-
河豚毒素原料药及有关物质含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测法的建立
编辑人员丨1天前
目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)方法,测定河豚毒素(TTX)原料药及有关物质的含量。方法:选用TSK Gel amide-80(150 mm×2 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-含5 mmol/L乙酸铵的0.1%甲酸溶液(70∶30, V/ V)为流动相,流速0.2 ml/min,柱温40 ℃。ELSD漂移管温度105 ℃,雾化器温度80 ℃,气体流量1.8 L/min。 结果:TTX在10~100 μg/ml浓度范围内,线性关系良好,相关系数 R2为0.999 5,检测限(S/N=3)为5 ng,定量下限(S/N=10)为10 ng。准确度试验相对标准差为0.93%;日内/日间精密度试验相对标准差均<2%;破坏试验中降解产物与TTX的分离度均>2.0;耐用性试验相对标准差均<2%。 结论:本方法适用于TTX和有关物质的含量检测,可为TTX原料药质量控制及其制剂开发提供参考。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1天前
-
食用织纹螺致呼吸衰竭救治成功1例
编辑人员丨1天前
织纹螺致食物中毒事件在我国沿海地区屡有发生,尤以夏秋季多见。织纹螺中毒患者可表现为唇舌麻痹、头晕头痛、恶心呕吐、心律失常甚至呼吸衰竭等症状。我们收治1例食用织纹螺中毒致呼吸衰竭患者,经过及时呼吸支持、血液灌流等积极治疗,最终痊愈出院。本文总结织纹螺中毒的临床特征及治疗方式,为临床类似病例提供诊治参考。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1天前
-
芳樟醇对瞬时受体电位香草酸1通路的影响及其缓解肠易激综合征大鼠内脏高敏感的作用
编辑人员丨1天前
目的:观察芳樟醇通过瞬时受体电位香草酸1(TRPV1)通路对中枢及外周神经的影响,以及其缓解肠易激综合征(IBS)内脏高敏感的作用。方法:选择36只无特定病原体动物级雌性Sprague-Dawley(SD)新生幼鼠,其中30只用于行为学实验,6只用于电生理实验。行为学实验:将30只SD新生幼鼠随机分为正常对照组(结直肠内注射0.2 mL 0.9%氯化钠溶液),新生期结肠炎性刺激(NCI)组(结直肠内注射0.2 mL 0.5%的乙酸溶液),以及芳樟醇20、50、100 mg/kg组(NCI造模成功后,在5周龄时分别予以芳樟醇20、50、100 mg/kg灌胃);在6周龄时,通过结肠扩张试验评估各组大鼠的腹部撤回反射(AWR)评分和痛阈压力值(AWR评分为3分时的充气压力值);在行为学观察结束后1 h,采用蛋白质免疫印迹法和免疫组织化学法检测各组大鼠结直肠黏膜和脊髓中的TRPV1蛋白质表达水平。电生理实验:采用6~7周龄雌性SD大鼠制作离体脊髓横切片,每只大鼠随机选取5~8个神经元进行全细胞膜片钳记录,分别记录芳樟醇、河豚毒素和抗辣椒素对胶状质区神经元自发性兴奋性突触后电流(sEPSC)的作用。统计学方法采用独立样本 t检验和配对 t检验。 结果:NCI组大鼠在40 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)压力下的AWR评分高于正常对照组、芳樟醇20 mg/kg组、芳樟醇50 mg/kg组、芳樟醇100 mg/kg组[(2.5±0.2)分比(1.0±0.3)、(1.5±0.3)、(1.5±0.2)、(1.5±0.2)分],在60 mmHg压力下的AWR评分高于正常对照组、芳樟醇50 mg/kg组、芳樟醇100 mg/kg组[(3.8±0.2)分比(2.3±0.4)、(2.3±0.5)、(2.0±0.3)分],差异均有统计学意义( t=4.39、2.45、3.16、3.16、3.31、2.88、5.97; P=0.001、0.034、0.010、0.010、0.008、0.028,<0.001)。NCI组大鼠的痛阈低于正常对照组、芳樟醇20 mg/kg组、芳樟醇50 mg/kg组、芳樟醇100 mg/kg组[(35.8±2.0) mmHg比(55.8±1.5)、(49.2±2.4)、(53.3±2.1)、(55.0±1.8) mmHg,差异均有统计学意义( t=-7.91、-4.28、-6.01、-7.06, P<0.001、=0.002、<0.001、<0.001)。蛋白质印迹法检测结果显示,NCI组大鼠结直肠中的TRPV1蛋白质相对表达水平高于正常对照组、芳樟醇20 mg/kg组、芳樟醇50 mg/kg组、芳樟醇100 mg/kg组(0.86±0.03比0.32±0.03、0.68±0.01、0.45±0.03、0.56±0.02),脊髓中的TRPV1蛋白质相对表达水平高于正常对照组、芳樟醇20 mg/kg组、芳樟醇50 mg/kg组、芳樟醇100 mg/kg组(0.91±0.02比0.34±0.03、0.72±0.03、0.51±0.06、0.63±0.05),差异均有统计学意义( t=12.44、5.14、9.68、7.69、19.14、5.13、6.72、5.60, P<0.001、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001、=0.001、<0.001)。给予2 mmol/L芳樟醇灌注给药4 min时sEPSC的频率和外向电流与同一胶状质区神经元给予0.5 μmol/L河豚毒素和2 mmol/L芳樟醇联合灌注给药4 min时比较[ n=5,(23.84±4.81) Hz比(20.54±5.71) Hz、(7.60±0.35) pA比(7.62±0.75)pA],差异均无统计学意义(均 P>0.05)。给予2 mmol/L芳樟醇灌注给药4 min时sEPSC的频率高于同一胶状质区神经元给予10 μmol/L抗辣椒素和2 mmol/L芳樟醇联合灌注给药4 min时[ n=5,(20.17±2.55) Hz比(14.09±2.98) Hz],差异有统计学意义( t=3.58、 P=0.021);外向电流比较[(7.42±0.78) pA比(7.03±1.32)pA],差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:芳樟醇部分通过TRPV1通道缓解IBS内脏高敏感,这些效应可能与其引起胶状质区神经元细胞膜电位超极化有关。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1天前
-
一氧化氮在外源性硫化氢抑制大鼠结肠动力中的作用
编辑人员丨1天前
目的:探讨一氧化氮(NO)在外源性硫化氢(H 2S)抑制大鼠结肠动力中的作用。 方法:免疫组化检测H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)在成年Wistar大鼠近端结肠的分布;制备近端结肠纵行肌(LM)和环形肌条(CM),通过恒温浴槽实验观察NO相关工具药干预后外源性H 2S供体硫氢化钠(NaHS)对LM和CM收缩活动的影响;通过膜片钳实验检测不同浓度NaHS对平滑肌细胞L型钙通道电流(I Ca,L)的影响。 结果:H 2S合成酶CBS和CSE在近端结肠肌间神经丛、黏膜层及环纵平滑肌细胞均表达。河豚毒素孵育肌条后NaHS以浓度依赖的方式抑制LM和CM自发性收缩活动,LM最大抑制的半数有效浓度(IC 50)为917.6 μmol/L(95% CI:776.3~1 085 μmol/L, n=6),CM的IC 50为730.4 μmol/L(95% CI:592.2~900.8 μmol/L, n=6)。NO供体硝普钠(SNP)预处理肌条后加入NaHS(3×10 -4~6×10 -4mol/L),LM及CM收缩幅度呈现双向变化,其中低浓度NaHS使LM收缩幅度从(0.679±0.181)g增加至(0.840±0.400)g( n=8, P<0.01),使CM收缩幅度从(0.378±0.140)g增加至(1.176.±0.056)g( n=8, P<0.01)。sGC抑制剂可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂(sGC)ODQ孵育组NaHS的IC 50高于对照组( P<0.05),而NO合成酶抑制剂L-NNA、NO前体L-精氨酸、环磷酸鸟苷(cGMP)竞争性拮抗剂PET-cGMP预处理肌条前后NaHS的IC 50差异无统计学意义( P>0.05)。NaHS(100 μmol/L)使L型钙通道峰电流密度增加[(-4.29±0.29)比(-3.77±0.27)pA/pF, P<0.01];而NaHS(300 μmol/L)使峰电流降低至(-2.96±0.34)pA/pF( P<0.05),并使电流-电压曲线右移。 结论:外源性H 2S对大鼠结肠动力可能具有双重调节作用,其中对结肠平滑肌的抑制作用不依赖NO;L型钙通道在H 2S对结肠动力的双重调节作用中发挥重要作用。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1天前
-
A型肉毒毒素对神经病理性疼痛大鼠钠离子通道Nav1.3和钠电流的影响
编辑人员丨1天前
目的:探讨A型肉毒毒素(BoNT/A)对神经病理性疼痛大鼠背根神经节(DRG)神经元中钠通道Nav1.3和功能性钠电流的影响。方法:建立保留性神经损伤(SNI)病理性疼痛模型,将造模成功大鼠根据注射溶液的不同按随机数字表法分为生理盐水注射组(注射生理盐水)和BoNT/A注射组(注射BoNT/A),每组9只;另取9只大鼠设为假手术组,只分离暴露坐骨神经分支,但不做神经结扎手术。术后第5天在一侧足底皮下注射BoNT/A(7 U/kg和15 U/kg)或等量的生理盐水,检测注射后不同时间点(给药后第3天、第7天和第14天)大鼠机械撤足阈值的变化。采用Western Blot检测观察给药后第7天和第14天BoNT/A对各组大鼠DRG神经元中Nav1.3蛋白表达的影响,用电生理膜片钳检测BoNT/A对各组大鼠功能性河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流的影响。结果:足底皮下注射BoNT/A可显著升高外周神经损伤后下降的机械触痛阈( P<0.001),缓解神经病理性疼痛。SNI术后DRG神经元中Nav1.3蛋白表达明显上调( P<0.001),BoNT/A干预后第7天和第14天的Nav1.3蛋白表达显著下调( P<0.01);BoNT/A可降低SNI术后增大的TTX-S钠电流( P<0.05)。 结论:BoNT/A可调控Nav1.3钠通道蛋白表达,影响功能性TTX-S钠电流,发挥改善神经病理性疼痛的作用。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1天前
-
胆碱能信号通路及离子通道介导精氨酸对结肠平滑肌收缩的促进作用
编辑人员丨1个月前
目的 研究L-精氨酸对大鼠结肠收缩的影响,以阐明其对结肠动力的调节作用和机制.方法 采用恒温机槽实验检测结肠平滑肌条自发性收缩活动的变化;采用全细胞膜片钳技术检测L-精氨酸干预前后结肠单个平滑肌细胞电压依赖的 L-型钙离子通道(L-type voltage-dependent Ca2+chan-nels,VDCCs)电流和电压依赖钾离子通道(voltage-gated K+channel,Kv)电流的变化.结果 L-精氨酸(1 mmol·L-1)显著增强结肠纵行平滑肌(P<0.05)和环形平滑肌(P<0.01)自发性收缩活动,且该兴奋作用不被一氧化氮合酶抑制剂 Nω-硝基-L-精氨酸(Nω-nitro-L-arginine,L-NNA)(1 mmol·L-1)阻断(P>0.05).而且,河豚毒素(1 μmol·L-1)和阿托品(1 μmol·L-1)显著减弱L-精氨酸对结肠平滑肌条收缩的兴奋作用(P<0.05).此外,L-精氨酸(1 mmol·L-1)增加VDCCs峰电流,降低Kv电流(P<0.01).结论 L-精氨酸对大鼠结肠收缩具有促进作用,该作用不依赖内源性NO,可能由碱能信号通路介导.此外,平滑肌细胞VDCCs和Kv通道也参与L-精氨酸对结肠动力的调节.
...不再出现此类内容
编辑人员丨1个月前
-
Na+通道在锰神经细胞毒性中的作用
编辑人员丨2024/3/16
目的 初步探讨Na+通道在锰神经细胞毒性中对γ-氨基丁酸(GABA)的作用.方法 SH-SY5Y细胞建立锰暴露模型,并分为空白对照组、0.25 mmol/L MnCl2、0.50 mmol/L MnCl2、1.00 mmol/L MnCl2.河豚毒素(tetro-dotoxin,TTX)0.10μmol/L、0.20μmol/L进行干预,MTT法测其细胞存活率、光学显微镜进行形态学观察、蛋白质印迹法检测Na+通道中Nav1.1通道蛋白和GABA的标记酶谷氨酸脱羧酶65(GAD65)蛋白的表达水平.结果 MnCl2可抑制细胞增殖,0.25 mmol/L MnCl2、0.50 mmol/L MnCl2、1.00 mmol/L MnCl2均可显著降低细胞存活率,差异均具有统计学意义(P<0.05);TTX可改善锰暴露所致的神经元损伤,提高细胞存活率,差异具有统计学意义(P<0.05);锰暴露可上调神经元GAD65蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05),但锰暴露未改变神经元细胞Nav1.1蛋白的表达水平,差异无统计学意义(P>0.05).结论 锰暴露所致神经元损伤及GABA能损伤可能与其Nav1.1蛋白表达无关.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2024/3/16
-
河豚毒素处方前初步研究
编辑人员丨2023/10/21
目的 考察河豚毒素(TTX)在不同溶剂中的溶解性及稳定性,以及温度和pH值对稳定性的影响.方法 配制TTX不同介质的溶液,采用高效液相色谱法(HPLC)测定其在不同温度、不同pH缓冲液中的浓度,分析计算其溶解度及稳定性.结果 TTX在pH值为 3.5时溶解度最大,随着pH值增加其溶解度逐渐降低.TTX在强碱条件下降解最为迅速,在 70℃条件下、0.1 mol/L的氢氧化钠溶液中,20 min即完全降解.稳定性试验结果同样证明TTX在碱性条件下的稳定性最差,在 37℃、pH值=7.4的磷酸缓冲盐溶液(PBS)中,TTX浓度在 1~10 h时开始持续降低,28天降解率为 88.07±0.27%.结论 TTX易溶于pH值=3.5的酸性水溶液,几乎不溶于碱性水溶液.其稳定性与温度、介质pH值密切相关,在酸性水溶液中较为稳定,在碱性条件下易降解,温度升高会加速其降解过程.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/10/21
-
液相色谱-串联质谱法测定腌制河豚鱼中河豚毒素
编辑人员丨2023/8/19
目的 建立基于阳离子交换固相萃取(SPE)小柱净化,液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测腌制河豚鱼中河豚毒素(TTX)的方法.方法 粉碎均匀的腌制河豚鱼样品,采用0.5%乙酸/50%甲醇/水超声提取,提取液经阳离子交换SPE小柱净化,0.3%盐酸/50%乙腈/水洗脱,洗脱液经氨水中和后采用XBridgeTM BEH Amide色谱柱(150 mm×3.0 mm,1.7 μm)分离,采用串联质谱多反应监测模式测定.结果 TTX的基质效应为85.7%~92.4%,采用优化后的SPE方法净化,基质抑制效应得到有效控制.样品中TTX在2.0~4 000 μg/kg范围内线性关系良好,相关系数(r2)为0.999 2;方法检出限和定量限分别为1.0μg/kg和2.0 μg/kg.在2.0、200、2 200μg/kg水平加标,平均回收率为81.2%~96.5%,相对标准偏差为4.3%~7.5%.质控样品中TTX的日内准确度为84.4%~95.6%,精密度为4.9%~5.8%;日间准确度为86.1%~94.9%,精密度为5.5%~8.5%.采用本方法测定38份市售腌制河豚鱼制品,TTX检出率为60.5%.结论 本研究建立的方法可以实现腌制河豚鱼中TTX的准确定量测定.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/19
-
五味子主要成分的镇痛作用及分子机制
编辑人员丨2023/8/19
目的 探究五味子主要成分(Sc)的镇痛作用和分子机制.方法 在醋酸扭体疼痛模型,福尔马林炎性疼痛模型和完全弗氏佐剂疼痛模型上评价Sc的镇痛活性.在重组细胞、脊髓背角(SDH)神经元以及背根神经节(DRG)神经元上,利用膜片钳技术研究Sc的镇痛靶点.结果 在3种小鼠疼痛模型中,Sc的镇痛活性与阳性药吲哚美辛相当.Sc对3种亚型甘氨酸受体和SDH神经元上甘氨酸受体的EC50在2.94~5.77 μmol·L-1.Sc可以显著降低DRG神经元动作电位的发放频率,抑制河豚毒素敏感的钠通道和高电压激活的钙通道.Sc优先作用于Nav1.7通道和Cav2.2通道的失活态,IC50分别为6.97和4.58 μmol·L-1.结论 Sc通过调节甘氨酸受体,Nav1.7通道和Cav2.2通道的活性发挥镇痛作用.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/19
