目的:观察狼疮鼠肝脏组织细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（MT-CO1）、BCL2相互作用蛋白3（BNIP3）和IL-1β表达特点及其意义。方法:以实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测狼疮鼠和对照鼠MT-CO1和BNIP3、IL-1β、线粒体微管相关蛋白1轻链3β（LC3B）、p16和p21的mRNA和蛋白水平，苏木精-伊红（HE）染色和免疫组织化学法检测狼疮鼠肝组织，免疫组织化学明确IL-1β在狼疮鼠肝组织的炎症损害表达部位，比色法检测2组肝组织丙二醛表达差异；以脂多糖刺激肝细胞和巨噬细胞，同时以脂多糖刺激巨噬细胞后上清液培养肝细胞，实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测上述基因蛋白表达，比色法检测各组肝细胞丙二醛表达差异。免疫荧光检测线粒体活性氧（mtROS）表达。各组均数比较使用单因素方差分析法，多个样本均数之间的两两比较，方差齐时用LSD法，方差不齐时用Tamhane′s T2法。 结果:PCR结果显示，狼疮鼠肝组织MT-CO1和BNIP3的mRNA（0.14±0.04；0.16±0.05）较对照组（0.11±0.04；0.16±0.06）表达明显下降，差异具有统计学意义（ t=7.16， P<0.001； t=4.54， P<0.001），狼疮组IL-1β、p16和p21（2.06±0.69；0.37±0.14；0.16±0.06）较对照组（0.23±0.07；0.25±0.08；0.11±0.04）表达显著增高，差异具有统计学意义（ t=9.58， P<0.001； t=24.35， P<0.001； t=22.36， P<0.001）。蛋白质印迹法结果与PCR结果趋势一致。HE染色显示狼疮鼠肝组织中有淋巴细胞浸润，免疫组织化学显示狼疮鼠肝组织中IL-1β阳性细胞主要集中在血窦中，肝实质细胞表达不明显。狼疮组肝组织丙二醛的含量（0.19±0.10）高于对照组（0.17±0.09），差异具有统计学意义（ t=4.33， P=0.005）。与对照组（0.176±0.072；0.08±0.03）相比，脂多糖直接刺激AML12肝细胞MT-CO1、BNIP3 mRNA表达（0.069±0.028；0.17±0.07）无明显变化，差异无统计学意义（ t=1.01， P=0.337； t=0.88， P=0.399）；脂多糖刺激巨噬细胞IL-1β（0.28±0.09）较对照组（0.15±0.05）表达增高，差异具有统计学意义（ t=28.26， P<0.001）。以脂多糖刺激巨噬细胞12 h后的上清培养肝细胞24 h，MT-CO1和BNIP3在脂多糖刺激组的mRNA水平（0.046±0.026；0.17±0.05）较对照组（0.144±0.083；0.18±0.06）表达明显下降，差异具有统计学意义（ t=7.52， P<0.001； t=4.24， P<0.001），脂多糖刺激组p16和p21（0.29±0.09；0.27±0.09）较对照组（0.18±0.06；0.22±0.07）表达增高，差异具有统计学意义（ t=13.54， P<0.001； t=8.69， P<0.001）。蛋白质印迹法结果与PCR结果趋势一致。免疫荧光提示脂多糖刺激组（0.25±0.10）mtROS荧光强度高于对照组（0.08±0.03），差异具有统计学意义（ t=4.86， P<0.001）。 结论:狼疮鼠肝脏免疫炎症可以刺激肝脏实质细胞发生细胞内线粒体功能损害，狼疮鼠肝脏器官损害机制不止局限于免疫活性细胞的免疫炎症，还有实质细胞线粒体功能障碍共同参与。

目的 探讨吗啡(Mor)对缺氧/复氧(H/R)诱发的心肌H9c2细胞线粒体动力学变化的影响.方法 将心肌H9c2细胞分为空白组(正常培养)、模型组(H/R 处理)、对照组(5 μmol·L-1 Mor 处理)、实验组(H/R+5 μmol·L-1 Mor处理).用透射电子显微镜(TEM)观察线粒体的形态,用活性氧(ROS)、四甲基罗丹明乙酯(TMRE)、线粒体复合体Ⅰ和Ⅲ活性检测试剂盒分别检测ROS含量、线粒体膜电位(MMP)、复合体Ⅰ和Ⅲ活性,用蛋白质印迹法检测线粒体动力学相关蛋白GTP酶动力蛋白相关蛋白1(Drp1)、细胞色素氧化酶Ⅳ亚型(COX Ⅳ)和线粒体外膜转位酶20(TOM20)蛋白的表达水平.结果 实验组细胞核膜光滑完整,线粒体大小一致,嵴排列整齐,空泡化减少,线粒体基质电子密度增加,自噬体数量减少.空白组、模型组、对照组和实验组细胞的ROS含量分别为1.03±0.04、1.53±0.10、1.06±0.06 和 1.10±0.11,MMP 分别为 1.00±0.15、0.80±0.16、1.06±0.19 和 1.00±0.19,复合体 Ⅰ 活性分别为 1.00±0.08、2.28±0.82、1.05±0.26 和 1.13±0.37,复合体 Ⅲ 活性分别为 1.00±0.09、2.13±0.38、0.83±0.22和0.96±0.11,Drp1蛋白相对表达水平分别为1.00±0.14、1.27±0.07、0.97±0.21 和0.93±0.17,线粒体裂变蛋白 1(Fis1)蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.16、1.33±0.18、1.17±0.25 和 0.99±0.05,COX Ⅳ蛋白相对表达水平分别为1.00±0.25、0.62±0.08、0.79±0.26和0.97±0.16,TOM20 蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.13、0.67±0.15、0.75±0.13和0.89±0.05.模型组的上述指标与空白组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001,P＜0.000 1);实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001,P＜0.000 1).结论 吗啡可能通过抑制心肌线粒体自噬和分裂,以及降低呼吸链复合体Ⅰ和Ⅲ的活性减轻氧化应激损伤,进而维持线粒体动力学稳态,减轻H/R诱发的心肌细胞损伤.

目的 建立一种龟甲配方颗粒高分辨熔解曲线(HRM)技术鉴别方法.方法 根据乌龟Chinemys reevesii及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome oxidase subunitⅠ,COI)基因序列上的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点设计鉴别引物,扩增产物直接进行HRM分析,并优化反应体系,根据最佳条件进行适用性验证.结果 在模板DNA质量浓度为0.62～374.88 ng/μL、引物浓度为0.1～0.4 μmol/L、退火温度为62℃、循环数为45个的条件下,龟甲饮片和配方颗粒的熔解曲线为单峰,其Tm均值分别为(82.39±0.09)、(82.38±0.05)℃,而混伪品和醋龟甲配方颗粒未有扩增.结论 该研究建立的高分辨熔解曲线鉴别方法可快速鉴别龟甲原料和配方颗粒的真伪,以及区分其生品和炮制品配方颗粒,为龟甲配方颗粒的质量标准研究提供了理论依据.

目的 探讨卡格列净通过PDGF/SIRT1减轻糖尿病肾病小鼠肾纤维化的潜在机制.方法 使用链脲菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病肾病小鼠模型,并设置以下组别:①对照小鼠;②STZ灌胃小鼠;③卡格列净处理的STZ小鼠;④BSA处理的STZ小鼠;⑤PDGF蛋白处理的STZ小鼠;⑥卡格列净与BSA共处理的STZ小鼠;⑦卡格列净与PDGF蛋白共处理的STZ小鼠.采集各组小鼠肾脏组织和血清,分析肌成纤维细胞标志物(Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、α-SMA)的mRNA水平和蛋白水平、线粒体生物发生的指标(线粒体DNA拷贝数、关键调节因子SIRT1和电子传递链蛋白的不同亚基的表达水平)、血清中PDGF的表达水平.结果 STZ显著增强了I型胶原、纤维连接蛋白和α-SMA的mRNA和蛋白表达;而卡格列净治疗后,这些肌成纤维细胞标志物的表达水平恢复到了正常水平.STZ降低了线粒体DNA拷贝数,而卡格列净可以阻止这种下降.同时,卡格列净纠正了STZ导致的SIRT1、抑制素1(PHB1)、热休克蛋白60(HSP60)、电压依赖性阴离子通道(VDHC)、琥珀酸脱氢酶复合物黄素蛋白亚基A(SDHA)和细胞色素C氧化酶Ⅳ(Cox Ⅳ)的降低.此外,STZ诱导的PDGF的上升因卡格列净的存在而恢复.相比于STZ处理小鼠,STZ与PDGF蛋白共处理的小鼠肾脏中SIRT1的表达水平更低、肌成纤维细胞标志物的mRNA水平更高;相比于STZ与卡格列净共处理小鼠,STZ、PDGF蛋白与卡格列净共处理的小鼠肾脏中SIRT1的表达水平、肌成纤维细胞标志物的mRNA水平无显著区别.结论 卡格列净治疗可以减轻糖尿病肾病的肾纤维化病变,并且依赖于PDGF/SIRT1介导的线粒体生物发生轴.

目的 以线粒体细胞色素C氧化酶亚基(COI)基因为目的基因,利用DNA条形码技术对未知鼠样本进行鉴定.方法 采用夹夜法对九江市武宁县宋溪镇某村的鼠密度进行调查,经形态学初步鉴定后,以捕获的 1 只无法明确鉴定的大型鼠样本为对象,提取基因组DNA并采用COI基因通用引物BatL5310 和R6036R进行PCR扩增及测序,将测序结果在NCBI网站进行BLAST比对,采用MEGA7 软件选择最大似然法构建系统发育树.结果 共捕获小型兽类7 只,密度为3.38%,经形态学鉴定有褐家鼠2 只,黑线姬鼠2 只,臭鼩鼱2只,形态学初步鉴定为青毛巨鼠或小泡巨鼠的未知鼠1 只,提取的未知鼠样本DNA通过PCR成功扩增出COI基因目的条带,与NCBI基因库中小泡巨鼠(KP995219)序列同源性高达 100%,系统发育树显示该鼠样本与小泡巨鼠(KP995219、KP995203)处于同一分支,遗传距离分别为 0、0.0016,而青毛巨鼠(NC_036730)单独处于另一分支,遗传距离较远.结论 赣北地区首次报道小泡巨鼠,采用COI基因的DNA条形码技术可快速、准确的进行鼠种鉴定,有助于弥补非常见鼠形态学鉴定困难的不足.

目的:建立一种鳖甲配方颗粒特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法.方法:根据中华鳖Trionyx sinen-sis及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因序列,筛选出中华鳖的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计鳖甲鉴别专属引物BJ-5F及BJ-5R.通过优化PCR反应条件,确定最佳的PCR反应体系,并对该方法进行耐受性、适用性考察和测序验证.结果:当退火温度为 60℃,循环 33 次时,鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒均可在约 236 bp处得到清晰单一的中华鳖条带,其混伪品及阴性对照品均无此条带.结论:该研究所建立的特异性PCR鉴别方法适用于快速鉴定鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的真伪,且具有专属性强、准确性高、简便易行等特点,为鳖甲配方颗粒质量标准的制定提供了参考依据.

对福州褐云玛瑙螺感染的广州管圆线虫进行遗传进化分析,并探讨其与5大洲地区广州管圆线虫分离株间的系统进化关系.在福州市市区各大公园、市民居住地附近的垃圾场、草丛和菜地等环境,采集褐云玛瑙螺,匀浆法收集广州管圆线虫Ⅲ期幼虫并进行形态学鉴定.提取幼虫DNA,PCR扩增细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)序列,测序后在GenBank数据库中进行BLAST比对.采用MEGA软件,以血管圆线虫为外群,用邻接法构建基于广州管圆线虫CO Ⅰ序列的系统进化树.共采集褐云玛瑙螺103只,19只感染广州管圆线虫Ⅲ期幼虫,感染率为18.4％.检获广州管圆线虫Ⅲ期幼虫1 081条.PCR扩增条带长450 bp.BLAST比对结果显示,本研究获得的CO Ⅰ序列与福建连江广州管圆线虫(GenBank登录号:AB684364.1)的序列一致性为98.2％.系统进化树分析结果显示,本研究获得的序列与福建分离株的序列聚在一个进化分支上,再与来自北美洲(GenBank登录号:MH069731.1)、南美洲(GenBank 登录号:MW390969.1)、大洋洲(GenBank 登录号:KU532144.1)和欧洲(GenBank登录号:MN227185.1)的参比序列聚为一个分支.福州广州管圆线虫分离株仍属于亚洲地理株,遗传分化稳定.

目的:建立一种能同时鉴别全蝎(东亚钳蝎)及其混伪品细尖狼蝎的有效方法.方法:基于东亚钳蝎和细尖狼蝎的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CO Ⅰ)基因差异,设计区分东亚钳蝎、细尖狼蝎的特异性引物,建立多重PCR方法,并对退火温度、引物浓度、循环次数、DNA模板用量等条件进行优化筛选.对不同来源的东亚钳蝎和细尖狼蝎样品进行实测验证,根据特异性条带大小进行鉴别.结果:当退火温度为51.6℃,循环次数为30,DNA模板用量为30 ng时,东亚钳蝎和细尖狼蝎分别出现约342 bp和108 bp的特异性条带.结论:该方法可以实现东亚钳蝎、细尖狼蝎及掺杂样品的快速而又准确地鉴别,并可弥补传统鉴别方法的不足.

目的 分析山东省济南市和济宁市白纹伊蚊(Aedes albopictus)线粒体细胞色素c氧化酶的一个亚基Ⅰ基因(mitochondrial cytochrome c oxidase subunit Ⅰ,mtDNA-CO Ⅰ),揭示白纹伊蚊不同亚群体间的遗传差异、亲缘关系,探讨白纹伊蚊遗传多样性与地理分布之间的关系.方法 分别从济南市历城区和济宁市任城区采集白纹伊蚊样本,利用PCR技术扩增白纹伊蚊种群的mtDNA-CO Ⅰ基因序列,结果通过NCBI的BLAST比对工具进行比对,运用BioEdit 7.0、DnaSP v6和PopART 1.7软件进行数据分析,计算白纹伊蚊遗传多样性参数并绘制单倍型网络图.结果 对山东省济南市和济宁市的白纹伊蚊mtDNA-CO Ⅰ基因进行了基因测序,分别获得了 86条和84条基因片段.与BLAST比对结果显示,全部序列存在5个突变位点,核苷酸多样性(nucleotide diversity,Pi)为0.000 97,G+C含量为33.4％,表现出线粒体DNA特性.与济宁市相比,济南市的白纹伊蚊种群在核苷酸多样性和单倍型多样性上均较高,核苷酸差异也更大,但这些差异无统计学意义.济南市和济宁市的白纹伊蚊种群各自拥有6种单倍型,其中3种是共同存在的,而另外3种仅在济南市的种群中发现.种群结构分析结果显示,济南与济宁两地的白纹伊蚊种群的群体间核苷酸差异很小.结论 mtDNA-CO Ⅰ基因可用于物种鉴定以及研究白纹伊蚊种群遗传多样性的分子标志,为更有效的分类和防控策略提供支持.

目的 结合鼠疫疫源地调查和监测工作对青海省海东市小型兽类体表寄生蚤的构成、宿主选择和分布进行调查研究,并应用分子生物学方法对部分常见和疑难蚤种进行分子鉴定,以提高蚤种分类鉴别准确性.方法 应用细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CO Ⅰ)基因对蚤类进行分子鉴定,并结合传统形态学分类方法综合鉴别蚤类.结果 海东市共发现和记录体表寄生蚤61种(亚种),隶属4总科5科28属.测得4科13属20种计99条蚤CO Ⅰ基因序列片段(约658 bp),种内遗传距离为0.2％～2.9％,种间为3.3％～22.9％,种间距离明显大于种内.结论 系统进化分析显示各蚤种单系的支持率均＞99％,CO Ⅰ基因和传统形态分类方法的结合可以更准确地鉴定海东市蚤类.