目的:探讨血清雌二醇、耳石蛋白-1(otolin-1)表达水平与绝经后良性阵发性位置性眩晕(BPPV)复发的相关性。方法:选取2018年1月至2019年12月于北京老年医院眩晕治疗中心就诊且确诊为原发性BPPV的绝经后女性患者116例为研究对象，根据随访过程中患者复发情况分为复发组(27例)和未复发组(89例)。比较两组患者基础资料、实验室指标、合并症等，采用电化学发光法检测血清雌二醇水平，采用酶联免疫吸附法检测血清otolin-1水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清雌二醇、otolin-1对绝经后BPPV患者复发的预测价值；利用多因素logistic回归分析影响绝经后BPPV患者复发的危险因素。结果:复发组患者剧烈咳嗽人数所占比例高于非复发组( P<0.05)；复发组雌二醇水平明显低于非复发组( P<0.05)，otolin-1水平明显高于非复发组( P<0.05)；ROC结果显示，血清雌二醇、otolin-1预测绝经后BPPV患者复发的曲线下面积(AUC)分别为0.852(95% CI：0.774~0.911)、0.722(95% CI：0.631~0.801)，截断值分别为18.09 pg/ml、361.79 pg/ml；多因素logistic回归分析结果显示，剧烈咳嗽、雌二醇≤18.09 pg/ml、otolin-1>361.79 pg/ml6是影响绝经后BPPV患者复发的独立危险因素( P<0.05)。 结论:绝经后BPPV复发患者血清雌二醇水平下降，otolin-1水平上升，其水平异常是影响绝经后BPPV患者复发的独立危险因素。

目的:观察大鼠血清雌二醇水平变化是否会影响内耳质膜钙ATP酶异构体2（plasma membrane Ca 2+-ATPase isoform 2，PMCA2）的表达，探讨雌二醇对耳石调节蛋白的影响。 方法:25只三月龄雌性Sprague-Dawley大鼠应用随机数字表法分成5组，每组5只，其中4组行卵巢切除术（ovariectomized，OVX），1组行假手术。造模1月后OVX各组分别补充雌二醇（E2组）、孕酮（P组）、雌二醇和孕酮（E2+P组）、溶剂芝麻油（Veh组），假手术组（Sham组）补充溶剂芝麻油。补充1个月后断头处死各组大鼠，取出双侧听泡。酶联免疫吸附（ELISA）方法检测各组大鼠术前、给药前、处死前血清雌二醇、孕酮水平变化；蛋白印迹杂交（Western Blot）、实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）方法检测各组大鼠内耳总PMCA2蛋白和mRNA的表达水平。采用SPSS 25.0软件进行统计学分析。结果:术前5组大鼠血清雌二醇、孕酮水平差异均无统计学意义（ P值均>0.05）；给药前各OVX手术组大鼠血清雌二醇、孕酮水平均较Sham组显著降低，差异有统计学意义（ P值均<0.05）；处死前E2组、E2+P组大鼠血清雌二醇水平与Sham组相比差异无统计学意义（ P值均>0.05），而P组、Veh组与Sham组相比差异有统计学意义（ P值均<0.05），P组、E2+P组与Sham组相比血清孕酮水平升高（ P值均<0.05），而Veh组、E2组与Sham组相比孕酮水平显著下降（ P值均<0.05）。与Sham组相比，P组、Veh组大鼠听泡总PMCA2蛋白和mRNA相对表达量均明显下降（ P值均<0.05），而E2组 、E2+P组的相对表达量无明显变化，差异无统计学意义（ P值均>0.05）。 结论:血清雌二醇水平下降可引起大鼠耳石调节蛋白PMCA2表达下降，进而影响耳石代谢，这可能是雌激素影响耳石代谢的一个重要环节。

目的:探讨高压氧联合倍他司汀治疗良性阵发性位置性眩晕（BPPV）的临床疗效及其作用机制。方法:选取2021年6月至2022年12月长治医学院附属和平医院神经内科收治的BPPV患者116例作为研究对象，按照随机数字表法分为观察组和对照组，每组58例。对照组均予以常规对症治疗及口服倍他司汀治疗，观察组在对照组治疗的基础上联合高压氧治疗。比较2组患者治疗后临床疗效及不良反应发生情况；分别于治疗前后采用电化学发光法检测2组患者血清雌二醇（E2）水平，采用酶联免疫吸附法检测血清耳石蛋白-1（otolin-1）水平。结果:观察组治疗后临床总有效率（91.38%）明显高于对照组（77.59%），差异有统计学意义（ χ2=4.209， P=0.040）；观察组治疗后血清E2水平明显高于对照组，血清otolin-1水平明显低于对照组（ P<0.05或 P<0.01）；观察组患者治疗后躯体、功能、情感评分明显低于对照组（ P<0.01）；观察组治疗后不良反应总发生率（8.62%）明显低于对照组（27.59%），差异有统计学意义（ χ2=5.098， P=0.024）。 结论:高压氧联合倍他司汀治疗可有效改善BPPV患者的临床症状，提高患者生活质量，其机制可能是通过调节血清E2、otolin-1水平，减轻内耳损伤实现的。

目的:骨质进行性吸收破坏是中耳胆脂瘤最重要的临床特征之一,可导致一系列颅内外并发症,而目前中耳胆脂瘤骨破坏的机制尚未明确.本研究旨在探究甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)参与中耳胆脂瘤骨破坏的机制.方法:收集后天性中耳胆脂瘤患者的25例胆脂瘤标本和13例外耳道正常皮肤组织标本.采用免疫组织化学染色方法检测PTHrP、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)在中耳胆脂瘤和外耳道正常皮肤组织中的表达,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法检测中耳胆脂瘤和外耳道正常皮肤组织中是否存在TRAP阳性多核巨噬细胞.选取小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞进行干预,分为RANKL干预组和PTHrP+RANKL共同干预组,采用TRAP染色法检测2组破骨细胞的生成情况,实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测干预后2组破骨细胞相关基因TRAP、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)和活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T cell cytoplasmic 1,NFATc1)的mRNA表达水平,骨吸收陷窝实验检测2组破骨细胞的骨吸收功能.结果:免疫组织化学染色结果显示,PTHrP和RANKL在中耳胆脂瘤组织中的表达均显著增高,OPG表达降低(均P<0.05),且PTHrP的表达与RANKL、RANKL/OPG比值均呈显著正相关,与OPG表达呈显著负相关(分别r=0.385、r=0.417、r=-0.316,均P<0.05).同时,PTHrP、RANKL的表达水平与中耳胆脂瘤的骨破坏程度均呈显著正相关(分别r=0.413、r=0.505,均P<0.05).TRAP染色结果显示中耳胆脂瘤上皮周围基质中有大量TRAP阳性细胞,并存在细胞核数量为3个或3个以上的TRAP阳性破骨细胞.RANKL或PTHrP+RANKL联合干预5 d后,与RANKL干预组相比,PTHrP+RANKL联合干预组的破骨细胞数量显著增加(P<0.05),且破骨细胞相关基因TRAP、CTSK和NFATc1的mRNA表达水平均升高(均P<0.05).骨吸收陷窝扫描电镜结果显示RANKL干预组、PTHrP+RANKL联合干预组的骨片表面均形成骨吸收陷窝;与RANKL干预组相比,PTHrP+RANKL联合干预组的骨片表面骨吸收陷窝数量显著增加(P<0.05),面积也更大.结论:PTHrP可能通过促进RANKL诱导胆脂瘤组织周围基质中的巨噬细胞分化为破骨细胞,参与中耳胆脂瘤骨破坏.

目的:研究负载曲安奈德(TA)的水凝胶缓释片在兔眼"单步隧道法"新型微创小梁切除术(SIGS)中的抗瘢痕作用及其安全性.方法:选择健康新西兰大耳白兔48只,随机分为四组(每组12只),小梁切除术组(Trab组)、SIGS组、在SIGS术中结膜瓣下植入聚乙烯醇水凝胶(PVAH)薄片(PVAH组)、在SIGS术中结膜瓣下植入负载TA的水凝胶缓释片(TA/PVAH组).分别于术后1、2、3、4 wk观察并记录各组眼压、滤过泡形态、前房反应及其它并发症情况,并处死动物,取右眼术区组织行病理组织石蜡切片,并行Masson染色、苦味酸-天狼星玫瑰红染色及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维细胞生长因子-2(FGF2)免疫组化染色.观察局部组织炎性细胞浸润情况、成纤维细胞增殖及Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维合成情况,计算并比较各组α-SMA、FGF2抗体免疫组化染色的平均阳性面积比.结果:术后2 wk TA/PVAH组均保持了弥散隆起的功能性滤过泡,而Trab组、SIGS组和PVAH组均有术眼出现扁平滤过泡.术后4wk,PVAH组、TA/PVAH组分别有1眼(33％)、2眼(67％)存在功能性滤过泡,其余滤过泡均扁平.Masson染色显示:术后4 wk PVAH组和TA/PVAH组水凝胶均未降解,相对于Trab组和SIGS组,滤过道更为明显,有较少胶原纤维增生.天狼星红染色显示:术后4 wk,与Trab组、SIGS组和PVAH组相比,TA/PVAH组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达更少.免疫组化染色显示:术后1 wk,TA/PVAH组α-SMA表达较Trab组和SIGS组均明显降低(P＜0.01);术后2 wk Trab组和SIGS组α-SMA表达最高,而PHAP组和TA/PVAH组结膜组织中α-SMA表达较前两组均显著降低(P＜0.01).与Trab组相比,PVAH 组、TA/PVAH 组术后 1、2、3、4 wk FGF2 表达均明显升高(P＜0.05);与SIGS组相比,TA/PVAH组术后4 wk FGF2表达明显升高(P＜0.05).结论:兔眼SIGS术中联合结膜瓣下填充负载TA的水凝胶缓释片能有效抑制手术区滤过道瘢痕化,可能是TA抗瘢痕作用与水凝胶支架作用的共同结果.

TECTB基因编码的β-盖膜蛋白(β-tectorin)在人类听觉功能中具有重要的调控作用,是内耳器官中覆盖膜的重要组成成分,在声音转导为神经信号的过程中发挥着关键作用.β-tectorin突变会导致人类非综合征性耳聋的发生,而目前关于听觉障碍发生的分子机制仍然有待研究.斑马鱼(Danio rerio)是一种常用的试验动物模型,能够对内耳发育和相关疾病的研究提供重要的价值.为了研究tectb基因在斑马鱼内耳发育中的作用,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,成功构建tectb内耳基因缺失型斑马鱼模型,并对tectb基因缺失的斑马鱼表型进行初步分析.首先,在tectb基因的第三号外显子上设计靶位点以及基因型检测引物,经体外扩增得到向导DNA(sgDNA),再对其进行体外转录,得到向导RNA(sgRNA);然后,将sgRNA与Cas9酶通过显微注射的方式注射到野生型斑马鱼胚胎中,经基因型鉴定筛选出携带突变的嵌合体F0代鱼,培养至性成熟后与野生型斑马鱼杂交得到F1代突变体杂合子;在遗传稳定性鉴定及基因序列测序之后,保留突变类型为移码突变的F1代鱼,培养至成年后,经过自交得到F2代tectb突变体纯合子;最后,通过体式显微镜初步观察及毛细胞染色试验,发现突变体斑马鱼内耳组织结构正常,耳石形态和大小没有明显差异,毛细胞的发育也没有明显缺陷,但是体内器官与组织的发育是否发生变化,需要进行深入研究.这项研究为深入了解内耳发育的分子机制和耳聋等人类疾病提供了有价值的研究模型,借助tectb基因敲除斑马鱼模型,我们可以探究该基因在疾病发生中的具体作用,更好地研究内耳发育中的关键途径,有利于进一步深入研究听力的调控机制.

目的 探讨炎性细胞、CXC趋化因子配体 10(CXC chemokine ligand 10,CXCL10)及干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)在上颌窦后鼻孔息肉(antrochoanal polyp,ACP)中的表达及意义.方法 收集 2015 年 10 月至 2020 年 7 月于河北北方学院附属第一医院耳鼻咽喉科就诊的58 例患者,其中40 例ACP患者、18 例上颌窦囊肿患者;分别收集手术样本和术前血清;对手术切除标本进行石蜡包埋、HE染色,计数各类炎性细胞的数量与百分比,对ACP患者上皮增生情况进行综合评分.免疫组织化学染色观察CXCL10 和IFN-γ在实验组和对照组的表达及差异情况;酶联免疫吸附实验检测两组血清CXCL10 的蛋白浓度,并分析蛋白浓度与两组外周血炎细胞间的相关程度.结果 HE染色显示ACP组织上皮重构,呈异质性,并有炎细胞浸润,以中性粒细胞、淋巴细胞以及浆细胞为主.血常规炎细胞分析显示中性粒细胞与淋巴细胞呈正相关.免疫组化显示ACP组CX-CL10和IFN-γ阳性表达强于对照组.ELISA测定ACP组CXCL10浓度为(32.15±4.60)pg/mL,对照组为(12.11±3.54)pg/mL(P＜0.05).结论 CXCL10 及IFN-γ在ACP组中的表达含量明显上调,推测与非Ⅱ型炎症(尤其与Th1 炎症因子)有关.

目的 观察耳穴揿针联合栀黄散穴位贴敷对胆石症患者的应用效果.方法 将120例患者随机分为A组:耳穴揿针组(40例),B组:穴位贴敷组(40例),C组:联合治疗组(40例).A组患者在常规西医治疗的基础上加用耳穴揿针治疗,按压4～6次/d,1～3 min/次,5 d 1个疗程,双耳交替操作.B组患者在常规西医治疗的基础上加用栀黄散穴位贴敷,贴敷于双侧胆俞穴、双侧肝俞穴、右侧期门穴、双侧阳陵泉穴,贴敷时间为4～6 h,2次/d,5 d 1个疗程.C组患者在常规西医治疗的基础上联合使用耳穴揿针和栀黄散穴位贴敷治疗.通过疼痛数值评分量表(NRS)比较3组患者治疗后0.5、1、2、24、48 h疼痛评分;治疗前后3组患者C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、胆红素、肝功能(ALT)变化情况;通过B超检查治疗前后胆囊收缩功能、胆囊壁厚度.结果 干预后3组患者疼痛评分时间效应值、CRP、胆红素、ALT数值、胆囊壁厚度均低于干预前,胆囊收缩功能较干预前增加,差异具有统计学意义(P＜0.05),A组、B组两组患者干预后疼痛评分时间效应值、CRP、胆红素、ALT数值、胆囊壁厚度、胆囊收缩功能比较,差异无统计学意义(P＞0.05).C组患者干预后疼痛评分时间效应值、CRP、胆红素、ALT数值、胆囊壁厚度均低于A、B两组,胆囊收缩功能高于A、B两组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 耳穴揿针和栀黄散穴位贴敷应用于胆石症患者,均可减轻患者的疼痛反应,降低炎症作用,促进肝功能恢复,增强胆囊收缩功能.将两者联合应用,临床疗效更加显著,能够加速患者康复,值得临床推广.

对在贵州采集的野生中国皱木耳"黔皱耳 1 号"菌株进行ITS测序、构建系统发育树,探究其生物学特性及品质.自测序列与中国皱木耳 Auricularia sinodelicata 聚到同一分支,支持率为90%;中国皱木耳"黔皱耳 1 号"菌株适宜温度 22-25℃,碳源为果糖,氮源为酵母粉,碳氮比20:4,无机盐为硫酸镁;单因素正交试验得到培养基最佳组合为红糖、酵母粉和硫酸镁.菌袋栽培料配方为阔叶林杂木屑 78%、麦麸 15%、米糠 5%、石膏粉 0.5%、石灰 0.5%、葡萄糖 1%,驯化栽培子实体生长周期收需(52±5)d,单棒产量为(300±95)g/FW;耳片肥厚,长(107.750±12.697)mm,宽(75.96±14.87)mm,厚(13.37±3.49)mm,复水比高达8.74±0.28;耳片粗蛋白含量为8.95 g/100 g,总糖 64.9%,粗纤维 10.3%,粗脂肪 1.5 g/100 g;耳片总氨基酸含量为 9.800 4 g/100 g,药效氨基酸(5.45 g/100 g)占 55.61%;鲜味氨基酸(2.64 g/100 g)占 26.94%;化学评分和氨基酸评分分别为 26.00和 40.86.本研究将为贵州野生中国皱木耳驯化及配套栽培技术的应用提供科学依据.

目的 基于真实世界数据挖掘缺血性中风病(ischemic stroke,IS)一般特征,探索关联核心症状群、中药与通路分析,并借助网络生物学方法验证分子机制.方法 收集并提取2016 年 1 月至 2018 年 12 月在山东省潍坊市中医院住院的IS患者病历资料,应用临床表型网络构建症状群模块;结合中医传统理论,确定优选模块及其核心症状群与中药;应用DAVID数据库进行KEGG富集分析,并以Jaccard 系数计算相似性,获得临床优选模块症状-中药共同通路,以备网络生物学验证.采用 HERB、SymMap、TCMID、TCMSP和TCM-ID等数据库获取优选模块核心中药靶点,从GeneCards、OMIM、TTD、DsiGeNET、SymMap、DrugBank和HERB等数据库中筛选症状群靶点.经Cytoscape中BisoGenet插件构建优选模块核心中药与症状群的PPI网络并筛选核心基因,应用MCODE富集分析潜在模块.采用Metascape对核心基因进行GO和KEGG富集分析,构建特异性通路网络以筛选关键靶点,并验证共同通路.结果 真实世界数据获得包含 362 种症状和 351 种中药的 7170 例病历,症状群模块 34 个,确定优选模块M3,症状5 个(头晕、头痛、视物旋转、头胀、耳鸣)与中药10 味(天麻、石决明、钩藤、首乌藤、炒栀子、黄芩、槲寄生、杜仲、益母草和茯神),KEGG通路 94 条.网络生物学共获取中药靶点361 个,症状群靶点 40 个,症状-中药核心靶点 238 个,GO功能 2402 个和KEGG通路182 条.验证共同通路 82 条,涉及丝裂原活化蛋白激酶 3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)、MAPK1、RAF原癌基因丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶(RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase,RAF1)、RAC-α-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAC-alpha serine/threonine-protein kinase,AKT1)、磷酸肌醇 3 激酶调控亚基 1(phosphoinositide-3-kinase,regulatory subunit 1,PIK3R1)等核心靶点,通路富集PI3K/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、MAPK、Neurotrophin与神经突触传导通路等.结论真实世界数据发现肝阳上亢证是IS的核心病机,临床用药以天麻钩藤饮加减为主;网络生物学推测该中药组合在分子水平上通过多靶点与多通路的交互而发挥作用,为后续临床转化与基础实验指明了研究方向.