目的:探讨沉默肝细胞生长因子受体c－Met表达对结肠癌细胞生物学特性的影响。方法:利用HCT116结肠癌细胞，通过RNA干扰技术建立c－Met瞬时转染的细胞模型，同时设阴性对照(siRNA－NC)和空白对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT－qPCR)和Western blot检测细胞中c－Met的表达，通过细胞增殖实验、细胞周期和凋亡测定、细胞侵袭实验、细胞迁移实验等观察沉默c－Met对HCT116结肠癌细胞生物学特性的影响。结果:siRNA－Met组、siRNA－NC组和空白对照组细胞c－Met mRNA的表达水平分别为0.32±0.26、1.05±0.23和1.01±0.03，c－Met蛋白的表达水平分别为0.24±0.03、1.18±0.11和1.23±0.06，siRNA－Met组均显著降低(均 P<0.05)。转染后72 h，siRNA－Met组的吸光度值为1.13±0.05，低于siRNA－NC组(1.53±0.07， P<0.01)和空白对照组(1.48±0.08， P<0.01)。siRNA－Met组G 2/M期细胞比例为(14.65±1.41)%，高于siRNA－NC组[(5.63±0.71)%， P<0.05]和空白对照组[(5.07±0.70)%， P<0.05]，并且siRNA－Met转染后，细胞周期调节蛋白Cdc25c和cyclin B1的表达水平显著下降。siRNA－Met组细胞凋亡率为(5.85±0.35)%，显著高于siRNA－NC组[(0.91±1.14)%， P<0.05]和空白对照组[(1.00±0.17)%， P<0.05]，并且siRNA－Met转染后，凋亡相关蛋白Bcl－2的表达水平显著下降，Bcl－2关联X蛋白(BAX)表达水平显著升高。siRNA－Met组的细胞迁移率为(51.33±8.62)% ，显著低于siRNA－NC组[(102.33±6.43)%, P<0.05]和空白对照组[(100.00±3.72)%， P<0.05]。siRNA－Met组穿透至基底膜下室面的细胞数为(47.50±10.60)个，少于siRNA－NC组[(102.50±10.61)个， P<0.05]和空白对照组[(100.00±5.33)个， P<0.05]，并且siRNA－Met转染后，侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP－2)和MMP－9的表达水平显著下降。 结论:c－Met在维持结肠癌细胞生物学特性中发挥重要作用，c－Met抑制剂可能在结肠癌治疗中具有重要价值。

骨肉瘤是好发于儿童和青少年的原发恶性骨肿瘤，易复发或转移，且复发或转移的患者预后较差。肝细胞生长因子受体(c-Met)是酪氨酸激酶受体家族成员之一，其激活促进多种肿瘤细胞增殖、上皮-间充质转换(EMT)、转移和抑制肿瘤细胞凋亡。目前关于c-Met在骨肉瘤中的研究较少，其在骨肉瘤中发生发展中的作用尚未完全明确。本文将对c-Met表达及其靶向抑制剂在骨肉瘤中的研究进展作综合性阐述，以期为其在骨肉瘤中的进一步研究阐明方向。

目的:探讨间充质干细胞（MSC）旁分泌肝细胞生长因子（HGF）的可能机制。方法:①体外培养C57BL/6小鼠间充质干细胞（mMSC），并构建慢病毒质粒稳转的高表达趋化因子受体7（CXCR7）的mMSC，同时设置空白对照组和空载体对照组。待细胞传代培养20代后，采用荧光显微镜和流式细胞仪鉴定转染效率；采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测mMSC中CXCR7 mRNA表达水平。②另取传至4～6代的mMSC，分为MSC对照组〔MSC-blank组，野生型mMSC加入100 μg/L脂多糖（LPS）〕、高表达CXCR7组（MSC-OE-CXCR7组，慢病毒质粒稳转高表达CXCR7 mMSC加入100 μg/L的LPS）、高表达CXCR7对照组（MSC-OENC-CXCR7组，慢病毒空载体质粒稳转mMSC加入100 μg/L的LPS）、CXCR4抑制剂组（MSC-IE-CXCR4组，mMSC经0.1 mg/L CXCR4抑制剂TC14012预处理24 h后加入100 μg/L的LPS）和CXCR4抑制剂对照组（MSC-IENC-CXCR4组，mMSC加入与TC14012等量的DMEM培养液预处理24 h后再加入100 μg/L的LPS）。经LPS处理6 h后收集各组细胞，采用RT-PCR法检测分化抑制因子-1（ID-1）的mRNA表达；收集细胞上清液，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HGF水平。结果:①经荧光显微镜及流式细胞仪检测鉴定慢病毒质粒介导的高表达CXCR7的mMSC构建成功。与空白对照组比较，高表达CXCR7慢病毒载体组mMSC中CXCR7 mRNA表达水平明显升高（2 -ΔΔCt：5.81±0.97比1.02±0.12， P<0.05）；而空载体对照组mMSC中CXCR7 mRNA表达水平与空白对照组差异无统计学意义（2 -ΔΔCt：0.95±0.22比1.02±0.12， P>0.05）。②与MSC-blank组相比，MSC-OE-CXCR7组高表达CXCR7或者MSC-IE-CXCR4组抑制CXCR4均可引起mMSC中ID-1 mRNA高表达（2 -ΔΔCt：5.56±0.66、2.47±0.58比1.00±0.10，均 P<0.05），同时可增加HGF外分泌水平（ng/L：632.02±149.98、217.21±40.53比108.53±24.62，均 P<0.05）；但MSC-OENC-CXCR7组和MSC-IENC-CXCR4组mMSC中ID-1 mRNA表达水平和HGF外分泌水平与MSC-blank组比较差异均无统计学意义ID-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.01±0.27、1.21±0.32比1.00±0.10，HGF（ng/L）：133.56±25.19、107.11±25.30比108.53±24.62，均 P>0.05。 结论:诱导MSC中CXCR7高表达或者抑制CXCR4表达均可增加MSC中ID-1表达，并促进HGF分泌，从而促进肺微血管内皮修复。

甲磺酸仑伐替尼是一种针对血管内皮生长因子受体1~3、成纤维细胞生长因子受体1~4、血小板衍生生长因子受体α、干细胞生长因子受体以及转染重排基因等靶点的口服酪氨酸激酶受体抑制剂。该药于2018年9月4日经我国国家药品监督管理局批准，用于治疗未接受过系统治疗的不可切除肝细胞癌患者。截至2023年2月，仑伐替尼已在我国上市4年余，积累了一系列临床研究证据。为了临床上更加合理、有效使用仑伐替尼，国内相关领域的多学科专家学者，采用德尔菲法，根据仑伐替尼上市前后的临床实践，参考其他抗血管生成抑制剂的使用经验，经过多次共同讨论，反复修改，最终形成《仑伐替尼肝癌全病程应用中国专家指导意见》，以供临床医师参考。

目的:探讨茵栀黄口服液对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠的作用和相关机制。方法:将18只C57BL/6J雌性小鼠分成正常饮食组、高脂饮食组和茵栀黄口服液组，每组6只。肝脏组织切片行H-E染色、油红O染色和Masson染色后进行病理学评分。检测血三酰甘油、总胆固醇、TBil、ALT和AST水平，采用高效液相色谱-串联质谱法测定小鼠回肠内容物胆汁酸组成，包括牛磺酸结合β鼠胆酸(TβMCA)、熊去氧胆酸(UDCA)和胆酸等。采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测法尼醇Ⅹ受体( FXR)、成纤维生长因子15( FGF15)和和成纤维生长因子受体4( FGFR4)基因的mRNA和蛋白质表达水平，以及胆汁酸合成相关酶细胞色素P450家族27亚族a成员1(CYP27a1)、细胞色素P450家族7亚族b成员1(CYP7b1)、细胞色素P450家族7亚族a成员1(CYP7a1)和细胞色素P450家族8亚族b成员1(CYP8b1)水平。统计学分析采用 t检验。 结果:茵栀黄口服液组血三酰甘油、总胆固醇、TBil、ALT和AST水平均低于高脂饮食组[分别为(1.47±0.07) mmol/L比(1.90±0.13) mmol/L、(2.57±0.17) mmol/L比(6.84±0.23) mmol/L、(0.88±0.22) mg/dL比(2.06±0.25) mg/dL、(28.43±3.16) U/L比(87.15±23.27) U/L、(147.40±8.47) U/L比(289.00±12.66) U/L]，差异均有统计学意义( t＝3.90、15.19、4.31、2.50、9.58， P均<0.05)。茵栀黄口服液组肝细胞脂肪变和气球样变评分均低于高脂饮食组[分别为(1.00±0.26)分比(2.33±0.33)分、(0.33±0.21)分比(1.17±0.31)分]，差异均有统计学意义( t＝3.90、4.90， P均<0.05)。茵栀黄口服液组回肠内容物FXR拮抗型胆汁酸TβMCA和UDCA水平均高于高脂饮食组[分别为(4.95±0.68) nmol/g比(2.64±0.15) nmol/g、(7.86±1.84) nmol/g比(2.22±0.38) nmol/g]，差异均有统计学意义( t＝3.92、2.99， P均<0.05)；茵栀黄口服液组回肠内容物FXR激动型胆汁酸胆酸水平低于高脂饮食组[(4.69±0.46) nmol/g比(21.66±3.25) nmol/g]，差异有统计学意义( t＝5.14， P<0.05)。茵栀黄口服液组回肠组织 FXR、 FGF15 mRNA和蛋白质，以及肝组织 FGFR4 mRNA和蛋白质表达水平均低于高脂饮食组(分别为1.86±0.40比4.25±0.70、9.99±2.82比75.17±23.41、4.76±0.63比12.66±1.39、2.20±0.14比5.30±0.25、1.15±0.05比3.05±0.16、1.73±0.09比2.37±0.21)，差异均有统计学意义( t＝2.56、2.76、4.87、10.90、10.96、2.94， P均<0.05)。茵栀黄口服液组胆汁酸合成替代途径中的CYP27a1和CYP7b1水平均高于高脂饮食组(分别为2.13±0.33比0.50±0.09和2.95±0.60比0.37±0.19)，差异均有统计学意义( t＝5.22、3.20， P均<0.05)；但CYP8b1表达水平低于高脂饮食组(2.38±0.41比8.63±2.20)，差异有统计学意义( t＝2.80， P<0.05)。 结论:茵栀黄口服液通过改变小鼠肠道胆汁酸组分抑制肠道FXR-FGF15信号通路，进而促进肝脏胆固醇合成胆汁酸，达到减轻NAFLD的作用。

目的:观察低硒条件下T-2毒素对大鼠关节软骨及骺板软骨肝细胞生长因子（HGF）、HGF受体（C-Met）表达的影响。方法:选择24只健康雄性SD大鼠，体质量为60~80 g，按体质量采用随机数字表法分为常规饲料组（硒含量为101.5 μg/kg）和低硒饲料组（硒含量为1.1 μg/kg），每组12只。喂养30 d后，将常规饲料组分为常规组和T-2毒素组（100 μg·kg -1·d -1），低硒饲料组分为低硒组和低硒+T-2毒素组（100 μg·kg -1·d -1），每组6只。继续喂养30 d后处死大鼠，取膝关节软骨组织，采用HE染色光镜下观察膝关节软骨及骺板软骨形态学改变；免疫组织化学法检测膝关节软骨及骺板软骨HGF和C-Met表达情况，计算HGF和C-Met阳性表达率。 结果:光镜下，低硒+T-2毒素组关节软骨及骺板软骨细胞排列稀疏，深层可见坏死无结构区，区域内软骨细胞细胞外基质降解而淡染，附近可见增生的肉芽组织。低硒、T-2毒素、低硒+T-2毒素组大鼠关节软骨及骺板软骨HGF阳性表达率[（21.97 ± 6.90）%、（49.41 ± 8.24）%、（76.39 ± 5.88）%，（23.36 ± 12.49）%、（58.43 ± 14.48）%、（66.59 ± 10.83）%]高于常规组[（9.13 ± 6.01）%、（11.14 ± 4.67）%， P均< 0.05]。低硒、T-2毒素、低硒+T-2毒素组关节软骨及骺板软骨C-Met阳性表达率[（25.34 ± 7.53）%、（58.21 ± 12.54）%、（81.46 ± 7.89）%，（35.21 ± 4.71）%、（40.84 ± 2.03）%、（49.41 ± 6.29）%]高于常规组[（11.21 ± 5.11）%、（12.12 ± 4.71）%， P均< 0.05]。 结论:低硒条件下T-2毒素对大鼠关节软骨及骺板软骨HGF、C-Met表达有影响。

目的:探讨白细胞介素-12（IL-12）对干燥综合征（SS）小鼠肝脏的损伤作用及其机制。方法:选取12周龄C57BL/6小鼠、非肥胖型糖尿病（NOD）SS模型小鼠、IL-12基因敲除NOD小鼠各5只，分别纳入正常对照组、SS模型组和IL-12 KO NOD组。各组小鼠取外周静脉血分离提取外周血单个核细胞（PBMC）和血清，处死小鼠解剖获取颌下腺组织和肝脏组织。（1）取正常对照组和SS模型组小鼠肝脏组织制备石蜡切片，HE染色观察肝脏肝小叶结构，MASSON染色观察肝脏纤维化情况。（2）取正常对照组和SS模型组小鼠肝脏组织、颌下腺组织的石蜡切片免疫组织化学染色观察比较IL-12阳性细胞光密度（OD）值的改变。（3）采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测正常对照组、SS模型组小鼠PBMC和肝脏组织IL-12 mRNA的相对表达量，以及正常对照组、SS模型组、IL-12 KO NOD模型组小鼠肝脏组织纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β（TGF-β）、Ⅰ型胶原（Col1）mRNA的相对表达量。（4）取正常对照组、SS模型组、IL-12 KO NOD模型组小鼠外周血血清和肝脏组织，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、转铁蛋白（TRF）、转铁蛋白受体（TFR）蛋白的表达情况。结果:（1）HE染色可见正常对照组小鼠肝小叶结构基本正常，而SS模型组小鼠肝脏的肝小叶、肝索结构紊乱，肝细胞胞浆内有空泡出现。MASSON染色可见SS模型组小鼠肝脏组织中见弥漫不规则的染为蓝色的胶原纤维，正常对照组小鼠肝组织中染为蓝色的胶原纤维则少见。（2）正常对照组小鼠颌下腺和肝脏IL-12阳性细胞OD值分别为0.08±0.01、0.03±0.01，高于SS模型组的8.74±0.78、2.58±0.07，差异均有统计学意义（ t=24.82、80.64， P值均<0.001）。（3）正常对照组小鼠肝脏组织及PBMC中IL-12 mRNA表达分别为1.07±0.15、1.03±0.14，均低于SS模型组的3.00±0.50、3.01±0.57，差异均有统计学意义（ t=8.27、7.54， P值均<0.001）。与正常对照组比，SS模型组FN、TGF-β mRNA的相对表达量均增高，差异均有统计学意义（ P值均<0.001）；与SS模型组比较，IL-12 KO NOD组FN、TGF-β mRNA的相对表达量均降低，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）；3组间Col1 mRNA的相对表达量差异无统计学意义（ P=0.243）。（4）与正常对照组比较，SS模型组血清和肝脏组织中SLC7A11、GPX4、TRF蛋白相对表达量均明显降低，TFR蛋白相对表达量均增高，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。与SS模型组比较，IL-12 KO NOD组血清和肝脏组织中SLC7A11、GPX4、TRF的相对表达量均增加，血清TFR蛋白的相对表达量降低，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）；而肝脏组织中TFR蛋白的相对表达量差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:IL-12表达增高对SS小鼠肝脏组织的损伤起到了促进作用，其机制可能与增高的IL-12诱导肝脏细胞铁死亡有关。

近来研究表明人类多种肿瘤细胞都有肝细胞生长因子受体（hepatocyte growth factor receptor，c-met）的高表达。c-met与其特异性配体肝细胞生长因子结合，通过激活细胞内信号转导通路，促进肿瘤的生长、增殖和转化。对于c-met的研究不仅有助于肿瘤侵袭转移机制的研究，而且也为抗肿瘤治疗提供了具有希望的靶点。

目的:探讨Wnt信号通路蛋白5a(Wnt5a)基因过表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)移植治疗心肌梗死的影响及分子机制。方法:结扎雄性SD大鼠冠脉前降支制备心肌梗死动物模型，按数字表法分为实验组(40只)和假手术组(20只)，4周后超声检测大鼠血流动力学指标变化；分离大鼠BMSC并在体外培养纯化，建立Wnt5a稳定沉默(sh-Wnt5a)和过表达的(oe-Wnt5a)BMSC细胞株，采用划痕实验检测Wnt5a沉默和过表达对细胞迁移能力的影响；采用酶联免疫吸附实验(ELISA)技术检测心肌梗死大鼠模型组血清中胰岛素样生长因子1(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、干细胞因子(SCF)和肝细胞生长因子(HGF)的含量；BMSC移植治疗心肌梗死大鼠，实验共分4组：心肌梗死对照组，生理盐水组、BMSC组和oe-Wnt5a组。移植治疗4周后，超声检测血流动力学变化后取材大鼠心肌，冰冻切片、苏木精-伊红(HE)染色后检测大鼠心肌梗死的面积；采用蛋白质印迹法(Western blot)技术检测移植后大鼠心肌组织中Wnt5a、桩蛋白(Paxillin)、干细胞因子受体(C-KIT)、Ca 2+依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和钙敏感受体(CaSR)蛋白的表达，两组和多组间比较分别采用 t检验和单因素方差分析。 结果:(1)成功建立Wnt5a稳定沉默和过表达的BMSC细胞模型。sh-Wnt5a组细胞迁移率显著低于对照组(6.67±1.02比18.71±3.02， t＝6.542， P<0.01)，oe-Wnt5a组细胞迁移率显著高于对照组(43.33±7.95比18.71±3.02， t＝5.014， P<0.01)。(2)ELISA结果显示，BMSC组及oe-Wnt5a组的血清中IGF-1、VEGF、SCF和HGF的浓度明显高于心肌梗死组[(5 473.20±474.55)、(1 237.85±173.90)、(548.09±77.06)、(136.14±37.41) pg/ml比(3 799.20±384.99)、(652.32±95.34)、(352.78±65.89)、(62.92±12.93) pg/ml， t＝4.745、5.114、3.337、3.204， P<0.05]；oe-Wnt5a组的血清中IGF-1、VEGF、SCF和HGF的浓度明显高于BMSC组[(6 264.31±498.87)、(1 445.75±179.58)、(663.22±79.71)、(238.15±62.09) pg/ml比(5 473.20±474.55)、(1 237.85±173.90)、(548.09±77.06)、(136.14±37.41) pg/ml， t＝3.990、5.441、3.799、3.437， P<0.05]。(3)移植治疗4周，大鼠心功能血流动力学有所改善。BMSC组的Wnt5a、Paxillin、C-KIT、和CaSR蛋白显著高于心肌梗死组(33.37±7.34、86.71±13.12、57.67±11.23、96.45±11.45比14.19±5.26、61.62±10.76、26.81±7.89、64.01±7.75， t＝3.679、3.561、3.895、4.064， P<0.05)；oe-Wnt5a组的Wnt5a、Paxillin、C-KIT、CAMKⅡ和CaSR蛋白表达显著高于心肌梗死组(60.33±10.12、90.22±15.42、86.44±12.45、73.30±11.34、108.69±14.43比14.19±5.26、61.62±10.76、26.81±7.89、47.66±9.87、64.01±7.75， t＝7.007、2.635、7.007、2.954、4.725， P<0.05)。Wnt5a和C-KIT蛋白表达显著高于BMSC组(60.33±10.12、86.44±12.45比33.37±7.34、57.67±11.23， t＝3.735、2.972， P<0.05)BMSC组和Oe-Wnt5a的心梗面积小于心肌梗死组(20.98±1.46、14.14±3.11比32.79±3.96， t＝4.825、6.415， P<0.05)，Oe-Wnt5a组的梗死面积小于BMSC组(14.14±3.11比20.98±1.46， t＝3.448， P<0.05)。 结论:Wnt5α基因过表达能有效促进BMSC的迁移及细胞因子的表达，过表达Wnt5a的BMSC移植治疗心肌梗死大鼠比单独移植BMSC疗效更显著。

目的:探讨建立肝细胞癌索拉非尼耐药细胞株鸡胚种植瘤模型的可行性。方法:采用药物连续诱导法，构建肝癌索拉非尼耐药细胞株；利用鸡胚动物模型，建立索拉非尼耐药细胞株的移植瘤；初步探讨耐药细胞株鸡胚种植瘤模型成瘤特点，分析相关靶点和信号通路的表达。采用 t检验。 结果:筛选到索拉非尼耐药的HepG2细胞(sHepG2)半数抑制浓度(IC 50)为(88.7±7.6) μmol/ml，显著高于HepG2( t＝16.416， P<0.01)；建立HepG2与sHepG2细胞株鸡胚种植瘤模型各5例，成功种植成瘤率为70%[(3+4)/(5+5)]；种植瘤肿瘤鲜重HepG2组[(0.093 2±0.012 2) g]低于sHepG2组[(0.141 1±0.019 4) g， t＝3.709， P<0.05]；成瘤组织蛋白质印迹法(Western blot)检测，sHepG2组磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)( t＝9.336， P<0.01)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt/p-PKB)( t＝7.123， P<0.01)表达显著高于HepG2组，人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)( t＝6.164， P<0.01)、成纤维细胞生长因子受体1 (FGFR1)( t＝6.297， P<0.01)表达显著低于HepG2组。 结论:体外建立索拉非尼诱导的HepG2耐药细胞株，并在鸡胚移植瘤动物模型中成瘤，移植瘤生长以及瘤组织相关靶点与信号通路的差异性表明，鸡胚种植瘤模型可作为肝细胞癌索拉非尼耐药的在体研究方法。