异,分析其表达水平与临床病理资料的相关性,并进行生存分析判断其预后价值.结果:(1)hnRNPA1在不同消化系统肿瘤组织中表达较正常组织均明显增高(P＜0.01),其中结直肠癌、肝癌、胆管癌、胰腺癌更为明显.(2)hnRNPA1在肝癌组织中的表达与肿瘤分化程度(P＜0.05)、TNM分期(P＜0.05)和浸润深度(P＜0.05)相关,与年龄、性别、肝癌危险因素无关联.hnRNPAJ在胆管癌、胰腺癌组织中的表达与年龄、性别、TNM分期、浸润深度等不相关.(3)hnRNPA1生胰腺癌组织中的表达高低与总生存期有相关性(P＜0.05),且为独立于TNM分期、分化程度而影响患者预后的危险因子;hnRNPA1生结肠、直肠、肝、胆管肿瘤组织中的表达高低与总生存期无相关性.结论:hnRNPA1 mRNA在不同消化系统肿瘤中表达都增高;其高表达是胰腺癌独立预后不良因素,可以作为判断预后的有效生物标志物.

目的 利用蛋白质组学方法,对比经姜黄素处理和未经姜黄素处理的人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR之间差异表达的蛋白,分析与姜黄素逆转结肠癌耐药相关的蛋白.方法 取结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR,分为观察组和对照组,观察组加入终浓度为25μmol/L的姜黄素作用于人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR 24 h,对照组加入等体积生理盐水.以固相pH梯度等电聚焦为第一向,垂直平板十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向(2-DE),分离两组细胞总蛋白;通过凝胶银染显色,扫描仪GS-800采集凝胶图像,图像分析软件PDQuest8.0分析电泳图谱,寻找有意义的差异蛋白点,运用MALDI-TOF-MS系统对选取的蛋白点筛选出差异蛋白并进行质谱鉴定.结果 获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的HCT-8/VCR细胞2-DE图谱.鉴定出可能与结肠癌多药耐药密切相关的10种蛋白,其中在对照组高表达的有7种,分别是谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)、重组人FK506结合蛋白4(FKBP4)、X线修复交叉互补基因5(XRCC5)、肿瘤蛋白翻译调节因子1(TPT1)、热休克蛋白8(HSPA8)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、前列腺特异性膜抗原剪接变体(PSMA5);在观察组中高表达的有3种,分别是肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIB)、鸟氨酸转氨酶(OAT)、核内不均一核糖核蛋白H1(HNRNPH1).结论 姜黄素干预HCT-8/VCR后出现10种差异性表达的蛋白,蛋白功能涉及信号传导、肿瘤细胞的分裂、多药耐药以及抗氧化、凋亡和糖酵解等,可能与姜黄素逆转HCT-8/VCR细胞对化疗药物的耐药性有关.