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基于甲基丙烯酸酐化明胶悬滴培养小鼠毛乳头细胞制备仿生毛乳头球的生物活性及其在裸鼠中的毛发诱导功能
编辑人员丨1周前
目的:探讨基于甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)仿生微环境与悬滴法三维培养小鼠毛乳头细胞(DPC)制备仿生毛乳头球的生物活性及其在裸鼠中的毛发诱导功能。方法:采用实验研究方法。采用酶消化法获取雄性5~6周龄C57BL/6J小鼠触须毛的DPC以及1 d龄C57BL/6J小鼠皮肤角质形成细胞(KC),经免疫荧光法鉴定前者第3代细胞稳定表达DPC标志物神经细胞黏附分子、碱性磷酸酶(ALP)、β连环蛋白及α平滑肌肌动蛋白,后者原代细胞稳定表达KC标志物角蛋白15。取第8代DPC,用GelMA重新悬浮并接种至Transwell孔板插件底面,光交联后倒置培养,于光学显微镜下观察培养0(即刻)、3 d GelMA悬滴中DPC聚集情况(聚集成球即仿生毛乳头球),采用活/死染色试剂盒检测培养3 d仿生毛乳头球中细胞活性。将传统二维培养的原代DPC、第8代DPC以及按前述方法制备的仿生毛乳头球分别设为原代DPC组、第8代DPC组、仿生毛乳头球组,利用高通量测序技术平台对每组培养3 d的3个样本中DPC进行转录组测序,利用基迪奥生物信息云工具平台(OmicShare Tools)对转录组数据进行主成分分析、Pearson相似性分析、差异表达基因筛选,利用时间序列趋势分析软件对差异表达基因进行表达模式聚类分析,利用基迪奥生物信息云工具平台对具有特定表达模式的差异表达基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)富集分析。同前进行细胞分组,采用随机数字表法从差异表达基因中抽取性别决定区Y框蛋白8( SOX8)、基质金属蛋白酶9( MMP- 9)、26型胶原纤维α1( COL26A1)、无翅型MMTV整合位点家族成员6( Wnt6),采用实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法验证差异表达基因mRNA表达情况与测序结果的一致性(样本数为9);采用实时荧光定量RT-PCR法检测DPC生物功能标志物成纤维细胞生长因子7(FGF7)、Wnt10a、淋巴样增强因子1(LEF1)、ALP、β连环蛋白、多功能蛋白聚糖、SOX2的mRNA表达情况(样本数为9)。取3只5~6周龄雄性BALB/c裸鼠,分别设为原代DPC组、第8代DPC组、仿生毛乳头球组,将原代DPC、第8代DPC、仿生毛乳头球分别与原代KC以2∶1细胞数比例混合后分别注射至相应组别裸鼠皮下,每只注射6个区域。注射后2周,取注射区域全厚皮,计数再生毛发,行苏木精-伊红染色后观察再生毛囊情况。对数据行单因素方差分析、Tukey检验并进行Bonferroni校正。 结果:培养3 d,DPC在GelMA悬滴中由培养0 d的分散状态聚集成仿生毛乳头球,制备的仿生毛乳头球中细胞活性良好。培养3 d,主成分分析显示,相比于第8代DPC组,原代DPC组、仿生毛乳头球组组内样本间变异程度较低,仿生毛乳头球组与原代DPC组组间样本变异程度最低,3组DPC样本超过90%的基因谱数据变异可由第1个和第2个主要成分来解释;Pearson相似性分析显示,组内样本重复性好,原代DPC组和仿生毛乳头球组样本间的相关系数为0.84~0.95,原代DPC组和第8代DPC组样本间的相关系数为0.72~0.87;3组DPC间差异表达基因分析筛选出642个组间交集差异表达基因,对其进行表达模式聚类显示有2种基因表达模式有显著趋势( P<0.05),分别为第8代DPC组基因表达显著低于原代DPC组/仿生毛乳头球组、第8代DPC组基因表达显著高于原代DPC组/仿生毛乳头球组,共包含411个差异表达基因;KEGG富集分析显示这411个差异表达基因在Wnt信号通路以及磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路显著富集( P<0.05),GO富集分析表明细胞外基质、经典Wnt信号通路、细胞分化等GO术语被显著富集( P<0.05)。与原代DPC组、仿生毛乳头球组比较,第8代DPC组细胞基因 SOX8、MMP- 9、COL26A1、Wnt6 mRNA表达量均明显下降( q=15.950、8.854、11.890、11.050,9.851、5.884、7.418、4.870, P<0.01),与测序数据一致。与原代DPC组、仿生毛乳头球组比较,第8代DPC组细胞生物功能标志物FGF7、Wnt10a、LEF1、ALP、β连环蛋白、多功能蛋白聚糖、SOX2 mRNA表达量均明显下降( q=11.470、9.795、4.165、9.242、10.970、10.570、8.005,7.472、4.976、3.651、4.784、5.236、6.825、5.214, P<0.05或 P<0.01)。注射后2周,第8代DPC组裸鼠无毛发再生,仿生毛乳头球组与原代DPC组裸鼠再生毛发数量相近( q=1.852, P>0.05)且均显著高于第8代DPC组( q=18.980、17.130, P<0.01);第8代DPC组裸鼠注射区域皮肤仅形成了坏死灶,而仿生毛乳头球组与原代DPC组裸鼠注射区域皮肤均观察到再生毛囊且毛囊横断切面有黑色素沉着。 结论:基于GelMA仿生微环境与悬滴法三维培养小鼠DPC制备仿生毛乳头球的培养模型可一定程度上恢复高传代DPC在裸鼠中的毛发诱导能力,且其生物特性更加类似于原代DPC,可实现DPC的扩增后特性恢复。
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编辑人员丨1周前
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恶性胸腔积液细胞块105例临床病理分析
编辑人员丨1周前
目的:分析恶性胸腔积液(胸水)的病理类型、组织来源及临床特点。方法:选取启东市人民医院2017年5月至2019年10月经液基细胞学检查发现异型细胞后制成细胞块并行免疫组织化学检查、明确诊断为恶性胸水的细胞块105例,分析病理形态特征、免疫组织化学特点及临床特点。结果:胸水恶性细胞经免疫组化证实为肺腺癌来源的共94例,占89.52%,甲状腺转录因子1(TTF-1)、天冬氨酸蛋白酶A(Napsin A)、癌胚抗原(CEA)阳性;肺小细胞癌来源1例,占0.95%,神经细胞黏附分子1(CD56)、突触素(Syn)阳性;肺鳞状细胞癌来源2例,占1.90%,细胞角蛋白5/6(CK5/6)、P40阳性;卵巢来源腺癌1例,占0.95%,癌抗原125(CA125)阳性;乳腺来源腺癌4例,占3.81%,雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、囊泡病液蛋白15(GCDFP-15)阳性;胃肠道来源腺癌2例,占1.90%,肠特异性转录因子2(CDX-2)阳性;胰腺来源腺癌1例,占0.95%,癌抗原19-9(CA199)阳性。结论:肺腺癌是引起恶性胸水的最常见原因,TTF-1、NapsinA、CEA对于肺腺癌来源的肿瘤细胞呈阳性表达,3种标志物联合应用有助于明确诊断,同时应与其他类型肺癌及其他部位来源的肿瘤鉴别。
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编辑人员丨1周前
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WDR63促进人根尖牙乳头干细胞成神经分化功能
编辑人员丨3周前
目的:研究WD重复结构域 63(WDR63)对人根尖牙乳头干细胞(SCAPs)体外成神经分化能力的作用.方法:通过实时荧光定量PCR检测未转染慢病毒SCAPs中WDR63 基因在成神经分化诱导 3、6、9 d的表达变化,利用慢病毒转染分别获得WDR63 稳定过表达和敲低的SCAPs,通过类神经球形成实验对各组SCAPs进行神经分化诱导,对类神经球的直径进行定量分析,免疫荧光染色实验检测SCAPs中巢蛋白(Nestin)和βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)的表达,实时荧光定量PCR实验检测神经分化相关指标βⅢ-tubulin、神经源性分化蛋白(NeuroD)、神经细胞黏附分子(NCAM)和Nestin基因的表达.结果:未转染慢病毒SCAPs中WDR63 的表达量在成神经分化后的3、6、9 d逐渐增加(P<0.05);过表达WDR63 后,WDR63 基因(P<0.001)和蛋白表达增加,神经球直径增加(P<0.01),Nestin 和 βⅢ-tubulin 神经球样细胞荧光强度增加(P<0.01),βⅢ-tubulin、NeuroD、NCAM和Nestin基因表达升高(P<0.05);敲低WDR63 后,WDR63 基因(P<0.01)和蛋白的表达降低,神经球直径降低(P<0.05),Nestin和βⅢ-tubulin神经球样细胞荧光强度减少(P<0.05),βⅢ-tubulin、NeuroD、NCAM和Nestin基因表达降低(P<0.05).结论:WDR63 可促进SCAPs的成神经分化功能.
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编辑人员丨3周前
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肝脏原发及转移性神经内分泌肿瘤36例临床病理分析
编辑人员丨2024/2/3
目的:探讨肝脏神经内分泌肿瘤(HNEN)的临床病理特点、诊断及鉴别诊断.方法:收集36例HNEN,分析其临床特点,观察其病理组织学形态及免疫表型特征、临床及影像学资料,进行回顾性分析,并进行随访.结果:6例为原发性肝脏神经内分泌肿瘤(PHNEN),分为神经内分泌瘤(NET G1 1例、NET G2 2例),神经内分泌癌(NEC 3例),另外30例为转移性肝脏神经内分泌肿瘤(MHNEN),分为NET G1 4例,NET G2 8例,NET G32例,NEC 16例;该病变临床表现无特异性,同肝脏部位其他肿瘤所致的一些占位性症状,如腹部不适、食欲减退、精神不振、体重下降等,通常为体检发现.血清中甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、细胞表面糖蛋白(CA199)等肿瘤标志物几乎无诊断价值.病理组织学:细胞呈腺样或者玫瑰花样,梁索状排列,免疫组化:肿瘤细胞强阳性表达突出素(Syn)、NSE、钙离子结合蛋白(S-100)、嗜铬素A(CgA)、神经细胞黏附分子(CD56),细胞角蛋白(AE1/AE3)呈核旁点状阳性,细胞增殖抗原(Ki-67)依肿瘤分级不同,分布于2%~80%不等.结论:HNEN临床表现无特异性,其诊断需依赖病理组织学及免疫组化,综合临床相关检查,不同分级对其预后影响不同.WHO分类(2019)可以协助预测其恶性程度及预后判断,具有可行性.
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编辑人员丨2024/2/3
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EP-CAM、N-CAM1及C-KIT与原发性肝癌分级、转移及患者预后的关系
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨上皮细胞黏附分子(epithelial cellular adhesion molecule,EP-CAM)、 神经细胞黏附分子1(neural cell adhesion molecule1,N-CAM1)及C-KIT与原发性肝癌分级、 转移及患者预后的关系.方法 收集2008年1月~2014年9月重庆三峡中心医院收治的80例原发性肝癌患者作为观察组,选择同期行手术治疗的50例肝硬化及乙型肝炎患者作为对照组,均收集患者病理组织标本,采用免疫组化法测定肝癌及对照组织EP-CAM、N-CAM1、C-KIT表达情况,并收集所有肝癌患者的临床及随访资料,分析EP-CAM、N-CAM1、C-KIT与原发性肝癌临床病理特点及患者预后的关系.结果 观察组EP-CAM、N-CAM1、C-KIT阳性表达率均高于对照组(P<0.05);高AFP水平、 无包膜或包膜不完整、 低中分化肿瘤、 临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、 病理类型为胆管上皮癌、 混合型肝癌及出现肝内外转移的肝癌患者EP-CAM、N-CAM1、C-KIT阳性率较高(P<0.05);Pearson相关分析显示:肝癌患者肝组织EP-CAM与N-CAM1、C-KIT表达呈正相关(P<0.05),肝组织N-CAM1与C-KIT表达呈正相关(P<0.05);肝癌患者1、2、3年生存率分别为72.50%、53.75%、37.50%,随访3年存活患者,EP-CAM、N-CAM1、C-KIT阳性率低于1年及2年存活患者(P<0.05).结论 EP-CAM、N-CAM1、C-KIT表达水平与原发性肝癌患者AFP水平、 肿瘤包膜情况、 分化程度、 临床分期、 组织学类型及预后均有一定的关系,且参与肝癌侵袭、 转移过程.
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编辑人员丨2023/8/6
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神经细胞黏附分子阳性初治原发急性髓系白血病临床特点分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 分析神经细胞黏附分子(CD56)阳性的初治原发急性髓系白血病(AML)患者的临床特征.方法 回顾性分析2015年1月至2016年12月该院血液科144例初治原发A M L住院患者的临床资料,其中男76例,女68例,根据患者免疫分型是否伴有CD56表达,分为CD56+组(n=48)和CD56-组(n=96).分别采用t检验、秩和检验或 χ2检验比较各组临床特征的差异.结果 CD56+组出现发热症状、AML-M2b亚型、伴有AML-ETO融合基因和IKZF1基因突变患者比例高于CD56-组(χ2=4.064、11.359、11.359、4.781,P<0.05);CD56+组出现乏力症状、出血、AML-M3亚型、伴有PML-RARA融合基因和DNMT3A基因突变患者比例低于CD56-组(χ2=4.704、5.262、6.272、4.013、4.442,P<0.05).结论 CD56+患者多为W HO急性髓系白血病分型中伴有重现性遗传学异常的M2b型,常见发热症状,易伴IKZF1基因突变;而少见WHO急性髓系白血病分型中伴有重现性遗传学异常的M3型、乏力和出血症状,少伴DNM T3A基因突变.
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编辑人员丨2023/8/6
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ZEB1上调神经细胞黏附分子促进胶质瘤细胞侵袭与转移
编辑人员丨2023/8/6
胶质瘤是一种较为常见的颅内恶性肿瘤,其侵袭转移能力强,影响临床疗效.探讨胶质瘤发生侵袭转移的分子机制,寻找新的靶点干预胶质瘤侵袭转移是目前亟待解决的重大课题.我们前期研究中发现,神经细胞黏附分子(neuronal cell adhesion molecule,NRCAM)在各种胶质瘤细胞中的表达量均显著高于其在人正常星形胶质细胞(NHA)中的表达量(NRCAM在胶质瘤A172和T98G中的表达量分别是其在NHA中的2.15和17.63倍);且根据人类蛋白质组学数据库信息及qRT-PCR结果证实,NRCAM在胶质瘤组织中的表达量也显著高于其在正常组织中的表达.Kaplan-Meier分析提示,高表达的NRCAM与胶质瘤患者较差的预后正相关.在此基础上,通过生物信息学预测的方法结合双荧光素酶报告基因实验证实,转录因子锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)能够增加NRCAM启动子活性,上调NRCAM mRNA和蛋白质水平的表达量.通过Transwell实验证实,在过表达ZEB1的胶质瘤细胞A172中,沉默NRCAM将抑制该细胞的侵袭能力.而在敲低ZEB1的胶质瘤细胞T98G中,过表达NRCAM将增加该细胞的侵袭能力.总之,NRCAM在胶质瘤中显著高表达且与患者较差的预后正相关.ZEB1转录上调NRCAM来增加胶质瘤细胞侵袭能力.
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编辑人员丨2023/8/6
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Slit-Robo通路参与缺血性脑卒中的神经修复作用研究进展
编辑人员丨2023/8/6
脑卒中在全球发病率和病死率逐年上升,2015年死亡人数较2005年提高5%[1].据我国2008年的居民死因抽样调查显示,脑卒中已成为我国国民第一位的死亡原因.缺血性脑卒中占脑卒中总数的80%[2].缺血性脑卒中发生后,缺血区域的血液减少以及耗氧量的增加,会导致神经细胞的快速坏死,进而缺血区域周边的神经细胞会陆续发生凋亡,严重影响神经功能的恢复和患者的预后.在中枢神经系统发育过程中,神经导向因子在参与神经元的迁移以及引导轴突沿特定的方向发育过程中有着重要的作用.神经导向因子Slit家族是一种与Robo受体结合而发挥作用的分泌性糖蛋白,介导中枢和周围神经系统发育过程中轴突的排斥作用和神经元的迁移,在促进神经细胞的发育和神经的形成起着重要的作用[3].在缺血脑室注射外源性Slit2可以减少神经元的凋亡,促进神经元和血管新生,目前认为,Slit-Robo信号通路对脑缺血后的神经修复有促进作用.下面从Slit及其受体Robo的种类和结构特点、Slit-Robo信号通路在神经发育过程的作用以及在缺血性脑卒中后对神经修复的功能机制等方面进行系统阐述,并对未来研究方向进行展望,以期对缺血性脑卒中的临床诊治提供一定的理论依据.
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编辑人员丨2023/8/6
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原发性中耳类癌2例报道并文献复习
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨中耳类癌的临床表现、病理特征、治疗方法及预后.方法 回顾性总结分析2011年至今我院经病理证实的2例中耳类癌患者的临床资料,并对2000 ~2018年发表的相关中文文献中报道的25例患者的临床资料进行复习.结果 本病最常见的临床表现为听力下降,其次为外耳道肿物、耳鸣.27例中采用免疫组织化学检测肿瘤标志物的患者15例,常见相关标志物有突触素、嗜铬蛋白、细胞角蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经细胞黏附分子和波形蛋白等;27例均行手术治疗;术后平均随访时间为25个月,复发7例.结论 中耳类癌是一种发病率低、临床表现及影像学检查缺乏特异性、易于漏诊和误诊的中耳肿瘤.在临床工作中,当发现临床症状及影像学表现缺乏特异性的中耳肿物患者时,应考虑行术前穿刺活检或术中冰冻,根据肿物性质确定手术方案,使手术方法更加合理,从而改善预后.尽管中耳类癌患者预后尚好,但容易远期复发,须进行长期随诊.
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编辑人员丨2023/8/6
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自配液基保存液在免疫细胞化学染色辅助细胞学诊断肺癌中的应用
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨自配液基保存液用于免疫细胞化学染色辅助细胞学诊断肺癌的效果.方法 应用自配液基保存液保存纤维支气管镜刷检和冲洗液标本,对细胞学诊断不能分类的74份肺癌标本行液基制片后用免疫细胞化学染色(ICC)方法对肺癌进行分型,并以组织学诊断为金标准,评价自配液基保存液用于ICC辅助细胞学诊断在肺癌分型中的价值.结果 74份标本中,60例有明确的组织学分型.与组织学结果相比,ICC辅助细胞学诊断对肺癌分型具有较好的一致性(Kappa值=0.762);p63、细胞角蛋白(CK)5/6对鳞癌的敏感度分别为80.0%、100%,CK7、甲状腺转录因子-1对腺癌的敏感度分别为85.1%、63.8%,突触素、神经细胞黏附分子56对小细胞癌的敏感度均为66.7%.结论 自配液基保存液能较好地保存纤维支气管镜刷检和冲洗液标本中细胞的免疫原性,液基制片后的ICC辅助细胞学诊断对肺癌分型结果与组织学结果的一致性较高.
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编辑人员丨2023/8/6
