目的:探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）分泌的外泌体对损伤后肌腱细胞修复的影响及其机制。方法:组织块贴壁法分离并纯化筛选出能稳定传代培养的hUC-MSCs，倒置荧光显微镜观察细胞形态，通过流式细胞术检测hUC-MSCs的免疫表型。应用诱导培养基诱导hUC-MSCs向成骨细胞、成软骨细胞和脂肪细胞分化并进行鉴定。运用高速离心法提取MSCs的分泌物外泌体（MSCs外泌体），用Western blot技术和电镜检测外泌体，用PKH67染色荧光法检测外泌体膜融合能力。40只Wistar鼠按随机数字表法分为肌腱损伤组和正常组，每组20只。肌腱损伤组：切断跟腱1周后用100 mg/kg戊巴比妥钠处死，取跟腱组织用胰蛋白酶消化得到损伤肌腱细胞。正常组：不做任何处理直接处死，与损伤组并行处理得到正常肌腱细胞。将外泌体与体外培养的肌腱细胞共培养，12，24，48，72 h后通过细胞计数CCK-8检测肌腱细胞增殖情况。hUC-MSCs外泌体处理细胞24 h后，采用Western blot、qPCR、免疫荧光方法检测外泌体对肌腱细胞转化生长因子-β（TGF-β）、骨形态发生蛋白（BMP）、血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）和炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。结果:鉴定了hUC-MSCs，并成功分离hUC-MSCs外泌体。分离培养的MSCs呈梭形，丙氨酸氨肽酶（CD13）、整联蛋白β-1（CD29）、ecto-5'-核苷酸酶（CD73）、胸腺细胞表面抗原（CD90）和内皮素（CD105）呈阳性，人类白细胞DR抗原（HLA-DR）、造血祖细胞抗原（CD34）、白细胞共同抗原（CD45）呈阴性。分离出的外泌体经PKH67染色鉴定证实，在电镜下呈直径30~100 nm的圆盘、内部凹陷结构，Western blot检测高表达移动相关蛋白-1（CD9）和溶酶体相关膜蛋白3（CD63）。处理肌腱细胞后，CCK-8检测12，24，48，72 h细胞活性，结果表明肌腱损伤组显著高于正常组（ P < 0.01），qPCR结果表明肌腱损伤组TGF-β（1.850 ± 0.127）、BMP（2.133 ± 0.398）、FGF（1.610 ± 0.223）、VEGF（2.207 ± 0.059）的mRNA表达显著高于正常组TGF-β（1.004 ± 0.105）、BMP（1.007 ± 0.145）、FGF（1.007 ± 0.140）、VEGF（1.001 ± 0.065）（ P < 0.05），而肌腱损伤组IL-1β（0.102 ± 0.009）、TNF-α（0.130 ± 0.013）的表达显著低于正常组IL-1β（1.004 ± 0.113）、TNF-α（1.006 ± 0.134）（ P < 0.01）。Western blot检测结果与qPCR检测趋势一致。 结论:hUC-MSCs分泌的外泌体通过上调生长因子TGF-β、BMP、VEGF、FGF的表达，抑制炎性因子IL-1β、TNF-α的表达，促进肌腱细胞生长，促进肌腱细胞损伤修复。

生肌调节因子是肌细胞发生过程中的重要因子，不仅在肌肉的发育、发生中发挥着作用，在指导肌卫星细胞特化、骨骼肌再生中也起着重要的作用。尽管研究者们对这些因子进行了大量的研究，但是它们的功能存在重叠，确切作用机制仍不清楚。本文以生肌调节因子的分子结构为基础，对其在肌肉发育发生、控制卫星细胞功能和再生中的作用进行综述，以期为肌肉骨骼疾病的治疗提供新的思路。

目的 探讨山柰酚对TNF-α/INF-γ诱导C2C12 细胞炎症及成肌分化的作用.方法 采用生长培养基培养C2C12成肌细胞,用山柰酚(10、20、30、40、50、60 μmol/L)处理 24 h,CCK8 法检测细胞活力.10 ng/mL TNF-α和 10 ng/mL IFN-γ与山柰酚(30、50 μmol/L)共处理C2C12 细胞 24 h,RT-qPCR法检测炎性因子mRNA表达.采用分化培养基诱导C2C12 细胞肌分化,在分化第 5 天,加入TNF-α/INF-γ与山柰酚共处理细胞 24 h,RT-qPCR法检测生肌调节因子(MRFs)mRNA表达,免疫荧光观察肌管细胞形态,Western blot法检测PI3K/Akt和MAPKs相关功能蛋白表达.结果 与刺激组比较,山柰酚组成肌细胞促炎因子(IL-1β、IL-6),α 趋化因子(CCL2～5)、β 趋化因子(CCL9～11)mRNA表达降低(P＜0.05,P＜0.01);肌管细胞形态萎缩得到改善,Myogenin、Myf6 mRNA表达和 p-PI3K、p-ERK1/2 蛋白表达升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 山柰酚通过降低促炎因子和α、β趋化因子mRNA表达抑制TNF-α/INF-γ诱导C2C12 细胞炎症进程;山柰酚促进肌源性分化,其机制可能与上调PI3K和ERK1/2 有关.

[目的]观察针刺联合康复训练治疗气虚血瘀型高血压脑出血恢复期的临床疗效.[方法]将132例气虚血瘀型高血压脑出血恢复期患者随机分为观察组和对照组,每组各66例,对照组给予西医常规治疗联合康复训练,观察组在对照组治疗的基础上联合针刺治疗.2组患者均连续治疗12周.治疗12周后,评价2组临床疗效.观察2组患者治疗前后简化Fugl-Meyer运动功能评定量表(FMA)、美国国立卫生院神经功能缺损量表(NIHSS)评分和中医证候积分的变化情况,以及血清白细胞介素6(IL-6)、同型半胱氨酸(Hcy)、内皮素1(ET-1)、血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)、脑源性神经营养因子(BDNF)水平的情况.比较2组患者治疗前后血清丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、Bcl-2相关X蛋白(bax)水平的变化情况.[结果](1)治疗后,2组患者血清IL-6、Hcy、ET-1水平均明显改善(P＜0.05),且观察组在改善血清IL-6、Hcy、ET-1水平方面明显优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)治疗后,2组患者血清MMP-9、BDNF水平均明显改善(P＜0.05),且观察组在改善血清MMP-9、BDNF水平方面明显优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)治疗后,2组患者血清AKT、PI3K、bax水平明显改善(P＜0.05),且观察组在改善血清AKT、PI3K、bax水平方面明显优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(4)治疗后,2组患者的FMA评分、中医证候积分、NIHSS评分均明显改善(P＜0.05),且观察组在改善FMA评分、中医证候积分、NIHSS评分方面明显优于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).(5)观察组总有效率为93.34%(62/66),对照组为81.82%(54/66).观察组疗效优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]针刺联合康复训练治疗气虚血瘀型高血压脑出血恢复期患者,能明显减轻患者的炎症反应,调节神经因子水平,抑制神经细胞凋亡,促进神经功能恢复,临床疗效显著.

背景:间充质干细胞与巨噬细胞共培养环境中,间充质干细胞能够促进巨噬细胞向抗炎型巨噬细胞极化减轻炎症反应,巨噬细胞能够促进间充质干细胞成骨分化,两者共培养在调节免疫系统和促进组织再生中发挥重要的作用.目的:综述间充质干细胞与巨噬细胞共培养方法、影响因素及相互调控的可能机制,为间充质干细胞和巨噬细胞共培养在组织工程中的应用提供理论依据以及实验方法参考.方法:第一作者在2023年1-9月应用计算机在PubMed和中国知网数据库中检索1970年1月至2023年9月相关文献,以"mesenchymal stem cells,macrophages,co-culture"为英文检索词,以"间充质干细胞,巨噬细胞,共培养"为中文检索词,最终纳入63篇文献进行分析.结果与结论:①体外间充质干细胞与巨噬细胞共培养体系根据模型可分为直接接触和间接接触共培养,根据维度可分为二维和三维细胞共培养.②间充质干细胞与巨噬细胞共培养能够促进巨噬细胞向M2型极化,增强间充质干细胞的成骨作用.③在共培养模型中,共培养方法、共培养比例与时间、巨噬细胞的表型及细胞来源和条件的不同均影响巨噬细胞的免疫调节和间充质干细胞的成骨作用.④共培养中细胞相互作用可能通过细胞分泌的可溶性因子、细胞外囊泡、细胞-细胞接触和代谢途径调节巨噬细胞的免疫功能,对间充质干细胞的增殖、迁移和成骨等生物学功能产生一定影响.⑤间充质干细胞和巨噬细胞能改善急性心肌梗死后的心功能、促进上皮创面愈合、减轻肺部炎症、改善肾功能和促进骨修复.⑥间充质干细胞和巨噬细胞共培养仍存在一些问题:例如共培养的条件选择、共培养细胞良好细胞状态的保持和相互作用等.⑦间充质干细胞与巨噬细胞共培养改善局部炎症微环境,促进组织再生修复,在组织工程中具有广阔的应用前景.

[目的]探究丹参-川芎-红花(丹川红,DCH)及主要吸收成分阿魏酸(FA)对颅脑损伤(TBI)模型大鼠抑郁-心脏损伤的治疗作用及多病发生机制研究.[方法]SD大鼠TBI造模,造模苏醒后给药,24 h后取材.分为空白(Sham)组,模型(Vehicle)组,FA(2 mg/kg)组、DCH(10 g/kg)组.用高尔基染色法检测海马神经元的树突棘密度和树突长度,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测海马、心脏及血清中即刻早期基因(c-Fos)和胃饥饿素(Ghrelin)、心脏内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、血清五羟色胺(5-HT)和炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马、心脏的脑源性神经营养因子(BDNF),心脏损伤指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌凋亡指标半胺氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3).[结果]TBI后大鼠海马神经元树突棘密度和长度均下降,治疗后有所恢复;血清炎性因子应激后明显上升,治疗后下降;5-HT应激后显著下降,治疗后上升.应激后显著下降的心脏eNOS水平治疗后升高,显著上升的心脏损伤指标CK-MB和Caspase3水平治疗后下降.c-Fos、Ghrelin在大鼠血清、海马、心脏中具有一致性的表达特征,前者在应激后表达量增高,给药后下降;后者在应激后表达量下降,给药后上升.BDNF在心脑中表现为应激后下降,给药后上升.[结论]TBI后大鼠具有抑郁-心脏损伤的多病表现,DCH和FA均发挥抗抑郁-心脏保护的作用,可能通过调节Ghrelin-BDNF/c-Fos这一共享途径对TBI后抑郁-心脏损伤共病发挥治疗作用.

探讨丹参酮 ⅡA(tanshinone ⅡA,TaⅡA)协同内皮祖细胞来源外泌体(endothelial progenitor cell-derived exosomes,EPCs-exos)通过磷酸肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路对胸主动脉血管内皮细胞(aortic vascular endothelial cells,AVECs)氧化损伤的保护作用的分子机制.将1-棕榈酰基-2-(5'-氧-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱[1-palmitoyl-2-(5'-oxovaleroyl)-sn-glycero-3-phosphocholine,POVPC]诱导的 AVECs 随机分为模型组、TaⅡA 组、EPCs-exos组和TaⅡA+EPCs-exos组,另取正常细胞作为对照组,细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测LDH漏出率,Matrigel实验检测成管能力,DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(activated oxygen,ROS)水平,激光共聚焦显微镜检测内皮细胞骨架形态,ELISA检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α等炎性因子表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印记(Western blot)法检测PI3K和Akt的mRNA及磷酸化水平表达情况.结果显示,与对照组比较,模型组中细胞增殖及成管能力下降,LDH漏出率及ROS水平上升,细胞骨架破坏明显,IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子表达增加,PI3K和Akt mRNA及磷酸化水平下降;与模型组比较,单用TaⅡA或EPCs-exos干预后,2组细胞增殖及成管能力上升,LDH漏出率及ROS水平下降,骨架破坏得到修复,IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子水平下降,PI3K和Akt mRNA及磷酸化水平上升;与单用TaⅡA或EPCs-exos组比较,TaⅡA+EPCs-exos组细胞增殖及成管能力进一步上升,LDH漏出率、ROS水平、IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子表达都进一步下降,细胞骨架得到更好的修复,PI3K和Akt mRNA及磷酸化水平显著上升.研究表明,TaⅡA和EPCs-exos均能对POVPC诱导的AVECs产生保护作用,其机制与激活PI3K/Akt通路相关,而将两者联合应用,可以对治疗效果起协同增效作用.

目的:观察电针“内关”预处理对心肌缺血再灌注大鼠氧化应激及线粒体功能的影响.并从p38MAPK信号通路的角度分析其作用机制.方法:将50只大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、电针预处理组、抑制荆预处理组和电针+抑制剂预处理组.进行相应组电针内关穴,治疗结束后,测定大鼠心肌ROS、ICAM-1、VCAM-1、ATP和RCR的含量.结果:与S组比较,M组、EA组、SB组及EA+ SB组大鼠心肌细胞ICAM-1、VCAM-1蛋白表达含量明显下降,RCR及ATP含量明显下降(P＜0.05),SB组、EA组及EA+ SB组ATP含量及ICAM-1、VCAM-1与M组比较,均有显著性差异(P＜0.05),其中EA组各项指标优于EA+ SB组及SB组(P＜0.05).结论:I/R中炎症反应增强,电针内关预处理可以抑制大鼠I/R模型中心肌细胞黏附分子ICAM-1I/R和VCAM-1的蛋白表达,能激活内源性的抗炎因子,发挥保护受损心肌细胞的效应,并有效缓解钙超载,减轻胞内Ca2负荷.

非人源性唾液酸N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolylneuraminic acid,Neu5Gc)是红肉中潜在的致癌性因子.唾液酸转移酶是涉及转运其前体物质的关键酶之一.大鼠用不同浓度的山奈酚(kaempferol,KA)和槲皮素(quercetin,Qu)灌胃,并模拟宰前对Neu5Gc合成影响的结果表明,不同浓度的KA、Qu对大鼠体内肌肉组织、肝和肾中Neu5Gc的含量均有一定的影响,最大抑制率分别为36.44％±0.11％和33.37％±0.08％.为探究其抑制机制,采用唾液酸转移酶(sialyltransferase,ST)与KA、Qu进行分子对接和分子动力学模拟分析.分子对接复合物二维相互作用图表明:KA和Qu能有效占据ST特异性抑制剂5'-胞苷单磷酸的活性位点氨基酸残基;对最佳复合物进行200ns的动力学模拟结果显示,ST和KA产生稳定氢键作用的氨基酸残基主要是His301和Gly298,与Qu产生氢键作用的氨基酸残基主要是Gly293、Glu324、Thr272和Ser276.结合自由能分析表明,范德华力、静电吸引作用对抑制过程具有重要作用.本研究为合成和筛选高效ST抑制剂提供了一定实验依据.

原发性骨质疏松症是严重威胁当代老年人健康及生活质量的疾病之一,治疗刻不容缓.骨骼肌不仅在解剖位置上与骨骼紧密相连,更是一种内分泌器官,可通过机械和非机械两种因素影响骨的代谢平衡.根据中医“骨肉不相亲”理论,从近5年的实验及临床研究入手,探讨补肾健脾法改善肌肉质量、促进肌源性细胞因子表达,致以影响骨组织的代谢,进而治疗原发性骨质疏松症的机制,并进行深入阐述,以期为治疗原发性骨质疏松症提供全新视角.