目的:建立卷丹、百合、细叶百合 3 个基原药材及对应蜜百合鉴别的薄层色谱法(TLC)和指纹图谱方法,对各基原药材所含有的化学成分进行差异性研究.方法:采用Ultimate XB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱;建立 21 批不同基原百合药材高效液相色谱法指纹图谱,并进行相似度评价、聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析,评价不同基原百合的异同.同时采用硅胶G薄层色谱板,分别以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(18∶2∶1.5∶1)、乙醚-正丁醇-冰乙酸(3∶9∶6)为展开剂,建立不同基原百合药材及蜜百合的薄层色谱区分方法,全面展现不同基原百合及蜜百合中化学成分特点.结果:指纹图谱结果显示,不同基原百合药材差异明显,卷丹、百合、细叶百合样品分别标定 8、12、8 个峰,共有成分为高泛酸、王百合苷H、王百合苷A,而王百合苷I存在于百合、细叶百合中,2-乙酰王百合苷A存在于卷丹中;不同基原百合的相似度评价结果(均小于 0.50)显示其成分差异较大;经统计分析发现,不同基原百合分别聚为一类;峰 12(2-乙酰王百合苷A)、峰 13、峰 14、峰 11(王百合苷I)、峰 3(高泛酸)是卷丹、百合、细叶百合的差异性成分.TLC结果表明,不同基原百合的色谱斑点存在明显差异,可与指纹图谱结果相互印证;而蜜百合TLC存在蔗糖、果糖、葡萄糖斑点,百合药材仅存在蔗糖斑点,这种成分差异来源于炼蜜.结论:所建立的指纹图谱及TLC可对百合药材进行质量评价,且能快速、准确、直观地反映不同基原百合药材及蜜百合中含有的成分差异,为不同基原百合药材和蜜百合的质量控制及区分鉴别提供参考.

目的:探究去除玄参芦头对净制玄参药材是否具有必要性.方法:通过对比不同批次玄参药材根和芦头净制后得率、含水量以及浸出物,采用高效液相色谱法比较哈巴苷、哈巴俄苷、安格洛苷C、麦角甾苷、肉桂酸5个主要活性成分含量,并采用苯酚-硫酸法测定玄参多糖,且对上述成分进行主成分分析(PCA),采用脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞(BV-2细胞)建立炎症模型,通过测定细胞上清液中一氧化氮(NO)的释放量,考察玄参根和芦头的抗炎活性,综合评价去除芦头的必要性.结果:玄参中芦头占药材重量的10％～20％,玄参根中浸出物高于芦头;PCA结果显示将玄参根和芦头区分为2大类,哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸以及多糖类活性成分以玄参根中含量高,但芦头中也有较大的贡献,而玄参芦头以安格洛苷C、麦角甾苷含量较多;玄参根和芦头的抗炎活性比较,差异无统计学意义.结论:按照传统习惯,玄参净制去芦具有一定的科学道理,但玄参芦头具有一定的药用价值,在提取物制备等方面进一步挖掘利用.

紫斑牡丹是我国西北牡丹种群的优势种,其作为地方传统药材,具有较高的食药价值和开发潜力.目前,已经从紫斑牡丹中分离和鉴定出了多种化学成分,包括单萜苷类、酚及酚苷类、黄酮类、低聚芪类、挥发油类、脂肪酸类、甾醇类、单宁类、三萜类等.现代研究表明,紫斑牡丹具有抗氧化、抗菌、抗癌等活性,已将其开发为口含片、软胶囊、口服液、保健化妆品、牡丹酒、花茶等新资源产品.本文主要对近10年国内外有关紫斑牡丹的化学成分进行分类整理,对其活性及开发利用现状进行梳理,并对发展前景进行展望,以期为紫斑牡丹的深入研究和综合开发利用提供参考.

目的 建立定量核磁方法,同时测定复方阿胶浆(Compound E'jiao Jiang,CEJ)的药材提取液中多类成分的含量,为中间体的质量评价提供可靠的分析手段.方法 采用水信号预饱和脉冲序列Noesygpprld采集样品的1H-NMR图谱.通过文献调研、数据库检索以及加标实验的方式进行核磁谱峰归属.进一步确定各化合物的定量峰,采用内标法定量.开展方法学考察,考察项包括线性、精密度、稳定性、重复性、耐用性、准确度.另基于核磁共振氢谱的信噪比确定方法的检测限和定量限,并对3批中间体样本进行分析.结果 共指认22种化合物,其中17种可同时定量分析,包括缬氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、焦谷氨酸、γ-氨基丁酸5种氨基酸,乙酸根、富马酸根、丙酮酸根、琥珀酸根、甲酸根、乳酸6种小分子有机酸根,葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖4种糖类以及尿苷、胆碱.线性考察结果得出相关系数均不小于0.999 5,精密度考察结果显示,RSD均小于2.7％,重复性考察RSD均小于2.5％,耐用性及稳定性考察RSD均小于2.6％,加样回收实验得出平均回收率为90.0％～105.0％、RSD小于2.2％,分析值与参考值平均相对偏差小于4.0％.对3批样品进行定量分析,17种成分的测定结果均高于定量限,且满足线性范围.3批样品可定量部分占总固体含量的质量分数分别为71.09％、84.44％、70.09％.结论 各方法学考察均满足要求;研究开发的定量核磁方法检测时间短、制样方式简单,能有效提高分析效率,为CEJ的生产过程物质转移规律研究打下基础.

鹿角为鹿科马鹿Cervus elaphus或梅花鹿C.nippon已骨化的角或锯茸后翌年春季脱落的角基.目前市场上鹿角基原混杂,为快速准确地鉴别鹿角多基原及混伪品,研究通过比较马鹿、梅花鹿及其混伪品线粒体条形码Cytb基因序列差异,筛选获得鹿角的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计鹿角特异性鉴别引物dishmy-F及dishmy-R,分别采集鹿角及其混伪品,建立鹿角配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR反应体系,对影响该方法重复性的Taq酶种类、PCR仪型号进行耐受性和适用性考察,再使用限制性内切酶MseⅠ对梅花鹿与马鹿的扩增产物进行酶切.结果显示,当退火温度为 56℃,循环次数为35 时,鹿角药材、标准汤剂及其配方颗粒经PCR反应及凝胶电泳后,马鹿可在近100 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,且马鹿的条带较梅花鹿短约 60 bp,而其他混伪品如驼鹿、驯鹿、白尾鹿、黑尾鹿、狍子、白唇鹿等及阴性对照均无条带.该研究建立的PCR-RFLP方法可快速准确的鉴别出鹿角药材、标准汤剂和配方颗粒中的马鹿成分,并可区分梅花鹿和其他混伪品,同时为其他中药配方颗粒质量标准研究提供了理论依据.

为了阐明组方药材芦荟对天天胶囊体内存在形式(原形成分和代谢产物)的贡献,首次对芦荟、天天胶囊及去芦荟天天胶囊在大鼠体内的存在形式进行了研究.大鼠灌胃给药,每天 1 次,连续灌胃 7 d.收集给药 7 d的全部尿液和粪便,最后一次灌胃给药后分别于 0.5、1、1.5 h收集血液.采用UHPLC-Q-TOF-MS检测和鉴定生物样品中的存在形式,分别鉴定了芦荟给药组、天天胶囊给药组、去芦荟天天胶囊给药组生物样品中的原形成分 34、28、2 个及代谢产物 64、94、0 个.代谢反应类型主要为甲基化、氢化、羟基化、脱羟基、葡萄糖醛酸结合、硫酸结合等.该研究首次阐明了芦荟、天天胶囊、去芦荟天天胶囊在大鼠体内的存在形式和部分代谢途径,为进一步揭示其显效形式奠定基础,并对中药芦荟和天天胶囊的作用机制及质量控制研究具有重要意义.

目的:系统分析狗脊饮片的化学成分.方法:利用正反相硅胶、聚酰胺和葡聚糖凝胶Sephadex LH-20等分离手段对狗脊饮片70％乙醇提取物进行分离纯化,根据1H-NMR和13C-NMR数据鉴定其结构;进一步采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)对狗脊饮片化学成分进行分析,以ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm× 100 mm,1.7 μm)为色谱柱,乙腈-0.1％甲酸水为流动相进行梯度洗脱;正负离子模式下采集质谱数据.结果:共分离得到8个单体化合物,其中化合物C1为首次从狗脊饮片中分离得到;基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术,根据精确分子质量、保留时间、碎片离子等信息共分析42个化合物,包括18个苯丙素、8个酚酸、4个蕨素、3个酚类、4个芳香族、1个黄酮和4个其他化合物.结论:该研究首次结合传统分离手段和UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术较为全面地分析了狗脊饮片化学成分,为该药材血清药物化学、药动学和质量控制研究提供部分参考.

目的 建立同步测定药对大黄-黄芪胶囊主要蒽醌类成分含量的高效液相色谱法(HPLC).方法 采用HPLC检测药对大黄-黄芪胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚的含量.色谱条件:Supersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温35℃,流动相为甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B),流速1.0 mL/min,梯度洗脱方式为0～70 min(50%～75%A)、70～90 min(75%A),流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm.在上述色谱条件下进行专属性试验、线性关系考察、仪器精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收试验及样品含量测定.结果 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚的浓度分别为 0.25～36.25 mg/mL(r =0.990 8),0.50～53.50 mg/mL(r =0.994 2)、0.25～45.00 mg/mL(r =0.991 2)、0.50～62.00 mg/mL(r =0.993 7),浓度与峰面积呈良好的线性关系.仪器精密度试验、稳定性试验、重复性试验的相对标准偏差(RSD)均<3%.4 种蒽醌类成分的平均回收率为98.97%～102.45%,RSD为0.26%～3.92%.芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚的含量分别为(0.821±0.062)mg/g、(1.753±0.159)mg/g、(1.303±0.109)mg/g、(2.909±0.251)mg/g.结论 采用HPLC同步检测药对大黄-黄芪胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚的含量,结果准确可靠、操作简便、重复性好,可用于大黄药材及其复方制剂药对大黄-黄芪胶囊主要蒽醌类成分的含量测定.

目的 基于Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠模型和网络药理学方法探讨痹祺胶囊的药效作用及作用机制.方法 SD大鼠采用Ⅱ型胶原蛋白造模,造模成功大鼠随机分为模型组,痹祺胶囊(0.05、0.10、0.20、0.40g/kg)组及泼尼松(10mg/kg)组和雷公藤总苷(10mg/kg)组,连续给药15d.持续监测大鼠体质量、足趾肿胀度和关节炎评分,苏木素-伊红染色考察大鼠踝关节病理变化,ELISA法测定血清细胞因子含量,初步评价痹祺胶囊治疗效果.选择痹祺胶囊中39个化合物为研究对象,依据反向药效团匹配方法和TCMSP、Uniprot等数据库预测化合物作用靶点,与通过OMIM、DisGeNet等数据库收集的RA相关靶点相互交互,将交互靶点借助Omicsbean、STRING等数据库平台对获得靶点进行基因本体功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia ofgenes and genomes,KEGG)通路富集分析,利用Cytoscape软件构建"药材-化合物-靶点-通路-功效-疾病"网络,预测其可能的作用机制.结果 与对照组比较,模型组大鼠活动、饮食减少,足趾肿胀、关节呈急性炎症表现,关节炎评分显著增加(P＜0.01),血清中类风湿因子(rheumatoidfactor,RF)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-1β 和 γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平均显著增加(P＜0.05、0.01、0.001),IL-10水平降低,脾脏、胸腺指数显著增加(P＜0.01、0.001),病理显示膝关节可见滑膜细胞增生、炎性细胞浸润,骨与软骨被侵蚀.与模型组比较,痹祺胶囊组大鼠踝关节病变情况得到不同程度改善,具体可见足肿胀度、关节炎评分显著降低(P＜0.05、0.01),血清中RF、IL-17、TNF-α、IL-1β、IFN-y水平显著降低(P＜0.05、0.01、0.001),IL-10水平增高,脾脏、胸腺指数降低(P＜0.05、0.01),踝关节骨、软骨组织损伤减轻,炎性细胞浸润、滑膜结缔组织增生减少.网络药理学预测发现,痹祺胶囊39个成分与RA交集靶点共371个.蛋白质-蛋白质相互作用网络分析结果显示,IL-6、白蛋白、TNF、血管内皮生长因子A、基质金属蛋白酶9、趋化因子配体8等124个靶点可能是痹祺胶囊治疗RA的关键靶点.KEGG通路富集分析获得IL-17信号通路、Toll样受体信号通路、Th1和Th2细胞分化、VEGF信号通路、瞬时受体电位通道的炎症介质调节、Wnt信号通路、血小板激活等80条信号通路,与免疫调控、抗炎、抑制血管翳生成、成骨/破骨细胞平衡等过程相关.对网络进行分析发现痹祺胶囊治疗RA具有多成分、多靶点、多途径的特点,其中单体成分士的宁、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、异甘草素、迷迭香酸、阿魏酸等可能为痹祺胶囊的关键药效物质基础.结论 痹祺胶囊对Ⅱ型胶原诱导的RA大鼠模型治疗效果较好,可能通过抗炎、免疫调节、血管生成、骨形成/侵蚀平衡等发挥治疗作用,体现了痹祺胶囊治疗RA多成分、多靶点、多通路的特点.

目的 对五加皮Acanthopanacis Cortex的二萜类化学成分及抗炎活性进行研究.方法 通过MCI树脂柱、硅胶柱、薄层色谱、半制备HPLC等方法对五加皮药材中化学成分进行提取分离,采用核磁共振波谱、质谱、红外光谱等方法,对单体化合物的结构进行鉴定.采用Griess法测试脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞释放炎症因子模型,对化合物进行抗炎活性评价.结果 从五加皮70％乙醇提取物中分离得到13个二萜类化合物,包括7个对映海松烷型二萜7β-羟基-8(14),15-二烯-19-异海松烷酸(1)、7-酮基-8(14),15-二烯-19-异海松烷酸(2)、7β-甲氧基-8(14),15-二烯-19-异海松烷酸(3)、6,8(14),15-三烯-19-异海松羧酸(4)、14-酮基-8,15-二烯-19-异海松羧酸(7)、14-羟基-16-乙烯基-8,11,13-三烯-17-异海松羧酸(8)、7α-羟基-8(14),15-二烯-19-异海松烷酸(11);以及6个对映贝壳杉烷型二萜16α,17-二羟基-19-异贝壳杉烷羧酸(5)、17-羟基-19-异贝壳杉烷羧酸(6)、异贝壳杉烯酸(9)、17-醛基-19-异贝壳杉烯酸(10)、17-醛基-15-烯-19-异贝壳杉烷酸(12)和17-羟基-15-烯-19-异贝壳杉烷酸(13).其中化合物8为新化合物,命名为细柱五加酸G1;3和4为首次从细柱五加植物中分离得到.体外抗炎活性研究表明,13个化合物均具有一定的抗炎活性,其中化合物1～3、7的活性较好.海松烷型二萜类化合物抗炎活性较贝壳杉烷型二萜强,海松烷型二萜类化合物7位取代活性强弱顺序为β-OH＞β-OCH3＞△6双键＞C=O＞α-OH.结论 五加皮分离鉴定的化合物及其活性研究为五加皮专属性质控方法建立、药用资源合理开发和利用提供了依据.