CRISPR/Cas是原核生物在进化过程中获得的一种免疫防御系统,用于抵抗外来遗传物质的入侵,近年来被开发成为高效的基因编辑、基因调控以及分子诊断工具.其可编程靶向机制揭开了利用该系统进行基因组操作的序幕,并允许在活性范围内实现动态调节和控制基因表达.作为现有基因修饰手段中灵活性最强和成本最低的技术之一,已被广泛应用于临床疾病治疗、工农业生产、可持续染料开发和化学品加工等领域.随着对CRISPR/Cas系统的不断深入挖掘和探索,大量研究报道了 gRNA工程改造及优化方法,包括改变间隔序列长度、调节恒定区和可变区的结构、向末端或中间延伸添加额外功能序列及化学合成修饰等,以期降低脱靶突变率,提高作用效率,充分激发CRISPR基因操纵工具在生物医学方面的潜力.基于此,本综述将介绍CRISPR/Cas9和CRISPR/Cas12系统中gRNA工程化设计方法及应用研究的最新进展,分析探讨了当前工程化gRNA技术面临的机遇和挑战,旨在为获得性能更加优异的gRNA提供思路和方向,从而提高利用CRISPR/Cas系统探测人类细胞基因组的能力,进一步为可编程生物学带来更多可能性.

分子成像能以非侵入性的方式重现活体细胞的生理功能和生物学过程，提高疾病的早期和特异性诊断水平。纳米颗粒/材料具有物理性质可控性高、易于表面修饰、血液循环时间长和可功能化等优点，在疾病诊断与治疗中显示出巨大潜力。但如何阐明纳米材料多功能间的内在联系、解决其代谢及安全性等关键机制难题、实现纳米颗粒/材料多功能性到临床多功能性的转化，成为目前研究的短板。本文就纳米颗粒/材料在分子成像及诊疗一体化中的应用现状、最新研究进展、面临的挑战和未来前景进行述评。

阿尔茨海默病（AD）是老年期最常见的神经系统退行性疾病，目前临床对其发病机制认识仍较为局限、治疗药物研发滞后。β-淀粉样蛋白（Aβ）级联瀑布假说仍然是目前 AD 发病机制的主流学说，也是AD疾病修饰药物研发的重要理论基础。近年来，靶向Aβ的免疫治疗药物相继通过美国食品药品监督管理局批准上市或突破性疗法认定，为AD的疾病修饰治疗带来了曙光。文中评述了近年来靶向Aβ疾病修饰治疗临床试验的研究进展，分析总结了以往靶向Aβ疾病修饰治疗临床试验失败的原因。虽然目前靶向Aβ疾病修饰疗法不是十分成熟，但其俨然已成为极具前景的AD药物研发策略。

机体发育中少突胶质细胞谱系定型、特化、增殖、迁移、分化、成熟、髓鞘形成以及脱髓鞘疾病髓鞘重塑过程受到内外多因素的调控。近年来，表观遗传调控机制研究越来越多，包括DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA、染色质重塑等。研究表观遗传调控为髓鞘形成障碍或者髓鞘破坏性疾病，如多发性硬化、早产儿脑室周围白质损伤及脑脊髓炎等提供了潜在的治疗新靶点。本文现围绕少突胶质细胞表观遗传学调控机制的研究进展综述如下。

生物钟的形成与一系列生物钟基因及其调控基因构成的分子环路有关，其编码的蛋白可影响炎症细胞因子和趋化因子的表达，调控免疫细胞的增殖、分化和迁移，形成免疫功能的节律性变化。通过调控外界环境信号或基因修饰改变生物钟基因的表达，可诱发和加剧炎性肠病、类风湿性关节炎和1型糖尿病等多种自身免疫疾病。探讨生物钟基因的调控方式、固有免疫和适应免疫系统中生物钟的作用，以及生物钟基因在自身免疫性疾病发病机制和治疗中的潜在作用具有重要意义。

目的:研究血清缺血修饰蛋白（ischemia modified albumin，IMA）、钙调蛋白（CaM）表达水平与脑小血管病（cerebral small vessel disease，CSVD）患者神经功能受损的相关性。方法:回顾性分析2020年4月至2021年12月在聊城市第三人民医院住院治疗的CSVD患者的140例临床资料，在患者入院时，采用酶联免疫吸附法测定患者血清中CaM水平，采用白蛋白-钴结合实验测定患者血清中IMA水平，采用美国国立卫生院卒中量表（NIHSS）量表对患者的神经功能进行评价，参照国立神经病学与中风研究所（NINDS）评价患者短暂性脑缺血情况，评价患者尿失禁情况、步态障碍情况，采用蒙特利尔认知评估（MoCA）量表对患者的认知功能进行评价。分析CSVD患者血清IMA和CaM表达水平的影响因素，分析CSVD患者神经功能受损程度的影响因素及其与患者血清IMA和CaM表达水平的相关性。结果:患者的性别、年龄、有无步态障碍、有无尿失禁等与患者血清IMA、CaM表达水平均无相关性（均 P > 0.05）；认知功能障碍患者、头晕和眩晕患者、短暂性脑缺血患者的血清IMA表达水平［（38.5±5.3）×10 3U/L、（38.5±4.7）×10 3U/L、（39.0±4.4）×10 3U/L］、CaM表达水平［（190.4±34.5）μg/L、（191.2±26.7）μg/L、（199.7±24.8）μg/L］均显著高于认知功能正常患者、无头晕和眩晕患者、无短暂性脑缺血患者［（27.3±4.4）×10 3U/L、（21.0±3.8）×10 3U/L、（20.5±5.1）×10 3U/L、（180.6±29.6）μg/L、（179.5±28.6）μg/L、（168.6±32.4）μg/L］（ t=14.10、24.36、22.50，均 P < 0.05）。轻度、中度、重度神经功能受损患者的认知功能障碍（38/16/9）、头晕和眩晕（39/16/8）、短暂性脑出血（35/16/9）、NIHSS评分［（3.6±0.8）分、（7.5±0.9）分、（16.2±3.2）分］、CaM表达水平［（125.3±20.5）μg/L、（185.5±23.6）μg/L、（237.9±54.3）μg/L］、IMA表达水平［（21.2±3.5）×10 3U/L、（38.5±4.3）×10 3 U/L、（74.9±5.4）×10 3U/L］，组间差异均有统计学意义（ t=32.87、11.28、12.42、34.59、151.73、147.84，均 P < 0.05）。多因素分析结果显示，认知功能障碍（ OR=1.578，95% CI：1.043～2.386）、短暂性脑缺血（ OR=2.396，95% CI：1.156～4.969）、头晕和眩晕（ OR=1.906，95% CI：1.086～3.345）、NIHSS评分（ OR=2.171，95% CI：1.162～4.056）、CaM水平（ OR=2.022，95% CI：1.268～3.224）、IMA水平增加（ OR=2.090，95% CI：1.313～3.325）均是患者神经功能受损加重的独立影响因素（均 P < 0.05）。患者血清IMA、CaM表达水平与神经功能受损程度呈明显的正相关（ r=5.45、8.33，均 P < 0.05）。 结论:脑小血管病患者血清IMA、CaM表达水平的升高是神经功能受损的独立危险因素，其表达水平与神经功能受损程度呈正相关。

以纳米材料为平台发展起来的诊疗一体化技术将疾病的诊断与治疗有机结合起来，构成了诊疗一体化纳米平台，其在疾病诊疗方面展现出广阔的前景。随着纳米医学的迅速发展，磁性纳米颗粒（MNPs）的合成工艺不断成熟。MNPs具有表面易于进行化学修饰、形状和粒径可控、稳定性和生物相容性良好及磁学性能优良等优点，使其在疾病诊断、药物靶向递送、医学成像、热疗和放射治疗等临床治疗领域广泛应用，也使其成为诊疗一体化平台的优质材料。综述了MNPs在磁导向递药、磁热疗和多模式成像这3方面的研究进展及其作为诊疗一体化平台的优势，并对研究面临的问题和应用前景进行了总结和展望。

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性自身免疫性疾病，该病可引起不可逆转的关节畸形，早期诊断和治疗可延缓疾病的进展。瓜氨酸化、氨甲酰化、氧化及乙酰化是蛋白质翻译后修饰产生的新表位，B细胞针对这些新表位发生免疫应答而产生相应的自身抗体。文章就抗瓜氨酸蛋白抗体(anti citrulline protein antibodies，ACPA)、氨甲酰化抗体，氧化型II型胶原抗体、乙酰化抗体在RA实验室诊断中的作用进行综述，以期为RA早期标志物识别和疗效指标评价提供一定的依据。

阿尔茨海默病(AD)是一种中枢神经退行性疾病，其发病机制目前尚不明确。近年来有研究表明，线粒体轴突转运障碍可能参与AD的进程。正常的线粒体轴突转运过程主要由微管、分子马达和连接蛋白参与，而AD的早期病理改变可以通过干扰这些蛋白来损伤线粒体轴突转运，如积聚的β-淀粉样蛋白(Aβ)会损害分子马达的功能，异常修饰的Tau蛋白会降低微管的稳定性，突变型早老蛋白-1(PS1)可以通过激活糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)来诱导部分相关蛋白的磷酸化，使线粒体轴突转运出现障碍，导致突触功能失调。本文围绕AD中线粒体轴突转运障碍可能的发生机制进行综述，以期为AD的治疗提供新思路。

表观遗传学已成为生物医学领域的研究热点，疾病的发生不仅与遗传因素有关，而且还受到环境因素的影响。老年性黄斑变性、糖尿病视网膜病变等视网膜血管性疾病是一类以视网膜血管病变为核心病理改变的不可逆致盲性眼病，是多种环境因素和基因相互作用的结果。表观遗传学的调控方式主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA调控。表观遗传机制介导环境因素，参与视网膜血管病变相关基因的调控，影响疾病最终的发生发展。因此，眼科医生应重视表观遗传在视网膜血管性疾病中的作用，追踪表观遗传学方法在视网膜血管性疾病治疗中取得的进展，关注表观遗传学的应用前景。寻找这些疾病的表观调控因子，不仅可以加深对这些疾病发生机制的认识，同时还能为这些疾病的诊断和治疗提供新的思路。