目的:研究L-T4凝胶剂联合二甲双胍对甲状腺功能减退（简称：甲减）模型大鼠海马乙酰胆碱（acetylcholine，Ach）和单羧酸转运蛋白8（monocarboxylate reansporter 8，MCT8）含量的影响。方法:应用随机数字表法将40只大鼠随机分为5组，正常对照组（CON组）、甲减组（Hypo组）、L-T4替代治疗组（L-T4组）、二甲双胍治疗组（MET组）、联合治疗组（L-T4+MET组）。CON组大鼠进行正常饮水，其余4组大鼠饮用含有0.05%丙硫氧嘧啶的饮用水，进行6周甲减造模。在造模第5周时，MET组大鼠进行灌胃1ml/100g二甲双胍溶液，L-T4组大鼠应用L-T4凝胶剂涂抹背部脱毛处，涂抹剂量为0.1g/100g，L-T4+MET组大鼠进行L-T4凝胶剂涂抹和二甲双胍溶液（1ml/100g）灌胃治疗。6周造模结束后，收集腹主动脉血液，在冰台上将大脑海马组织快速分离，同时将气管和甲状腺剪下拍照纪录大小，且将其储存在-80℃冰箱中或浸泡在4%多聚甲醛固定，用于免疫组化染色。使用 t检验确认各组数据之间的差异性，多组间均数比较应用单因素方差分析，当计数资料以百分率表示时使用 χ 2。以 P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果:尼氏染色结果显示，Hypo组的光密度值低于CON组（ t=8.944， P<0.001），MET组大鼠光密度较Hypo组高（ t=4.472， P<0.001），L-T4组大鼠光密度值较Hypo组大鼠高（ t=4.472， P<0.001），联合治疗组大鼠光密度值较Hypo组大鼠高（ t=8.944， P<0.001），且恢复至CON组水平（ P=1.000）。经过2周治疗后，Hypo组的总甲状腺素水平（total thyroxine level，TT4）水平低于CON组（ t=14.536， P<0.001），MET组大鼠TT 4水平较Hypo组高（ t=6.924， P<0.001），L-T4组TT 4水平较Hypo组大鼠高（ t=4.892， P<0.001），联合治疗组大鼠TT 4水平较Hypo组大鼠高（ t=12.890， P<0.05），且恢复至CON组水平（ t=0.494， P=0.647）。研究结束后，收集各组大鼠的甲状腺组织，Hypo组大鼠甲状腺组织重量高于CON组（ t=7.906， P<0.001），MET组和L-T4组大鼠甲状腺组织重量低于Hypo组（MET: t=2.000， P<0.001; L-T4: t=3.000， P<0.001），但高于CON组（MET: t=3.000， P<0.001; L-T4: t=2.000， P<0.001），L-T4+MET组大鼠甲状腺重量与CON组相似（ P=0.610）。经过HE染色显示，联合治疗组甲状腺滤泡出现大小不等，胶质数量和吸收空泡数量基本恢复与CON相似。经治疗后，Hypo组的Ach水平低于CON组（ t=3.618， P<0.001），MET组大鼠Ach水平较Hypo组高（ t=3.121， P=0.016），L-T4组Ach水平较Hypo组大鼠高（ t=3.321， P=0.027），联合治疗组大鼠Ach水平较Hypo组大鼠高（ t=3.202， P=0.001），且恢复至CON组水平（ t=3.362， P=0.605）。经过治疗后，Hypo组的MCT8水平高于CON组（ t=11.254， P<0.001），MET组大鼠MCT8水平较Hypo组低（ t=5.679， P<0.001），L-T4组MCT8水平较Hypo组大鼠低（ t=5.813， P<0.001），联合治疗组大鼠MCT8水平较Hypo组大鼠低（ t=8.624， P<0.001），且恢复至CON组水平（ P=0.477）。 结论:L-T4凝胶剂联合二甲双胍对甲减有良好治疗作用，其能升高海马Ach水平，降低海马MCT8水平。

目的:探究TcpC对尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli, UPEC)引发小鼠膀胱炎的作用，并初步了解其致病机制。 方法:从尿道向C57BL/6小鼠膀胱滴注10 9 CFU分泌TcpC的UPEC CFT073 wt或敲除 tcpc基因的CFT073 Δ tcpc，构建膀胱炎模型小鼠。3 d后处死小鼠取膀胱观察大体病理变化。膀胱4%多聚甲醛固定24 h后，包埋、切片、HE染色观察膀胱组织病理改变情况，免疫组化法对组织中TcpC进行定位。采集上述UPEC菌株感染的小鼠尿液，十倍稀释法计数尿液中细菌载量，PCR检测CFT073 wt感染组膀胱组织和尿液细菌基因组DNA中是否存在 tcpc基因。实时荧光定量PCR和Western blot检测CFT073 wt菌株感染巨噬细胞后胞内TcpC mRNA和蛋白质水平。Western blot和ELISA分别检测上述UPEC菌株对巨噬细胞NF-κB活化和促炎因子表达水平的影响，激光共聚焦显微镜和荧光显微镜分别观察上述UPEC菌株感染巨噬细胞后细菌和细胞活力。 结果:与CFT073 Δ tcpc组相比，CFT073 wt组小鼠膀胱明显肿大，膀胱组织中有大量中性粒细胞浸润和TcpC。CFT073 wt组小鼠尿液中的细菌数量显著多于CFT073 Δ tcpc组；PCR结果显示，膀胱组织和尿液中的细菌均为CFT073 wt。在CFT073 wt菌株感染巨噬细胞过程中，胞内TcpC的mRNA和蛋白质水平显著升高。CFT073 wt促进巨噬细胞NF-κB信号通路IκBα的蛋白质水平并抑制p65的磷酸化水平和促炎因子的产生。TcpC有利于CFT073 wt在巨噬细胞内的存活和侵袭。 结论:TcpC在CFT073 wt感染及引发小鼠膀胱炎过程中表达水平显著升高，并通过抑制巨噬细胞NF-κB信号通路的活化和促炎因子的产生提高CFT073 wt在巨噬细胞内的存活率，与UPEC致病及逃逸巨噬细胞固有免疫密切相关。

目的:研究前列地尔对快速上浮脱险致减压病大鼠心肺系统的影响。方法:80只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、前列地尔预防1组、前列地尔预防2组和前列地尔预防3组，每组20只。3个前列地尔预防组大鼠在进舱前15 min通过尾静脉分别注射前列地尔溶液（5、10、20 μg/kg）；对照组大鼠在进舱前15 min注射等体积生理盐水。4组大鼠进舱后，采用压缩空气以指数速率2 T/7加压至1.5 MPa，停留4.5 min后以3 m/s速度减压出舱。出舱后即刻观察大鼠的行为学表现并统计存活率；30 min后采用5%戊巴比妥溶液腹腔注射麻醉大鼠，摘取右下肺组织进行肺干湿重比检测；另取心脏和肺脏组织，4%中性甲醛溶液固定，经过脱水、包埋、切片和染色等处理后于显微镜下观察其病理改变。经下腔静脉收集静脉血用于血清生化指标［谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）］和血浆D-二聚体的检测。 结果:前列地尔预防3组大鼠存活率（70%）显著高于对照组（40%），差异有统计学意义（ P<0.05）；前列地尔预防3组大鼠肺组织干湿重比与对照组相比差异显著（ P<0.01）。对照组大鼠肺泡结构大面积破坏融合，肺泡腔内可见红细胞渗出，心肌纤维水肿、变性，断裂明显；前列地尔预防组大鼠肺泡壁增厚程度和心肌纤维水肿程度显著减轻。此外，前列地尔预防组大鼠血清ALT、AST、ALP水平以及血浆D-二聚体含量明显降低（ P<0.05）。 结论:前列地尔通过减轻大鼠心肺组织的损伤和炎症反应，达到预防快速上浮脱险所致减压病的目的。

目的:探讨内耳道底骨性结构及前庭神经、单孔神经骨管（神经管）的Micro-CT影像解剖学特征。方法:取10%甲醛溶液固定的成人尸头标本6具（颞骨12侧），其中男性4具、女性2具，具体年龄不详。对12侧颞骨均行Micro-CT扫描，再应用Mimics软件对内耳道底骨性结构及其中的神经管进行三维重建，之后进行影像解剖学观察，并分别测量前庭上神经、前庭下神经、单孔神经管相关解剖学参数。结果:经Micro-CT扫描及三维重建，内耳道底骨性结构及其内穿行的前庭神经和单孔神经管显示清晰。前庭上、下神经及单孔神经的解剖形态、位置及走行存在多种解剖变异以及多交叉分布现象。左右两侧前庭上神经管长度分别为（3.68±0.79）mm和（3.54±1.04）mm，起始处前后径分别为（2.03±0.76）mm和（1.83±0.68）mm、上下径分别为（1.75±0.35）mm和（1.72±0.43）mm，中点处的前后径分别为（0.89±0.19）mm和（1.13±0.29）mm、上下径分别为（1.58±0.26）mm和（1.69±0.58）mm；左右两侧前庭下神经管前后径分别为（0.44±0.07）mm和（0.50±0.29）mm，上下径分别为（0.53±0.11）mm和（0.76±0.38）mm。左右两侧单孔神经管直线长度分别为（3.97±0.68）mm和（3.85±0.69）mm，其内侧段长度分别为（2.54±0.70）mm和（2.26±0.82）mm、外侧段长度分别为（1.82±0.57）mm和（1.99±0.39）mm，内侧段直径分别为（0.67±0.10）mm和（0.66±0.09）mm、外侧段直径分别为（0.47±0.04）mm和（0.51±0.10）mm，内外段交角分别为128.82°±17.23°和127.51°±11.70°。以上各指标测量值侧别间比较，差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。 结论:Micro-CT扫描及三维重建可清晰显示内耳道底骨性结构及前庭神经、单孔神经骨管等结构及其空间位置与走行；前庭神经和单孔神经骨管解剖形态及位置、走行均存在较大变异，但左右侧别间相关解剖学测量结果无差异。

目的:旨在体外建立一种具有自发成球和多向分化潜能的人脑胶质瘤干细胞三维球体扩增模型，并了解其蛋白质和脂质及其次级成分含量，为进一步研究球体的代谢奠定基础。方法:分别将人脑胶质瘤干细胞GSC23和SU3在无血清干细胞培养液中培养，培养约2~3周收集细胞球。在多聚甲醛溶液中固定，脱水，石蜡包埋，切片，免疫组织化学染色检测胶质瘤相关标志蛋白，拉曼成像分析球体组织中的蛋白质和脂质及其次级成分含量。采用单因素方差分析比较大球体组、中球体组、小球体组的蛋白质、脂质和苯丙氨酸含量。结果:两种干细胞均能在培养皿内形成类似实体瘤的干细胞扩增球体。免疫组织化学染色显示，多形性胶质母细胞瘤常见标志蛋白CD133、Nestin、表皮生长因子受体、S100、Olig2、p53、Ki－67、胶质纤维酸性蛋白、vimentin、CXC趋化因子受体4和CD34全部表达。拉曼成像显示，所构建的人脑胶质瘤干细胞扩增球体中含有蛋白质(2 930、1 685和1 586 cm －1)、脂质(2 845和1 444 cm －1)、苯丙氨酸(1 003 cm －1)和酰胺Ⅲ(1 250 cm －1)，大球体组、中球体组、小球体组的蛋白质、脂质和苯丙氨酸含量差异无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:体外成功构建了人脑胶质瘤干细胞扩增球体模型，其不仅具有三维实体瘤的外形特征和无限扩增能力，还有稳定储存蛋白质和脂质等肿瘤细胞代谢必备能源的能力，有望作为体外人脑胶质瘤研究的工具。

目的:构建人唾液腺基底细胞腺瘤（basal cell adenoma，BCA）体外类器官模型。方法:纳入2021年10月于上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔病理科确诊的唾液腺BCA患者1例（66岁女性），收集其手术切除新鲜肿瘤组织，在以基质胶固态液滴为基础的培养液中行体外类器官培养，倒置显微镜观察类器官生长情况；14 d后将类器官用4%中性多聚甲醛固定，琼脂预包埋石蜡包埋法制成石蜡块，切片、苏木精-伊红染色，组织学形态观察及p63、Ki67、细胞角蛋白14（cytokeratin14，CK14）、β-联蛋白（β-catenin）、S-100、钙调理蛋白（calponin）免疫组化染色进行类器官鉴定。结果:构建的BCA类器官光镜下局部呈分叶结节状，类器官细胞巢周围嗜伊红玻璃样物质沉积，与BCA组织形态学相似；免疫组化显示类器官细胞表达CK14、p63，β-联蛋白核阳性，提示类器官保留了BCA原肿瘤细胞的免疫表型。结论:初步建立了人唾液腺良性肿瘤BCA体外类器官模型。

目的:通过尸体标本解剖的方法确定前锯肌下筋膜平面阻滞的范围。方法:甲醛固定的尸体标本4具，年龄18～64岁，身长163～170 cm，男女各2具，以其一侧胸壁为一研究对象，4具尸体共8个研究对象。尸体置于仰卧位，行超声引导下前锯肌下筋膜平面阻滞，注入亚甲蓝甘油果糖溶液40 ml。30 min时逐层解剖胸壁，记录不同体表标志下蓝染情况。结果:胸壁解剖可见第2～6肋间神经外侧皮支呈蓝染。于锁骨中线、腋前线、腋中线和腋后线蓝染范围分别为：9.95(1.18)、11.90(1.32)、12.80(1.32)和11.35(1.22) cm。第2～9肋于腋前线、腋中线和腋后线均呈蓝染，第1肋于各个体表标志下均无蓝染，锁骨中线下，各肋骨蓝染率分别为，第2肋为0，第3肋为7/8，第4肋为7/8，第5肋为6/8，第6肋为6/8，第7肋为5/8，第8肋为4/8和第9肋为0。结论:前锯肌下筋膜平面阻滞可阻滞第2～6肋间神经外侧皮支。

将C57/B6J小鼠分别固定于传统固定液(4％甲醛液,下同)与新型固定液中,进行石蜡切片的常规制片程序,并将新型固定液在年龄相关性黄斑变性(AMD)模型小鼠及人胚胎眼球HE染色石蜡切片中进行效果验证.用新型固定液处理的眼球石蜡切片质量优于传统固定液,且成功模拟了 AMD模型小鼠视网膜各层不同时间段的变化.新型固定液在制备高质量视网膜石蜡切片方面是可行的,为后续视网膜石蜡切片的有关研究奠定了基础.

目的 探讨肝细胞局部补体对疟原虫红外期发育的影响.方法 分别提取Hepa1-6和HepG2-CD81细胞RNA,逆转PCR扩增C3、C3aR1、C5、C5aR1基因.Hepa1-6细胞和HepG2-CD81细胞悬液分别加入蛋白酶和磷酸酶裂解,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法测定蛋白浓度,用蛋白质免疫印迹(Western blotting)测定肝细胞内补体和受体表达情况.将表达红色荧光蛋白(RFP)的约氏疟原虫BY265-RFP株、伯氏疟原虫ANKA株的昆明小鼠供斯氏按蚊吸血,17～19 d后解剖分离斯氏按蚊唾液腺,收集子孢子,在24孔板中按50 000个子孢子/孔加入HepG2-CD81细胞(105个/孔)孵育6、12、24 h;另设置共孵育3 h后加入C5aR拮抗剂(40nnmol/L,每孔500 μ1)的组别.经4％多聚甲醛固定、封闭,非透膜组加入一抗C3a兔抗人IgG抗体(1∶500)或rC5a兔抗人IgG抗体(1∶500)4 ℃孵育过夜,加入绿色Dylight 488荧光标记的山羊抗兔IgG二抗(1∶400)孵育1 h,加入DAPI染色液孵育5 min;透膜组加入一抗UIS4山羊多克隆抗体(1∶500)4 ℃孵育过夜,加入绿色IFKine?荧光标记的驴抗兔IgG二抗(1∶400)孵育1h,加入CD88兔多克隆抗体(1∶400)4 ℃孵育过夜,加入红色Dylight 649荧光标记的山羊抗兔IgG二抗(1∶400)孵育1h,加入DAPI染色液孵育5 min,激光共聚焦显微镜观察补体在纳虫空泡周围的富集情况.取眼镜蛇毒因子(CVF)腹腔注射至C57BU6小鼠,为CVF组;并设置C3-/组(C3全基因敲除C3-/-小鼠)和对照组(C57BU6小鼠).取10 000个约氏疟原虫子孢子感染各组小鼠,取肝脏提取总RNA后逆转录合成cDNA,荧光定量PCR测定疟原虫18S rRNA含量,肝脏虫荷用18S rRNA的相对含量表示.以尾静脉注射方式,用200个约氏疟原虫子孢子感染对照组(C57BU6小鼠)10只、C3aR-/-小鼠10只;1 000个约氏疟原虫子孢子感染对照组(C57BU6小鼠)5只、C5aR全基因敲除C5aR-/-小鼠6只和肝脏C5aR条件性敲除Alb-cre+/+C5aRflox/flox杂交小鼠5只;1 000个伯氏疟原虫子孢子感染对照组(C57BU6小鼠)6只和C5aR-/-小鼠6只,感染后3d开始取尾静脉血,制成薄血膜涂片,吉氏染色后观察,至所有小鼠均出现红内期疟原虫为止.采用Graphpad prism 9.0软件进行统计学分析.正态分布的数据采用t检验比较连续变量,两两差异比较采用单因素方差分析(ANOVA)进行多重比较;非正态分布数据比较采用Mann-Whitney U检验.结果 PCR结果可见,Hepa1-6细胞株内扩增出C3(358 bp)、C5(267 bp)及其受体C3aR(222 bp)、C5aR(388 bp)基因;HepG2-CD81 细胞株内扩增出 C3(202 bp)、C5(220 bp)、C3aR(299 bp)和 C5aR(374 bp)基因.Western blotting 检测结果发现,两种细胞均有 C3、C5、C3aR和C5aR蛋白表达.激光共聚焦显微镜成像可见,细胞核经DAPI染色呈蓝色荧光,约氏疟原虫红外期呈红色自发荧光,非透膜组HepG2-CD81细胞内高表达的C3a和C5a呈绿色荧光,与纳虫空泡分布区域重叠;透膜组C5aR(粉色)与纳虫空泡膜(绿色)重叠;加入C5aR拮抗剂组别的纳虫空泡膜上仍有C5aR表达.约氏疟原虫子孢子感染后,对照组、CVF组、C3-/-组的肝脏虫荷(18S rRNA相对含量)分别为0.954±0.523、0.958±0.231、0.638±0.437,3组间差异均无统计学意义(P＞0.05).约氏疟原虫子孢子感染后,对照组和C3aR-/-小鼠分别在(5.30±0.78)d和(5.30±0.78)d后出现红内期;伯氏疟原虫子孢子感染后,对照组和C5aR-/-小鼠分别在(3.67±0.47)d和(3.83±0.69)d后出现红内期;2组基因敲除小鼠红内期出现时间与对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).约氏疟原虫子孢子感染后,对照组、Alb-cre+/+C5aRflox/flox小鼠和C5aR-/-小鼠红内期的出现时间分别为(4.00±0.00)、(4.00±0.00)、(4.17±0.37)d,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肝细胞局部补体活化对疟原虫红外期发育无显著影响.

目的 比较不同固定液对光镜下金黄地鼠海马体神经元的影响,为金黄地鼠海马体神经元固定液的选择提供参考.方法 将 21 只 11 周龄雄性 SPF级金黄地鼠随机分为 7 组,分别使用 4%多聚甲醛、10%中性甲醛、Bouin's、Carnoy、Davidson's、Zenker、Helly溶液进行心脏灌注,剥离脑壳取出完整大脑,在对应的固定液中固定48 h,并制作成石蜡切片,经 HE染色后在光镜下观察海马体神经元的形态特征.通过匈牙利 3DHISTECH 公司数字切片扫描系统测量尺测量神经元细胞直径,比较固定液对细胞收缩的影响.结果 4%多聚甲醛、10%中性甲醛、Bouin's溶液展现了良好的固定效果,固定后的大脑硬度适中,HE染色后的切片着色适中、色泽鲜艳、神经元各种细胞形态对比清晰,4%多聚甲醛因固定后切片无龟裂而更为理想.不同固定液固定后的海马体神经元存在细胞收缩方面的极显著差异(P<0.01),使用 Carnoy、Davidson's 固定后的神经元各种细胞收缩最严重.结论 4%多聚甲醛、10%中性甲醛、Bouin's溶液是金黄地鼠海马体神经元较为理想的固定液,4%多聚甲醛溶液建议作为首选.