目的:分析食蟹猴不同程度肝纤维化的磁共振灌注加权成像(MR-PWI)定量参数值的变化规律，探讨评价肝纤维化严重程度的MR-PWI最佳检测指标。方法:以皮下注射四氯化碳溶液辅以饲喂高脂饲料的方法成功建立22只食蟹猴的肝纤维化模型，其中15只发展至早期肝硬化(即肝纤维化S4期)。采用配伍组设计对具有肝纤维化完整发展过程的15只食蟹猴进行Exchange肝脏双血供模型的MR-PWI对比研究，MR-PWI定量参数包括对比剂容积转运常数( ktrans)、反流速率常数( kep)、血管外细胞外间隙容积分数( ve)、对比剂血浆容积分数( vp)、肝动脉灌注指数(HPI)。分析不同程度肝纤维化上述参数的变化规律及其与肝纤维化严重程度的相关性，并探讨最佳的MR-PWI检测指标。统计学方法采用配伍组设计(随机区组设计)方差分析、SNK- q检验、Spearman秩相关分析和ROC曲线分析。 结果:食蟹猴MR-PWI的 ktrans、 kep随着肝纤维化进展而下降，差异均有统计学意义( F＝685.228、99.718， P均<0.01)，肝纤维化各期(S1～S4)与正常肝组织(S0期)比较，差异均有统计学意义[(0.527±0.038)、(0.479±0.035)、(0.432±0.032)、(0.387±0.031) mL/min比(0.584±0.044) mL/min， P均<0.01；(2.193±0.307)、(1.997±0.301)、(1.624±0.174)、(1.532±0.130) mL/min比(2.565±0.482) mL/min， P均<0.01]；重度肝纤维化S3、S4期与轻度肝纤维化S1期和中度肝纤维化S2期比较， ktrans、 kep差异均有统计学意义( P均<0.01)；但S3与S4期、S1与S2期的 ktrans、 kep比较差异均无统计学意义( P均>0.05)。随着肝纤维化严重程度的进展，HPI逐渐增大，差异有统计学意义( F＝839.883， P<0.01)，S0～S4期HPI分别为0.244±0.022、0.317±0.035、0.421±0.046、0.546±0.043、0.651±0.058，各组间两两比较差异均有统计学意义( P均<0.01)。随着肝纤维化严重程度的进展， vp逐渐降低， ve逐渐增大，但S0～S4期组间比较差异均无统计学意义( P均>0.05)。Spearman秩相关分析显示， ktrans、 kep与肝纤维化严重程度呈负相关( rs ＝-0.875、-0.797， P均<0.01)，HPI与肝纤维化程度呈正相关( rs ＝0.959， P<0.01)。ROC曲线分析结果显示， ktrans、 kep和HPI诊断早期肝硬化的AUC分别为0.852(95% CI 0.767～0.937)、0.799(95% CI 0.700～0.897)和0.967(95% CI 0.932～1.002)，最佳截断值分别为0.395 mL/min、1.561 mL/min和0.590，灵敏度分别为86.7%、79.6%和97.4%，特异度分别为77.4%、71.9%和93.1%。其中HPI诊断S1、S2、S3和S4期肝纤维化的最佳截断值分别为0.291、0.376、0.503和0.590，灵敏度分别为95.7%、93.8%、94.4%和97.4%，特异度分别为89.5%、84.7%、91.3%和92.7%。 结论:食蟹猴肝纤维化模型的MR-PWI参数值随肝纤维化发展而发生规律性变化，其中HPI是定量评价肝纤维化严重程度的最佳检测指标。

目的:建立大鼠供肝常温机械灌注(NMP)模型，比较不同门静脉灌注压力对热缺血大鼠肝损伤修复的影响。方法:经心脏停搏30 min、冷保存8 h的大鼠肝脏，使用肝动脉供氧、常温双通道灌注肝脏体系后，比较门静脉常压(M1组， n＝6)和低压(M2组， n＝6)灌注对肝灌注液流量和肝酶学指标的影响，并使用HE染色和Suzuki标准评定肝脏病理损伤，免疫组化检测中性粒细胞和巨噬细胞活化的指标髓过氧化物酶(MPO)和CD68表达，检测肝组织脂质过氧化产物丙二醛含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。心脏停搏30 min、冷保存8 h的大鼠作为静态低温保存组(CS组， n＝6)。 结果:保持门静脉灌注压力恒定的大鼠肝脏常温机械灌注模型建立后，随着灌注时间的延长，门静脉灌注流量呈增高趋势，NMP 60～120 min时灌注流量较0～20 min均增高( P<0.05)。与CS组比较，M1组肝淤血、肝细胞坏死、脂肪变性减轻，Suzuki评分减少( P<0.05)。与M1组比较，M2组的灌注液的肝酶学指标下降( P<0.05)，镜下观察M2组肝细胞坏死、脂肪变性、肝窦扩张减轻，Suzuki评分减少( P<0.05)；肝组织MDA含量降低、SOD活力升高( P<0.05)；肝组织CD68和MPO表达、TNF-α和IL-6水平降低( P<0.05)，以上差异均有统计学意义。 结论:建立大鼠常温双通道机械灌注模型，有效模拟肝灌注的生理状态；门静脉低压灌注后肝缺血再灌注损伤减轻，更有利于热缺血大鼠供肝损伤的修复。

目的:观察双重动脉血供(LDABS)对肝脏线粒体能量代谢的影响。方法:108只Sprague-Dawley(SD)大鼠(购自北京维通利华公司)采用完全随机化方法分分3组，即假手术组(SO组)、68%肝切除组(PH组)、68%肝切除结合双重动脉血供组(PH＋LDABS组，简称LDABS组)。每组模型术后0、12、24、72、120和168 h各组每个时间点随机取材6只；通过测线粒体膜电位、呼吸链酶浓度及三磷酸腺苷(ATP)酶探索LDABS致线粒体能量代谢的影响，组间比较用单因素方差分析，组间两两比较用LSD检验。结果:线粒体呼吸链酶Ⅰ在LDABS组术后12 h和72 h[(0.48±0.02，0.33±0.02) μmol/(min·mgprot)， t＝-5.296、-6.399， P值均<0.05]，差异有统计学意义；Ca 2＋-Mg 2＋-ATP酶在LDABS组术后168 h低于PH组[(35.84±5.02) U/g， t＝8.857， P<0.01]；术后24 h高于SO组[(37.33±5.39) U/g， t＝-0.127， P<0.05]，差异均有统计学意义；Na ＋-K ＋-ATP酶在LDABS组术后12 h达到峰值，术后0 h高于PH组[(20.27±0.69) U/g， t＝-4.527， P<0.01]，差异有统计学意义。 结论:LDABS可能通过线粒体呼吸链酶Ⅰ在肝再生能量代谢中发挥重要作用，可能在更早的阶段通过提高能量代谢促使肝细胞再生，且可能使肝再生所需的能量代谢的峰值提前。

目的 利用网络药理学方法研究地菍总黄酮抗 2 型糖尿病的作用机制,通过动物实验对靶点进行验证.方法 通过文献检索收集地菍总黄酮的化学成分,并在Swiss Target Prediction平台进行筛选;依据Swiss Target Prediction、GeneCards、TTD、DrugBank数据库预测和筛选地菍总黄酮成分治疗 2 型糖尿病的作用靶点;由Cytoscape 3.7.1 构建"成分-疾病-靶点"网络;String数据库构建靶点蛋白相互作用(PPI)网络;R语言对靶点基因进行基因本体(GO)富集分析及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.以高脂饮食诱导和ip链脲佐菌素(STZ)方法构建 2 型糖尿病模型大鼠,将 2型糖尿病模型造模成功的 40 只大鼠随机分成模型组,二甲双胍组(0.2 g/kg)组,地菍总黄酮(0.34、0.45、0.60 g/kg)组,每组 8 只,继续提供高脂饲料喂养,另设对照组.各组每天ig相应药物,1 次/d,对照组和模型组ig 0.5%CMC-Na溶液,连续给药 5 周.记录大鼠体质量、饮水量和摄食量,检测大鼠血糖及血脂的相关指标,运用qPCR法检测地菍总黄酮对2 型糖尿病大鼠肝组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)作用靶点的调控作用.Western blotting法检测各组大鼠肝脏中Akt、AMPK、固醇调节元件结合蛋白-1C(SREBP-1C)的蛋白相对表达量.结果 从地菍总黄酮成分中筛选得到槲皮素、芹菜素、柚皮素等 8 种活性成分,作用于 98 个 2 型糖尿病靶点,GO功能与KEGG富集分析表明,地菍总黄酮抗糖尿病主要通过调节PI3K/Akt信号通路、AMPK相关信号通路等来发挥抗 2 型糖尿病的作用.动物实验证实,地菍总黄酮可降低 2 型糖尿病大鼠的空腹血糖(FBG),抑制血脂升高,上调 2 型糖尿病大鼠肝脏PI3K、Akt、AMPK mRNA表达,显著增加Akt、AMPK蛋白表达含量,降低SREBP-1C蛋白表达含量(P＜0.01、0.05),对糖、脂代谢紊乱均具有改善作用,具有良好的抗 2 型糖尿病作用.结论 验证了地菍总黄酮多成分、多靶点、多途径治疗2 型糖尿病的特点,其抗糖尿病的作用机制可能与调节PI3K、Akt、AMPK、SREBP-1C靶点的表达水平,从而改善糖脂代谢紊乱有关,为后续更进一步研究作用机制提供参考.

目的 建立双波长高效液相法(High performance liquid chromatography,HPLC)比较研究山萸肉酒制前后配伍入六味地黄汤(以下分别简称六(山),六(酒))中7种药效成分:莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷、芍药苷、没食子酸、5-羟甲基糠醛以及丹皮酚的含量变化;探究六(山)、六(酒)干预绝经后骨质疏松症模型大鼠去卵巢术后90天的作用及其机制.方法 ①采用双波长HPLC法测定山萸肉酒制前后配伍入六味地黄汤中七种药效成分的含量.色谱条件:Hypersil C18色谱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.3%磷酸,梯度洗脱(0-7 min,0%-8%乙腈;7-15 min,8%-10%;15-20 min,10%-15%;20-30 min,15%-23%;30-50 min,23%-45%),流速0.6 mL·min-1,检测波长:240 nm(莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷、芍药苷),274 nm(没食子酸、5-羟甲基糠醛、丹皮酚),柱温30℃,进样量20 μL.②6-8月龄SD大鼠,分假手术组、模型组、阳性药物组、山萸肉配伍入六味地黄汤组(六(山)组)和酒萸肉配伍入六味地黄汤组(六(酒)组),去卵巢术后第5天开始给药,每周称重,并于术后90天取各组大鼠5只,称重后麻醉,取血清,双侧股骨,并取脏器(子宫、脾、肝、双肾以及心脏)称重.分别采用全自动生化仪以及化学发光微粒子免疫检测法检测大鼠血清钙(Calcium,Ca)、磷(Phosphorus,P)水平和雌二醇(Estradiol,E2)水平;双能X线骨密度仪测定大鼠骨密度(Bone mineral density,BMD)值;HE染色法观察大鼠骨组织形态学变化.结果 ①山萸肉酒制前后配伍入六味地黄汤中均含有上述7种药效成分,且六(酒)中7种药效成分总含量高于六(山)(P<0.01).其中,六(酒)中没食子酸、5-羟甲基糠醛高于六(山)(P<0.01),而莫诺苷含量则较六(山)低(P<0.01).②与假手术组比较:模型组大鼠血清中Ca、P、E2水平及子宫指数降低(P<0.01),BMD值降低(P<0.01),骨组织结构损害程度加深,表现为骨髓腔增大、脂肪细胞逐渐增多,骨小梁排列稀释,骨小梁数量变少甚至出现断裂.③与模型组比较,六(山)组及六(酒)组大鼠血清中的E2、Ca、P水平及子宫指数均升高(P<0.05),骨组织结构有明显改善,BMD值明显升高(P<0.05);六(酒)组肝脏、脾脏指数升高(P<0.05).结论 山萸肉酒制前后配伍入方六味地黄汤后均含有莫诺苷,马钱苷,獐牙菜苷,芍药苷,没食子酸,5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethyl furfural,5-HMF)以及丹皮酚七种药效成分,可有效干预PMOP;其中,酒萸肉入方的六味地黄汤抗骨质疏松作用优于山茱萸入方的六味地黄汤,其机制可能与六(酒)中七种有效成分的总含量高于六(山),该7种成分与成骨细胞、破骨细胞增殖分化密切相关,从而可调节骨代谢失调,提高骨密度,改善PMOP有关.可为2020版药典六味地黄丸选用酒萸肉入方及临床上应用六味地黄汤防治PMOP提供一定的实验依据.

目的 基于网络药理学及动物实验探究穿心莲内酯对5-氟尿嘧啶(5-Fu)所致大鼠化疗性肠黏膜炎(CIM)的预防治疗机制,为其临床应用提供依据.方法 检索Swiss Target Prediction、SuperPred、Genecards和OMIM等数据库,获得穿心莲内酯作用靶点及CIM疾病相关靶的交集并作为潜在靶点,通过String平台构建其蛋白-蛋白互作网络,利用R语言编程软件包对其进行GO功能及KEGG富集分析,Cytoscape分析其网络拓扑结构,最终筛选出核心靶点并进行分子对接验证.将雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组(金双歧三联活菌片,700 mg/kg)、穿心莲内酯低剂量组(30 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg).各给药组分别灌胃给予对应药物,空白组和模型组灌胃给予相应体积生理盐水,持续给药10 d.给药第6天时,除空白组腹腔注射相应体积生理盐水外,其余各组分别注射5-Fu 30 mg/kg,持续5d.每日观察记录大鼠体质量、腹泻情况;末次给药后第2天处死动物,摘取肝脏和脾脏,计算脏器指数;HE染色观察大鼠小肠组织病理变化;ELISA检测血清中TNF-α、IL-6炎症因子的水平.结果 穿心莲内酯治疗CIM的潜在靶点有190个.在PPI网络中,筛出STAT3、TNF、IL6等20个核心靶点.GO富集分析得到生物学过程相关条目2 315条、分子功能相关条目184条及细胞组分相关条目101条,主要涉及氧化应激反应、MAPK级联的正调控和细胞对化学应激的反应等.KEGG通路富集分析得到177条相关信号通路,主要涉及HIF-1、TNF、Toll样受体和T细胞受体信号通路等.分子对接结果表明穿心莲内酯与关键核心靶点STAT3、TNF、IL-6之间均具有较好的结合活性.动物实验结果显示,与空白组相比,模型组大鼠体质量下降,腹泻严重,脏器指数降低,肠道组织损害严重,血清TNF-α、IL-6水平显著升高;与模型组相比,穿心莲内酯高剂量组大鼠体质量下降率减少,腹泻评分减少,脏器指数升高,末端回肠组织损害程度较小,且血清中的TNF-α、IL-6含量显著降低(P<0.05).结论 穿心莲内酯能通过多个靶点对5-Fu所致大鼠化疗性肠黏膜炎发挥预防作用,其作用机制可能与抑制炎症相关因子TNF-α、IL-6等有关.

目的 探讨三维可视化技术在原发性肝癌经动脉化疗栓塞(TACE)治疗中的应用效果.方法 回顾性分析24例行TACE治疗的原发性肝癌患者临床资料,术前行双低剂量肝脏灌注CT检查及肝癌供血动脉三维可视化模型构建.以TACE术中数字减影血管造影(DSA)结果为金标准,采用自身对照分析三维可视化技术评估肝癌供血动脉的准确性,并指导TACE治疗.结果 24例患者术前均成功构建肝癌供血动脉的三维可视化模型,供血动脉来源于肝右动脉22例、肝左动脉7例、肝外供血动脉10例.DSA结果显示,供血动脉来源于肝右动脉22例,肝左动脉6例、肝外供血动脉9例.三维可视化模型与DSA结果比较差异无统计学意义(P>0.05).三维可视化模型对1～3级肝动脉的显示率为100%、4级肝动脉的显示率为83.3%,DSA对1～4级肝动脉的显示率为100%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05).根据三维可视化数据,24例患者均成功栓塞全部供血动脉,术后1个月客观缓解率为66.7%.结论 三维可视化技术在TACE术前可准确、全面显示肝癌供血动脉,有助于TACE术前规划及术中对肝癌供血动脉的精准判定.

目的 探讨应用放疗建立卵巢早衰小鼠动物模型的方法并验证其可行性. 方法 给予8周龄C57BL6雌性小鼠单次全身X射线辐照,按照辐照剂量不同分为0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy组,每组5只.记录各组放疗后第7天小鼠的体重、卵巢湿重、激素水平、卵泡计数及全身各脏器形态学的变化.观察并分析0 G y、4 Gy组放疗后14d、21d、28 d、42 d的上述指标. 结果 放疗后第7天,2 Gy、4 Gy及6 Gy组双侧卵巢湿重均较0 Gy组显著下降,4 Gy及6 Gy组血清FSH水平显著升高,2 Gy、4 Gy、6 Gy组卵巢内原始卵泡数、生长卵泡数均显著下降(P均＜0.05);肝脏、脾脏、子宫内膜均出现了相应组织学改变.与0 Gy组比较,4 Gy组小鼠随着辐照时间延长,卵巢湿重逐渐下降,血清FSH水平逐渐升高,血清E2水平则逐渐降低(P＜0.05);卵巢内原始卵泡数和生长卵泡数逐渐减少至完全耗尽,至42 d时卵巢内仅见闭锁卵泡. 结论 给予C57BL6小鼠4 Gy最低适宜剂量,放疗后7d至14 d能够成功建立小鼠卵巢早衰模型,且造模时间短、成功率高、死亡率低,为临床卵巢早衰患者的基础研究提供了稳定可靠的动物模型.

目的:观察血红素加氧酶(beme oxyenase,HO)2种同工酶HO-1和HO-2在慢性脑血流灌注不足大鼠的肝脏中的动态变化并探讨其意义.方法:42只成年雄性SD大鼠,4月龄,体质量250～300 9,随机分为模型组和假手术组.假手术组只分离出双侧颈总动脉但不结扎,模型组行永久性双侧颈总动脉结扎术,然后将大鼠分别在术后l、7、14、21、28 d处死,分别用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot检测HO-1和HO-2的表达,并检测H0的活性变化.结果:RT-PCR和Western blot显示,与假手术组比较,HO-1 mRNA和蛋白水平在术后1d即有增加,并在第7天达到高峰(P=0.000,P=0.000);伴随着脑血流供应的代偿性恢复,HO-1 mRNA和蛋白的表达在术后14、21、28 d都逐渐降低,但是和假手术组相比,在术后14 d和21 d时,差异都有统计学意义(P=0.000,P=0.000).这样的变化与HO的活性变化一致(P=0.000).然而RT-PCR和Western blot发现HO-2 mRNA和蛋白水平在慢性脑血流灌注不足的肝脏中没有变化(P=0.604,P=-0.329).结论:血红素加氧酶和HO-1 mRNA以及蛋白的表达在慢性脑血流灌注不足的肝脏中增加,而HO-2 mRNA和蛋白的表达变化无统计学意义.提示HO-1通过增加血红素加氧酶活性保护肝脏免收慢性脑血流关注不足引起的损伤.

目的:基于黄疸模型比较栀子根与栀子果实的保肝作用,为扩大栀子的药用部位提供药理学依据,为其资源的综合利用提供理论支撑.方法:将KM小鼠随机分为9组,每组10只,分别为正常组,模型组,阳性药联苯双酯组(150 mg·kg-1),栀子果实和根部位不同剂量给药组(各设高、中、低3个剂量),提前灌胃给药5d后采用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)复制小鼠黄疸型肝炎模型,继续给药,造模48 h后处理动物测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),γ-谷氨酰转移酶(γ-GT),总胆红素(TBIL),总胆汁酸(TBA),肝脏中超氧化物歧化酶(SOD),还原型谷胱甘肽(GSH),谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肝脏组织病理学变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),转运体胆盐输出泵(BSEP),钠离子-牛磺胆酸协同转运多肽(NTCP)和胆固醇12α羟化酶(Cyp8b1) mRNA的表达.结果:与正常组比较,模型组血清中ALT,AST,γ-GT,TBIL,TBA水平显著升高,组织中SOD,GSH-Px,GSH的活性显著降低,NTCP,Cyp8b1 mRNA的表达显著降低,TNF-α,IL-6,BSEP mRNA的表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,栀子果实与根提取物中、高剂量组均能明显降低血清中ALT,AST,γ-GT,TBIL,TBA,明显增强肝组织中SOD,GSH-Px,GSH的活性,对肝脏病理损伤有减轻作用,且能明显增加NTCP,Cyp8b1 mRNA的表达,明显降低TNF-α,IL-6,BSEP mRNA的表达(P ＜0.05,P＜0.01);而低剂量组仅对单项指标或几项指标有一定的改善作用.结论:栀子果实和根部位对ANIT诱导的黄疸模型小鼠有一定的保护作用,2个部位各剂量对不同指标有不同影响,栀子果实保肝机制可能主要与抗氧化作用和抑制炎症反应有关,而栀子根保肝作用可能主要与胆汁酸代谢有关.