目的:研究中枢蓝斑区促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)系统在IBS中的作用，探索影响其改变的分子机制。方法:采用母婴分离联合出生后复合应激构建大鼠IBS模型，后采用脑核团微取样的方法获得大鼠蓝斑区的组织样本。应用实时荧光定量PCR技术检测对照组和IBS组大鼠蓝斑核内细胞癌基因 Fos( c- Fos)，以及 CRH和其相应受体促肾上腺皮质激素释放激素受体( CRHR)1、 CRHR2的mRNA表达；同时检测DNA甲基转移酶( DNMT)1、 DNMT3a和 DNMT3b的mRNA表达；采用蛋白质印迹法检测组蛋白甲基转移酶——ASH2样蛋白(ASH2L)，以及SET核癌基因和MYND域2蛋白(SMYD2)的表达。统计学分析采用 t检验。 结果:IBS组的直肠充气压低于对照组[(69.82±5.47) mmHg比(86.86±5.98) mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)]， c- Fos基因的mRNA水平较对照组升高(2.11±0.44比1.00±0.19)， CRH的mRNA水平较对照组升高(1.99±0.35比1.00±0.13)，SMYD2的蛋白表达水平较对照组上调(1.04±0.21比0.61±0.12)，差异均有统计学意义( t＝6.215、2.321、2.797、4.451， P均<0.05)。IBS组大鼠 CRHR1、 CRHR2、 DNMT1、 DNMT3a、 DNMT3b的mRNA水平以及ASH2L的表达与对照组比较(分别为0.96±0.13比1.00±0.26、1.35±0.63比1.00±0.43、1.40±0.61比1.00±0.19、1.39±0.58比1.00±0.21、1.45±0.71比1.00±0.39和0.80±0.19比1.05±0.26)，差异均无统计学意义( P均>0.05)。 结论:母婴分离联合出生后复合应激通过影响蓝斑核内 Crh基因的转录进而造成CRH系统和去甲肾上腺能系统应激调控网络的激活，导致大鼠内脏敏感性增加。 Crh基因转录异常可能与SMYD2介导的组蛋白H3K36的甲基化有密切关系，而与DNA的甲基化修饰无关。

目的:探讨痛泻要方对腹泻型肠易激综合征模型大鼠内脏敏感性的影响及其作用机制。方法:将30只雄性1日龄SD大鼠按随机数字表法分为正常组(10只)和造模组(20只)。采用母婴分离+束缚应激构建腹泻型肠易激综合征大鼠模型。造模成功后，将造模组随机分为模型组和痛泻要方组，每组10只。痛泻要方组大鼠灌胃痛泻要方4.92 g/ml，正常组、模型组灌胃等体积生理盐水，按2 ml/100 g大鼠体重灌胃，1次/d，连续灌胃14 d。采用电子恒压器测定结直肠扩张刺激下腹外斜肌肌电反应，评价内脏敏感性，采用HE染色观察大鼠结肠组织形态，ELISA法检测大鼠结肠中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)水平，qPCR法检测结肠组织中5-羟色胺转运体(serotonin transporter, SERT) mRNA水平，Western blot检测大鼠结肠和下丘脑SERT蛋白表达。结果:与模型组比较，痛泻要方组在球囊扩张压力为60、80 mmHg时，肌电图积分变化率[(179.51±18.26)%比(226.42±25.78)%；(242.13±15.42)%比(306.02±51.51)%]降低( P<0.05或 P<0.01)，结肠5-HT[(8.85±0.53)ng/mg比(12.25±1.95)ng/mg]水平降低( P<0.01)，结肠SERT mRNA[(0.85±0.12)比(0.38±0.02)]、蛋白[(0.53±0.11)比(0.36±0.17)]表达升高( P<0.05或 P<0.01)，下丘脑SERT蛋白[(0.88±0.12)比(0.36±0.13)]表达升高( P<0.05)。 结论:痛泻要方可调节腹泻型肠易激综合征模型大鼠5-HT及SERT表达，从而降低内脏高敏感。

目的:探讨早期母婴分离应激联合成年慢性不可预知性应激制备成年SD大鼠抑郁模型，观察大鼠行为学表现和突触蛋白的表达。方法:将刚出生的24只雄性大鼠随机分为空白组(CON组)、慢性不可预知性应激组(CUMS组)、母婴分离联合慢性不可预知性应激组(MS＋CUMS组)，每组8只。CUMS组大鼠成年期采用慢性不可预知性应激(chronic unpredictable mild stress，CUMS)建立抑郁模型，MS＋CUMS组大鼠采用母婴分离＋慢性不可预知性应激建立大鼠成年期抑郁模型。采用体质量和外观观察、糖水偏好实验、旷场实验、强迫游泳实验评价大鼠抑郁模型；免疫组化检测海马中Syn的表达以及Western blot检测大鼠海马PSD-95、Syn蛋白表达水平。结果:(1)应激造模结束后，与CON组相比，CUMS组和MS＋CUMS组大鼠体质量明显降低[(126.43±3.88) g，(91.04±3.85) g，(69.89±6.67) g； t＝5.03，8.03，均 P<0.01]，糖水偏好度显著下降[(94.21±0.56)%，(79.30±1.13)%，(72.73±1.82)%； t＝8.24，11.87，均 P<0.01)，不动时间明显增加[(3.50±0.84) s，(13.59±2.40) s，(15.70±2.97) s； t＝3.16，3.82，均 P<0.01]；其中，MS＋CUMS组的体质量和糖水偏好度比CUMS组大鼠的更低( t＝3.00，3.63，均 P<0.01)。(2)与正常组相比，MS＋CUMS大鼠的中央区域活动时间明显缩短[(21.41±4.65) s，(8.96±2.37) s； t＝2.66， P<0.05]。(3)在免疫组化实验中，与正常组相比，CUMS组和MS＋CUMS组大鼠海马Syn阳性面积百分比明显减少[(24.42±0.76)%，(14.00±0.95)%，(10.38±1.38)%； t＝6.93，9.33， P<0.01)]。(4)Western blot结果显示，与CON组相比，CUMS组和MS＋CUMS组大鼠海马中PSD-95[(1.18±0.02)，(0.74±0.06)，(0.52±0.05)； t＝6.29，9.31，均 P<0.05]和Syn[(1.12±0.08)，(0.95±0.06)，(0.90±0.07)； t＝3.10，4.04，均 P<0.05]蛋白的表达情况明显下降；其中，与CUMS组相比，MS＋CUMS组的PSD-95的蛋白表达更低[(0.74±0.06)，(0.52±0.05)； t＝0.93， P<0.05]。 结论:母婴分离联合CUMS应激造模能诱发大鼠出现抑郁样行为，降低海马突触可塑性相关蛋白的表达。

目的 研究儿泻康贴膜对功能性腹痛幼龄大鼠的影响,并探讨其疗效机制.方法 将出生 1 d的SD大鼠随机分为对照组和模型组,采用母婴分离联合冰水应激的方法建立功能性腹痛大鼠内脏高敏感模型.选取造模成功的大鼠随机分为模型组、丁桂儿脐贴组,儿泻康贴膜(1/24、1/12、1/6 贴)组.各组大鼠腹部贴剂给药,连续 7 d,对照组、模型组腹部给予空白模拟贴.观察给药后大鼠粪便Bristol分级评分、粪便含水率及腹壁撤退反射(AWR)评分结果;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清和结肠组织中 5-羟色胺(5-HT)、P物质(SP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定结肠组织中囊性纤维化跨膜转运调节体(CFTR)、促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)mRNA表达水平;Western blotting法检测CFTR、CRF蛋白表达水平.结果 与模型组相比,儿泻康贴膜各剂量组大鼠粪便Bristol评分明显降低,粪便含水量显著减少,不同注水体积下的AWR评分均显著降低,血清和结肠组织中致痛致泻相关因子 5-HT、SP、TNF-α的表达均得到显著抑制,结肠组织中CFTR和CRF mRNA和蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.05、0.01、0.001).结论 儿泻康贴膜对功能性腹痛大鼠有显著的治疗效果,其通过调节血清和结肠组织中腹痛腹泻相关因子的含量以及结肠组织中相关蛋白的表达以显著降低大鼠粪便Bristol评分和粪便含水量以及大鼠的内脏敏感性.

个体在生命早期遭遇不幸事件(虐待、忽视等),即生命早期应激(ELS),会导致其成年后的大脑结构和功能发生改变,增加各类精神疾病(如抑郁症、创伤后应激障碍及精神分裂症等)的患病风险.为模拟人类幼年时期留守现象,啮齿动物的母婴分离(MS)模型得到广泛应用,有助于揭示ELS诱发疾病发生发展的机制.文章通过对大、小鼠MS模型的行为学及相关脑区改变的研究成果进行综述.

目的 观察腹部推拿对内脏高敏感腹泻型肠易激综合征(diarrhea-type irritable bowel syndrome,IBS-D)模型大鼠肠道肥大细胞(mastcell,MC)及TRPV1表达水平的影响,探讨腹部推拿调控内脏高敏感IBS-D作用机制.方法 40只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、腹部推拿组、MC阻断剂组,每组10只.采用母婴分离法+慢性应激法制备IBS-D大鼠模型.应用粪便性状(Bristol)评分、旷场试验评价干预效果,透射电镜观察结肠组织MC变化,定量PCR检测TRPV1 mRNA表达,免疫荧光法检测瞬时感受器电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid subfamily 1,TR-PV1)阳性细胞数.结果 (1)Bristol评分:与空白组比较,模型组Bristol评分增加(P＜0.05);与模型组比较,腹部推拿组、MC阻断剂组评分降低(P＜0.01).(2)旷场试验:与空白组比较,模型组穿行方格次数、中央停留次数、中央停留时间和站立次数均显著减少(P＜0.01);与模型组比较,腹部推拿组、MC阻断剂组各评分升高(P＜0.05,P＜0.01);与MC阻断剂组比较,腹部推拿组在站立次数方面低于MC阻断剂组(P＜0.01).(3)透射电镜:与空白组比较,模型组肠道MC微绒毛形态不规则,呈脱颗粒状态;腹部推拿组较模型组MC形态规整,脱颗粒程度不明显.MC阻断剂组形态规则与空白组近似.(4)TRPV1 mRNA表达:与空白组比较,模型组表达量明显升高(P＜0.01);与模型组比较,腹部推拿组和MC阻断剂组表达量明显降低(P＜0.01);与MC阻断剂组比较,腹部推拿组TRPV1 mRNA的表达略高(P＜0.05).(5)免疫荧光检测:与空白组比较,模型组TRPV1阳性细胞数显著增多,且荧光强度明显增高;与模型组比较,腹部推拿组和MC阻断剂组模型组TRPV1阳性细胞数显著减少,且荧光强度明显降低.结论 腹部推拿可能借助调控肠道MC脱颗粒,降低TRPV1表达,从而对内脏高敏感IBS-D大鼠起到干预作用.

目的 探讨健脾祛湿膏对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠的作用及其机制.方法 参照三因素法(母婴分离+醋酸刺激+束缚应激)复制肝郁脾虚型IBS-D模型,随机将大鼠分为空白组,模型组,补脾益肠丸组,匹维溴铵组,健脾祛湿膏低、高剂量组.连续灌胃给药14 d后,评价各组大鼠粪便含水率、肠道疼痛阈值及糖水偏好值.取材后,检测各组结肠组织5羟色胺1A受体(5-HT1A)、5-HT2A受体、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达,闭锁小带蛋白1(ZO-1)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)和环状鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)信号通路相关靶点mRNA及蛋白表达.结果 与模型组比较,健脾祛湿膏组粪便含水率降低(P＜0.05,P＜0.01),肠道疼痛阈值和糖水偏好值升高(P＜0.05,P＜0.01),结肠组织干扰素β(IFN-β)水平、5-HT1A、5-HT2A、TNF-α、cGAS、STING mRNA 和 STING、TANK 结合激酶 1(TBK1)、p-TBK1 蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01),ZO-1、Claudin-1 mRNA和蛋白表达升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 健脾祛湿膏能改善IBS-D大鼠症状,其作用机制可能与改善内脏高敏感、调节紧密连接蛋白表达、调控cGAS-STING通路激活相关.

随着三孩政策的出台实施,我国高龄产妇生产率逐年增加.高龄产妇妊娠期和分娩期容易出现各种疑难和高危情况,高危新生儿出生率随之增加.高危新生儿出生后在新生儿重症监护室接受治疗与护理,与母亲分离.母婴分离会损伤认知功能,但在临床护理中尚未发现有效护理措施.大量动物实验表明,丰富环境能够改善阿尔兹海默症、抑郁症、缺血性脑卒中等疾病引起的认知功能障碍,但目前关于丰富环境在母婴分离模型中的作用和机制报道还较少且存在分歧.为此,本文就丰富环境对母婴分离大(小)鼠模型认知功能障碍的影响及氧化应激、表观遗传、突触可塑性、下丘脑-垂体-肾上腺轴等相关作用机制研究进展进行综述,为高危新生儿认知功能的改善及护理提供新的思路.

失眠以睡眠启动和/或维持困难为突出表现,是最为常见的睡眠障碍,严重影响患者生活质量.因其难以在体外观察,因此动物模型对于镇静催眠药物的筛选和评价是至关重要的.本文对现有常用的失眠啮齿类动物模型进行梳理总结,分为应激诱导型和药物诱导型两大类,其中应激诱导型包括换笼法、水上平台法、足底电刺激、感官刺激、母婴分离、产前应激等,药物诱导型包括咖啡因、对氯苯丙氨酸、甲状腺素诱导失眠动物模型,并重点分析它们对睡眠结构的影响以及现有镇静催眠药物的作用效应.现有动物模型各有优势和特色,但均不能完全模拟临床失眠患者的所有特征.因此对于催眠药物的评价筛选应采用多种动物模型结合的方式,才能更加全面真实地反映其药效药理.

目的:探讨螺环哌嗪盐化合物DXL-A-24对肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)大鼠内脏高敏感性和肠道菌群的影响.方法:采用母婴分离联合束缚应激制备IBS大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、利那洛肽组(0.022 mg· kg-1)、螺环哌嗪盐化合物DXL-A-24低、中、高剂量组(2,6,12mg·kg-1),每组14只,同时设正常组,连续灌胃28 d.采用腹壁回撤反射评估大鼠内脏敏感性,ELISA法检测结肠组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、D-乳酸(D-lac-tate,D-LA)和二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)含量,免疫组化法检测结肠组织P物质(substance P,SP)和降钙素基因肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的表达,16S rRNA基因测序分析肠道菌群的变化.结果:与正常组相比,模型组大鼠毛发稀疏发黄,攻击性强,肛周有粪便污染,内脏敏感性明显升高(P＜0.05).与模型组相比,各给药组大鼠被毛发黄、竖毛、撕咬表现有所缓解,内脏敏感性显著降低,结肠组织TNF-α、D-LA、SP、CGRP的表达显著降低(P＜0.05),肠道有益菌增加,有害菌减少.结论:DXL-A-24改善IBS大鼠内脏高敏感性和肠道屏障损伤,其机制可能与改善肠道菌群,降低SP、CGRP和TNF-α的表达有关.