目的 考察中药复方艾可清对药物代谢酶和抗艾滋病病毒(HIV)药物克力芝组分洛匹那韦(LPV)和利托那韦(RTV)药物代谢动力学的影响.方法 将人肝微粒体与混合探针和艾可清共孵育,用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术测定探针的含量变化,计算艾可清对肝微粒体中药物代谢酶细胞色素P450 不同亚型的半数抑制浓度(IC50),确定艾可清抑制的P450 亚型.建立HPLC-MS法同时测定大鼠血浆中LPV和RTV含量;大鼠灌胃艾可清或溶媒,每日 1 次,连续 7 d,末次灌胃艾可清后 0.5 h灌胃克力芝,检测LPV和RTV的血药浓度,分析艾可清对其药代动力学参数的影响.结果 艾可清甲醇提取物在 0～500 μg·mL-1 浓度范围内,对P450 代谢酶表型CYP2D6、CYP2C8、CYP2E1、CYP2C19、CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9 和CYP3A4 酶活性的IC50 值依次为 7.7、75.3、144.0、99.5、43.5、104.5、49.3 和 204.9 μg·mL-1.建立了定量分析LPV和RTV的HPLC-MS/MS方法,LPV和RTV分别在 30～10 000 ng·mL-1 和 3～1 000 ng·mL-1 范围呈线性关系,最低定量限分别为 30 ng·mL-1 和 3 ng·mL-1,日内、日间精密度均小于 5%,LPV和RTV的准确度均在 96.3%～109.0%之间,提取回收率均不小于 88.7%,基质效应均在 93.8%～105.0%之间,血浆样品稳定性较好.与克力芝组比较,艾可清与克力芝联用组LPV的非房室模型参数AUC0-t、AUC0-∞、MRT0-t、t1/2z、tmax、Vz/F、Clz/F、Cmax均无明显影响(P＞0.05),但可延长MRT0-∞(P＜0.05);联用组RTV所有药动学参数均无明显影响(P＞0.05).结论 艾可清对人肝脏药物代谢酶CYP450 中 8 个亚型有不同程度的抑制作用,其中对CYP2D6 的抑制作用最明显;大鼠灌胃人等效剂量艾可清对洛匹那韦和利托那韦的药代动力学参数无明显的影响.

目的 考察谷红注射液对体外及体内细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶的影响.方法 人肝微粒体"Cocktail"探针底物法进行体外酶抑制实验,检测7种探针底物代谢产物的相对生成量,计算半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50),评估谷红注射液(0.05％～10％)对7种CYP450亚酶抑制作用.人原代肝细胞体系进行体外酶诱导实验,分别检测酶活性及其mRNA表达水平,评估谷红注射液对CYP450酶诱导作用.采用整体动物法进行体内酶活性实验,检测7种特异性探针底物血浆药物浓度,评估谷红注射液(0.9、3.6mL/kg)对大鼠7种CYP450亚酶活性的影响.结果 谷红注射液对人肝微粒体 CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6 和 CYP3A4 的 IC50 值分别为 1.98％、7.95％、2.85％、5.39％、4.92％、7.76％和3.41％,均大于0.5％(理论临床最大血药浓度值);人原代肝细胞CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4 mRNA表达增加＞2倍,且前两者呈浓度相关性增加,对CYP1A2酶活性高于阳性对照40％.谷红注射液在超临床剂量下使大鼠CYP1A2、CYP2B6、CYP2C19和CYP3A4酶的体内探针底物茶碱、安非他酮、奥美拉唑和咪达唑仑的总清除率明显增加、系统暴露降低.结论 谷红注射液在临床剂量下对7种CYP450酶无显著抑制作用,但不排除高剂量下对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C19和CYP3A4的诱导效应,建议开展使用敏感探针底物的临床试验以进一步确认潜在的药物相互作用.

目的 探讨消癌平注射液(XAP)对大鼠体内多西紫杉醇(DOC)药代动力学与体外细胞色素P450(CYP450)酶活性的影响.方法 对 24 只SD雄性大鼠实施体内研究,随机分为A组(DOC对照组)、B组(XAP+DOC组)、C组[(咪达唑仑(MDZ)对照组)]、D组(XAP+MDZ组)共 4 组.借助超高效液相色谱串联质谱法检测给药后 5、10、20、30 min和 1、2、3、4、6、8、12、24 h大鼠血清中DOC/MDZ浓度,计算药代动力学参数.通过重组CYP450 酶 3A4(CYP3A4)的体外反应体系展开研究,制备人肝微粒体,以MDZ为底物探究XAP对CYP450 酶活性的抑制作用,考察XAP对DOC代谢的影响.结果 体内药代动力学结果显示,XAP可使DOC的Cmax 和AUC0→t 分别增加 150%(P<0.01)和60%(P<0.05);t1/2 和MRT分别为(4.24±1.78)h、(3.92±1.14)h,较DOC对照组显著延长;XAP可使MDZ的消除延长,半衰期t1/2 延长至(0.962±0.19)h,MRT延长至(1.008±0.13)h,药时曲线下面积(AUC0→∞)为(1510.078±242.11)ng·h/ml,均显著高于MDZ对照组(P<0.05).以MDZ为底物进行的体外抑制实验表明,XAP(10～100 mg/ml)和C21 总甾体提取物(10～50 μg/ml)能明显抑制人肝微粒体CYP3A4 活性.结论 XAP与DOC联合使用后,DOC的血药浓度升高,DOC的多个药代动力学参数明显改变,XAP对DOC的消除有抑制效能,同时其作用机制可能与CYP3A4 受抑制有关.

目的:从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)肝脏组织中克隆细胞色素P450还原酶基因(BgCPR,GenBank登录号:OQ572435)进行生物信息学分析,并进行功能验证.方法:基于中华大蟾蜍转录组数据库挖掘BgCPR基因序列,使用SnapGene软件设计BgCPR基因两端特异性引物,以蟾蜍肝脏组织总RNA逆转录成的cDNA为模板进行PCR扩增.利用生物信息学分析BgCPR蛋白理化性质、空间结构并构建系统进化树;基于CRISPR/Cas9基因编辑系统将蟾蜍BgCPR基因表达框经同源重组整合进入酿酒酵母基因组,利用聚乙二醇法制备转化子微粒体,验证其对细胞色素C的还原功能.结果:克隆得到全长2 043 bp的BgCPR基因cDNA,编码680个氨基酸,相对分子质量77 852 Da.结构预测显示,BgCPR蛋白为非分泌蛋白;有一段跨膜螺旋区,位于蛋白的第24～46位氨基酸之间;亚细胞定位预测显示该蛋白定位于内质网上.采用体外酶活实验证明其具有传递电子功能.结论:本研究克隆得到中华大蟾蜍BgCPR基因,并构建了表达具有生物活性的BgCPR的酿酒酵母工程细胞,为进一步研究蟾蜍CYP450基因功能乃至解析蟾蜍二烯内酯类化合物的生物合成途径奠定了基础.

目的 从基因水平探讨阻燃剂与农药联合暴露致甲状腺癌可能的生物联合作用机制.方法 通过比较毒理基因组学数据库(comparative toxicogenomics database,CTD)中获取阻燃剂与农药有确切证据的甲状腺癌相关基因,对阻燃剂与农药共同基因进行基因富集分析,获取共同基因/蛋白可能参与的生物进程或信号通路.结果 经分析共同作用关键基因61个,这些基因分别参与激素代谢过程、对有毒物质的反应、对无机物的反应、细胞对脂质的反应、细胞对激素刺激的反应等GO生物学进程和AMPK信号通路.结论 阻燃剂和农药主要通过肝微粒体酶P450酶系相关基因联合作用影响甲状腺激素水平,引起机体内分泌紊乱造成甲状腺功能改变,从而导致甲状腺癌的发生.

目的 观察并比较苯巴比妥钠(PB)单独诱导、苯巴比妥钠与β-萘黄酮(β-NF)联合诱导两种方法对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶含量的影响.方法 将24只健康成年SD雄性大鼠随机为单独诱导组、联合诱导组及对照组,分别腹腔注射PB、PB+β-NF和生理盐水,给药4d后制备大鼠肝微粒体,测定肝脏脏器系数、肝微粒体蛋白含量、CYP450及细胞色素b5(Cytb5)含量.结果 单独诱导组、联合诱导组分别与对照组比较,大鼠肝脏脏器系数、肝微粒体蛋白含量、CYP450及Cytb5含量均有增加,差异有统计学意义(P＜0.05);单独诱导组和联合诱导组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PB单独作用、PB与β-NF联合作用对大鼠肝微粒体CYP450酶均产生诱导效应,两种诱导法对肝粒体CYP450酶的作用差异不明显.

目的:通过UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技术对石斛碱在人肝微粒体中的主要代谢产物进行鉴定与分析.方法:运用人肝微粒体体外温孵法,模拟细胞色素P450酶(CYP450)及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(UGT)酶反应体系,采用ThermoQ-Exactive型四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统分析,Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm ×150 mm,1.9 μm),流动相0.1％甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.3 mL· min-1,电喷雾离子源(ESI)正离子模式检测.结果:通过精确相对分子质量和二级碎片离子信息,鉴定了石斛碱在入肝微粒体中Ⅰ相代谢的4个主要代谢产物,依次标记为M-250([M+H]+m/z250.180 1),M-262([M+ H]+m/z 262.180 0),M-280([M +H] +m/z 280.190 6),M-296([M+H]+ m/z 296.185 6),以及Ⅱ相代谢的1个主要代谢产物,标记为M-440([M]+m/z 440.227 8).结论:所建立的UPLC/LTQ-Orbitrap-MS测定人肝微粒体中石斛碱及其代谢产物的方法灵敏、快捷,可应用于石斛碱在人肝微粒中的代谢研究,同时为石斛碱的药物代谢动力学研究提供了实验依据.

目的 考察HY 152-J对人重组肝微粒体细胞色素P450 (CYP450)5种亚型酶活性的影响.方法 利用不同浓度HY152-J与重组酶的体外孵育试验,以睾酮、咪达唑仑、美芬妥英、右美沙芬、非那西汀和双氯芬酸为CYP450酶探针底物,应用优化液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法比较代谢产物(6β-羟基睾酮、l-羟基咪达唑仑、4-羟基美芬妥英、去甲右美沙芬、对乙酰氨基酚和4-羟基双氯芬酸)的量,计算半数抑制浓度(IC50)值,评价HY152-J对5种人CYP450亚型酶的抑制活性.结果 在HY152-J浓度范围为0～200 μmol/L的各孵育体系中,CYP3A4(6β-羟基睾酮)、CYP3A4(1-羟基咪达唑仑)、CYP2C19(4-羟基美芬妥英)、CYP2D6(去甲右美沙芬)、CYP1A2(对乙酰氨基酚)和CYP2C9(4-羟基双氯芬酸)的剩余活性百分比分别为4.6％、0.6％、0.3％、8.1％、32.5％和15.3％,对应IC50值分别为21.02、2.66、1.23、14.9、71.0和35.8 μmol/L.结论 HY152-J对CYP3A4(1-羟基咪达唑仑)和CYP2C19具有中度抑制作用,对CYP3A4(6β-羟基睾酮)、CYP2D6、CYP1A2和CYP2C9抑制作用较弱.

目的:探讨丹红注射液对阿司匹林和氯吡格雷体外代谢的影响,为临床合理用药提供参考.方法:(1)体外酶抑制研究.取人肝微粒体5种细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)亚酶(1A2、2C9、2C19、2D6和3A4)与不同浓度的丹红注射液(0.01％、0.3％、1％、3％、10％和30％)预孵育15 min后,分别加入各亚酶的探针底物和辅酶还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸孵育30 min,检测各CYP450亚酶底物代谢产物的减少程度.(2)体外药物相互作用研究.取阿司匹林或氯吡格雷分别在有、无丹红注射液的条件下,与辅酶和微粒体孵育0、15、30、60、90和120 min,检测经肝微粒体代谢后的阿司匹林和氯吡格雷的母体剩余率.结果:(1)酶抑制研究.丹红注射液(0.01％、0.3％、1％、3％、10％和30％)对人肝微粒体中的CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的酶活性均存在浓度依赖性潜在抑制作用,半数抑制浓度分别为0.593％、0.816％、0.740％、0.841％和0.780％.(2)相互作用研究.0.25μmol/L的阿司匹林在有、无1％丹红注射液的条件下,120 min后的母体剩余率分别为96.6％和83.2％,其母体半数消除时间>120 min且体外清除率<20.0.5μmol/L的氯吡格雷在有、无1％丹红注射液条件下,15 min后的母体剩余率分别为10.4％和4.33％,其母体半数消除时间分别为4.01和2.05 min,体外清除率分别为434和843,且在无辅酶条件下的母体剩余率为0.257％.结论:在体外肝微粒体孵育体系中,丹红注射液对人肝微粒体中的CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的酶活性均存在浓度依赖性潜在抑制作用,但1％的丹红注射液对阿司匹林和氯吡格雷的母体代谢均无明显抑制作用.

目的:探讨抗癌药物组蛋白去乙酰化酶抑制剂S25在不同种属中代谢稳定性差异并确定S25药物的代谢表型.方法:将S25置于人、小鼠、大鼠、犬和猴的肝微粒体中孵育,运用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)方法检测经过孵育代谢后S25剩余浓度,分析其代谢稳定性并推导出其在体内的半衰期及清除率;通过肝微粒体中细胞色素P450酶(CYP450)同工酶特异性抑制剂的化学抑制剂方法鉴定S25在小鼠肝微粒体中的代谢表型.结果:S25在人、小鼠、大鼠、犬和猴5个种属肝微粒体中半衰期(t1/2)分别为45.00、187.30、43.31、130.75、198.00 min;肝微粒体中固有清除率CLint分别为30.8、7.4、32、10.6、7/mL·min-1·mg-1;在人肝微粒体中S25主要通过CYP2E1、CYP2C9、CYP2C19催化代谢.结论:在肝微粒体研究体系中,S25通过多种酶催化而迅速代谢降解;该药在人和小鼠的代谢动力学无差异,小鼠肝微粒体代谢系统可用于S25在人体内发生不良反应的风险评估.