目的:探讨二甲双胍改善小鼠非酒精性脂肪肝炎(NASH)脂肪代谢和炎症的作用机制。方法:将18只8周C57BL/6J雄性小鼠按随机数字法分为3组：正常饮食组、高糖高脂加胆固醇饮食(HFF)模型(HFF组)和HFF模型二甲双胍处理组(Met组)，每组6只小鼠，喂养16周，第12周起Met组每天给予一次二甲双胍药物(150 mg/kg)灌胃干预，持续4周，正常饮食组和HFF组给予等体积生理盐水灌胃处理。造模结束后，麻醉并称取小鼠体重后，取小鼠血清和肝组织，计算肝脏指数(肝重/体重)，检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及血清甘油三酯(TG)、肝脏TG；通过苏木精-伊红(HE)染色和油红O染色观察肝脏的病理变化；蛋白质印迹法(Western blot)检测脂质合成相关蛋白甾醇调节元件结合蛋白(SREBP1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FASN)的蛋白表达水平；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Acc、Fasn、Srebf1、白细胞介素-1β(IL-1β)、淋巴细胞抗原6(Ly6g)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA相对表达水平。其次，利用HFF组和Met组小鼠肝组织进行表达谱高通量测序并分析相关信号通路的变化。最后，Western blot检测自噬底物p62、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3-Ⅰ/Ⅱ)、自噬相关基因5(ATG5)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)及其磷酸化水平，以及M1型巨噬细胞标志物[IL-1β、iNOS、单位细胞趋化蛋白1(MCP1)、CD86]和M2型巨噬细胞标志物(CD163、CD206)的蛋白水平。两组间采用 t检验进行比较。 结果:HE染色和油红O染色显示，与正常饮食组比较，HFF组小鼠肝组织脂滴累积，炎性细胞浸润增加；HFF组小鼠肝组织ACC、SREBP1c以及iNOS、MCP1的蛋白表达水平高于正常饮食组(1.03±0.15比0.60±0.15， t＝3.277， P<0.05；1.04±0.08比0.70±0.10， t＝4.467， P<0.05；1.16±0.02比0.54±0.22， t＝3.772， P<0.05；1.20±0.15比0.51±0.09， t＝6.908， P<0.05)。Met组小鼠体重、肝重、肝脏指数低于HFF组[(27.45±4.26) g比(35.51±1.69) g， t＝4.306， P<0.05；(1.20±0.21) g比(1.74±0.17) g， t＝4.839， P<0.05；0.04±0.01比0.05±0.01， t＝2.147， P<0.05]；Met组小鼠血清ALT和AST对比HFF组无明显变化[(21.33±4.32) U/L比(30.33±10.84) U/L， t＝1.889， P>0.05；(106.70±17.33) U/L比(112.30±14.33) U/L， t＝0.617， P>0.05)]。Met组小鼠血清TG、肝脏TG水平低于HFF组[(0.72±0.27) mmol/L比(1.33±0.41) mmol/L， t＝3.004， P<0.05；(0.02±0.01) mmol/L比(0.05±0.03) mmol/L， t＝2.350， P<0.05)]；HE染色和油红O染色结果观察到Met组小鼠肝细胞内未见明显空泡和脂滴；Met组小鼠肝组织中ACC、FASN、SREBP1c蛋白表达水平低于HFF组(0.37±0.13比0.66±0.09， t＝3.174， P<0.05；0.61±0.03比1.11±0.14， t＝6.069， P<0.05；0.48±0.05比0.88±0.01， t＝12.310， P<0.05)；Met组小鼠肝组织中ACC、FASN、SREBP1c mRNA表达水平低于HFF组(2.21±0.08比8.13±3.45， t＝2.974， P<0.05；1.06±0.12比1.39±0.05， t＝4.310， P<0.05；1.03±0.06比1.50±0.26， t＝3.055， P<0.05)。Met组小鼠IL-1β、Ly6g、NLRP3、iNOS mRNA表达水平低于HFF组(0.47±0.02比1.40±0.08， t＝21.030， P<0.05；0.16±0.06比0.65±0.19， t＝4.276， P<0.05；0.67±0.04比1.17±0.16， t＝5.082， P<0.05；0.82±0.52比4.49±0.78， t＝6.784， P<0.05)。Met组小鼠肝组织p-Akt/Akt、p-PI3K/PI3K比值低于HFF组(1.05±0.02比1.58±0.04， t＝15.420， P<0.05；0.47±0.11比1.07±0.10， t＝6.906， P<0.05)；Met组小鼠肝组织ATG5、CD163蛋白表达和LC3II/LC3I比值高于HFF组(1.05±0.11比0.52±0.04， t＝7.690， P<0.05；0.99±0.02比0.64±0.04， t＝14.470， P<0.05；1.58±0.05比1.34±0.03， t＝7.091， P<0.05)；Met组小鼠肝组织P62、IL-1β、iNOS、MCP1蛋白表达低于HFF组(0.72±0.06比1.07±0.08， t＝6.047， P<0.05；0.17±0.10比0.56±0.10， t＝4.310， P<0.05；0.42±0.03比0.78±0.15， t＝4.038， P<0.05；0.39±0.10比0.72±0.02， t＝4.253， P<0.05)；Met组小鼠肝组织CD86、CD206蛋白表达对比HFF组无明显变化(0.65±0.04比0.68±0.08， t＝0.600， P>0.05；0.72±0.33比0.88±0.21， t＝0.664， P>0.05)。 结论:二甲双胍治疗通过抑制PI3K/Akt通路，增强自噬，促进M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化，从而减轻小鼠NASH的肝脂肪变性和炎症。

目的:探讨牛奶对金黄地鼠皮脂分泌的影响及作用机制。方法:将18只金黄地鼠随机分为3组，每组6只。空白组不予任何干预措施，全脂牛奶组予全脂牛奶灌胃，脱脂牛奶组予脱脂牛奶灌胃，2.5 ml/次，2次/d，连续4周；于干预开始后第0、7、14、21、28天测量金黄地鼠双侧皮脂腺斑最大横径及纵径，计算皮脂腺斑的面积；末次灌胃24 h后剪下各组金黄地鼠双侧皮脂腺斑组织，采用免疫组化法检测皮脂腺斑胰岛素样生长因子1（IGF-1）/固醇调节元件结合蛋白-1（SREBP-1）/乙酰辅酶A羧化酶（ACC-1）信号通路表达水平。采用重复测量方差分析、成组设计的单因素方差分析、Kruskal-Wallis H检验进行统计学分析，两两比较采用LSD- t检验。 结果:重复测量方差分析显示，金黄地鼠各组间皮脂腺斑面积差异无统计学意义（ F= 0.96， P= 0.417）。脱脂牛奶组IGF-1表达（0.39 ± 0.03）显著高于空白组（0.35 ± 0.03）及全脂牛奶组（0.33 ± 0.02），差异均有统计学意义（ t值分别为2.62、3.82， P值分别为0.021、0.002）；与空白组（0.36 ± 0.02）相比，脱脂牛奶组SREBP-1表达显著升高（0.42 ± 0.04， t= 2.64， P= 0.021）；与空白组ACC-1表达（0.34 ± 0.03）相比，全脂牛奶组（0.40 ± 0.03）及脱脂牛奶组（0.40 ± 0.05）均显著升高（ t值分别为2.39、2.47， P值分别为0.031、0.026）。 结论:牛奶可能通过IGF-1/SREBP-1/ACC-1信号通路促进金黄地鼠皮脂分泌。

目的:探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病（CAD）患者固醇调节元件结合蛋白-2（SREBP-2）的启动子甲基化水平与血浆miR-33a以及血脂和心肌酶等生化指标的相关性。方法:病例对照研究，2017年8月至2018年4月在湖北医药学院附属太和医院心内科三病区招募冠状动脉造影检查受检者100例，其中冠状动脉造影显示梗阻的CAD患者50例以及冠状动脉造影阴性的对照者50例。采集外周血样本，提取白细胞DNA，通过焦磷酸测序法检测SREBP-2启动子区两个片段，共计12个CpG位点的甲基化水平；提取血浆RNA，定量qPCR检测血浆miR-33a水平；分离血浆，采用全自动生化分析仪检测血浆中血脂、心肌酶、炎症相关因子等15项生化指标。通过Pearson和Spearman相关系数及多因素Logistic回归分析等统计学方法分析其相关性。结果:CAD患者SREBP-2启动子区F1-4 CpG位点（转录起始点上游-103bp）甲基化水平显著高于对照组（4.56%±0.70% vs 3.54%±0.72%， t=-3.864， P<0.001）；F1-4位点的甲基化水平与血浆中miR-33a-5p水平和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平呈负相关（ r=-0.318， P=0.001； r=-0.225， P=0.024）。此外，校正年龄、性别、高血压、高脂血症和糖尿病病史混杂因素之后，F1-4高甲基化是CAD的独立风险因素（ OR=2.452，95 %CI=1.398~4.299， P=0.002）。 结论:DNA甲基化和miRNA可能协同调控CAD发病机制中异常的脂质代谢。

目的:研究白虎加人参汤对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/固醇反应元件结合蛋白-1(SREBP1)信号通路的影响.方法:通过高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)注射建立T2DM模型大鼠,并用不同剂量的白虎加人参汤灌胃.通过检测各组大鼠造模给药后血清中相关生化指标和肝组织病理学变化,评估白虎加人参汤对T2DM模型大鼠的治疗作用;然后,运用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质免疫分析法检测白虎加人参汤干预后,各组大鼠肝组织中AMPK/SREBP1信号通路关键因子腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、脂肪酸合成酶(FASN)、ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)基因及蛋白水平,初步探究白虎加人参汤治疗T2DM模型大鼠的作用机制.结果:白虎加人参汤可明显降低T2DM模型大鼠血清中空腹血糖(FBG)、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,同时改善T2DM模型大鼠肝组织病理学变化.qPCR及蛋白质免疫分析结果显示,白虎加人参汤可显著降低T2DM模型大鼠肝组织中AMPK基因与蛋白水平,上调SREBP1、ACC1、ACLY、FASN基因与蛋白水平.结论:白虎加人参汤对T2DM模型大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与调节肝组织中AMPK/SREBP1信号通路,改善脂代谢有关.

目的 研究红芪多糖(HPS)对非酒精性脂肪肝病细胞模型法尼醇X受体(FXR)-小异二聚体伴侣(SHP)-甾醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)信号通路的影响.方法 用1.2 mmol·L-1脂肪酸培养LO-2细胞复制非酒精性脂肪肝病细胞模型.将细胞分为正常组(细胞正常培养)、模型组(建立非酒精性脂肪肝病细胞模型)、阳性对照组(造模后用50 μmol·L-1硫辛酸处理),实验组(造模后用80 mg·L-1 HPS处理),各组细胞均培养24 h.用GPO-PAP酶法检测细胞三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)含量和谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)活性,用蛋白质印迹(Western blot)法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝细胞FXR-SHP-SREBP-1c信号通路蛋白和mRNA的表达水平.结果 正常组、模型组、对照组、实验组的肝细胞TG含量分别为(2.91±1.13)、(6.81±1.32)、(3.72±0.52)和(4.67±0.62)mmol·gprot-1,TC 含量分别为(23.66±4.92)、(67.96±5.56)、(29.41±4.22)和(54.34±3.96)mmol·gprot-1,GOT 活性 分别为(249.10±11.59)、(322.63±28.81)、(288.89±19.14)和(266.91±8.77)U·gprot-1,GPT 活性 分别为(58.83±16.88)、(134.55±22.96)、(89.63±15.81)和(77.37±7.25)U·gprot-1,FXR mRNA 表达水平分别为 1.01±0.16、2.09±0.12、1.83±0.17和 1.45±0.15,SHP mRNA 表达水平分别为 1.00±0.11、0.51±0.15、0.64±0.14和 0.70±0.14,SREBP-1c mRNA 表达水平分别为 1.00±0.08、1.57±0.19、1.37±0.13 和 1.21±0.15,FXR 蛋白表达水平分别为 1.00±0.02、1.63±0.03、1.42±0.02 和 1.25±0.03,SHP 蛋白表达水平分别为 1.00±0.02、0.23±0.01、0.54±0.21 和 0.62±0.02,SREBP-1c 蛋白表达水平分别为1.00±0.03、4.08±0.05、1.99±0.02 和 1.48±0.01.上述指标,模型组与正常组比较,实验组与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 HPS可能通过调控FXR-SHP-SREBP-1c信号通路,减少肝细胞脂质合成,从而保护肝细胞.

目的 观察高磷环境对巨噬细胞内胆固醇蓄积的影响及其分子机制.方法 将人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞分为对照组(磷1.0 mmol/L)、高磷处理组(磷3.0 mmol/L)、磷甲酸钠(PFA)处理组(磷1.0 mmol/L加PFA 1.0 mmol/L)以及高磷联合PFA处理组(磷3.0 mmol/L加PFA 1.0mmol/L),按不同要求分别处理各组细胞.培养24 h后,油红O染色观察细胞内中性脂质的分布,酶催化比色法定量测定细胞内的胆固醇含量,qPCR检测细胞内羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCoAR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP) mRNA的表达,蛋白质印迹法测定细胞内SCAP、LDLR、HMGCoAR及核内固醇调节元件结合蛋白2(N-SREBP2)的蛋白水平,激光共聚焦法检测SCAP从内质网向高尔基体的移位情况.结果 与对照组相比,高磷处理组巨噬细胞内中性脂质明显聚集,细胞内总胆固醇与胆固醇酯的含量增加(P＜0.05),LDLR、HMGCoAR mRNA与蛋白的表达增高(P＜0.05,P＜0.01),细胞核内N-SREBP2的蛋白表达水平增加(P＜0.05),SCAP从内质网向高尔基体的移位增加;PFA处理(高磷联合PFA处理组)可阻断高磷引起的上述作用(P＜0.05,P＜0.01).高磷处理组巨噬细胞内SCAP的蛋白水平相比对照组增高(P＜0.05),PFA处理能抑制高磷导致的SCAP蛋白水平增高,但SCAPmRNA的表达在各组间差异均无统计学意义(P＞o.05).结论 高磷环境下,钠磷转运体介导磷离子进入巨噬细胞内,通过基因转录后机制增加SCAP的蛋白水平,诱导其功能失调并促使其异常转运SREBP2至高尔基体裂解释放N-SREBP2,后者转位入核促进HMGCoAR和LDLR的表达,促使细胞内源性胆固醇合成和外源性LDL经LDLR摄入的增加,最终导致细胞内胆固醇异常蓄积.

酒精性脂肪肝(AFLD)为酒精性肝损伤的最初症状,对其发生机制的深入研究有助于AFLD的预防和治疗.迄今研究发现,AFLD的发生发展主要与细胞色素P4502E1、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、固醇调节元件结合蛋白(SREBP)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、去乙酰化酶1、脂联素和胰岛素等通路相关.研究发现,酒精及代谢产物乙醛直接或间接抑制PPARα和AMPK并激活SREBP蛋白通路,导致肝脂质代谢紊乱、脂肪酸氧化能力降低和脂质堆积,最终形成AFLD.此外,本综述对这3个蛋白作为AFLD治疗靶点的治疗前景予以展望.

目的:研究胆固醇调节元件结合蛋白2 (sterol regulatory element binding protein 2, SREBP2)过表达对正常人肝细胞LO2和肝癌细胞HepG2胆固醇代谢以及增殖、凋亡及迁移的影响方法:应用pAd-Easy-1腺病毒载体系统构建重组腺病毒Ad-SREBP2m(SREBP2的剪切形式)以及作为对照的重组腺病毒Ad-GFP,分别感染LO2和HepG2细胞.采用胆固醇定量试剂盒检测SREBP2m过表达对细胞中总胆固醇水平的影响;蛋白质印迹法检测SREBP2m和胆固醇合成限速酶还原酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase, HMGCR)以及调亡相关蛋白caspase 3、cleaved-caspase 3和caspase 12表达的改变;分别采用EdU染色法和FCM法检测感染Ad-SREBP2m后对LO2和HepG2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响;划痕愈合实验检测对肝癌HepG2细胞迁移能力的影响.结果:成功构建重组腺病毒Ad-SREBP2m.与Ad-GFP组相比,感染Ad-SREBP2m的LO2和HepG2细胞中SREBP2m和HMGCR的表达水平均明显上调,总胆固醇水平明显升高(P值均<0.05); Ad-SREBP2m组LO2细胞中G1、S和G2期细胞所占比例差异均无统计学意义(P值均>0.05),而肝癌HepG2细胞中G1期细胞所占比例明显降低,S期细胞所占比例明显升高(P值均< 0.001).SREBP2m过表达对正常肝细胞LO2的增殖无影响,仅对肝癌HepG2细胞增殖具有促进作用(P< 0.001).Ad-SREBP2m组LO2细胞中总caspase 3、cleaved-caspase 3和caspase 12的表达水平均明显上调(P值均< 0.001),而HepG2细胞中总caspase 3、cleaved-caspase 3和caspase 12蛋白的表达水平均明显下调(P值均<0.05).LO2细胞在感染腺病毒Ad-SREBP2m后凋亡率与Ad-GFP组比较升高了(11.40±0.52) ％ (P<0.001), HepG2在感染腺病毒Ad-SREBP2m后凋亡率与Ad-GFP组比较降低了(4.17±0.47) ％ (P< 0.05); Ad-SREBP2m感染HepG2细胞48 h后,其迁移距离与Ad-GFP组相比多了(1.17±0.12) mm (P< 0.05).结论:过表达SREBP2m能促进HepG2肝癌细胞增殖与迁移并抑制其凋亡;而过表达SREBP2m能促进人正常肝细胞LO2的凋亡.

目的 观察低密度脂蛋白受体(LDLr)表达失调在高糖腹膜透析液(PDS)诱导腹膜纤维化中的作用及可能机制.方法 以人腹膜间皮细胞(PMC)为研究对象.分别在含1.50％、2.50％及4.25％葡萄糖的PDS中培养PMC 6、12、24 h以筛选高糖PDS组的干扰条件.以4.25％甘露醇作为高渗对照.细胞分为对照组(PBS干预)和高糖PDS组(含4.25％葡萄糖的PDS干预24 h).倒置显微镜观察细胞形态变化;实时定量PCR和Western印迹分别检测平滑肌肌动蛋白0(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)、胶原Ⅰ的mRNA和蛋白表达;油红0染色及Filipin染色观察PMC中脂质沉积情况,高效液相色谱测定细胞内胆固醇酯含量;免疫荧光双重染色观察胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)裂解激活蛋白(SCAP)与高尔基体共表达情况,实时定量PCR和Western印迹分别检测LDLr、SREBP-2及SCAP的mRNA和蛋白表达;实时定量PCR和Western印迹分别检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)、效应子核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)的mRNA和蛋白表达.结果 (1)与1.50％PDS干预组比较,4.25％PDS刺激PMC 24 h后,细胞内LDLr表达明显升高(P＜0.05);各时间点高渗对照组细胞内LDLr表达无明显改变(P＞0.05).(2)与对照组比较,高糖PDS组细胞形态由圆形铺路石样向长梭形转变,而且胞外基质蛋白α-SMA、FSP-1及胶原Ⅰ的表达均增加(均P＜ 0.05),细胞内脂质沉积增多(P＜0.05),细胞内SCAP与高尔基的共表达明显增多,LDLr、SREBP-2及SCAP的mRNA和蛋白表达随之升高(均P＜0.05),mTOR、4EBP1及S6K1的mRNA和磷酸化蛋白表达升高(均P＜0.05).结论 高糖PDS可能通过激活PMC细胞内雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)通路,破坏LDLr负反馈调节,从而导致细胞内脂质沉积增加,胞外基质积聚,促进腹膜纤维化发生.

本研究目的是为了探究7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷(OXL-1)对油酸诱导的HepG2细胞形成的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型中脂质生成的潜在抑制作用.油红染色显示OXL-1能显著降低油酸诱导的甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的脂质生成.基因芯片分析发现,与对照组相比,HepG2细胞经OXL-1处理后固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)、脂肪酸合酶(FAS)及乙酰辅酶a羧化酶α(ACCα)转录表达显著降低.相比较于对照组,OXL-1组甘油三脂减少56.87％±9.08％ (P ＜0.01),总胆固醇减少24.96％±5.45％ (P ＜0.01).同时也使SREBP1c、FAS和ACCα蛋白质表达水平降低.OXL-1组相比OA组,其SREBP1c、FAS和ACCα的蛋白质表达分别下调52.62％±6.38％(P＜0.01)、51.14％±8.75％ (P ＜0.01)和19.46％±3.64％(P＜0.05).结果说明,OXL-1可能经由SREBP1c、FAS和ACCα的转录和蛋白质水平的调控作用来阻止OA诱导的脂质蓄积.综上结果揭示,OXL-1可能在非酒精性脂肪肝病细胞模型中作为一种阻止脂质积累的新型化合物.