目的:探讨大鼠脊髓损伤后线粒体自噬和凋亡相关蛋白的表达变化及其发生机制。方法:将96只健康雌性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（48只）和脊髓损伤组（48只），每组分为1、3、7、14、21、28 d共6个时间点，各时间点8只。假手术组将T 8~9棘突及椎板切除但不损伤脊髓，脊髓损伤组采用Allen法建立脊髓损伤模型。采用BBB评分评估两组伤后各时间点运动功能；HE染色观察两组伤后各时间点脊髓组织病理学改变；免疫荧光观察两组伤后各时间点电压依赖性阴离子通道蛋白1（VDAC1）分别与微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ、E3泛素连接酶（Parkin）、多泛素结合蛋白（p62）共定位阳性细胞情况；Western blot法检测两组各时间点线粒体LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、细胞质Parkin、线粒体Parkin、细胞质p62、线粒体p62、细胞质细胞凋亡蛋白（Bax）、线粒体Bax、细胞质细胞色素C（Cyt C）、线粒体Cyt C的表达情况。 结果:（1）假手术组伤后各时间点BBB评分均为（21.00±0.00）分，脊髓损伤组伤后1、3、7、14、21、28 d BBB评分分别为（0.94±0.50）分、（1.69±0.70）分、（4.13±0.99）分、（11.81±1.03）分、（15.06±1.12）分、（18.38±0.83）分（ P<0.01）。（2）与假手术组比较，脊髓损伤组伤后1、3 d脊髓组织结构明显破坏，可见大量出血灶，炎性细胞浸润，神经元肿胀，空洞形成；伤后7、14 d出血灶较前明显减少，神经元胞体肿胀，炎性细胞浸润，存在大量空洞；伤后21、28 d可见大量细胞参与修复，细胞排列紊乱。（3）与假手术组比较，脊髓损伤组伤后1、3 d VDAC1分别与LC3Ⅱ、Parkin、p62共定位阳性细胞数明显增多，此后共定位阳性细胞数逐渐减少。（4）假手术组和脊髓损伤组伤后1、3、7、14、21、28 d线粒体LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达量分别为0.56±0.05和1.00±0.05、1.19±0.11、0.86±0.05、0.80±0.08、0.66±0.13、0.51±0.11，细胞质Parkin表达量分别为0.80±0.13和0.47±0.08、0.29±0.06、0.57±0.07、0.70±0.05、0.97±0.09、0.88±0.12，线粒体Parkin表达量分别为0.67±0.09和1.07±0.18、1.27±0.15、0.82±0.12、0.59±0.09、0.53±0.13、0.57±0.14，细胞质p62表达量分别为1.25±0.08和1.04±0.04、0.94±0.05、1.09±0.05、1.19±0.06、1.20±0.04、1.27±0.05，线粒体p62表达量分别为0.61±0.06和0.88±0.07、1.09±0.09、0.98±0.07、0.70±0.08、0.68±0.08、0.60±0.09，细胞质Bax表达量分别为0.92±0.08和0.67±0.07、0.36±0.08、0.48±0.08、0.69±0.06、0.88±0.11、0.94±0.08，线粒体Bax表达量分别为0.57±0.04和0.74±0.04、0.91±0.05、0.76±0.05、0.63±0.08、0.61±0.05、0.57±0.05，细胞质Cyt C表达量分别为0.28±0.05和0.81±0.07、1.12±0.08、0.64±0.07、0.67±0.13、0.60±0.11、0.37±0.06，线粒体Cyt C表达量分别为1.02±0.07和0.91±0.14、0.37±0.07、0.73±0.06、0.91±0.11、0.95±0.13、1.10±0.15。与假手术组比较，脊髓损伤组线粒体LC3Ⅱ/LC3Ⅰ在伤后3 d表达最高，细胞质Parkin在伤后3 d表达最低，线粒体Parkin在伤后3 d表达最高，细胞质p62在伤后3 d表达最低，线粒体p62在伤后3 d表达最高，细胞质Bax在伤后3 d表达最低，线粒体Bax在伤后 3 d表达最高，细胞质Cyt C在伤后3 d表达最高，线粒体Cyt C在伤后3 d表达最低。 结论:大鼠脊髓损伤后线粒体自噬及凋亡均增强，其发生机制可能是由于细胞质Parkin、p62转移至受损线粒体以增强线粒体自噬，而Bax从细胞质转移至受损线粒体内，促使线粒体中大量释放Cyt C以增强细胞凋亡。

目的:研究泛素羧基末端水解酶-1（UCH-L1）抗原表位自身抗体在干燥综合征（SS）筛查诊断中的临床意义。方法:用ELISA检测2017年1月至2020年1月于郑州大学第五附属医院和北京大学人民医院就诊的98例SS患者［男17例，女81例，年龄（49.1±12.3）岁］和37名体检健康志愿者［对照组，男6名，女31名，年龄（46.3±5.8）岁］血清UCH-L1抗原表位自身抗体的水平。分析与合成UCH-L1三种潜在的抗原表位肽段，最终抗UCH-L1 203-214抗体和抗UCH-L1 58-69抗体进入研究，比较两组抗UCH-L1抗体水平，并使用Pearson相关分析UCH-L1与患者临床资料的相关性。 结果:SS组血清中抗UCH-L1 203-214抗体水平显著高于健康对照组（108.2±54.3比78.9±25.8， P<0.001）。SS组血清中抗UCH-L1 58-69抗体水平显著高于健康对照组（86.8±33.3比60.4±21.5， P<0.001）。SS患者血清中抗UCH-L1 203-214抗体及抗UCH-L1 58-69抗体阳性率分别为27.6%（27/98）和25.5%（25/98），健康对照组分别为2.7%（1/37）和5.4%（2/37）。在血清抗UCH-L1 58-69抗体阳性的SS患者中，血清IgG、γ球蛋白及类风湿因子（RF）水平及抗SS相关抗原B（SSB）抗体阳性率均高于抗UCH-L1 58-69抗体阴性患者，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。SS组，在抗核抗体（ANA）、抗RNA结合蛋白（RNP）抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体阴性患者中抗UCH-L1 203-214抗体阳性率分别为32.1%（9/28）、27.2%（25/92）、36.4%（12/33）、28.6%（18/63）；抗UCH-L1 58-69抗体阳性率分别为21.4%（6/28）、30.4%（28/92）、30.3%（10/33）、20.6%（13/63）。血清抗UCH-L1 203-214抗体水平与SS患者血清IgA水平呈正相关（ r=0.21， P=0.024）；抗UCH-L1 58-69抗体水平与SS患者血清γ球蛋白、IgG、RF水平均呈正相关（ r=0.35、0.33、0.32，均 P<0.01）。 结论:UCH-L1抗原表位自身抗体与SS患者某些临床指标具有相关性，对SS的筛查及诊断具有一定意义。

目的:探讨microRNA-140（miR-140）是否有独立于其宿主基因WWP2的转录启动子，从而为骨性关节炎的治疗提供新的思路。方法:通过共转染CRISPR-dCas9-VP64和ACAN gRNA慢病毒的SW1353细胞验证软骨细胞特征性基因ACAN的转录水平。通过构建能稳定表达CRISPR-dCas9-VP64的SW1353细胞并结合多条sgRNA（single guide RNA, sgRNA/gRNA）、人类髋关节软骨RNA测序结果验证miR-140是否与WWP2基因共表达，是否有独立的转录启动位点。结果:共转染CRISPR-dCas9-VP64和ACAN gRNA慢病毒的SW1353细胞能显著提高软骨细胞特征性基因ACAN的转录水平。从基因水平、蛋白水平证实成功构建能稳定表达CRISPR-dCas9-VP64的SW1353细胞。通过人类髋关节软骨RNA测序结果设计多条WWP2 gRNA以及miR-140启动子gRNA。实时定量PCR结果显示miR-140的表达既受其宿主基因WWP2调控，同时也有其独立的转录位点。结论:运用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建稳定表达CRISPR-dCas9-VP64蛋白的SW1353细胞能极大减少实验中样本间的差异化，保证实验结果的一致性。结合多条gRNA证明了miR-140既与WWP2共表达，同时也受其独立的转录启动子调控转录。运用CRISPR-dCas9-VP64d-gRNA能单独调控miR-140的表达，同时其宿主基因的表达不受影响，有潜力作为新兴的基因治疗方法治疗骨性关节炎。

目的:探讨内皮细胞和血管组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的小泛素样修饰在糖尿病加速动脉粥样硬化中的作用。方法:2014年9月至2017年1月选取14周龄雄性健康Sprague-Dawley大鼠（SD大鼠）32只，按随机数字表法分为对照假手术组、对照动脉损伤组、糖尿病动脉损伤组和泛素结合酶9（UBC9）转染组，每组8只。制备1型糖尿病大鼠模型，各组均有1只大鼠造模失败被排除。采用超声仪检测损伤侧颈总侧动脉和健侧颈总动脉收缩期和舒张期内径、动脉内膜厚度，计算标化颈总动脉舒张期直径（sCADD）；采用HE染色和免疫组织化学染色检测内膜增殖情况，在中膜面积相当的情况下计算内膜面积与中膜面积比值。人脐静脉内皮细胞（HUVEC）在高糖中培养24 h后采用实时反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测白细胞介素（IL）-8和IL-1β mRNA表达水平，蛋白质印迹法检测动脉组织UBC9的表达水平，小泛素样修饰试剂盒检测PPARγ小泛素样修饰水平。体外培养HUVEC，检测在不同浓度和不同时间的高糖刺激下PPARγ小泛素样修饰水平。在体内和体外利用慢病毒过表达UBC9，再检测PPARγ小泛素样修饰水平。结果:对照假手术组、对照动脉损伤组和糖尿病动脉损伤组颈总动脉损伤8周后动脉内膜厚度、内膜增殖面积和内膜面积与中膜面积比值逐渐增加[（0.026 ± 0.018）、（0.084 ± 0.007）和（0.264 ± 0.022） mm，（0.18 ± 0.09） × 10 6、（0.32 ± 0.06） × 10 6和（1.64 ± 0.22） × 10 6 μm 2，0.345 ± 0.073、0.570 ± 0.080和2.710 ± 0.220]，sCADD逐渐降低（0.903 ± 0.084、0.800 ± 0.071和0.330 ± 0.036），差异有统计学意义（ F =10.40、9.40、8.20和8.60， P<0.05）。高糖培养HUVEC 24 h后，糖浓度10、20和40 mmol/L时IL-8 mRNA分别为1.00 ± 0.11、3.57 ± 0.22和4.07 ± 0.40，IL-1β mRNA分别为1.00 ± 0.07、3.32 ± 0.29和5.13 ± 0.19，差异有统计学意义（ F = 73.05和205.80， P<0.05）。糖尿病动脉损伤组动脉组织PPARγ小泛素样修饰水平和UBC9表达水平明显低于对照动脉损伤组（0.46 ± 0.25比1.00 ± 0.21和0.45 ± 0.02比1.00 ± 0.07），差异有统计学意义（ P<0.05）；两组PPARγ表达水平比较差异无统计学意义（0.94 ± 0.07比1.00 ± 0.04， P>0.05）。糖浓度10、20和40 mmol/L时UBC9表达水平和PPARγ小泛素样修饰水平逐渐降低（0.99 ± 0.05、0.80 ± 0.06和0.62 ± 0.05，1.00 ± 0.05、0.57 ± 0.13和0.55 ± 0.08），差异有统计学意义（ F = 21.02和14.31， P<0.05），PPARγ表达水平比较差异无统计学意义（1.00 ± 0.03、0.90 ± 0.04和0.91 ± 0.05， F = 3.11， P>0.05）。对HUVEC进行0、6、12、24、48 h的20 mmol/L高糖刺激后，UBC9表达水平和PPARγ小泛素样修饰水平逐渐下调（1.00 ± 0.09、0.75 ± 0.05、0.70 ± 0.08、0.38 ± 0.04和0.35 ± 0.03，1.00 ± 0.03、0.86 ± 0.01、0.59 ± 0.01、0.51 ± 0.11和0.35 ± 0.08），差异有统计学意义（ F = 36.06和33.13， P<0.05），但PPARγ表达水平比较差异无统计学意义（1.00 ± 0.03、1.14 ± 0.02、1.18 ± 0.17、0.98 ± 0.01和1.04 ± 0.05， F = 1.90， P>0.05）。在糖尿病大鼠动脉中过表达UBC9后，组织学分析结果显示，对照动脉损伤组、糖尿病动脉损伤组和UBC9转染组UBC9相对表达水平分别为1.53 ± 0.18、1.00 ± 0.22和3.62 ± 0.35，三组比较差异有统计学意义（ F = 5.64， P<0.05）。超声检测结果显示，对照动脉损伤组、糖尿病动脉损伤组和UBC9转染组颈动脉内膜厚度逐渐增厚[（0.077 ± 0.015）、（0.216 ± 0.007）和（0.125 ± 0.014） mm]，差异有统计学意义（ F = 27.18， P<0.05）。组织学分析结果显示，对照动脉损伤组、糖尿病动脉损伤组和UBC9转染组颈动脉损伤后内膜增殖面积分别为（0.335 ± 0.066） × 10 6、（1.053 ± 0.103） × 10 6和（0.544 ± 0.040） × 10 6 μm 2，内膜面积与中膜面积比值分别为0.630 ± 0.063、2.030 ± 0.052和0.930 ± 0.100，三组比较差异均有统计学意义（ F = 13.58和53.96， P<0.05）。 结论:高血糖下调HUVEC和大鼠动脉组织UBC9表达水平及抑制PPARγ小泛素样修饰的作用，揭示高血糖下调的UBC9和PPARγ小泛素样修饰水平是糖尿病加速动脉粥样硬化的重要机制。

目的:分析幼年特发性炎症性肌病(JIIM)患儿肌炎特异性抗体(MSAs)及肌炎相关性抗体(MAAs)与临床亚型的相关性，探讨MSAs在JIIM中的意义。方法:回顾性分析2017年1月至2019年10月在南京医科大学附属儿童医院风湿免疫科住院的JIIM患儿53例，采用欧蒙免疫印迹法检测血清16项肌炎抗体(MSAs和MAAs)的阳性率，分析肌炎抗体与JIIM患儿临床表现、并发症、治疗及预后的相关性。其中MSAs包括抗染色体-解旋酶-DNA结合蛋白(Mi-2)α抗体、抗Mi-2β抗体、抗转录中介因子(TIF)1-γ抗体、抗黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)抗体、抗核基质蛋白2(NXP2)抗体、抗小泛素样修饰物活化酶抗体、抗信号识别颗粒抗体和抗合成酶(ARS)抗体。结果:53例JIIM患儿肌炎抗体(MSAs和MAAs)阳性率为69.8%(37/53例)，MSAs阳性率为66.0%(35/53例)，最常见MSAs为抗NXP2抗体(10例)，其次为抗TIF1-γ抗体(9例)、抗MDA5抗体(7例)、抗ARS抗体(7例)。抗NXP2抗体阳性患儿以中度肌肉损害(7例)和中度皮肤损害(7例)为主，抗TIF1-γ抗体阳性患儿5例出现持续性皮疹，抗MDA5抗体阳性患儿有严重皮疹(2例)和肺间质病变(5例)。与抗NXP2抗体阴性患儿比较，抗NXP2抗体阳性患儿的天冬氨酸转氨酶(AST)及肌酸激酶(CK)水平明显升高，抗TIF1-γ抗体、抗MDA5抗体和抗ARS抗体阳性患儿的CK水平均明显降低，抗MDA5抗体阳性患儿的血清铁蛋白水平明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。抗NXP2抗体与皮疹( r＝0.360， P＝0.008)和吞咽困难( r＝0.504， P<0.001)呈正相关。抗MDA5抗体( r＝0.497， P<0.001)和抗ARS抗体( r＝0.621， P<0.001)与肺间质病变呈正相关。抗TIF1-γ抗体( r＝-0.542， P<0.001)和抗MDA5抗体( r＝-0.446， P<0.001)与CK水平呈负相关。 结论:MSAs在JIIM患儿中阳性率较高，部分MSAs与JIIM特征性临床表型相关。MSAs可为JIIM患儿的临床亚类分型和疗效针对性评价提供指导。

目的:研究女性雄激素性脱发(FAGA)患者血浆中代谢相关蛋白及其价值。方法:2021年3月至2023年3月从复旦大学附属华山医院皮肤科门诊招募年龄18～50岁的FAGA患者(FAGA组)及健康对照女性(HC组)。采集每位受试者的外周静脉血3 ml，离心获得血浆。对血浆行Olink蛋白质组学分析，通过R语言筛选2组间的差异表达蛋白，并以受试者工作特征(ROC)曲线评估差异蛋白的诊断性能；对差异表达蛋白行基因本体论(GO)分析。取FAGA组顶区、HC组枕区毛囊行免疫荧光分析，对筛选的差异表达蛋白进行验证。应用SPSS 25.0软件对数据进行分析，正态分布计量资料以 ± s表示，2组受试者基本资料比较、毛囊中差异蛋白相对荧光强度比较采用 t检验；对血浆中代谢相关蛋白与受试者基本资料行Pearson相关分析。 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:FAGA组纳入61例患者，年龄(33.8±7.4)岁，发病年龄(29.5±7.8)岁，其中轻度38例、中度14例、重度9例；HC组纳入27例健康女性，年龄(32.0±7.7)岁。2组受试者的基本资料(年龄、体重指数及睾酮、25-羟维生素D、尿酸、铁蛋白水平)比较，差异均无统计学意义( P>0.05)。与HC组相比，FAGA组血浆中有26种差异蛋白表达显著上调( P<0.05)，其中AHCY、NECTIN2差异最为显著( P均＝0.003)，ROC曲线评估显示AHCY和NECTIN2的曲线下面积均大于0.7，表现出良好的诊断准确性。GO分析显示，差异蛋白主要富集在BAT3复合物(细胞组分)，泛素依赖性ERAD途径、自然杀伤细胞活化(生物学过程)，以及泛素蛋白连接酶结合、泛素特异性蛋白酶结合(分子功能)等方面。Pearson相关分析显示，AHCY( r＝－0.23， P＝0.010)、NECTIN2( r＝－0.31， P＝0.033)均与FAGA患者的脱发严重程度呈负相关。毛囊免疫荧光分析结果显示，FAGA组中AHCY、NECTIN2相对荧光强度高于HC组( P<0.05)，即AHCY、NECTIN2均在FAGA组中表达上调。 结论:代谢相关蛋白在FAGA中起着重要作用，AHCY及NECTIN2有可能作为FAGA的早期诊断生物标志物。

目的:基于网络药理学方法探讨海藻治疗甲状腺结节的作用机制。方法:利用TCMSP筛选海藻主要活性成分及靶点，通过GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）获取甲状腺结节疾病靶点。在STRING数据库和Cytoscape 3.2.1软件构建"活性成分-疾病-靶点"网络和蛋白相互作用网络。借助R语言（R version 4.0.0)将共有靶点进行GO生物功能注释和KEGG通路分析。结果:最终筛选出海藻有效成分2个，作用于甲状腺结节靶点59个，涉及DNA结合转录激活剂活性、RNA聚合酶Ⅱ特异性、泛素样蛋白连接酶结合等生物过程，通过介导PI3K-Akt信号通路、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染通路等信号通路，RELA、CASP3、IL6、CASP9、EGFR、VEGFA等基因靶点发挥作用。结论:海藻治疗甲状腺结节具有多靶点、多通路的作用特点，为其进一步研究提供依据。

目的 探讨泛素结合酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用.方法 首先采用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)法和Western blot检测不同浓度(0 μmol/L、50μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L 和 200 μmol/L)同型半胱氨酸对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)的活力及焦亡的影响;采用Western blot检测不同组细胞中UBC9、SUMO化修饰蛋白SUMO-1、炎症因子IL-1β的表达水平;qRT-PCR检测干扰前后UBC9的mRNA表达,同时检测干扰UBC9后,UBC9、焦亡相关蛋白、IL-1β及SUMO-1相关表达.结果 当采用100 μmol/L的Hcy刺激后,巨噬细胞的活力影响最小且焦亡蛋白NLRP3、Caspase-1表达最明显(P＜0.001);与Control组相比,Hcy组IL-1β的表达水平升高(P＜0.01),SUMO-1表达升高(P＜0.01);与Control组相比,Hcy组中UBC9蛋白水平及mRNA水平表达均增高(P＜0.05);转染si-UBC9后,与si-NC+Hcy 组相比,si-UBC9+Hcy 组 NLRP3、Caspase-1、IL-1β、UBC9、SUMO-1 表达降低(P＜0.01).结论 同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡的发生,其机制与上调泛素结合酶9发生SUMO化修饰有关.

探索柠檬精油中发挥抗肿瘤作用的活性物质以及抑制头颈癌细胞SCC15 和CAL33 增殖的分子机制,该研究利用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay,MTT]鉴定出抑制头颈癌细胞增殖的活性物质为柠檬醛,并测定了柠檬醛抑制头颈癌细胞和正常细胞的IC50;同时,利用 5-ethynyl-2'-deoxyuridine(EdU)实验检测柠檬醛对头颈癌细胞增殖率的影响,通过克隆形成实验检测柠檬醛对头颈癌细胞体外肿瘤球形成的影响.通过流式细胞术检测柠檬醛对头颈癌细胞周期阻滞和凋亡诱导情况;采用蛋白印迹检测柠檬醛对头颈癌细胞周期和凋亡相关蛋白表达水平的影响.结果表明柠檬醛可有效抑制头颈癌细胞的生长增殖,具有抗肿瘤活性,其抑制CAL33 和SCC15 的半数抑制浓度分别为 54.78、25.23 μg·mL-1.进一步分析发现细胞周期相关蛋白 S期激酶关联蛋白 2(SKP2)、原癌基因(C-MYC)、细胞周期依赖性激酶 1(CDK1)、周期蛋白B(cyclin B)均呈下调趋势,细胞周期阻滞于G2/M期.此外,柠檬醛能够促使细胞凋亡相关蛋白半胱天冬蛋白酶-3(caspase-3)、半胱天冬蛋白酶-9(caspase-9)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)剪切形式呈现上调趋势,而且使自噬相关蛋白微管相关蛋白 1 轻链 3B(LC3B)、泛素结合蛋白(P62)、自噬效应蛋白Beclin1(Beclin1)和溶酶体相关膜蛋白 1(LAMP1)表达呈上调趋势,暗示柠檬醛诱导头颈癌细胞发生凋亡和激活自噬.利用双标质粒系统mCherry-GFP-LC3 分析发现柠檬醛阻碍自噬体和溶酶体融合,使自噬流进程受阻.因此,柠檬精油中发挥抗头颈癌细胞增殖的主要活性成分是柠檬醛,该成分对头颈癌细胞具有显著的抑制作用,其分子机制可能是柠檬醛通过阻滞细胞周期,诱导细胞发生凋亡和自噬,最终抑制肿瘤细胞增殖.

目的:探讨去泛素连接酶USP9X(deubiquitin ligase 9X)是否通过调控叉头框蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1)介导糖酵解从而影响鼻咽癌细胞的增殖能力.方法:采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测鼻咽癌组织和正常鼻黏膜组织以及鼻咽癌细胞中USP9X mRNA和蛋白的表达情况.通过病毒感染的方法将携带有特异性针对USP9X基因的shRNA(shUSP9X)和携带有USP9X全基因的重组质粒Flag-USP9X(过表达USP9X)分别转入鼻咽癌CNE2和HNE2细胞,采用CCK-8法检测沉默或过表达USP9X基因对鼻咽癌细胞增殖的影响,通过对细胞能量代谢和细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)的检测分析对鼻咽癌细胞糖酵解能力的影响.通过ubibrowser_v3/数据库、免疫共沉淀和ZDOCK软件分析USP9X与FOXM1蛋白的结合情况,并通过泛素化实验观察沉默USP9X对FOXM1蛋白泛素化水平的影响;随后进一步通过实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测对FOXM1 mRNA和蛋白表达的影响.最后,采用慢病毒感染的方法在沉默USP9X表达的CNE2细胞中同时转入重组载体Flag-FOXM1恢复FOXM1的表达,再通过CCK-8法、细胞能量代谢和ECAR检测分析上调FOXM1对CNE2细胞增殖和糖酵解能力的影响.结果:与正常鼻黏膜组织相比,鼻咽癌组织中USP9X mRNA和蛋白的表达水平均显著提高(P均＜0.05).下调鼻咽癌CNE2细胞中USP9X的表达水平后,CCK-8法、细胞能量代谢检测和ECAR实验检测发现,CNE2细胞的增殖和糖酵解能力均被明显抑制(P均＜0.05).相反,上调HNE2细胞中USP9X的表达水平后,HNE2细胞的增殖和糖酵解能力均被明显提高(P均＜0.05).通过ubibrowser_v3/数据库、免疫共沉淀和ZDOCK软件证实,USP9X与FOXM1蛋白存在相互结合的关系,CNE2细胞中沉默USP9X表达水平可显著增加FOXM1的泛素化水平.在低表达USP9X的CNE2细胞中过表达FOXM1可恢复鼻咽癌细胞的增殖和糖酵解能力(P均＜0.05).结论:去泛素连接酶USP9X通过抑制FOXM1泛素化降解进而提高鼻咽癌细胞的糖酵解能力,最终促进鼻咽癌细胞的增殖.USP9X可能是鼻咽癌治疗上一个潜在的新靶点.