目的:探讨促肾上腺皮质激素释放因子2型受体（CRFR2）对慢性偏头痛小鼠痛觉敏化及焦虑的调控作用及潜在机制。方法:将48只C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、NBI35965组、K41498组，每组12只。后3组小鼠于第1、3、5、7、9天腹腔注射10 mg/kg硝酸甘油建立慢性偏头痛模型，NBI35965组及K41498组小鼠于第2、4、6、8天双侧三叉神经脊束尾核分别注射100 nL NBI35965、K41498溶液，对照组小鼠注射同体积生理盐水。第1、3、5、7、9天腹腔注射2 h后及第10天上午11时采用Von frey纤维丝检测小鼠眶额部机械痛阈值。于第11天上午11时采用高架十字迷宫实验检测小鼠的焦虑样行为。采用Western blotting实验检测小鼠三叉神经脊束尾核中促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）、促肾上腺皮质激素释放因子1型受体（CRFR1）、CRFR2蛋白的表达。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测小鼠三叉神经脊束尾核中 CRFR1及 CRFR2 mRNA的表达。采用免疫荧光染色检测小鼠三叉神经脊束尾核中降钙素基因相关肽（CGRP）、即刻早期基因（c-fos）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及离子钙结合适配器分子1（Iba-1）蛋白的表达。 结果:（1）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠第3、5、7、9、10天的眶额部机械痛阈值较低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠第7、9、10天的眶额部机械痛阈值较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（2）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠的开臂进入次数较少，开臂停留时间较短，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠的开臂进入次数较多，开臂停留时间较长，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（3）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CRF和CRFR2蛋白的表达较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CRF蛋白的表达较低，差异有统计学意义（ P<0.05）。（4）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中 CRFR2 mRNA的表达较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（5）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CGRP、c-fos、Iba-1、GFAP蛋白的表达均较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CGRP及c-fos蛋白的表达较低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:CRFR2通过调控三叉神经脊束尾核的神经元活化及CGRP释放而影响慢性偏头痛小鼠眶额部痛觉敏化及焦虑样行为的发生发展。

目的:探讨重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation，rTMS)对卒中后睡眠剥夺模型大鼠学习记忆及海马区突触可塑性蛋白表达的影响。方法:28只SPF级8周龄健康雄性Wistar大鼠，按照随机数字表法分为对照组、假手术组、模型组和rTMS组，每组7只。模型组和rTMS组大鼠采用大脑中动脉栓塞＋对氯苯丙氨酸腹腔注射法建立卒中后睡眠剥夺模型，rTMS组大鼠在建模后连续14 d进行rTMS干预；假手术组大鼠仅分离动脉但不结扎、不插线；对照组大鼠正常饲养。采用旷场实验观察大鼠自主行为，水迷宫实验观察其空间学习记忆能力，Western blot法检测海马组织酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor type B，TrkB)含量，免疫荧光法检测海马组织脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)、即刻早期基因c-fos表达情况，光学显微镜及透射电镜观察海马区神经元形态及结构。采用SPSS 21.0软件进行统计分析，逃避潜伏期数据采用重复测量方差分析，其他数据多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验。结果:(1)旷场实验结果表明，干预后4组大鼠穿越方格数、直立次数和总得分均差异有统计学意义( F＝27.638，10.425，30.690，均 P<0.001)。rTMS组大鼠穿越方格数[(72.71±10.10)个]、直立次数[(6.57±0.87)次]、总得分[(79.29±10.03)分]均高于模型组[(43.71±6.96)个，(3.43±0.65)次，(47.14±6.82)分](均 P<0.05)。水迷宫实验结果表明，rTMS干预后，4组大鼠逃避潜伏期比较，交互作用不显著( F＝1.108， P＝0.37)，时间主效应( F时间＝27.295， P时间<0.01)和组别主效应( F组别＝8.691， P组别<0.01)均显著，在第3天和第4天，rTMS组大鼠逃避潜伏期均低于模型组(均 P<0.01)。干预后，4组大鼠穿越平台次数、目标象限游泳距离及停留时间均差异有统计学意义( F＝8.569，3.308，3.547，均 P<0.05)，rTMS组大鼠的穿越平台次数[(2.00±0.31)次]、目标象限游泳距离[(196.95±24.57)cm]及停留时间[(17.72±1.36)s]均高于模型组[(1.57±0.30)次，(146.61±4.79)cm，(13.58±0.98)s](均 P<0.05)。(2)光学显微镜和透射电镜下均显示，与正常对照组比较，模型组大鼠海马区细胞排列紊乱、细胞器完整性被破坏，经rTMS干预后，rTMS组大鼠海马区神经细胞排列及结构均有所改善。(3)免疫荧光结果显示，rTMS组大鼠海马区的c-fos(1.49±0.09)、BDNF(0.84＋0.06)均高于模型组[(1.24±0.12)，(0.48±0.08)，均 P<0.05]。Western blot结果显示，rTMS组大鼠海马组织TrkB(1.81±0.03)表达水平高于模型组(0.96±0.02)( P<0.05)。 结论:rTMS能改善卒中后睡眠剥夺大鼠的学习记忆能力和自主行为能力，可能与促进海马区c-fos、BDNF、TrkB表达有关。

目的:探讨心率校正后的QT离散度(QTcd)及可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)与急性一氧化碳中毒性心脏病患者病情严重程度与预后的关系。方法:回顾性分析2017年1月至2020年3月入住本院急救医学部的急性一氧化碳中毒性心脏病患者135例，记录入院即刻、3 h、12 h、2 d、3 d血sST2、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌钙蛋白I(cTnI)浓度；由专人测量并计算患者入院当天、2 d、3 d及出院时QTcd；根据一氧化碳中毒性心脏病严重程度分为轻度心脏病组(58例)、中度心脏病组(45例)、重度心脏病组(32例)，按照是否发生重度心脏病分为重度组(32例)和非重度组(103例)，在重度心脏病患者中根据患者是否死亡分为死亡组和存活组。两组间比较采用 t检验，相关性分析采用Spearman相关法分析，并绘制受试者工作特征曲线(ROC)，分析sST2、QTcd对重度急性一氧化碳中毒性心脏病早期的预测价值及相关性。 结果:135例患者中有32例为重度中毒性心脏病，发生率为23.7%。重度组sST2自入院时开始升高，cTnI自24 h开始升高，CK-MB自2 d开始升高，检测值均高于非重度组及健康对照组，差异有统计学意义( P<0.05)。治疗前各中毒组患者sST2、QTcd与非重度组、健康对照组比较，差异有统计学意义( P<0.05)。中毒后2 d、3 d不同程度中毒组之间各指标比较，差异有统计学意义( P<0.05)。ROC曲线分析显示，sST2曲线下面积为0.726，95% CI为0.555~0.898，敏感度56.3%，特异度94.1%，截断值为88.5 ng/mL；QTcd曲线下面积为0.745，95% CI为0.602~0.889，敏感度56.3%，特异度82.4%，截断值为68.5 ms；两者联合检测曲线下面积为0.939，95% CI为0.874~1.000，敏感度81.3%，特异度91.2%。 结论:急性一氧化碳中毒性心脏病患者sST2水平升高时间早于cTnI、CK-MB，sST2与QTcd两者联合观测可作为早期预测急性一氧化碳中毒性心脏病及其严重程度的指标。

目的:探讨白细胞介素-6（IL-6）受体拮抗剂托珠单抗（TCZ）对Sprague-Dawley大鼠心肌梗死（MI）后室性心律失常的改善作用及潜在机制。方法:选取成年雄性Sprague-Dawley大鼠32只，按照随机数表法分为4组：假手术组、TCZ组、MI组和MI+TCZ组，每组8只。MI组和MI+TCZ组大鼠通过结扎冠状动脉左前降支建立MI模型，假手术组和TCZ组大鼠仅穿线不结扎。TCZ组和MI+TCZ组大鼠于建模成功或假手术后在左侧颈上神经节注射TCZ，假手术组和MI组给予等量生理盐水注射。建模后24 h，记录各组大鼠心电图，计算心率变异性（包括低频功率、高频功率、低频功率/高频功率比值）和QT间期、QTc间期，并测量左心室有效不应期和室性心律失常诱发数。通过2，3，5-氯代三苯基四氮唑染色和HE染色观察各组大鼠心肌梗死面积及组织改变。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测大鼠颈上神经节中IL-6、信号转导子和转录激活子（STAT）3的信使RNA（mRNA）及MI周边区组织钾电压门控通道亚家族D成员2（potassium voltage-gated channel subfamily D member 2，Kcnd2）的mRNA表达水平。采用免疫荧光染色检测大鼠颈上神经节的即刻早期基因的表达。结果:与假手术组和MI+TCZ组大鼠相比，MI组大鼠低频功率和低频功率/高频功率比值较高、QT间期与QTc间期较长、室性心律失常诱发数较多，而高频功率较低、左心室有效不应期较短（ P均<0.05）。2，3，5-氯代三苯基四氮唑染色和HE染色显示，假手术组和TCZ组大鼠心肌组织结构正常，MI组大鼠心肌损伤严重，MI+TCZ组与MI组相比心肌损伤较轻。实时荧光定量聚合酶链反应显示，与假手术组和MI+TCZ组相比，MI组大鼠颈上神经节中 IL-6、STAT3的mRNA表达水平较高，心肌Kcnd2的mRNA表达水平较低（ P均<0.05）。免疫荧光染色显示，MI组大鼠颈上神经节中即刻早期基因含量比假手术组和MI+TCZ组大鼠高（ P均<0.05）。 结论:IL-6受体拮抗剂可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路降低MI后颈上神经节的神经活性，减轻心肌损伤，抑制室性心律失常发生。

目的 通过机械、温度伤害感受变化评价早期推拿镇痛启动后,慢性压迫性神经损伤(minor CCI)模型大鼠24 h内疼痛变化情况及疗效最优时间点,为推拿镇痛启动疗效提供支撑.方法 将49只SD大鼠随机分为7组,即假手术组、模型组、推拿后即刻组、推拿后6 h组、推拿后12h组、推拿后18 h组与推拿后24 h组.模型组和推拿各亚组建立minor CCI模型.推拿各亚组在造模后7 d进行1次三法三穴干预;模型组与假手术组进行抓握束缚.干预结束后对推拿各亚组、模型组及假手术组先后进行冷敏阈值(CST)、机械缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(TWL)测试不同性质痛觉的变化;取血清进行ELISA测试白介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化;取造模侧背根神经节(DRG)进行qPCR检测;观察TNF-α、TRPV1和TRPA1基因表达的变化.结果 行为学检测显示CST、PWMT、TWL均有不同程度的降低或延长;ELISA检测大鼠血清IL-10、TNF-α显示明显降低;qPCR检测显示TNF-α、TRPV1、TRPA1基因表达均减少,但三种检测方法结果显示指标变化显著时间点均不相同.结论 对于CST、PWMT、TWL三种不同伤害性感受阈值,推拿干预后24h内的镇痛疗效显著时间点不同;推拿可通过降低IL-10、TNF-α、TRPV1和TRPA1的表达发挥即刻镇痛和持续镇痛作用.

目的:探讨电针"四白"和"颧髎"对小鼠躯体感觉皮层和初级运动皮层神经元的激活状态及其分型的影响.方法:雄性 C57BL/6J小鼠随机分为空白组和电针组,每组6只.电针组电针"四白"和"颧髎",干预 30 min.采用免疫荧光染色法观察躯体感觉皮层和初级运动皮层即刻早期基因c-Fos的阳性细胞密度,以及c-Fos阳性细胞和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)/γ-氨基丁酸(GABA)共表达细胞的百分比,分析电针后躯体感觉皮层和初级运动皮层c-Fos神经元的类型.另取10只小鼠,采用光纤钙成像技术分别观察电针前后躯体感觉皮层和初级运动皮层兴奋性神经元钙活动的变化.结果:在躯体感觉皮层和初级运动皮层中,电针组的c-Fos阳性细胞密度显著高于空白组(P<0.05).在躯体感觉皮层和初级运动皮层中,电针组c-Fos和CaMKⅡ共表达细胞百分比显著高于空白组(P<0.01).光纤记录钙成像结果显示,与电针前相比,电针期间躯体感觉皮层和初级运动皮层兴奋性神经元的自发钙活动显著上升(P<0.01);电针后,其自发钙活动较电针期间显著降低(P<0.05).结论:在生理状态下,针刺"四白"和"颧髎"能够有效激活躯体感觉皮层和初级运动皮层的兴奋性神经元.

目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/瞬时受体电位A1通道(TRPA1)通路探究川芎-天麻药对治疗偏头痛的可能作用机制.方法 48只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、川芎-天麻药对组,每组16只.对照组和模型组给予10 ml/kg生理盐水灌胃,川芎-天麻药对组给予0.675 g/kg川芎-天麻灌胃,均每天1次,连续8天.末次给药前造模,对照组皮下注射生理盐水10ml/kg,模型组和川芎-天麻药对组皮下注射硝酸甘油10 ml/kg制备偏头痛模型大鼠.运用Von Frey纤毛测定大鼠眶周机械痛阈值;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠血清、脑脊液中降钙素基因相关肽(CGRP)水平;一氧化氮(NO)试剂盒测定血清、脑脊液中NO水平;RT-PCR法检测大鼠三叉神经节中即刻早期基因(c-Fos)、CGRP、瞬时受体电位V1通道(TRPV1)、腺苷酸活化蛋白激酶A(PRKAA)及TRPA1 mRNA表达水平;免疫荧光法检测三叉神经颈复合体(TCC)中c-Fos阳性细胞数和三叉神经节磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、TRPA1蛋白表达水平.结果 与对照组比较,模型组大鼠机械刺激阈值、pAMPK蛋白表达降低,血清中CGRP、NO水平,三叉神经节c-Fos、CGRP、TRPV1、TRPA1 mRNA表达水平,TRPA1蛋白表达和TCC中c-Fos阳性细胞数均显著升高(P＜0.05).与模型组比较,川芎-天麻药对组大鼠机械刺激阈值、pAMPK蛋白表达显著上升,血清中CGRP、NO水平,三叉神经节中c-Fos、CGRP、TRPV1、TRPA1 mRNA表达水平,TRPA1蛋白表达和TCC中c-Fos阳性细胞数明显下降(P＜0.05).结论 川芎-天麻药对可能通过调控三叉神经节中AMPK/TRPA1通路,升高机械痛阈,从而改善偏头痛症状.

[目的]探究丹参-川芎-红花(丹川红,DCH)及主要吸收成分阿魏酸(FA)对颅脑损伤(TBI)模型大鼠抑郁-心脏损伤的治疗作用及多病发生机制研究.[方法]SD大鼠TBI造模,造模苏醒后给药,24 h后取材.分为空白(Sham)组,模型(Vehicle)组,FA(2 mg/kg)组、DCH(10 g/kg)组.用高尔基染色法检测海马神经元的树突棘密度和树突长度,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测海马、心脏及血清中即刻早期基因(c-Fos)和胃饥饿素(Ghrelin)、心脏内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、血清五羟色胺(5-HT)和炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马、心脏的脑源性神经营养因子(BDNF),心脏损伤指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌凋亡指标半胺氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3).[结果]TBI后大鼠海马神经元树突棘密度和长度均下降,治疗后有所恢复;血清炎性因子应激后明显上升,治疗后下降;5-HT应激后显著下降,治疗后上升.应激后显著下降的心脏eNOS水平治疗后升高,显著上升的心脏损伤指标CK-MB和Caspase3水平治疗后下降.c-Fos、Ghrelin在大鼠血清、海马、心脏中具有一致性的表达特征,前者在应激后表达量增高,给药后下降;后者在应激后表达量下降,给药后上升.BDNF在心脑中表现为应激后下降,给药后上升.[结论]TBI后大鼠具有抑郁-心脏损伤的多病表现,DCH和FA均发挥抗抑郁-心脏保护的作用,可能通过调节Ghrelin-BDNF/c-Fos这一共享途径对TBI后抑郁-心脏损伤共病发挥治疗作用.

目的:分析创伤后应激障碍(PTSD)小鼠恐惧记忆消退过程中海马各亚区神经元的激活及差异.方法:使用两种即刻早期基因蛋白标记策略,对PTSD小鼠条件性恐惧记忆消退相关神经元进行标记.第一组利用免疫荧光染色技术,使用野生型小鼠对海马区域神经元Arc蛋白进行标记并观察;第二组使用Fos-Cre-ERT2;Ai9转基因小鼠,在恐惧记忆消退前23 h注射他莫昔芬诱导荧光蛋白表达,标记相关神经元并观察.通过对标记的海马神经元数量及树突分支结构进行分析,对比海马神经元激活水平和神经元树突的可塑性变化.结果:两组实验观察发现Arc和Fos阳性神经元主要分布在背侧海马,其中Arc蛋白显色在CA3和DG亚区呈富集分布,CA1、CA2亚区的分布则较为散在,而Fos阳性神经元在海马DG亚区表达富集,散在分布于CA1、CA2和CA3亚区.与对照组对比,PTSD组海马各亚区表达Arc蛋白神经元数目没有明显差异;而PTSD组海马中CA1、CA3、DG亚区的Fos阳性神经元数量显著增加(P＜0.01).利用Fos-CreERT2;Ai9小鼠对两组小鼠海马区域神经元树突分支进行观察分析,未发现明显变化.结论:PTSD小鼠恐惧记忆消退过程中海马不同亚区神经元存在异常激活,但激活的神经元树突分支无明显可塑性改变.

目的 探讨左旋多巴活化NMDA受体1(NMDAR1)/ERK1/2(丝裂原活化蛋白激酶)信号对单眼剥夺弱视大鼠视皮质神经细胞的保护作用.方法 实验研究.54只SD大鼠根据随机数字表分为9组:正常对照组、弱视模型(MD)组、低剂量左旋多巴治疗组、高剂量左旋多巴治疗(H-左旋多巴+MD)组、高剂量左旋多巴+MK801组、高剂量左旋多巴+PD98059组、MK801组、PD98059组、二甲基亚砜溶剂对照组,每组6只.通过右眼缝合制备弱视大鼠模型,左旋多巴灌胃治疗,MK801、PD98059通过侧脑室注射,免疫印迹法检测N-甲基-D-天冬氨酸受体(NR1)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-ERKI/2)、丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2)、神经生长因子(NGF)、即刻早期基因c-FOS的表达,Nissl染色检测神经元细胞形态学变化,核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口标记(TUNEL)法检测神经元细胞凋亡,免疫组织化学法检测神经元细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、NGF和c-FOS的表达.采用单因素或双因素方差分析联合LSD-t检验进行组间比较.结果 正常对照组小鼠神经元尼氏小体完整,形态清晰;MD组视皮质区神经元尼氏小体体积缩小,神经元丢失和核固缩.与对照组相比,MD组神经细胞凋亡显著增多(23.09±2.00、2.20±0.35,t=12.120,P=0.000),Caspase-3阳性细胞增多(22.70±1.50、3.30±0.54,t=12.120,P=0.000),NGF (0.31 ±0.04、0.74±0.09,t=7.674,P=0.000)和c-FOS (0.25±0.03、0.57±0.07,t=5.919,P=0.000)表达降低,NGF(8.30±0.82、35.18±2.01,t=12.370,P=0.0000)和c-FOS (10.84±1.02、35.68±2.55,t=9.056,P=0.0001)阳性细胞数减少,视皮质区NR1 (0.40±0.05、0.55±0.07,t=4.533,P=0.001)、p-ERK1/2(0.68±0.17、0.88±0.11,t=0.920,P=0.142)的表达降低;左旋多巴治疗后,神经细胞形态恢复正常,尼氏小体染色清晰;有效缓解神经细胞凋亡(13.07±1.47、23.09±2.00,t=8.698,P=0.000),减少Caspase-3阳性细胞率(17.05±1.11、22.70±1.50,t=3.019,P=0.015);NR1 (0.75±0.09、0.40±0.05,t=8.528,P=0.001)、p-ERK1/2(2.13±0.26、0.68±0.17,t=3.488,P=0.008)的表达显著升高;NGF(18.07±0.87、8.30±0.82,t=8.18,P=0.0000)和c-FOS(19.78±0.91、10.84±1.02,t=6.543,P=0.0001)阳性细胞率增加.MK-801或PD98059干预处理后,有效拮抗左旋多巴治疗作用.MK801、PD98059处理下调NR1(0.53±0.06、0.95±-0.12,t=5.647,P=0.005)及下游p-ERK1/2 (1.52±0.18,2.58±0.30,t=3.091,P=0.013)的表达,并进一步促进MD小鼠尼氏小体体积缩小、细胞核固缩、神经元凋亡、Caspase-3表达,并抑制NGF和c-FOS的表达;二甲基亚砜溶剂未见明显作用.结论 左旋多巴通过活化NMDA-ERK1/2 MAPK信号对大鼠视皮质神经元细胞的保护作用.