本文报道我院收治并行支气管肺泡灌洗诊断新型冠状病毒肺炎2例，1例有流行病学史、临床症状及影像学高度疑似，但反复咽拭子阴性患者；1例确诊新型冠状病毒肺炎患者，出院前临床症状消失，胸部CT显示影像学表现明显好转，咽拭子2次阴性，达到出院标准。我们对2例患者的支气管肺泡灌洗液，分别进行新冠病毒ORF 1ab基因、N基因及新冠病毒核酸检测。结果表明，支气管肺泡灌洗液新型冠状病毒核酸检测阳性率高，对疑诊或者确诊新型冠状病毒肺炎患者出院咽拭子核酸检测阴性但肺部仍残留病灶行支气管肺泡灌洗有助于尽早诊断及指导治疗、判断预后。

目的:对某新型冠状病毒定点医院临时新型冠状病毒核酸实验室进行核酸污染监测及生物安全风险评估。方法:于2022年3月14日至5月16日每周一对某新型冠状病毒定点医院临时新型冠状病毒核酸实验室实验过程中以及消毒后各高风险实验活动区域及实验室工作人员防护物品表面进行新型冠状病毒核酸采样，采用实时荧光定量PCR技术对样本进行检测。结果:各高风险实验活动区域及实验室工作人员防护物品表面共40处采样点采集760份样本。样本处理区有8个采样点检出阳性，阳性率为27%（27/100），其中以生物安全柜、转运箱外表面和编号样本架阳性检出率最高，分别为5/10、4/10和6/10。核酸检测区有7个采样点检出阳性，全部出现在PCR综合实验间，阳性率为7.1%（10/140），其中以样本传递窗和核酸检测区门把手阳性检出率最高，均为4/20。来自样本处理区的阳性样本靶基因Ct值显著高于核酸检测区。实验人员防护物品表面的检出阳性率为20%（16/80），部分实验人员在实验过程中外层手套阳性检出率最高可达9/10。消毒后新型冠状病毒核酸实验室各区域及实验人员防护物品表面的核酸残留能够被有效清除。结论:实验过程中样本处理区物体表面新型冠状病毒核酸阳性检出率及污染强度高于核酸检测区，且实验人员在工作中面临较高生物安全风险。科学开展消毒流程有助于降低实验室环境及实验人员防护物品表面的核酸残留风险，从而保证检验质量和实验室人员安全。

目的:探索新型冠状病毒奥密克戎变异株污染不同物体表面后，不同温度条件下病毒核酸存留时间及变化规律，为环境样本中新冠病毒核酸检测及相关防控策略制定提供依据。方法　取实验室保存的新冠肺炎奥密克戎变异株感染者咽拭子灭活样本，污染不锈钢、塑料、木材、纸板及棉布等材质的表面，制成模拟污染样本，放置常温及冷藏环境下，分别在第0 d、1 d、3 d、7 d、14 d和第30 d，每种材料每次取出3件样本，浸泡后提取核酸，使用实时荧光PCR法检测新冠病毒核酸。分析不同类型材料表面污染后病毒核酸回收率、核酸可检出时间和Ct值变化。结果　新冠病毒污染后，棉布、塑料和不锈钢核酸的回收率为1.75%~2.90%，木材和纸板较低，分别为0.0021%和0.21%。所有材料模拟样本在第30 d均仍可检测出新冠病毒核酸。不锈钢、木材、纸板及棉布表面病毒核酸Ct值在前7 d内快速上升，随后变化较小。塑料表面病毒核酸Ct值较其它四种材料变化较小。结论　新冠病毒污染物体表面后，第30 d仍可检出病毒核酸，且不同性质的物体表面降解模式不同。在日常环境监测中，应结合核酸检测和其他调查手段，综合评估判定污染物品的病毒传播风险。

目的 为了准确定量检测易残留的小分子药物,利用核酸适配体强特异性和高亲和力的特点,已开发出多种小分子药物的核酸适配体传感器.本文对现有的几类小分子药物的核酸适配体传感器进行综述,从而促进核酸适配体传感器在小分子药物检测的开发与应用.方法 对近 20 年国内外关于多种小分子药物进行核酸适配体传感器开发的文献进行检索.结果 对核酸适配体传感器在解热镇痛类、麻醉类、抗生素类和激素类等几类小分子药物检测中的应用进行归纳总结,概述其基本原理,同时探讨核酸适配体传感器在分析检测中的应用前景.结论 为核酸适配体传感器在小分子药物检测的深入开发与应用提供借鉴.

目的 比较并评价 7 种不同商品化新型冠状病毒核酸检测弱阳性质控品性能.方法 使用 20 种新冠病毒核酸检测试剂检测 7 种质控品,评价其适用性.对短期储存(37℃存放 4 h、25℃存放 1d、4℃存放 3d)、长期储存(-20℃存放 6 个月)和反复冻融后的 7 种质控品进行检测并评价其稳定性.使用新冠病毒核糖核酸基因组标准物质对 7 种质控品进行定量,与产品说明书中的标示浓度进行比较,评价其量值准确性.进一步比较 7 种质控品不提取核酸与提取核酸后检测Ct值差异,判断各质控品核酸残留.结果 7 种质控品中仅 1 种不适用于个别检测试剂,其余均适用于所有检测试剂;各质控品稳定性检测Ct值差异均无统计学意义;不同弱阳性质控品定值浓度差异较大;部分质控品不提取核酸检测Ct值较小,存在较多核酸残留.结论 不同品牌质控品质量不一,部分弱阳性质控品在量值准确性、核酸残留处理方面存在问题,但多数质控品适用性和稳定性良好.实验室应合理选择核酸检测质控品,以有效保障检测质量.

目的 探讨脱细胞的兔子腹主动脉基质管状支架用于猪胆管损伤修复的可行性.方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)和脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,SDC)去除血管所含细胞,应用核酸酶去除残留的DNA和RNA片段.将制备的脱细胞血管基质支架移植到猪胆管损伤部位,术后观察猪的生存状态,黄疸发生等.于术后45 d取材观察,做组织学染色.结果 兔子腹主动脉脱细胞处理前后病理学检查血管结构改变不明显.脱细胞后DNA含量为(0.12±0.01) μg/mg干重,比脱细胞前(2.31±0.03) μg/mg干重明显降低(P＜0.05).胶原含量由(152±22) μg/mg干重增加到(177±21) μg/mg干重.脂肪间充质干细胞在支架上生存良好,形态清晰,并长入管壁内部.体内实验中,吻合口无胆漏,支架无塌陷,术后猪生存状态良好,饮食正常,45 d后取材发现该支架管腔明显,内含少量絮状物,仍有一定弹性.组织学染色显示,该组织工程胆管结构基本完整,内部含有大量细胞,有疑似上皮和腺体生成.结论 本研究制备的脱细胞腹主动脉基质管状支架可用于胆管损伤修复.

背景:制备脱细胞肺支架的一个困难在于必须充分去除细胞同时尽可能保留细胞外基质.灌注去污剂-核酸酶法已被广泛应用于脱细胞支架的制备.目的:对比脱氧胆酸钠和十二烷基硫酸钠两种去污剂用于制备脱细胞肺支架的效果.方法:取出24只雄性SD大鼠肺脏,分3组,正常对照组不进行任何干预;脱氧胆酸钠组灌注去污剂脱氧胆酸钠联合核酸酶,制备脱细胞肺支架;十二烷基硫酸钠组灌注去污剂十二烷基硫酸钠联合核酸酶,制备脱细胞肺支架;取3组肺组织,进行组织学染色、免疫荧光染色及DNA含量测定.将A549细胞分别接种于两组脱细胞肺支架上培养7 d,进行苏木精-伊红染色.将两组脱细胞肺支架分别埋于SD大鼠背部皮下,2周后进行移植组织Masson 染色.结果与结论:①正常对照组肺组织布满细胞,两脱细胞肺支架均没有残留的细胞和细胞核,但脱氧胆酸钠组肺支架内肺泡形态结构较十二烷基硫酸钠组完整;两组肺支架的DNA含量均低于正常对照组(P < 0.01);②培养7 d,两组肺支架上的细胞均是由边缘向组织中间生长、浸润,脱氧胆酸钠组肺支架内的细胞生长、浸润速度明显优于十二烷基硫酸钠组;③肺支架移植2周后,十二烷基硫酸钠组肺支架与周围组织融合欠佳,边界清楚,可见大量细胞浸润,分布较均匀,血管内血细胞清晰可见;脱氧胆酸钠组肺支架内新生血管数量明显多于十二烷基硫酸钠支架,并且新生血管直径更大;④结果表明与十二烷基硫酸钠相比,采用去污剂脱氧胆酸钠制备的脱细胞肺支架生物相容性更好,与周围组织融合速度更快,细胞浸润和新生血管形成更明显.

目的 研制可用于扎伊尔型埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)核酸检测试剂质量评价的国家参考品,并建立相关试剂的质量标准.方法 通过分子生物学方法制备含有5种EBOV核蛋白和糖蛋白基因目的片段的RNA噬菌体颗粒、质粒菌液和RNA体外转录产物作为参考品候选样本,使用6种出血热病毒、虫媒病毒培养液和含拉沙热病毒核蛋白和糖蛋白基因的质粒菌液作为阴性参考品候选样本.分别应用培养法和荧光定量PCR确定病毒滴度和核酸浓度,应用RT-PCR、荧光定量PCR对候选样本进行序列鉴定和交叉污染检查.采用RNaseA和DNase Ⅰ抵抗试验确认RNA噬菌体颗粒的包装完整性.对于序列正确、无污染的候选样本进行稀释分装,发放5家EBOV核酸检测试剂生产企业进行适用性验证,根据结果确定参考品盘的阳性、阴性、最低检测限和精密度组成及试剂质量标准.结果 RNA噬菌体颗粒包装的RNA序列与预期完全一致,颗粒包装完整且内含DNA残留污染低于RNA含量的1/10 000,可以用于制备参考品.经适用性验证,确定国家核酸参考品盘包括4份阳性、16份阴性参考品(其中8份型别特异性参考品)、14份最低检测限和2份(4支)精密度参考品,均为冰冻样本.适用性验证结果显示,各申报试剂均能检出扎伊尔型EBOV核酸,但最低检测限存在一定差异.结论 建立的扎伊尔型EBOV核酸检测试剂国家参考品适用于现有的5家已申报应急审批的扎伊尔型EBOV核酸检测试剂,可用于相关试剂的质量控制,且对于该类试剂的研发具有重要指导意义.

目的 探索利用磁珠提取法结合实时荧光定量核酸扩增技术,建立定量测定毕赤酵母来源重组人血白蛋白中残留DNA的方法.方法 将蛋白裂解后采用磁珠提取法提取样品中的残留DNA,利用Taqman探针法对样品和DNA标准品进行定量PCR测定,根据标准曲线对样品中的DNA残留量进行分析.采用重组人血白蛋白和血浆来源人血白蛋白2种基质对建立的方法进行回收率和重复性测定,评价方法准确性及精密度,并测定毕赤酵母来源重组人血白蛋白产品中残留DNA含量.结果 该方法测定毕赤酵母DNA残留最低准确定量浓度为3fg· μL-1,DNA含量在3 fg· μL-1 ～300pg· μL-1内曲线线性良好,标准曲线相关系数r2为0.998 3;以重组人血白蛋白作为基质时,100和10fg·μL-1 DNA加标回收率均值分别为93.58％(n=4)和215.56％(n=4);相对标准偏差RSD分别为19.6％及42.9％;以人血白蛋白作为基质时,100和10 fg·μL-1DNA加标回收率均值分别为67.09％(n=3)和113.40％(n=3);相对标准偏差RSD分别为6.9％和11.1％.按该方法检测毕赤酵母来源的3批重组人血白蛋白DNA残留量均值(n=7)分别为5.98、4.16和4.49 fg·μL-1 (n =7);3批样品DNA残留量均小于1ng· 10 g(Pro)-1.结论 磁珠分离法结合荧光定量PCR方法可解决超高蛋白浓度背景下重组人血白蛋白痕迹量DNA定量测定的技术难题,准确性和重现性良好,可以用于重组人血白蛋白毕赤酵母DNA残留量的定量检测.

循环肿瘤细胞(CTCs)对恶性肿瘤传播转移有重要影响,因此CTCs识别技术的出现与不断进步有着重要的临床意义,准确可靠的CTCs识别技术将为尽早确诊肿瘤、指导个性化治疗方案、诊断微小残留病变以及评估抗癌药物的敏感性提供强有力的工具.本文针对核酸检测法、免疫细胞化学术、流式细胞术和基于表征特性图像识别技术等CTC识别技术的发展情况进行了综述总结,比较各种技术的优缺点,对现阶段该领域存在的问题进行了讨论,并对CTCs识别的技术发展方向作了进一步的展望,为学者们提供更广的研究思路.