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无创性延迟肢体缺血预适应对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨无创性延迟肢体缺血预适应(NDLIP)是否通过抑制线粒体通透性转换孔(MPTP)的异常开放来发挥对脑缺血/再灌注(I/R)损伤的神经保护作用。方法:健康雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机分为Sham组、I/R组、NDLIP组、NDLIP+Atr组和I/R+Atr组,每组12只。再灌注24 h后进行神经行为评分,2,3,5-三苯四唑氯化物(TTC)染色法测定脑梗死区域的面积。提取缺血半球皮层线粒体检测线粒体膜电位和呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ及Ⅳ的活性。蛋白质印迹法(Western blot)法检测大脑皮层中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平。组间比较采用单因素方差分析及事后多重比较LSD法。结果:NDLIP组神经行为评分低于I/R组[(1.17±0.41)分比(2.33±0.52)分,LSD- t=-3.250, P<0.01],脑梗死面积小于I/R组[(11.00±0.89)%比(17.67±1.03)%,LSD- t=-9.110, P<0.01],线粒体膜电位高于I/R组[(118.14±11.11)荧光强度比(67.84±5.51)荧光强度,LSD- t=11.903, P<0.01],线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ及Ⅳ活性均高于I/R组[(6.05±0.07) μmol/min比(4.67±0.06) μmol/min,LSD- t=9.106, P<0.01;(2.50±0.08) μmol/min比(1.99±0.05) μmol/min,LSD- t=7.878, P<0.01;(11.10±0.12) μmol/min比(7.06±0.06) μmol/min,LSD- t=19.881, P<0.01],bax/bcl-2及Caspase-3蛋白表达均低于I/R组(2.45±0.68比10.50±0.80,LSD- t=-13.864, P<0.01;0.42±0.07比0.68±0.08,LSD- t=-4.600, P<0.01)。然而,NDLIP+Atr组神经行为评分高于NDLIP组[(2.00±1.10)分比(1.17±0.41)分,LSD- t=2.321, P<0.05],脑梗死面积大于NDLIP组[(17.67±1.21)%比(11.00±0.89)%,LSD- t=9.110, P<0.01],线粒体膜电位低于NDLIP组[(81.73±7.57)荧光强度比(118.14±11.11)荧光强度,LSD- t=-8.616, P<0.05],线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ活性均低于NDLIP组[(4.52±0.54) μmol/min比(6.05±0.07) μmol/min,LSD- t=-10.087, P<0.01;(2.01±0.15) μmol/min比(2.50±0.08) μmol/min,LSD- t=-7.616, P<0.01;(6.88±0.72) μmol/min比(11.10±0.12) μmol/min,LSD- t=-20.783, P<0.01],bax/bcl-2及Caspase-3蛋白表达均高于NDLIP组(10.54±1.33比2.45±0.68,LSD- t=13.935, P<0.01;0.67±0.14比0.42±0.07,LSD- t=4.309, P<0.01)。 结论:NDLIP对大鼠脑I/R损伤的保护作用可能与抑制MPTP的异常开放有关。
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编辑人员丨1周前
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基于单细胞转录组测序探讨小鼠脉络膜新生血管内皮细胞的病理特征
编辑人员丨1周前
目的:基于单细胞转录组测序(scRNA-seq)探讨小鼠脉络膜新生血管(CNV)中内皮细胞(EC)的分子表达与病理特征。方法:取6只6~8周龄C57BL/6小鼠按照随机数字表法随机分为2个组,每组3只,处死后摘取双眼眼球,分别采用剪碎脉络膜巩膜复合体法和刮取脉络膜法分离脉络膜组织,采用胰蛋白酶/Ⅰ型胶原酶37 ℃连续消化制得单细胞悬液,流式细胞术检测细胞活率及EC比例,确定单细胞悬液制备方法。选取6只小鼠随机分为正常对照组和CNV组,每组3只,其中CNV组小鼠建立激光诱导的CNV模型;于造模后7 d制备单细胞悬液,采用10xGenomics进行单细胞分离并构建测序文库,Illumina Novaseq6000进行高通量测序,获得基因表达矩阵;根据文献报道并参考Cellmarker数据库定义细胞亚群;选取EC亚群进行拟时序分析,生成各个细胞分化状态(State)的基因表达矩阵,筛选CNV-EC并初步分析表达特征。另选取6只小鼠建立CNV模型,于造模后7 d取小鼠眼球制备冰冻切片,免疫荧光染色检测EC标志物Pecam1与线粒体外膜蛋白Tomm20、mt-Co1和毛细血管标志物Kdr、Plvap的共定位及面积占比情况,并统计血管直径。结果:剪碎复合体和刮取脉络膜所制备单细胞悬液的细胞活率分别为99.4%和99.1%,符合测序要求;流式细胞术检测EC占比约为1.58%。scRNA-seq结果显示,正常对照组和CNV组小鼠脉络膜均包含13个细胞亚群,与正常对照组比较,CNV组视锥/视杆细胞、EC和造血系细胞比例增加,视网膜色素上皮(RPE)细胞和施万细胞比例相应减少。在所有细胞亚群中,EC比例为18.40%。EC拟时序分析显示,脉络膜EC可分为4个State,CNV组中位于State 2状态的EC比例为29.1%,较正常对照组的9.5%明显升高;差异基因分析显示,State 2 EC中线粒体相关基因 mt-Nd4和 mt-Atp6等表达上调而毛细血管基因 Kdr和 Esm1等表达显著下调。免疫荧光染色结果显示,CNV区域内Tomm20和mt-Co1在Pecam1阳性EC内表达分布面积比例分别为(19.50±4.68)%和(4.64±2.82)%,明显高于正常区域的(3.00±2.09)%和(0.18±0.34)%,差异均有统计学意义( t=7.88、3.84,均 P<0.01)。CNV区域内Kdr和Plvap在Pecam1阳性EC内表达面积比例分别为(1.50±0.29)%和(0.79±0.97)%,明显低于正常区域的(31.30±5.44)%和(10.43±2.28)%,差异均有统计学意义( t=13.40、9.48,均 P<0.01)。CNV区域血管直径为(5.52±1.85)μm,明显大于正常区域的(4.21±1.84)μm,差异有统计学意义( t=9.57, P<0.001)。 结论:CNV发生时,脉络膜组织中EC比例增加,CNV-EC呈现线粒体代谢活化和毛细血管特性丢失的病理特征,提示EC线粒体活化可能在CNV生成中具有一定的作用。
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编辑人员丨1周前
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有氧运动对心肌梗死大鼠心肌能量代谢及线粒体呼吸功能的影响
编辑人员丨1周前
目的:观察有氧运动对心肌梗死致慢性心力衰竭大鼠心脏能量代谢及线粒体呼吸功能的影响。方法:采用随机数字表法将45只SD大鼠分为假手术组、心衰对照组及心衰运动组。采用冠状动脉结扎术将心衰对照组及心衰运动组大鼠制成心肌梗死模型,术后4周时心衰运动组大鼠给予为期8周的跑台有氧运动。于运动干预结束后采用超声心动图检测各组大鼠心功能,采用递增负荷跑台实验测定大鼠运动能力,采用磁共振波谱法测定大鼠心肌磷酸肌酸(PCr)及三磷酸腺苷(ATP)含量,采用细胞呼吸测量仪评估大鼠心肌线粒体呼吸功能。结果:心衰对照组PCr含量、PCr/ATP比值、线粒体呼吸链复合体Ⅰ和Ⅱ的耗氧量、左心室缩短分数(FS)、射血分数(EF)以及递增负荷实验最高跑速、力竭距离和力竭时间等均不及假手术组水平( P<0.05);心衰运动组ATP含量、复合体Ⅰ耗氧量、左心室FS和EF、递增负荷实验最高跑速、力竭距离和力竭时间均显著优于心衰对照组水平( P<0.05),PCr/ATP比值组间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:规律有氧运动能改善慢性心力衰竭大鼠心脏做功能力,表现为心功能及运动能力增强,其作用机制可能与上调心肌ATP水平及改善线粒体复合体Ⅰ功能有关;另外PCr/ATP比值可能不适合作为评估运动训练对心脏有益影响的生物标志物。
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编辑人员丨1周前
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脊髓线粒体自噬在姜黄素减轻小鼠糖尿病神经病理性痛中的作用
编辑人员丨1周前
目的:评价脊髓线粒体自噬在姜黄素减轻小鼠糖尿病神经病理性痛(DNP)中的作用。方法:选择SPF级健康雄性C57BL/6小鼠,2月龄,体重20~25 g,采用腹腔注射链脲佐菌素130 mg/kg方法制备DNP模型。取DNP建模成功的小鼠36只,采用随机数字表法分成3组( n=12):DNP组、DNP+姜黄素组(DPR组)、DNP+姜黄素+环孢素A组(DRC组)。另取12只正常C57BL/6小鼠腹腔注射等容量生理盐水,为正常对照组(NC组)。DPR组给予姜黄素200 mg/kg灌胃,1次/d,持续7 d;DRC组每次姜黄素灌胃前,鞘内注射线粒体自噬抑制剂环孢素A 10 mg/kg,1次/d,持续7 d,NC组和DNP组于同时点灌胃等容量生理盐水,1次/d,持续7 d。于灌胃前、灌胃1、3、5、7 d时测定机械缩足反应阈(MWT)。最后1次行为学测试完成后,取L 4-6段脊髓组织,采用JC-1法和DCFH-DA法分别联合流式细胞仪检测线粒体膜电位和ROS含量,采用Western blot法检测微管相关轻链蛋白3(LC3)、Beclin1和P62的表达水平,计算LC3-Ⅱ/Ⅰ比值,透射电镜检测线粒体自噬小体,采用免疫荧光双标技术观察LC3-Ⅱ与线粒体外膜转位酶复合体蛋白20(TOM20)共表达情况。 结果:与NC组比较,DNP组MWT和线粒体膜电位降低,ROS含量和LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高,Beclin1表达上调,P62表达下调( P<0.05),线粒体自噬小体形成增加,LC3-Ⅱ和TOM20共表达增加。与DNP组比较,DPR组MWT和线粒体膜电位升高,ROS含量降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高,Beclin1表达上调,P62表达下调( P<0.05),线粒体自噬小体形成增加,LC3-Ⅱ和TOM20共表达增加。与DPR组比较,DRC组MWT和线粒体膜电位降低,ROS含量升高,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低,Beclin1表达下调,P62表达上调( P<0.05),线粒体自噬小体形成减少,LC3-Ⅱ和TOM20共表达减少。 结论:姜黄素减轻小鼠DNP的机制可能与上调脊髓线粒体自噬水平,改善线粒体功能有关。
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编辑人员丨1周前
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正己烷亚急性染毒对小鼠学习记忆及海马组织线粒体能量代谢的影响
编辑人员丨1周前
目的:研究正己烷亚急性染毒对小鼠学习记忆及海马组织线粒体能量代谢的影响。方法:选择昆明种SPF级小鼠40只,采用简单随即分组方法根据不同染毒剂量分为低、中、高剂量染毒组和对照组,每组10只,采用灌胃方式进行正己烷染毒,低、中、高剂量染毒组每只小鼠分别给予浓度500、1 000、2 000 mg/kg正己烷0.2 ml/d灌胃;对照组给予食用油0.2 ml/d灌胃,1次/d,连续28 d。染毒结束后,各组进行Y型迷宫实验,以及海马组织ATP酶、线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ~Ⅳ活力、线粒体融合基因(Mfn1、Mfn2)与分裂基因(Fis1)mRNA的测定,并进行统计学分析。结果:与对照组比较,除第1次实验低剂量染毒组错误反应次数外,低、中、高剂量染毒组第1、2次Y型迷宫实验结果均有差异,差异有统计学意义( P<0.05)。低、中、高剂量染毒组Na +-K +-ATP酶活力分别为(8.27±2.65)、(5.38±1.55)、(3.55±1.69)μmol/gprot/h,Ca 2+-Mg 2+-ATP酶活力分别为(10.32±2.96)、(7.19±1.94)、(4.49±1.33)μmol/g prot/h。与对照组比较,中、高剂量染毒组海马组织Na +-K +-ATP酶、Ca 2+-Mg 2+-ATP酶活力均明显降低,差异有统计学意义( P<0.05)。与对照组比较,各剂量染毒组的复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ酶活力均降低,Mfn1 mRNA、Mfn2 mRNA表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:正己烷亚急性染毒可导致小鼠海马组织线粒体呼吸链酶复合体活力的降低,并进而可能通过ATP酶活力下降及线粒体融合-分裂失衡而导致线粒体的能量代谢紊乱,可能导致小鼠学习记忆能力下降。
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编辑人员丨1周前
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吗啡预处理对缺氧/复氧诱发的心肌细胞线粒体动力学变化的影响
编辑人员丨1个月前
目的 探讨吗啡(Mor)对缺氧/复氧(H/R)诱发的心肌H9c2细胞线粒体动力学变化的影响.方法 将心肌H9c2细胞分为空白组(正常培养)、模型组(H/R 处理)、对照组(5 μmol·L-1 Mor 处理)、实验组(H/R+5 μmol·L-1 Mor处理).用透射电子显微镜(TEM)观察线粒体的形态,用活性氧(ROS)、四甲基罗丹明乙酯(TMRE)、线粒体复合体Ⅰ和Ⅲ活性检测试剂盒分别检测ROS含量、线粒体膜电位(MMP)、复合体Ⅰ和Ⅲ活性,用蛋白质印迹法检测线粒体动力学相关蛋白GTP酶动力蛋白相关蛋白1(Drp1)、细胞色素氧化酶Ⅳ亚型(COX Ⅳ)和线粒体外膜转位酶20(TOM20)蛋白的表达水平.结果 实验组细胞核膜光滑完整,线粒体大小一致,嵴排列整齐,空泡化减少,线粒体基质电子密度增加,自噬体数量减少.空白组、模型组、对照组和实验组细胞的ROS含量分别为1.03±0.04、1.53±0.10、1.06±0.06 和 1.10±0.11,MMP 分别为 1.00±0.15、0.80±0.16、1.06±0.19 和 1.00±0.19,复合体 Ⅰ 活性分别为 1.00±0.08、2.28±0.82、1.05±0.26 和 1.13±0.37,复合体 Ⅲ 活性分别为 1.00±0.09、2.13±0.38、0.83±0.22和0.96±0.11,Drp1蛋白相对表达水平分别为1.00±0.14、1.27±0.07、0.97±0.21 和0.93±0.17,线粒体裂变蛋白 1(Fis1)蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.16、1.33±0.18、1.17±0.25 和 0.99±0.05,COX Ⅳ蛋白相对表达水平分别为1.00±0.25、0.62±0.08、0.79±0.26和0.97±0.16,TOM20 蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.13、0.67±0.15、0.75±0.13和0.89±0.05.模型组的上述指标与空白组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.000 1);实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.000 1).结论 吗啡可能通过抑制心肌线粒体自噬和分裂,以及降低呼吸链复合体Ⅰ和Ⅲ的活性减轻氧化应激损伤,进而维持线粒体动力学稳态,减轻H/R诱发的心肌细胞损伤.
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编辑人员丨1个月前
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白花蛇舌草提取物通过抑制有氧糖酵解和促进氧化磷酸化抑制肝癌细胞增殖
编辑人员丨1个月前
目的 探讨白花蛇舌草提取物(HDE)对肝癌细胞增殖的影响及其与有氧糖酵解和氧化磷酸化的关系,并分析其可能机制.方法 采用CCK-8实验和细胞增殖实验(5-ethynyl-2-deoxyuridine,EDU)检测不同质量浓度(20、40、80 mg/mL)HDE对肝癌细胞SNU-368增殖的影响;采用酶标仪检测乳酸脱氢酶活性、葡萄糖摄取、乳酸生成、线粒体呼吸链复合体活性,采用pH计检测细胞外液pH值,采用细胞氧耗仪检测细胞氧耗,分析HDE对SNU-368细胞有氧糖酵解和氧化磷酸化的影响;采用qRT-PCR实验检测各组SNU-368细胞中GLUT1、GLUT4、HK2、GPI、PFKL、ALDOA和HIF-1α的mRNA表达,采用Western blotting检测HIF-1α的蛋白表达.用过表达HIF-1α的慢病毒转染肝癌细胞SNU-368构建过表达HIF-1α稳转细胞株,并进行HDE相应干预后,采用qRT-PCR和Western blotting检测HIF-1α的mRNA及蛋白表达.结果 CCK-8实验显示,HDE呈一定的浓度依赖效应抑制肝癌细胞增殖(均P<0.05);糖代谢相关检测结果显示,HDE可以抑制葡萄糖摄取和乳酸生成,降低乳酸脱氢酶活性,升高细胞外培养液pH值,增加细胞氧耗和线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性(均P<0.05);qRT-PCR结果显示,HDE抑制了 GLUT1、HK2、GPI、ALDOA mRNA的表达(均 P<0.05).qRT-PCR 和 Western blotting 实验显示,与对照组相比,HDE 组HIF-1α mRNA及蛋白的表达明显减少;而与HDE组相比,HDE干预过表达HIF-1α的HIF-1α-LV组中,HIF-1αmRNA及蛋白表达再次增加(P<0.05).结论 HDE通过抑制肝癌细胞有氧糖酵解、促进氧化磷酸化而抑制肝癌细胞增殖,作用机制可能与抑制HIF-1α的表达有关.
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编辑人员丨1个月前
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新型冠状病毒PLpro负调控DDX3诱导的β干扰素抗病毒免疫通路
编辑人员丨2024/7/20
目的 发现严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)木瓜样蛋白酶(PLpro)的宿主互作分子,探索其生物学意义.方法 邻近蛋白标记结合质谱分析筛选宿主互作分子DEAD-box解旋酶3(DDX3);免疫荧光法分析PLpro与DDX3的胞内共定位;免疫共沉淀法分析PLpro与DDX3的相互作用,以及PLpro对DDX3与IκB激酶ε(IKKe)和TANK结合激酶1(TBK1)、DDX3与线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)互作的影响;荧光素酶报告基因法检测PLpro对β干扰素(IFN-β)通路的影响和对底物的酶切效率.结果 DDX3能够与PLpro发生细胞内共定位和相互作用;PLpro可能抑制DDX3-MAVS复合体形成,抑制DDX3-IKKε-TBK1之间的相互作用,负调控Ⅰ型干扰素通路;DDX3过表达情况下,PLpro/PLP-TM对底物位点的切割效率显著升高,而DDX3表达降低时,切割效率则显著降低.结论 DDX3可能是PLpro的宿主相互作用分子之一;PLpro负调控DDX3活化的IFN-β表达,为病毒复制提供有利的免疫环境,提升蛋白酶切割活性,共同促进病毒复制.
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编辑人员丨2024/7/20
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二氢杨梅素对运动性骨骼肌损伤的保护作用及机制研究
编辑人员丨2024/5/11
目的 探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对运动训练后小鼠骨骼肌损伤的保护作用及潜在机制.方法将成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为安静对照组(CG)、运动组(EG)、二氢杨梅素(100mg/kg·d)+运动组(DHM组).干预期4周,同时进行运动训练,每天1小时.训练结束后的次日,EG组和DHM组进行一次坡度为0、速度为18 m/min、持续90 min的跑台运动.运动结束后24小时按组别取材,测定血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和骨骼肌线粒体酶复合体Ⅰ和Ⅱ的活性,观察骨骼肌病理学组织形态变化.免疫印迹法(Western blot)检测线粒体功能相关通路的蛋白表达.结果与EG组相比,DHM组小鼠骨骼肌形态改变和线粒体损伤明显减轻.DHM显著抑制了运动后骨骼肌损伤的标志物CK和LDH及脂质过氧化水平,提高了骨骼肌T-SOD活性.Western blot结果显示,DHM显著增加小鼠骨骼肌沉默调节蛋白3(SIRT3)、雌激素相关受体α(EERα)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1 α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1 alpha,PGC-1 α)的表达.结论DHM有助于减轻小鼠运动性骨骼肌损伤,其机制可能是DHM可激活肌肉SIRT3信号通路,促进大强度运动后骨骼肌线粒体结构和功能的恢复.
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编辑人员丨2024/5/11
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绞股蓝总苷通过miR-210/ISCU途径调节线粒体能量代谢对ApoE-/-AS小鼠的影响及机制
编辑人员丨2024/4/27
目的 探讨绞股蓝总苷通过影响miR-210/铁硫簇组装蛋白(ISCU)途径,调控线粒体能量代谢,改善动脉粥样硬化模型小鼠主动脉脂质沉积的作用机制.方法 30 只健康ApoE-/-小鼠随机分为模型组、绞股蓝总苷组和辛伐他汀组,每组 10 只.10 只C57BL/6J小鼠作为正常组.模型组、绞股蓝总苷组和辛伐他汀组采用高脂饲料喂养 12 w.绞股蓝总苷组和辛伐他汀组分别采用绞股蓝总苷[2.973 g/(kg·d)]和辛伐他汀[2.275 g/(kg·d)]灌胃 4 w,模型组、正常组灌胃给予等量生理盐水.造模结束后,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察动脉粥样硬化斑块形成;采用紫外吸收法检测主动脉线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ;实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)检测主动脉miR-210、ISCU及线粒体DNA(mtDNA)mRNA表达;采用Wes全自动Western印迹定量分析系统检测线粒体能量代谢相关蛋白ISCU、mtDNA表达.结果 与正常组比较,模型组miR-210 表达、TC、TG、LDL-C水平显著升高,呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ 水平、HDL-C、ISCU mRNA及蛋白表达、mtD-NA mRNA水平显著下降(P<0.05,P<0.01),主动脉管腔见较大粥样斑块.与模型组相比,绞股蓝总苷组及辛伐他汀组TG、TC、LDL-C 水平显著降低(P<0.01,P<0.05),绞股蓝总苷组和辛伐他汀组主动脉管腔中粥样斑块面积明显减小,辛伐他汀组线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ水平显著升高(P<0.01,P<0.05),绞股蓝总苷组线粒体呼吸链复合体酶Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ含量显著增加,miR-210 表达水平显著降低(P<0.01,P<0.05),绞股蓝总苷组ISCU mRNA和蛋白表达及mt DNA mRNA水平显著升高(P<0.05),辛伐他汀组ISCU mRNA表达水平显著升高(P<0.05).结论 绞股蓝总苷可能通过miR-210/ISCU途径,调控线粒体能力代谢,缓解动脉粥样硬化斑块形成,进而防治动脉粥样硬化.
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编辑人员丨2024/4/27
