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miR-320a调控水通道蛋白4对阿尔茨海默病细胞模型的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨miR-320a调控水通道蛋白4(AQP4)对阿尔茨海默病细胞模型的影响。方法:采用神经生长因子(NGF)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)为神经元细胞,观察PC12组和神经元细胞组的细胞形态。采用β淀粉样蛋白(Aβ)处理诱导的神经元细胞,构建AD细胞模型。根据处理因素的不同将培养细胞分为对照组(不做特殊处理)、miR-320a模拟剂组(加入miR-320a模拟剂50 nmol/L)、miR-320a抑制剂组(加入miR-320a抑制剂50 nmol/L)、Aβ处理组(加入Aβ)、Aβ+miR-320a模拟剂组(加入Aβ+miR-320a模拟剂50 nmol/L)和Aβ+miR-320a抑制剂组(加入Aβ+miR-320a抑制剂50 nmol/L)。采用CCK8法检测细胞活力。利用RT-PCR检测目标基因AQP4、miR-320a、Bax、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)mRNA的相对表达。采用免疫印迹法检测目标基因AQP4、Bax、Bcl-2蛋白的相对表达。结果:PC12经NGF诱导后,与PC12组比较,神经元细胞组泛素羧基末端水解酶-L1(Uch-L1)基因表达明显下调,神经丝蛋白(NFP)、微管结合蛋白2(MAP2)、AQP4基因表达明显上调,MAP2和AQP4蛋白相对表达明显增高。造模后,与对照组比较,Aβ处理组神经元细胞凋亡增加,细胞活力明显减低,miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax的mRNA及蛋白表达明显增加。与Aβ处理组比较,Aβ+miR-320a模拟剂组,细胞活力明显增加,miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显增加、Bax的mRNA及蛋白表达明显降低。与Aβ+miR-320a模拟剂组比较,Aβ+miR-320a抑制剂组细胞活力明显降低,miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax的mRNA及蛋白表达明显升高。结论:miR-320a可以上调AD细胞模型中AQP4的表达,减少细胞凋亡,增加细胞存活率。
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编辑人员丨5天前
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咪达唑仑对氧葡萄糖剥夺后N2a/APP695细胞β淀粉样蛋白的抑制作用及机制
编辑人员丨5天前
目的:探讨咪达唑仑对被剥夺氧和葡萄糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)后的N2a/APP695细胞淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)代谢变化的影响及机制。方法:将处于对数生长期的N2a/APP695细胞用平衡盐缓冲液冲洗后随机分为空白组、对照组及实验组。空白组未经OGD处理,在正常培养箱内培养;对照组行OGD处理后继续培养复氧;实验组在OGD处理后加入不同浓度(分别为70、100、125、150 ng/ml)的咪达唑仑继续培养复氧。24 h后用AnnexinV-FITC/双染法流式细胞术检测各组细胞凋亡比例;用Western blot方法检测各组细胞的Caspase-3、Aβ 1-42、解整合素金属蛋白酶10(adisintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)、β-淀粉样前体蛋白水解酶1(β-site APP cleavage enzyme-1,BACE1)、早老素1(presenilin 1,PS1)蛋白水平。 结果:与空白组相比,对照组的细胞凋亡比例、Caspase-3、Aβ 1-42、BACE1及PS1水平显著升高( P<0.05);APP及ADAM10水平无明显变化( P>0.05)。与对照组相比,实验组细胞凋亡比例、Caspase-3、Aβ 1-42显著下降( P<0.05);咪达唑仑70 ng/ml组BACE1显著下降( P<0.05),而APP、ADAM10及PS1无明显变化( P>0.05)。 结论:OGD可通过上调BACE1及PS-1导致Aβ 1-42表达增加促使细胞凋亡;而咪达唑仑可通过下调BACE1减少Aβ 1-42表达进而减少神经细胞凋亡,发挥对OGD损伤后N2a/APP695细胞的保护作用。
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编辑人员丨5天前
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槲皮苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的影响
编辑人员丨5天前
目的:观察槲皮苷对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的PC12细胞损伤的影响。方法:将PC12细胞随机分为正常组,Aβ25-35组,槲皮苷低、中、高剂量组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式双染检测细胞凋亡,比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Caspase-9活性,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路激活,组间比较采用 t检验。 结果:与正常组比较,Aβ25-35组细胞活力显著降低(0.362±0.036比0.453±0.045, t=4.230, P<0.05),细胞早期凋亡率[(17.89±1.81)%比(2.31±0.23)%, t=8.623, P<0.05]及晚期凋亡率[(19.56±1.95)%比(3.32±0.32)%, t=8.562, P<0.05]均显著提高( P<0.01),Caspase-3(4.93±0.50比1.32±0.13, t=6.325, P<0.05)、Caspase-9(4.46±0.45比1.45±0.14, t=6.105, P<0.05)活性显著提高( P<0.01),bax表达量上调(0.08±0.01比0.98±0.08, t=6.923, P<0.05)、bcl-2表达量下调(0.45±0.05比0.04±0.00, t=5.124, P<0.05),PI3K(0.16±0.01比2.23±0.24, t=4.236, P<0.05)、p-Akt(0.35±0.03比0.98±0.10, t=6.359, P<0.05)表达量下调;与Aβ25-35组比较,槲皮苷低、中、高剂量组细胞活力显著上升(0.432±0.043比0.362±0.036, t=4.259, P<0.05;0.464±0.046比0.362±0.036, t=5.856, P<0.05;0.523±0.052比0.362±0.036, t=6.258, P<0.05),细胞早期凋亡率[(12.19±1.22)%比(17.89±1.81)%, t=4.355, P<0.05;(6.69±0.68)%比(17.89±1.81)%, t=4.698, P<0.05;(3.31±0.37)%比(17.89±1.81)%, t=5.632, P<0.05]及晚期凋亡率[(12.46±1.25)%比(19.56±1.95)%, t=5.321, P<0.05;(8.37±0.84)%比(19.56±1.95)%, t=5.967, P<0.05;(4.28±0.43)%比(19.56±1.95)%, t=6.597, P<0.05]均显著降低,Caspase-3(4.06±0.41比4.93±0.50, t=5.326, P<0.05;3.08±0.32比4.93±0.50, t=6.257, P<0.05;2.08±0.21比4.93±0.50, t=6.984, P<0.05)、Caspase-9活性显著降低(3.52±0.35比4.46±0.45, t=4.214, P<0.05;2.78±0.27比4.46±0.45, t=5.987, P<0.05;1.85±0.18比4.46±0.45, t=6.865, P<0.05,bcl-2表达量上调(0.18±0.02比0.08±0.01, t=4.215, P<0.05;0.26±0.03比0.08±0.01, t=4.956, P<0.05;0.83±0.08比0.08±0.01, t=6.425, P<0.05),PI3K(0.25±0.02比0.16±0.01, t=3.231, P<0.05;0.43±0.04比0.16±0.01, t=4.239, P<0.05;1.23±0.12比0.16±0.01, t=6.865, P<0.05)及p-Akt表达量上调(0.43±0.04比0.35±0.03, t=3.215, P<0.05;0.45±0.04比0.35±0.03, t=3.243, P<0.05;0.65±0.06比0.35±0.03, t=5.326, P<0.05);槲皮苷中、高剂量组中bax表达量下调(0.29±0.03比0.45±0.05, t=5.234, P<0.05;0.09±0.01比0.45±0.05, t=6.216, P<0.05)。 结论:槲皮苷可能通过抑制PI3K/Akt信号通路抵抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡。
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编辑人员丨5天前
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奥曲肽联合乌司他丁在改善老年重型急性胰腺炎患者预后中的应用
编辑人员丨5天前
目的:探讨奥曲肽联合乌司他丁在老年重型急性胰腺炎(SAP)患者治疗中的临床应用价值。方法:选取2016年5月至2019年2月浙江省中西医结合医院消化科收治的124例老年SAP患者,分为联合组和对照组,每组各62例。联合组给予奥曲肽联合乌司他丁治疗,对照组仅采用奥曲肽进行治疗。全自动生化分析及酶联免疫法监测治疗前及治疗后1、3、5、7、14 d血清白细胞计数、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和淀粉酶水平;分析两组治疗后7 d的疼痛等级评分、急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)和疗效评价;对比两组患者的进食时间和住院时间,记录治疗过程中相关并发症情况;随访两组患者1年内并发症发生及胰腺炎再复发情况。结果:治疗前两组患者血清白细胞计数、CRP、血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平比较,差异均无统计学意义(均 P>0.05);治疗后3 d两组患者白细胞计数、CRP和TNF-α水平差异有统计学意义( t=3.735、2.851、-2.147, P=0.036、0.029、0.043),血清淀粉酶、IL-6水平差异无统计学意义(均 P>0.05);治疗后7 d两组患者上述各指标结果差异均有统计学意义( t=3.624、2.918、-2.166、2.684、-2.593, P=0.023、0.011、<0.001、0.015、<0.001);治疗后14 d血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平差异有统计学意义( t=-3.515、4.627、-3.189,均 P<0.001),白细胞计数、CRP水平比较差异无统计学意义(均 P>0.05)。治疗后7 d两组患者VAS、APACHE-Ⅱ评分比较差异有统计学意义( t=-2.346、-3.245, P=0.021、0.002)。治疗后7 d,联合组治疗显效率为79.0%(49/62),对照组为61.3%(38/62),差异有统计学意义( χ2=4.661, P=0.031)。联合组患者平均进食时间为(6.72±1.87)d、平均住院时间为(11.23±2.98)d,对照组为(7.65±1.69)d、(13.85±3.42)d,组间差异有统计学意义( t=-2.868、-4.565,均 P<0.05)。治疗过程中,联合组患者感染性胰腺坏死、消化道反应和器官衰竭的发生率分别为11.3%(7/62)、43.5%(27/62)、1.6%(1/62),与对照组25.8%(16/62)、21.0%(13/62)、11.3%(7/62)比较差异有统计学意义( χ2=4.324、7.233、4.810, P=0.038、0.007、0.028)。联合组平均无并发症时间为(10.25±3.26)个月、无复发时间为(10.69±2.51)个月,对照组分别为(8.72±3.73)个月、(9.62±2.92)个月,差异有统计学意义(Log Rank χ2=7.463、4.589, P=0.006、0.032)。 结论:奥曲肽联合乌司他丁可有效缓解老年SAP患者局部症状和临床进展,降低并发症风险和疾病复发率,促进患者早期康复。
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编辑人员丨5天前
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β淀粉样蛋白调控老年性黄斑变性免疫炎症机制的研究进展
编辑人员丨5天前
老年性黄斑变性(AMD)是一种发病机制复杂的年龄相关性退行性疾病,其初始病变即伴随免疫炎症反应的发生。β淀粉样蛋白(A β)是一种经淀粉样蛋白前体蛋白水解后生成的小分子蛋白,其作为主要成分参与AMD早期特征性表现玻璃膜疣的形成。在AMD局部炎症反应中,A β作为一种重要的病理沉积物,促进巨噬细胞的增生及分化,改变其形态进而推进AMD病程。此外,A β还可通过激活炎症反应通路,调控免疫分子及补体系统,从而介导视网膜慢性炎症反应,加速AMD病程。但由于AMD的发生并不仅仅因炎症反应导致,所以单一的免疫抑制未必能在AMD的病程中发挥作用,将AMD患者眼内被破坏的免疫系统重新平衡才是未来的发展方向。
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编辑人员丨5天前
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基于AMPK/SIRT1通路探究苦参碱对阿尔茨海默病Aβ25-35诱导PC12细胞氧化损伤和凋亡的影响
编辑人员丨1个月前
目的 探讨苦参碱对阿尔茨海默病β-淀粉样蛋白(Aβ)25-35诱导PC12细胞凋亡和氧化损伤的影响,并分析其与AMP活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子(SIRT1)通路的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度苦参碱对PC12细胞生长的影响,最终选择0.5、1.0和1.5 mmol/L苦参碱进行实验.将PC12细胞分为Con组(空白培养细胞),Aβ25-35组(20μmol/L的Aβ25-35处理细胞),Aβ25-35+Matrine-L组、Aβ25-35+Matrine-M组、Aβ25-35+Matrine-H组(20 μmol/L的Aβ25-35和0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L苦参碱处理细胞).用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(ROS)含量,酶联免疫吸附法检测超氧化的物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,Western blotting检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、AMPK/SIRT1通路相关蛋白表达.结果 与Con组相比,Aβ25-35组24 h、48 h的吸光度(OD)值、Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性均降低,凋亡率、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达、ROS含量、IL-6、IL-1β、TNF-α表达增加,p-AMPK、SIRT1蛋白表达上调(均P<0.05);与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+Matrine-L组、Aβ25-35+Matrine-M组、Aβ25-35+Matrine-H组24 h、48 h的OD值、Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性增加(P<0.05),凋亡率、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达、ROS含量、IL-6、IL-1β、TNF-α表达降低,p-AMPK、SIRT1蛋白表达下调(P<0.05).结论 苦参碱可能通过抑制AMPK/SIRT1通路激活,减轻Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤.
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编辑人员丨1个月前
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黄连解毒汤通过抑制NLRP3炎性小体改善Tau/APP/PS1转基因AD小鼠神经元损伤的机制研究
编辑人员丨2024/7/13
目的 探讨黄连解毒汤对Tau/APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠神经元损伤的影响及机制.方法 将Tau/APP/PS1转基因AD小鼠随机分成模型组和黄连解毒汤低、中、高剂量组,每组 10 只.选取 10 只相同月龄的雄性C57BL/6J小鼠作为对照组.药物干预4周后,ELISA法检测小鼠海马组织炎症因子及AD相关病理标志物可溶性淀粉酶前体蛋白α(soluble amyloid precursor protein α,sAPPα)、β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)40、Aβ42 和磷酸化Tau 蛋白(phosphorylated tau protein,p-Tau)的水平,免疫荧光双标法检测海马Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体和小胶质细胞特异性标志物离子钙结合衔接分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)的表达,Western blot检测小鼠海马NLRP3 炎性小体信号通路活化情况.结果 与对照组比较,模型组小鼠海马中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-1 和Iba1 表达明显增加(P<0.05),炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平上升(P<0.05),Aβ40、Aβ42 和p-Tau水平及p-Tau/Tau值均升高(P<0.05),sAPPα水平下降(P<0.05).与模型组比较,不同剂量黄连解毒汤治疗组小鼠海马中sAPPα水平上升(P<0.05),Aβ40、Aβ42 及 Tau 蛋白磷酸化水平均明显下降(P<0.05),IL-1β、IL-18、TNF-α 水平降低(P<0.05),NLRP3、ASC、Caspase-1和Iba1表达减少(P<0.05).结论 黄连解毒汤可能通过下调AD小鼠海马NLRP3炎性小体信号通路活性,抑制小胶质细胞活化,降低Aβ、p-Tau等神经元毒性病理产物的水平,从而改善海马神经元损伤.
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编辑人员丨2024/7/13
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一株肝素降解菌的分离鉴定及基因组测序分析
编辑人员丨2024/5/11
以白头叶猴粪便为材料分离到一株不形成芽孢、可产黄色色素的细菌,革兰氏染色为阴性,接触酶阳性,经形态学观察和分子生物学鉴定为Sphingobacterium daejeonense NS6-1.NS6-1 不能水解淀粉,但能降解肝素,肝素酶酶活为46.60 U/mL,当添加100 mmol/L的Ca2+为辅助剂时肝素酶活性可达107.29 U/mL.通过K-B纸片琼脂扩散法检测菌株对几种常规药物的敏感性,发现NS6-1对卡那霉素和庆大霉素耐药,对利福平、四环素、多黏菌素B、氧氟沙星、头孢哌酮和万古霉素敏感.基于Illumina Hiseq 4000 平台对NS6-1 进行全基因组序列测定,结果显示其基因组大小为 4381042 bp,GC含量为 37.21%,预测到的蛋白质编码基因数为 3852 个.功能基因注释结果显示,基因组中含 1 个编码肝素酶Ⅱ/Ⅲ基因,1 个氨基糖苷类抗生素耐药功能基因以及 1 个与芳香烃化合物降解相关的邻苯二酚 1,2-双加氧酶基因.利用antiSMASH预测到 6 个次级代谢产物生物合成基因簇,其中,2 个为类胡萝卜素合成基因簇,1 个为高分子表面活性剂emulsan合成基因簇.综上,NS6-1 具有肝素类物质降解能力以及潜在的石油降解能力和类胡萝卜素合成能力.以上结果为该菌的后续研究及实际应用奠定了理论基础.
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编辑人员丨2024/5/11
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生淀粉水解α-淀粉酶Amy486的重组表达和性质分析
编辑人员丨2024/5/11
为明晰生淀粉水解α-淀粉酶Amy486 独特的催化特征,将克隆自Exiguobacterium sp.J84 菌株的amy486 进行重组表达,并研究重组酶的酶学性质、嗜盐特性和钙离子依赖性.Amy486 最适催化pH为7.5,在pH 6.5~8.5 范围内酶活力保持 40%以上,最适温度为35℃,30℃半衰期为100 h.1.5 mol/L Na2 SO4 处理可将Amy486 的比酶活由 1.53 U/mg提升至 2209 U/mg.添加 1.0 mol/L Na2 SO4,Amy486 在 35℃放置 500 h,酶活力可保持 60%以上.2.5 mmol/L CaCl2 可提升酶活力至 110%,添加超过 5 mmol/L CaCl2,Amy486 的相对酶活力降至 100%以下,EDTA孵育对Amy486 蛋白的酶活力和稳定性影响较小.Amy486 与钙离子结合的关键位点为K302,K302E与钙离子的结合能力增强,从而降低该酶对外源钙离子的依赖性.α-淀粉酶Amy486 及其突变体酶K302E是具有较高比酶活的生淀粉水解酶,对外源钙离子的依赖性较低,其活力的发挥依赖于适合的盐浓度,可应用于某些高盐环境下的淀粉水解.
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编辑人员丨2024/5/11
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熟地黄-山茱萸药对通过PI3K/AKT通路对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡的影响
编辑人员丨2024/3/30
目的 研究熟地黄-山茱萸药对通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导小鼠脑神经瘤细胞株(N2a)细胞凋亡的抑制作用.方法 以Aβ25-35(20 μmol/L)处理N2a细胞构建阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)细胞模型,给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h.采用CCK8法测定细胞存活率,寻求最佳的Aβ25-35的诱导浓度;Hoechst 33342和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western Blot法检测cleaved Caspase-3、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达.结果 与空白对照组比较,经过Aβ25-35处理后的N2a细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值下降(P<0.05);给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h后,N2a细胞的凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量组比,高剂量组N2a细胞的凋亡率和Caspase-3活性降低,p-AKT/AKT比值升高(P<0.05).结论 熟地黄-山茱萸醇提物可对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与促进PI3K/AKT信号通路有关.
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编辑人员丨2024/3/30
