目的 建立测定白喉产毒培养基中微量铁离子的磺基水杨酸分光光度法,并进行验证及初步应用.方法 全光谱扫描铁-磺基水杨酸络合物最大吸光度;以铁磺基水杨酸络合物吸光度与铁离子含量进行线性回归,建立培养基中铁离子检测方法,并对方法进行稳定性、准确性和精密性验证;考察Ca2+、Mg2+、K+、Na+以及显色反应物对方法的影响;采用磺基水杨酸分光光度法测定自制及市售白喉产毒培养基中微量铁离子;分别采用磺基水杨酸分光度法及常用方法亚铁嗪比色法、邻菲啰啉分光光度法检测两种培养基(牛肉胰酶消化液、5％多聚蛋白胨)中铁含量,比较3种方法的检测结果.结果 铁-磺基水杨酸络合物在波长425nm处有最大吸光度;铁离子浓度在1～0.05μg/mL范围内与吸光度存在良好的线性关系,检测限为0.05 μg/mL,标准曲线方程为:Y=0.027 9 X+0.046 1,R2＞0.99;每间隔5 min测定1次A425值,各浓度标准品A425值的变异系数(CV)均小于5％;低(0.05 μg/mL)、中(0.5 μg/mL)、高浓度(1 μg/mL)Fe3+标准品溶液连续测定3次,每个浓度平行测定9组的CV均＜5％,回收率均＞95％;Ca2+、Mg2+、K+、Na+、15 μL磺基水杨酸(20％)和50 μL氢氧化氨(1∶1)不对检测方法构成干扰;产毒培养基测定结果与白喉细菌产毒结果一致;3种检测方法结果一致.结论 建立的磺基水杨酸分光光度法能够准确、有效地测定白喉产毒培养基中微量铁离子含量.

目的:探讨Notch信号通路在溃疡性结肠炎(UC)大鼠发病中的可能作用及姜黄素通过该信号通路治疗UC大鼠的分子机制.方法:按照将2 mL/kg三硝基苯磺酸注入结肠的方法制备大鼠UC模型.实验设对照组、UC模型组、5-氨基水杨酸(5-ASA)组、姜黄素组、姜黄素+5-氨基水杨酸(5-ASA)组,每组各6 只.后3 组每天灌胃1 次,连续10 d.同时每日观察大鼠一般情况,并且记录其每天的疾病活动指数评分,在连续10d给予不同处理方式后,取大鼠结肠组织进行结肠黏膜损伤指数评分、HE染色分析,观察统计大鼠结肠黏膜损伤情况,用免疫组织化学法、Western blotting法检测大鼠结肠黏膜内 Notch1、jaggled1、Hes1 蛋白表达,RT-PCR检测大鼠结肠黏膜内 Notch1、jaggled1、Hes1 mRNA表达.结果:HE染色结果表明模型组与对照组相比,出现了显著性病理损伤,5-ASA和姜黄素治疗组病理损伤有所减缓(P＜0.01);姜黄素+5-ASA联合治疗组病理损伤减缓效果最佳(P＜0.01).免疫组织化学结果、Western blotting结果及RT-PCR结果显示与对照组比较,模型组Notch1、jaggledl、Hes1 mRNA表达水平均上升(P＜0.01);与模型组相比,5-ASA和姜黄素治疗组大鼠黏膜组织中Notch1、jaggledl、Hes1表达下降(P＜0.01),而姜黄素+5-ASA联合治疗组Notch1、jaggledl、Hes1 下降趋势最明显(P＜0.01).结论:姜黄素对UC有一定的治疗作用,可能与参与介导Notch信号通路有关.

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一类慢性非特异性肠道炎症性疾病,当病变累及全结肠,伴肠外表现并全身症状明显时属重型病例,约占16%左右[1],病因尚不明确,目前多认为与免疫紊乱有关.该疾病症状会对患者的生活造成诸多不良影响,医疗费用投入负担重,使治疗该病成为急需要解决的问题. 传统的治疗药物有氨基水杨酸制剂、皮质激素等,但对重症患者疗效不佳. 近10余年,随着如抗肿瘤坏死因子(TNF)单克隆抗体等生物制剂的问世,UC患者也带来更多新的有效的治疗.最新研究显示早期使用英夫利昔单抗(IFX)比使用传统激素疗法可更为有效地取得内镜下黏膜完全缓解及不用激素仍能维持较长时间(可能4年)缓解,有利于减少激素难治性病例的发生[2]. 本研究探讨IFX联合泼尼松片和柳氮磺吡啶片(SASP)治疗重症UC的临床疗效,为临床治疗方案的制定提供参考,现报告如下.

目的 研究2014—2016年5-氨基水杨酸类药物在武汉地区的应用情况和发展趋势,为临床合理用药提供参考.方法 采用世界卫生组织推荐的限定日剂量(DDD)为指标的分析方法,对武汉地区31家医院2014-2016年5-氨基水杨酸类药物的销售金额、用药频度(DDDs)、限定日费用(DDC)、排序比(B/A)等进行统计分析.结果 武汉地区2014—2016年5-氨基水杨酸类药物的销售总金额呈逐年上升趋势.美沙拉嗪的销售金额和DDDs均高居第1位,柳氮磺吡啶的销售金额和DDDs均以较大的差距位居第2位,巴柳氮和奥沙拉嗪的应用非常少.美沙拉嗪和柳氮磺吡啶的B/A均为1.00.结论 2014—2016年5-氨基水杨酸类药物的临床应用逐年增加,但是临床应用品种单一,主要以美沙拉嗪占据市场,且以缓释制剂应用最多,因此我国仍需加强对于治疗溃疡性结肠炎药物的研发.

目的 探讨金樱子果实中总黄酮与多糖2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病(CD)小鼠的黏膜保护作用.方法 将140只KM小鼠分为空白对照组、模型组、5-氨基水杨酸(5-ASA)组、总黄酮高、低剂量组和多糖高、低剂量组,空白对照组正常饲养,其余各组小鼠利用TNBS建立CD模型,空白对照组给予等计量的蒸馏水,多糖高剂量组、低剂量组分别给予多糖6 g·kg-1·d-1、3 g·kg-1·d-1,总黄酮高剂量组、低剂量组分别给予黄酮4 g·kg-1·d-1、2 g·kg-1·d-1,5-ASA组给予5-ASA 0.5 g·kg-1·d-1.每日1次,连续灌胃21 d,处理动物.取小鼠结肠组织记录长度和重量,取固定结肠部位HE染色,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)测定结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)含量.结果 TNBS诱导的小鼠CD模型中,金樱子总黄酮和多糖可以降低小鼠结肠重量/长度比值、病理评分和结肠组织中TNF-α和IFN-γ表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05),但是各组间生存率差异无统计学意义.结论 在该模型中金樱子果实提取物可以降低小鼠结肠重量/长度比值,改善结肠炎症水肿程度,降低结肠组织中TNF-α和IFN-γ含量,因此金樱子果实提取物对CD小鼠有一定治疗作用.

目的:缓解白及药用资源压力,分离鉴定白及内生真菌并进行内生真菌胞外多糖活性强弱研究.方法:分离鉴定白及内生真菌,进行液体发酵培养获得胞外多糖,通过建立铁氰化钾法,2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)法,水杨酸法,2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)法4种体外模型研究白及内生真菌胞外多糖的抗氧化活性.结果:从白及新鲜根中分离得到10株内生真菌,鉴定合并菌株后得到6株不同的菌株,其中10号菌株胞外多糖(0.1 9·L-1)总还原力最强,其维生素C(VC)当量高达12.01 mg·L-1,其次为6号菌株;清除DPPH自由基活性最强的为1号和6号菌株为16.6％;6号菌株清除羟基自由基活性最强为21.6％,最弱的为10号菌株仅为11.0％;测定其清除ABTS自由基活性时则发现,10号菌株活性最强为13.6％,其次为6号菌株,最弱的为5号仅为1.8％.结论:白及内生真菌胞外多糖具有一定的抗氧化活性,其中6号菌株胞外多糖总还原力,清除DPPH自由基活性,清除羟基自由基活性、清除ABTS自由基均较好,可以加以开发和利用.

目的 对常用的尿蛋白定性检测方法 进行评价,分析干化学法检测尿蛋白出现假阳性的影响因素.方法对2500份随机尿标本分别采用干化学法及磺基水杨酸法定性检测尿蛋白,对2种方法检测结果 不一致的标本采用Modular P800全自动生化分析仪进行尿蛋白定量测定,确定阴、阳性结果,针对其主要影响因素(潜血、尿pH值)设计模拟实验,分析干化学法出现假阴性或假阳性的原因.结果采用干化学法与磺基水杨酸法同时检测2500份随机尿标本,2种方法结果一致(包括相差一级)的有2391份(95.64％),结果不一致的有109份(4.36％),2种方法检测结果之间差异有统计学意义(P<0.05).检测结果之间差异有统计学意义(P<0.05).当尿液中红细胞≥1×105时,干化学法会出现假阳性;当尿液pH值在7.0～8.5之间时干化学法易出现假阳性,而当pH值≥8.5时则可能出现假阴性.结论 尿液中红细胞及尿液pH值会干扰干化学法定性检测尿蛋白,使其出现假阳性或假阴性,临床实验室应给予足够的重视和关注.

目的 建立Ⅳ型胶原酶筛选模型,并运用此模型对中药活性成分进行评价.方法 利用Ⅳ型胶原酶特异性水解明胶释放的末端氨基与2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)发生显色,吸光度值可以衡量Ⅳ型胶原酶含量,优化Ⅳ型胶原酶浓度、琥珀酰凝胶浓度、显色剂用量及时间参数.结果 确定了Ⅳ型胶原酶筛选模型的条件:5.0×10-5 g/L酶溶液、20 g/L琥珀酰凝胶溶液、60μ1 0.05 ％TNBS、显色30 min,阳性药盐酸四环素在1.0g/L下对该酶的抑制率是19.39％,并呈现一定的量效关系,表明成功建立该筛选模型.应用该模型筛选发现,阿魏酸和川芎嗪具有明显的抑制Ⅳ型胶原酶活性,而水杨酸和小檗碱则具有促进作用.结论 Ⅳ型胶原酶的筛选模型成功建立并应用到中药活性成分筛选中,为快速评价中药活性成分及其作用机制提供了有益参考.

蜜环菌生物种与天麻的共生关系受到温度的调节.为了揭示我国蜜环菌生物种的温度适应性,本研究以我国8个蜜环菌生物种为实验材料,采用2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法研究了胞外漆酶、果胶酶和纤维素酶的活性对温度的响应特征.结果表明,各生物种的胞外酶活性存在显著性差异,各胞外酶活性具有随时间先升后降的变化趋势;各胞外酶的分泌时间和活性大小对温度的响应存在着很大的差异;且在培养过程中,首先分泌的是果胶酶和纤维素酶,然后才是漆酶.温度对蜜环菌胞外漆酶和果胶酶活性大小有影响,对产酶时间没有影响;对纤维素酶活性达到峰值的时间和活性大小都有很大影响.除此之外,蜜环菌胞外酶活性对温度的响应和我国蜜环菌的地域分布特点具有相关性,分布于秦岭-淮河线以南和以北的蜜环菌生物种胞外酶活性对温度的响应具有差异.本研究对开展蜜环菌生物学和我国天麻的野外种植区划的研究具有指导意义.

目的:观察桑黄多糖对糖尿病肾病(DN)模型小鼠肾间质纤维化的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:一次性尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)溶液120 mg/kg构建糖尿病小鼠模型,并将成模小鼠随机分为正常组、模型组、桑黄多糖40、80 mg/kg组、罗格列酮4 mg/kg组.小鼠连续灌胃给药12周后采血、留尿、留取肾脏组织.采用血糖仪检测空腹血糖(FBG)水平;采用磺基水杨酸-硫酸钠比浊法检测24 h尿蛋白(UP24 h)水平;采用全自动生化分析仪测定血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平;Masson染色观察肾脏组织的病理变化;免疫组织化学法检测肾皮质中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肾皮质中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平;Western blot检测肾皮质中组织金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)蛋白的表达及信号通路P311/TGF-β1/Snail1相关蛋白的表达.结果:与模型组比较,除桑黄多糖40 mg/kg组小鼠肾皮质中TIMP-2及P311蛋白表达无显著性变化外,其余剂量组FBG、UP 24 h、Scr和BUN水平、肾组织中胶原纤维沉积的比例、α-SMA蛋白表达及TIMP-2、P311、TGF-β1、Snail1的蛋白表达较模型组均明显降低,而E-cadherin蛋白表达和MMP-2水平均明显升高.结论:桑黄多糖可调节MMP-2/TIMP-2平衡,减轻糖尿病肾病小鼠肾间质纤维化,可能与抑制P311/TGF-β1/Snail1信号通路的激活有关.