目的 研究机械通气以及机械通气联合膈神经电刺激对大鼠膈肌神经肌肉接头形态学的影响.方法 实验分组:对照组(CON组,n=6)、机械通气18 h组(MV组,n=6)、机械通气18 h联合假电刺激组(S-MS组,n=6)、机械通气18 h联合电刺激组(MS组,n=6).通过生物信号采集系统检测膈肌收缩力,拟合刺激频率-收缩曲线,计算膈肌疲劳指数.通过HE染色观察膈肌标本肌纤维横截面积(cross-section area,CSA);通过膈肌整体免疫组织化学染色(IHC)联合激光共聚焦技术,观察神经肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)终板膜面积.结果 与CON组相比,MV组、S-MS组离体膈肌收缩力下降;与CON组(0.686 8±0.049 42)相比,MV组(0.360 3±0.066 89)、S-MS组(0.367 9±0.034 94)离体膈肌抗疲劳性下降,MS组(0.536 2±0.054 38)相对降低程度更低;与CON组[674.3(523.9,863.6)]相比,MV组[374.5(293.3,522.7)]、S-MS组[392.8(309.5,542.6)]膈肌CSA减少,MS组[592.7(425.1,820.0)]相对降低程度更低;与CON组[393.7(293.5,471.3)]相比,MV组[289.7(227.0,354.2)]、S-MS组[243.1(190.8,331.7)]膈肌终板膜面积减少,MS组[331.0(262.8,413.7)]相对降低程度更低.结论 机械通气导致大鼠膈肌功能障碍,且膈肌NMJ终板膜面积下降.通过10 min/h的双侧膈神经电刺激可改善机械通气引起的膈肌功能障碍和膈肌NMJ终板膜面积改变.

目的:利用同步辐射显微断层成像(SRμCT)表征大鼠脊髓挫伤(SCC)后髓内微血管在慢性恢复期的三维形态计量学特点。方法:成年雄性SD大鼠(取自中南大学动物实验中心)48只，按随机数字表法将其分为对照组、SCC后12周和24周组( n＝16/组)。SCC后12周和24周组采用改良的Allen’s打击法建立SCC模型，对照组仅行椎板切除术。3组大鼠在相应时间点行脊髓血管灌注造影并取标本行SRμCT扫描成像( n＝8/组)和血管免疫荧光染色( n＝8/组)，组间均值比较采用单因素方差分析。 结果:在SCC后的慢性恢复期，大鼠后肢BMS评分仅恢复至正常水平的61.1%~64.7%，髓内血管再生进入平台期。RECA-1+血管密度在SCC后24周和12周组比较，差异无统计学意义[(113.12±21.30)/mm 2比(100.25±21.81)/mm 2， t＝1.194， P>0.05]，血管容积比在SCC后24周和12周组比较，差异无统计学意义[(14.35±1.72)%比(12.61±1.87)%， t＝1.936， P>0.05]，分支节点密度在SCC后24周和12周组比较，差异无统计学意义[(4 600.0±1 319.1)/mm 3比(4 025.0±1 513.5)/mm 3， t＝0.810， P>0.05)，中央沟动脉血管分支计数在SCC后24周和12周组比较，差异无统计学意义[(120.0±29.8)/mm 3比(126.3±32.1)/mm 3， t＝－0.354， P>0.05]。 结论:大鼠SCC后慢性期后肢运动功能的恢复进入平台期可能与脊髓髓内微血管内源性再生的终止有关。

目的:观察脉冲电磁场(PEMF)对椎间盘退行性病变(IDD)大鼠髓核组织及离体髓核细胞神经肽Y(NPY)的调控作用，并探讨其对髓核细胞凋亡及基质降解的影响。方法:采用随机数字表法将18只SD大鼠分为对照组、IDD模型组(简称模型组)和PEMF组。将模型组及PEMF组大鼠制成IDD动物模型，PEMF组于造模后给予PEMF干预，每天曝磁1次，连续干预14 d。同期体外培养大鼠原代髓核细胞并分为对照组、TNF-α模型组(简称模型组)和TNF-α＋PEMF组(简称PEMF组)，分别向模型组、PEMF组细胞培养板内注入25 μL TNF-α(终浓度为50 ng/ml)，PEMF组随后给予曝磁处理，每天曝磁1次，连续干预6 d，对照组则同期向细胞培养板内注入25 μL磷酸盐缓冲液(PBS)。于造模8周后采用番红固绿染色评估各组大鼠椎间盘组织病理形态学改变；同时检测各组大鼠椎间盘及离体髓核细胞NPY、神经肽Y2受体(NPY2R)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2因子(Bcl-2)、Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、基质金属蛋白酶-3(MMP3)的表达水平。结果:模型组椎间盘纤维组织出现断裂、褶皱，且多糖、蛋白质等成分明显减少，骨纤维增多。PEMF组椎间盘纤维组织断裂较少，软骨组织增多，纤维环与髓核边界较清晰。模型组大鼠椎间盘纤维环及髓核组织中均有NPY表达，且NPY、NPY2R表达量均较对照组明显增加( P<0.05)，PEMF组NPY、NPY2R表达量较模型组进一步升高( P<0.05)。与对照组比较，模型组Bax含量显著增加( P<0.05)，Bcl-2表达明显减少( P<0.05)，而PEMF组Bax含量较模型组明显降低( P<0.05)。模型组Col-Ⅱ水平显著低于对照组( P<0.05)，MMP3蛋白表达则明显增强( P<0.05)；PEMF组Col-Ⅱ mRNA表达较模型组显著升高( P<0.05)，MMP3蛋白表达明显降低( P<0.05)。各组离体髓核细胞上述指标检测结果与在体实验观察结果基本一致。 结论:PEMF干预可能通过上调NPY表达，阻滞Bax/Bcl-2信号通路抑制髓核细胞凋亡，并通过增加Col-Ⅱ含量，减少MMP3表达以逆转ECM代谢失衡，有助于延缓IDD退变进程。

目的:分析人富血小板血浆(PRP)调控人表皮干细胞(ESC)的靶基因。方法:(1)收集陆军军医大学第一附属医院行泌尿外科手术的6例男性患者术后弃用的包皮组织，患者年龄为5～25岁，既往身体健康，无泌尿系统感染，采用快速贴壁法培养人ESC并进行形态学观察及鉴定。收集解放军南部战区总医院1名29岁女性健康志愿者静脉血40 mL，采用二次离心法提取PRP。(2)将培养成功的原代人ESC按照随机数字表法分为对照组和PRP处理组，每组3孔。对照组细胞不行特殊处理；PRP处理组待细胞贴壁12 h，在培养基中加入PRP，使其最终体积分数为2.5%。提取RNA应用RNA测序技术进行2组人ESC转录组测序和数据分析，以错误发现率<0.05、差异倍数≥4为标准应用Dr. Tom数据挖掘系统筛选差异表达基因，对获得的差异表达基因进行基因本体论(GO)富集分析找出显著富集的GO条目。再用京都基因和基因组(KEGG)信号通路注释分析进一步寻找差异表达基因可能参与的生物学过程或者代谢通路。最后，选取与再上皮化过程相关且差异表达明显的基因，利用实时荧光定量反转录PCR验证基因的差异表达情况。对数据行独立样本 t检验。 结果:(1)培养细胞呈克隆样生长，形态为铺路石样，CD49f阳性率达95.132%、CD71阳性率为0.006%，证明ESC原代培养成功。(2)质控数据分析显示，选取样本质量较好，序列比对百分比较高，满足测序要求。(3)测序数据显示，2组间共有449个差异表达基因，其中上调基因354个、下调基因95个，进一步聚类分析确定2组间有18个显著上调基因和5个显著下调基因。GO富集分析以及KEGG信号通路注释分析表明，显著差异表达基因主要富集在表皮构建和角化过程，同时可能与白细胞介素17信号通路相关。(4)选取了与再上皮化过程相关且差异表达明显的角蛋白19、角蛋白10以及S100A7基因进行验证。实时荧光定量反转录PCR显示，与对照组比较，PRP处理组细胞角蛋白19 mRNA和S100A7 mRNA表达量明显升高( t＝10.270、5.690， P<0.01)，角蛋白10 mRNA表达量明显降低( t＝7.306， P<0.01)，与测序数据结果一致。 结论:PRP调节人ESC功能促进创面再上皮化涉及角蛋白19、角蛋白10以及S100A7等多个基因的转录调控，深入探讨PRP影响人ESC的可能调控网络将为其后续临床治疗提供依据。

目的:探讨正常成年国人脊柱-骨盆矢状位X线影像学形态特征，以及基于Lee分型的脊柱-骨盆矢状位序列改良分型系统的建立及其临床意义。方法:前瞻性描述性研究。招募2020年5月—2023年5月徐州市中心医院体检中心140名健康成年国人志愿者，收集其标准站立位脊柱全长正侧位X线片，其中男59例、女81例，年龄18~49（32.9±10.4）岁。（1）利用图像存储与传输系统对胸椎后凸角（TK）、腰椎前凸角（LL）、腰椎水平线（HLL）、骶骨倾斜角（SS）、骨盆倾斜角（PT）和骨盆入射角（PI）等参数进行X线影像测量；（2）采用Pearson相关检验和Spearman秩相关检验进行各参数间相关性分析；（3）基于Lee分型系统，根据HLL的具体位置制定脊柱-骨盆矢状位序列改良分型系统，对比分析不同的改良分型间上述参数测量值的差异；（4）对比改良分型与Roussouly分型的读片时间（s）。结果:（1）本组140名志愿者各参数X线测量值如下：TK为25.7°±8.6°，LL为48.4°±10.8°，SS为35.0°±8.1°，PT为9.7°±7.1°，PI为44.7°±10.3°。（2）脊柱-骨盆各参数间相关分析结果显示，HLL与PI、LL、PT、SS均呈正相关（ r=0.514、0.503、0.211、0.169， P值均<0.05），HLL与TK呈负相关（ r=-0.189， P=0.025）；PI与SS、LL、PT均呈正相关（ r=0.727、0.528、0.622， P值均<0.001）；LL与SS、TK呈正相关（ r=0.827、0.410， P值均<0.05），与PT呈负相关（ r=-0.176， P=0.037）；TK与PI、SS、PT以及SS与PT均无相关性（ P值均>0.05）。（3）根据HLL的位置建立的脊柱-骨盆矢状位序列改良分型系统共分为4型：Ⅰ型，HLL低于L 4/5椎间隙，占3.6%（5/140）；Ⅱ型，HLL经过L 4椎体及L 4/5椎间隙，占39.3%（55/140）；Ⅲ型，HLL经过L 3椎体及L 3/4椎间隙，占45.7%（64/140）；Ⅳ型，HLL高于L 3上终板，占11.4%（16/140）。PI、SS自Ⅰ型至Ⅳ型逐渐递增，LL自Ⅰ型至Ⅲ型逐渐递增、至Ⅳ型则有下降，PT值在Ⅰ型最高、Ⅱ型最低，TK值则在Ⅰ型最低、Ⅱ型最高。4个分型间PI、SS、LL、PT、TK总体比较，差异均有统计学意义（ H=36.99、38.91、13.48、12.25、8.52， P值均<0.05值）。组间两两比较：Ⅰ、Ⅱ型分别与Ⅲ、Ⅳ型间PI比较，Ⅰ型分别与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型间的SS及LL比较，Ⅰ型与Ⅱ型间PT比较，Ⅱ型分别与Ⅲ、Ⅳ型间SS，Ⅱ、Ⅲ型分别与Ⅳ型间TK比较，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）；各指标不同分型间其他两两比较的差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。（4）改良分型系统的读片时间为3~8（4.99±0.91）s，少于Roussouly分型的9~19（14.12±2.19）s，差异有统计学意义（ t=45.48， P<0.001）。 结论:随着腰椎水平线下移，脊柱-骨盆序列将出现骶骨倾斜及腰椎前凸角减小、下腰弯组成椎体的数量减少等特点。根据HLL位置建立脊柱-骨盆矢状位序列改良分型系统，其方法容易掌握，读片时间短、准确性高，可作为外科医生在退行性腰椎融合手术中恢复腰椎前凸和矢状位的参考。

目的:通过腰椎CT扫描及三维重建图像模拟置入皮质骨轨迹螺钉并进行形态学测量，探讨经皮皮质骨轨迹螺钉置入的可行性。方法:收集100例成人腰椎病变患者的CT数据，利用Mimics 17.0软件进行CT三维重建，以腰椎椎弓根最小冠状断面的内缘与下缘交界处在椎板上的投影点为进钉点，测量头倾角、外倾角、最大螺钉长度、最大螺钉直径、轨迹与棘突的距离、上终板比率等参数，同时利用三维重建图像观察该轨迹与棘突的关系。结果:L 1~L 5的外倾角分别为9.3°（8.9°，9.8°）、9.6°（8.9°，9.8°）、10.4°（9.5°，11.3°）、11.81°±1.24°和13.6°（12.5°，14.5°），头倾角分别为26.6°（26.0°，27.0°）、26.2°（25.7°，26.5°）、26.9°（26.5°，27.4°）、25.94°±0.92°和24.3°（22.7°，25.4°），头倾角、外倾角各节段间的差异均有统计学意义。L 1~L 5的最大螺钉直径分别为（5.65±0.49） mm、（6.38±0.60） mm、（6.91±0.67） mm、（7.42±0.76） mm和8.33（7.59，9.01） mm，除L 1和L 5外各节段间的差异均有统计学意义；最大螺钉长度分别为36.4（35.4，37.0） mm、36.7（35.8，37.3） mm、37.6（37.1，38.1） mm、37.8 （37.3，38.1） mm和36.2（35.2，36.9） mm，各节段的差异有统计学意义。L 1~L 5上终板比率分别为41.08%（34.36%，45.60%）、37.94%（32.97%，43.63%）、40.18%（34.56%，44.49%）、38.61%（34.80%，46.24%）和40.9%（35.32%，46.02%），L 1与L 2、L 2与L 5的差异有统计学意义。L 1~L 5的轨迹与棘突间的距离分别为（7.27±1.23） mm、7.19（5.97，8.28） mm、7.32（6.01，8.28） mm、（7.31±1.36） mm和7.45（6.32，8.23） mm。CT矢状位重建图像中轨迹尖端位于上终板的后2/5附近，轨迹延长线位于棘突下缘。CT三维重建图像中模拟螺钉与棘突不冲突。 结论:腰椎皮质骨轨迹螺钉可经皮置入且棘突不会妨碍其置入过程，棘突和上终板可作为指导经皮置入皮质骨轨迹螺钉的标志，数字化模拟置钉为经皮皮质骨轨迹螺钉的临床应用提供了参考依据。

目的:探讨脐血间充质干细胞(MSC)联合艾曲波帕治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后移植物功能不良(PGF)患者的疗效及安全性。方法:选择2018年3月至2019年6月，在航天中心医院血液科接受allo-HSCT后，发生PGF的6例患者为研究对象。其中，男性患者为5例，女性为1例；患者中位年龄为33岁(范围：16~45岁)。根据血常规、骨髓细胞形态学、免疫表型及DNA指纹图谱等检查结果，患者被确诊为PGF。采用脐血MSC(1×10 6/kg)联合艾曲波帕(25~75 mg/d)对患者进行治疗。本研究对患者的随访截至2020年3月1日。回顾性分析患者的临床资料、相关实验室检查结果、脐血MSC联合艾曲波帕治疗PGF患者的临床疗效、不良反应及预后。本研究获得航天中心医院医学伦理委员会批准(批准号：20160420-XYZZ-02)，并与全部患者签署临床研究知情同意书。 结果:①本组6例患者的原发疾病中，急性髓细胞白血病(AML)为2例，肝脾T细胞淋巴瘤(HSTCL)为1例，T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病(T-LBC/ALL)为2例，慢性粒单核细胞白血病(CMML)为1例。所有6例患者移植前均处于未缓解状态。allo-HSCT后，均获造血功能重建，粒细胞植入的中位时间为移植后13 d(范围：12~14 d)，有4例患者治疗前血小板未植入，剩余2例患者血小板植入时间分别为移植后13 d及90 d，所有患者在移植后28 d经骨髓DNA指纹图谱证实为完全供者嵌合。6例患者中有5例发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)，均为Ⅲ~Ⅳ度aGVHD，经系统治疗后均获得良好控制。②患者的PGF中位诊断时间为移植后57 d(范围：28~370 d)；其临床特征包括血常规检查结果示，2系或者3系血细胞计数持续减少，骨髓细胞形态学检查结果示骨髓增生减低或者明显减低，巨核细胞少见或者缺如，微小残留病(MRD)检查未见原发疾病复发证据。③患者输注脐血MSC的中位次数为3.5次(范围：2~4次)。治疗后，1例患者无效，5例有效，达治疗有效的中位时间为19 d(范围：12~56 d)，并且最终获得造血功能恢复。④患者输注脐血MSC过程中均无不良反应，亦未发生aGVHD及慢性GVHD(cGVHD)症状加重。2例出现间接胆红素水平升高，予以艾曲波帕减量后改善。⑤本组患者的中位随访时间为10.5个月(范围：6~19个月)，截至随访结束，6例患者中5例存活，并处于无病生存状态，存活患者中位总体生存(OS)期为11个月(范围：8~19个月)；1例死亡，其死亡原因为严重肺部感染。结论:脐血MSC联合艾曲波帕治疗allo-HSCT后PGF患者，疗效及安全性均良好。

目的 探讨针刀干预对腰椎间盘突出症(LDH)模型大鼠椎间盘退变及转化生长因子β/骨形态发生蛋白(TGF-β/BMP)信号通路水平的影响.方法 建立LDH大鼠模型,大鼠分为空白组、假手术组、模型组、塞来昔布组(0.34g·kg-1·d-1塞来昔布溶剂)、针刀组、TGF-β/BMP抑制剂组(针刀+SB-431542,针刀+100 μL/鼠/2d的SB431542)、TGF-β/BMP 激动剂组(针刀+SRI-011381 hydrochloride,针刀+10 mg·kg-1·2 d-1 的 SRI-011381 hydrochloride),每组20只.观察7组大鼠一般行为状态;HE染色观察椎间盘软骨组织形态学变化;RT-qPCR检测TGF-β1 mRNA、BMP-7 mRNA、Smad2/3 mRNA、Smad 1/5/8 mRNA、Smad4 mRNA 及 TIMP-3 mRNA 的表达;ELISA 法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)水平;免疫组化检测椎间盘软骨组织TIMP-3表达;Western blot 检测 TGF-β1、BMP-7、Smad2/3、Smad1/5/8、BMPR-1A、ALK5、Sox9、COL2A1 蛋白水平.结果 与空白组及假手术组比较,模型组大鼠行为异常,椎间盘出现破裂,基质丢失,软骨细胞减少,软骨终板与髓核边界结构紊乱,Smad4 mRNA、TIMP-3 mRNA 表达与 TGF-β1、BMP-7、Smad2/3、Smad1/5/8 mRNA 及蛋白、BMPR-1A、ALK5、Sox9、COL2A1蛋白表达、TIMP-3平均光密度值显著降低(P＜0.05),TNF-α、IL-6、MMP-3水平显著升高(P＜0.05).与模型组比较,针刀组、塞来昔布组大鼠异常行为减少,椎间盘软骨组织损伤减轻,Smad4 mRNA、TIMP-3 mRNA表达与TGF-β1、BMP-7、Smad2/3、Smad1/5/8 mRNA 及蛋白、BMPR-1A、ALK5、Sox9、COL2A1 蛋白表达、TIMP-3 平均光密度值显著升高(P＜0.05),TNF-α、IL-6、MMP-3水平显著降低(P＜0.05).与针刀组比较,TGF-β/BMP抑制剂组大鼠异常行为及椎间软骨组织损伤加重;Smad4 mRNA、TIMP-3 mRNA 表达与 TGF-β1、BMP-7、Smad2/3、Smad1/5/8 mRNA 及蛋白、BMPR-1A、ALK5、Sox9、COL2A1 蛋白表达、TIMP-3 平均光密度值显著降低(P＜0.05),TNF-α、IL-6、MMP-3 水平显著升高(P＜0.05).TGF-β/BMP激动剂组大鼠异常行为减少,椎间盘软骨组织损伤减轻;Smad4 mRNA、TIMP-3 mRNA表达与 TGF-β1、BMP-7、Smad2/3、Smad1/5/8 mRNA 及蛋白、BMPR-1A、ALK5、Sox9、COL2A1 蛋白表达、TIMP-3 平均光密度值显著升高(P＜0.05),TNF-α、IL-6、MMP-3水平显著降低(P＜0.05).结论 针刀干预可能通过激活TGF-β/BMP信号通路,抑制细胞外基质降解、抑制椎间盘组织内炎症,起到延缓椎间盘退变发展、达到治疗LDH的目的.

磁共振成像(MRI)是诊断椎间盘退行性变(IVDD)的主要影像学检查方法.但腰椎软骨终板(CEP)组织T2较短,导致信号衰减较快,常规MRI不能对其进行清晰的显示.与常规MRI序列相比,超短回波时间(UTE)序列能够清晰显示短T2组织,因此对IVDD表现出较高的检测能力,可对CEP组织进行定性和定量研究,如评估CEP形态学变化、终板的早期病变和钙化、CEP定量值变化与IVDD的内在联系、人工智能在腰椎UTE MRI中的应用.本文主要对UTE序列在IVDD诊断中的应用研究进展进行综述.

[目的]地衣素(lichenysin)作为一种脂肽类物质,对白酒风味形成有促进作用.为研究地衣素合成酶中硫酯酶模块LchAD蛋白的性质和功能,采用传统分离纯化方法从酿酒大曲样品中,筛选产地衣素的芽孢杆菌菌株.[方法]采用质谱串联的方式检测发酵产物,通过形态学、生理生化实验和构建系统发育树,分析菌株的种属关系.以筛选出的菌株基因组DNA为模板克隆LchAD基因,在大肠杆菌中异源表达LchAD蛋白并用镍柱纯化.利用在线软件对LchAD蛋白进行生物信息学分析,探究LchAD 蛋白的性质和功能.[结果]在大曲中筛选获得的菌株YC7 为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),其发酵产物中含有地衣素A(D或G)的同系物,表明菌株YC7 为地衣素产生菌.LchAD蛋白的可溶性表达研究发现,在温度为 20℃,IPTG终浓度为100 μg/mL条件下可诱导LchAD蛋白异源表达,并形成可溶性蛋白,其分子量约为 27.62 kD.镍柱纯化结果显示,在咪唑浓度为250 mmol/L时,可获得较高纯度的LchAD蛋白.生物信息学分析结果表明,LchAD蛋白为稳定的亲水性蛋白,无信号肽,理论等电点(pI)为 7.23,含有一个GrsT保守结构域.LchAD蛋白的二级结构包含 43.5%的α-螺旋,13.82%的β-折叠,5.69%的β-转角,其三级结构与表面活性素合成酶的硫脂酶模块相似.[结论]筛选得到的地衣芽孢杆菌YC7 菌株可产地衣素,其LchAD基因编码的蛋白为 27.62 kD的亲水性蛋白,异源表达获得可溶性LchAD蛋白,该蛋白可能与合成表面活性素的硫酯酶模块功能相似.