[目的]结合数据挖掘及网络药理学,探讨运脾法治疗儿童功能性便秘的用药规律及作用机制.[方法]收集562例功能性便秘患儿病案,采用SPSS Statistic 24.0软件进行聚类分析,SPSS Modeler 18.0软件进行关联规则分析,Liquorice软件进行复杂网络分析,得出核心方药.运用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)、中药分子机制 生物信息学分析工具(Bioinformatics Analysis Tool for Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine,BATMAN-TCM)数据库筛选核心方活性成分及靶点,通过基因组注释数据平台(Genome Annotation Database Platform,GeneCards)数据库筛选功能性便秘相关靶点,取交集后获得预测靶标.基于蛋白质基因相互作用分析(Search Tool for the Retrieval of Interacting Genes/Proteins,STRING)数据库构建靶基因蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI),利用Cytoscape 3.8.0软件建立核心方成分-便秘-靶点网络图,借助Network Analyzer工具进行拓扑分析,确定核心靶点.基于STRING数据库,使用R语言4.2.2进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集与京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析.[结果]所纳病案包含1 121诊次方药记录,各疗程的症状改善率在86％～97％,便秘三大主症的改善率均在90％左右.涉及中药119味,药性以寒、平为主,药味以苦、甘居多,归经多属胃、脾.通过药物关联、聚类和复杂网络分析得到9味药物构成的核心组方.核心组方调治便秘的主要活性成分为槲皮素、甲基庚烯酮、胆汁三烯、烟酸、木犀草素、山柰酚、汉黄芩素.关键靶点包括前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、V-Jun肉瘤病毒17癌基因同源物(V-Jun sarcoma virus 17 oncogene homolog,JUN)、蛋白激酶B1(protein kinase B1,AKT1)、磷酸肌醇-3-激酶调节亚基 1(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 1,PIK3R1)、磷脂酰肌醇-3-激酶 α 催化亚基(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate-3-kinase catalytic subunit alpha isoform,PIK3CA).对炎症相关通路如磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)的调节可能是核心组方改善便秘的作用机制.[结论]运脾法治疗小儿便秘核心方包括麸炒枳实、厚朴、生白术、鸡内金、焦山楂、连翘、决明子、火麻仁、胡黄连,其主要成分可能通过影响炎症因子水平、修复肠道黏膜以恢复肠道平滑肌功能,改善便秘症状,对运脾法的临床应用及儿童功能性便秘的中医药治疗有一定借鉴意义.

目的 基于数据挖掘方法探究《中医方剂大辞典》中雷丸的组方用药规律.方法 以《中医方剂大辞典》为信息源,梳理含雷丸的方剂,构建雷丸方药数据库;采用文献分析和数据挖掘方法,探讨雷丸的增效减毒及其方剂主治病症类型、药物配伍情况;利用关联规则分析探寻其在常见病中的配伍特点;使用皮尔逊相关性分析发掘药-证的相关性,总结其用药规律.结果 含有雷丸方剂的剂型主要为丸剂和散剂,高频用药为槟榔、大黄、木香等,与雷丸配伍的主要为驱虫药、泻下药及理气药等,且味多为苦、辛,归胃经、脾经.其中"槟榔-雷丸"出现的药对配伍频数最高,其次是"大黄-雷丸""木香-雷丸";雷丸方剂的主治病症为虫积的频数最高,其次为疳证、积滞等.皮尔逊相关性分析结果表明,治疗虫积配伍槟榔、木香、使君子、芜荑、鹤虱等;治疗疳证配伍胡黄连、黄连、青皮等;治疗积滞配伍神曲、陈皮、牵牛子、三棱等.结论 雷丸与槟榔等配伍可加强杀虫消积的功效;与胡黄连、大黄等配伍可增加泻下攻积的作用,以上可能会引起轻微的胃肠道不良反应;与陈皮、神曲等配伍可保护胃黏膜,减轻胃肠不良反应.但雷丸毒性物质基础研究等未见报道,仍需深入研究,为雷丸临床应用提供更确切的基础.

目的:探究胡黄连提取物通过miR-26a-5p/NF-κB通路影响缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的作用.方法:通过缺氧/复氧(H/R)诱导H9C2细胞建立心肌细胞损伤模型,细胞分为空白对照组、模型组、胡黄连提取物低浓度(250 μg/mL)组、胡黄连提取物中浓度(500 μg/mL)组、胡黄连提取物高浓度(1 000 μg/mL)组、miR-NC组、miR-26a-5p组、anti-miR-NC+胡黄连提取物高浓度组、anti-miR-26a-5p+胡黄连提取物高浓度组.CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;Western Blot检测cleaved Caspase-3、Bax、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达;ELISA检测MDA、SOD、CAT水平;qRT-PCR检测miR-26a-5p表达.结果:与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率、MDA、p-NF-κB/NF-κB水平及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,细胞增殖能力、SOD、CAT水平及miR-26a-5p表达显著降低(P＜0.05).与模型组比较,胡黄连提取物可显著降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡率及MDA、p-NF-κB/NF-κB水平和cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达,显著升高细胞增殖能力及SOD、CAT水平和miR-26a-5p表达(P＜0.05).抑制anti-miR-26a-5p可逆转胡黄连提取物对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响.结论:胡黄连提取物可能通过调控miR-26a-5p/NF-κB通路抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激.

目的 研究胡黄连PicrorhizaeRhizoma在提取环节提取物指示性成分含量与颜色、苦味等感官属性之间的变化关联规律,及在浓缩、干燥环节温度对上述3类指标的影响.方法 基于HPLC技术建立胡黄连5种指示性成分香草酸及胡黄连苷Ⅳ、Ⅲ Ⅱ、Ⅰ含量测定方法;使用色差仪对液体颜色以L*、a*、b*进行数值量化;采用健康志愿者人工评价法对苦度值进行量化表征.在水提环节对成分含量、颜色及苦度值进行相关性分析,并建立回归方程;在浓缩及干燥环节对上述3类指标受温度影响结果进行差异性分析.结果 在水提环节,L*和b*值与各成分含量呈显著负相关(P＜0.05),a*值与各成分含量呈显著正相关(P＜0.05),苦度值与香草酸及胡黄连苷Ⅲ、Ⅱ含量及成分综合评分呈显著正相关(P＜0.05).在浓缩环节,60 ℃温度条件下与70、80 ℃相比指示性成分含量更高,并且溶液颜色的L*、b*值更小,a*值更高.在干燥环节,在各温度条件下各成分含量均有降低,温度对香草酸、胡黄连苷Ⅲ含量、L*、a*值影响显著(P＜0.05),对其他成分含量及b*值无显著影响.苦度值在浓缩及干燥环节则不存在规律性变化.结论 分析揭示了在制剂前处理环节胡黄连5种指示性成分含量与颜色、苦味感官属性的内在关联规律及温度对3类指标的影响,表明化学指示性成分含量及感官属性受不同环节因素的影响,为胡黄连在制剂前处理环节化学成分与感官属性之间关联性应用的可行性提供指示.

目的 研究胡黄连苷Ⅱ(Pic)减轻阿霉素(Dox)诱发H9C2心肌细胞损伤的潜在机制.方法 采用Dox(1μmol/L)处理H9C2心肌细胞24 h以构建Dox诱发心肌损伤的细胞模型.采用CCK-8法检测不同浓度Pic对细胞活性的影响,以确定Pic最佳的干预浓度.将细胞汇合度达到60％～70％的H9C2心肌细胞随机分为对照组(Con组)、阿霉素组(Dox组)和治疗组(Dox+Pic组).采用乳酸脱氢酶(LDH)水平评价Dox对细胞的损伤;采用膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)染色和TUNEL染色评估细胞凋亡率;使用JC-1染色判定Dox和Pic对H9C2心肌细胞线粒体膜电位(MMP)的影响;通过Western blot检测各组凋亡相关蛋白(BAX、BCL2、C-caspase-3)的表达情况;使用去乙酰化酶沉默信息调节因子1(SIRT1)选择性抑制剂(SIRT1-IN-1)研究Pic是否通过调控SIRT1来发挥对Dox处理细胞的保护作用.结果 Dox能明显降低H9C2心肌细胞活性,而Pic则可抑制这一过程,与Con组比较,Dox+Pic组细胞培养基中的LDH水平明显降低.Annexin V-FITC/PI染色和TUNEL染色均表明Pic可以抑制Dox导致的细胞凋亡.JC-1染色结果显示,与Dox组比较,Dox+Pic组细胞的MMP降低.Western blot检测表明,Pic能够抑制促凋亡蛋白BAX、C-caspase-3表达,促进抗凋亡蛋白BCL2表达.Dox组细胞SIRT1蛋白表达降低,但Pic能够上调SIRT1表达,而SIRT1-IN-I(2μmol/L)逆转了Pic的抗凋亡作用.结论 Pic可以通过激活SIRT1蛋白表达抑制Dox引起的细胞损伤.

目的 探讨胡黄连苷Ⅱ在大鼠睾丸缺血再灌注损伤过程中的保护作用.方法 选取成年雄性SD大鼠45只随机分为3组,每组15只:睾丸缺血再灌注+胡黄连苷Ⅱ组(睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组);睾丸缺血再灌注组(睾丸IRI组);对照组.睾丸IRI组和睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组大鼠分别建立睾丸扭转复位模型,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组在再灌注同时腹腔注射胡黄连苷Ⅱ(10 mg/kg).HE染色观察睾丸组织病理改变;测定丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)含量;采用原位缺口末端标记检测细胞凋亡指数;免疫组化检测睾丸组织中的Bax和Caspase-3的表达情况;RT-PCR检测TNF-α和IL-1βmRNA表达水平.结果 睾丸IRI组可见生精上皮排列紊乱,生精细胞广泛脱落等表现;3组的凋亡指数分别为(4.28±0.36)％、(18.93±1.27)％、(9.53±1.02)％,SOD活性分别为(0.83±0.05)、(0.28±0.03)、(0.54±0.03)U/mg蛋白,MDA含量分别为(1.92±0.26)、(5.23±0.78)、(2.97±0.35)nmol/g蛋白,各组上述指标相互比较均有统计学意义(P＜0.05);睾丸IRI组中Bax及Caspase-3表达明显高于对照组,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组明显改善IRI引起的表达变化;与对照组相比,睾丸IRI组中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平明显增高.和睾丸IRI组比较,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平明显减低,各组上述指标相互比较均有统计学意义(P＜0.05).结论 胡黄连苷Ⅱ可减轻氧化应激水平,发挥抗炎及抗凋亡作用,从而在睾丸组织在缺血再灌注损伤过程中发挥保护作用.

目的 研究胡黄连苷Ⅱ对脑缺血再灌注损伤后线粒体电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)表达的影响和意义.方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,按随机数字表法将造模成功的70只大鼠分为假手术组、模型组、胡黄连苷组、VDAC1选择性抑制剂钌红组、钙红+胡黄莲苷组、VDAC1选择性激动剂精胺组、精胺+胡黄连苷组,每组10只.改良神经功能缺损评分(mNSS)评价动物神经行为功能;ELISA检测脑组织活性氧(ROS)含量;HE染色观察神经细胞形态;原位末端标记(TUNEL)检测神经细胞凋亡;免疫组化染色和Western印迹检测VDAC1和核酸内切酶(EndoG)表达水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分明显升高[(9.6±1.9)分],ROS含量增加[(47.6 ±2.7)U/ml],皮质区变性细胞(0.79±0.04)和凋亡细胞增加(23.8±2.8),VDAC1 (0.94 ±0.06)和EndoG[胞质(0.76±0.06),胞核(0.75±0.06)]表达均显著增强(P＜0.05).与模型组比较,胡黄连苷组大鼠mNSS评分下降[(5.7±0.9)分],ROS含量降低[(35.6 ±2.2)U/ml],皮质区变性细胞(0.48±0.04)和凋亡细胞减少(14.5±2.1),VDAC1 (0.63 ±0.06)和EndoG[胞质(0.34±0.05),胞核(0.31±0.06)]表达均显著降低(P＜0.05).结论 胡黄连苷Ⅱ可通过下调脑缺血再灌注后VDAC1表达而减少线粒体凋亡蛋白EndoG的释放,发挥神经保护作用.

目的 建立胡黄连UPLC指纹图谱,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法.方法 采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),以0.5％乙酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min,柱温为32℃,检测波长为295 nm,对25批以胡黄连名称出售的药材进行检测.通过相似度评价,结合聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA),对不同批次胡黄连药材进行质量评价.ESI-Q-TOF/MS正、负2种离子模式扫描对其化学成分定性分析.结果 22批胡黄连药材与3批混淆品的指纹图谱明显不同.通过建立的22批胡黄连药材UPLC指纹图谱确证了16个共有峰,并对12个共有峰进行了明确化学成分指认;胡黄连药材的相似度为0.939～0.998;通过聚类分析可大致聚成3类;PCA结果支持了HCA结果;并结合偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)方法发现区分胡黄连样品的4个标志性化合物,指认出1、9、12号峰分别为藏黄连酚苷C、胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅲ.结论 胡黄连的UPLC指纹图谱的构建和化学模式的识别为药材质量控制提供更全面的参考.

目的: 建立同时测定金衣万应丸中儿茶素、表儿茶素、胡黄连苷Ⅲ、胡黄连苷Ⅱ和胡黄连苷Ⅰ的HPLC 波长切换法.方法: 选用Agilent TC-C18(250 mm×4. 6 mm,5 μm)色谱柱; 流动相: 乙腈-0. 2％磷酸溶液(梯度洗脱); 流速0. 9 mL/min; 柱温30 ℃; 进样量20 μL.结果: 金衣万应丸中儿茶素、表儿茶素、胡黄连苷Ⅲ、胡黄连苷Ⅱ和胡黄连苷Ⅰ分别在6. 12 ～ 122. 40、3. 78 ～ 75. 60、 3. 35～67. 00、12. 76 ～ 255. 20、8. 94 ～ 178. 80 μg /mL 浓度范围内线性关系良好,平均回收率(n = 6)分别为98. 40％(RSD = 1. 71％)、97. 56％(RSD= 1. 24％)、96. 94％(RSD = 0. 88％)、100. 19％(RSD = 0. 99％)、98. 97％(RSD = 1. 03％).结论: 该方法简便、准确、重复性好,可为金衣万应丸多指标质量评价提供参考.

目的:优化复方中药湿疹方的提取工艺.方法:通过单因素考察和正交实验设计,以君药苦参中苦参碱和氧化苦参碱、臣药胡黄连中胡黄连苷为指标,由单因素实验确定提取溶剂,进一步通过正交试验优化提取次数、溶剂倍数、提取时间等提取工艺参数,确定最佳提取工艺.结果:考虑复方中有效成分的含量及出膏率,结合实际生产及成本,选用75％乙醇为提取溶剂.三个考察因素中,提取次数对出膏率及苦参碱转移率的影响有极显著性意义;提取时间对苦参碱转移率的影响有一定意义.复方中药湿疹方最优提取工艺为:6倍75％乙醇提取2次,每次1.5h.结论:该提取工艺合理可靠,可为复方中药湿疹方的进一步制备研究提供理论依据.