目的:探讨硫氧环蛋白过氧化物酶-2（Prx-2）过表达对转化生长因子β1 （TGF-β1）诱导的人胚肺成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法:将人胚肺成纤维细胞随机分为对照组（DMEM培养液）、TGF-β1组（5 μg/L TGF-β1）、阴性对照组（5 μg/L TGF-β1+慢病毒空载体）、Prx-2组（5 μg/L TGF-β1+慢病毒Prx-2过表达载体）。采用MTT法检测各组细胞增殖情况，免疫荧光法检测8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）含量用以反映活性氧（ROS）水平，Western blot检测磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、p-P38、I和III型胶原蛋白及Prx-2水平。用SPSS 18.0软件进行统计分析，计量资料以 ± s表示，组间比较采用分差分析，两两比较用LSD- t检验。 结果:慢病毒成功转染，Prx-2组Prx-2蛋白水平明显高于对照组，差异有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，TGF-β1组细胞增殖能力明显增高，差异有统计学意义（ P<0.05）；与TGF-β1组比较，Prx-2组细胞增殖能力明显降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，TGF-β1组细胞8-OHdG、p-JNK、p-P38及I、III型胶原蛋白水平均明显增高，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与TGF-β1组比较，Prx-2组8-OHdG、p-JNK、p-P38及I、III型胶原蛋白水平均明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与TGF-β1组比较，阴性对照组差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:Prx-2过表达可能通过抑制ROS和JNK、P38通路激活，抑制TGF-β1促成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。

目地:回顾性分析1例线粒体DNA耗竭综合征(MTDPS)肝脑型患者的临床特点，并对脱氧鸟苷激酶 DGUOK基因突变进行家系分析。 方法:对2019年4月河北医科大学第二医院收治的1例MTDPS患儿临床资料、治疗过程、基因检测结果进行总结分析。结果:先证者，女，出生第1周开始出现反复低血糖、顽固性高乳酸血症，并伴进行性胆汁淤积性肝功能障碍、凝血功能障碍，喂养困难、体质量增长迟缓，小头畸形、肌力差、逐渐出现双眼间断性震颤，最终未能存活。基因检测发现该患儿为 DGUOK基因复合杂合突变c.42-c.43insTTCA(p.F15fs129X)/c.808-1(IVS6)G>A，前者为移码突变，产生截短蛋白，后者为剪切突变，导致异常剪切。患儿父母各携带1个 DGUOK基因突变，患儿姐姐此2个位点均无突变发生。 结论:此2种突变均系世界范围内首次报道。MTDPS中的 DGUOK基因突变是婴儿肝衰竭的一个重要原因。当新生儿及婴儿期出现低血糖、高乳酸血症、肝功能异常，婴儿或儿童患有急性肝衰竭时，即使缺乏神经肌肉受累，也应考虑进行 DGOUK基因测序筛查，以便早期明确诊断。

目的 探究空气负离子(negative air ions,NAIs)对原发性高血压大鼠(spontaneous hypertension rat,SHR)血压、氧化应激及炎症状态的影响及可能机制.方法 选择60只SHR(雌雄各半),根据干预时间随机分为1个月组和3个月组,每组30只;各组大鼠根据每日干预时间再进一步随机分为SHR对照组、2 h NAIs-SHR组和6 h NAIs-SHR组,每组10只.另将20只SHR同系正常血压成年大鼠(Wistar-Kyoto,WKY)作为正常血压对照组,根据干预时间随机分为1个月WKY组和3个月WKY组,每组10只.2 h NAIs-SHR组和6 h NAIs-SHR组每天分别置于NAIs浓度为4.5×104～5×104个/cm3的环境中2 h和6 h,WKY组和SHR对照组每天置于正常空气环境.各组大鼠每3天测一次血压,每周测一次体重,于饲养第1个月和第3个月后处死,称量脏器湿重;采用酶联免疫吸附法检测血清8-羟脱氧鸟苷(8-hydroxylated deoxyguanosine,8-OHdG)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、一氧化氮(nitric oxide,NO)和内皮素-1(endothelin-1,ET-1)水平;活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)检测试剂 盒测 定血清ROS水平;比色法检测血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(glutathione disulfide,GSSG)水平.HE染色观察各组大鼠胸主动脉组织病理形态,Western blot检测各组大鼠胸主动脉p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)、c-Jun 氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、c-fos、c-jun蛋白及其磷酸化蛋白的表达水平.结果 同周龄雄鼠WKY组体重较SHR对照组高,其他各组间体重差异无统计学意义.SHR组心脏脏器系数(4.66±0.48)较WKY组(3.73±0.15)高(P＜0.05),其余大脑、肾脏、肝脏和脾脏脏器系数各组间差异无统计学意义.同周龄 WKY组血压均较SHR对照组低,第2～5、8～11周SHR对照组血压均较2 h NAIs-SHR组和6 h NAIs-SHR组高(P＜0.05).HE染色发现2 h NAIs-SHR组和6 h NAIs-SHR组大鼠胸主动脉均较SHR对照组内膜结构紊乱、中膜增厚、外膜破裂等病理改变有不同程度的改善.氧化还原水平方面,与SHR对照组相比,6 h NAIs-SHR组ROS[0.66％±0.17％、0.49％±0.32％]、8-OHdG[(48.29±8.00)ng/mL、(33.13±14.67)ng/mL]水平均较低(P＜0.05),1 个月 6 h NAIs-SHR 组 GSH/GSSG(10.08±4.93)较高;与 2 h NAIs-SHR 组相比,6 h NAIs-SHR 组 ROS 水平[0.99％±0.19％]较低(P＜0.05).炎性因子水平方面,与SHR对照组相比,6 h NAIs-SHR组IL-8水平[(160.44±56.54)ng/L、(145.77±38.39)ng/L]均较低(P＜0.05),1 个月 WKY 组 ET-1[(249.55± 16.98)ng/L]较高,各组间NO水平差异无统计学意义.1个月SHR对照组大鼠胸主动脉p-p38蛋白相对表达量较WKY组低(P＜0.05),3个月SHR对照组大鼠胸主动脉p-p38和p-c-fos蛋白相对表达量均较2 h NAIs-SHR组和6 h NAIs-SHR组高(P＜0.05).结论 4.5×104～5×104 个/cm3 浓度的 NAIs 干预可能通过 ROS/MAPK/AP1信号通路调节SHR大鼠部分氧化及炎症状态,进而降低其血压水平.

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)脱氧鸟苷激酶反义RNA(DGUOK-AS)1 调控miR-204-5p对肝癌细胞MHCC97-H增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析肝癌组织中DGUOK-AS1 和miR-204-5p表达量.双荧光素酶报告实验确定DGUOK-AS1 与miR-204-5p靶向关系,RT-qPCR检测干扰DGUOK-AS1 表达后MHCC97-H细胞miR-204-5p表达量.集落形成实验分析DGUOK-AS1 和miR-204-5p表达对MHCC97-H细胞增殖的影响.流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡.Transwell实验分析细胞迁移和侵袭.结果 与癌旁组织比较,肝癌组织中DGUOK-AS1表达量明显上调,而miR-204-5p表达量明显下调(P<0.05).miR-204-5p是DGUOK-AS1 的靶基因.干扰DGUOK-AS1 表达后miR-204-5p表达量显著升高(P<0.05).干扰DGUOK-AS1 表达后MHCC97-H细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05).与干扰DGUOK-AS1 表达比较,同时干扰DGUOK-AS1 和miR-204-5p表达后MHCC97-H细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S 期细胞比例显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05).结论 干扰DGUOK-AS1 通过靶向miR-204-5p可抑制肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡.

目的:观察淫羊藿苷(ICA)通过一氧化氮(NO)-环磷酸鸟苷(cGMP)-蛋白激酶G(PKG)通路对射血分数保留型心衰(HFPEF)大鼠心室重塑的影响.方法:建立醋酸脱氧皮质酮(DOCA)敏感型HFPEF大鼠模型,造模成功后,随机分成Model组、ICA低、中、高剂量组、抑制剂组,随机选取 12 只大鼠作为control组,各组灌胃相应药物,每天 1 次,连续 6 周.超声心动图检测大鼠心功能;心导管法测定血流动力学参数;HE染色观察大鼠心肌组织病理损伤;试剂盒检测NO、cGMP、活性氧(ROS)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α 水平;免疫荧光染色观察血小板-内皮细胞黏附分子-1(CD31)表达;Western blot检测PKG、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、可溶性鸟苷酸环化酶α(sGCα)蛋白表达.结果:与control组比较,Model组大鼠左室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)、二尖瓣舒张早期/舒张晚期血流速度最大峰值(E/A)、左心室收缩压(LVSP)、左室压力最大上升速率(+dp/dt max)、左室压力最大下降速率(-dp/dt max)、NO、cGMP水平、CD31 及PKG、eNOS、sGCα蛋白表达水平降低(P＜0.05),左心室前壁厚度(LVAM)、左心室后壁厚度(LVPW)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期压力(LVEDP)、ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、iNOS蛋白表达水平升高(P＜0.05).与Model组比较,ICA低、中、高剂量组大鼠LVEF、LVFS、E/A、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max、NO、cGMP水平、CD31 及PKG、eNOS、sGCα蛋白表达水平升高(P＜0.05),LVAM、LVPW、LVEDD、LVESD、LVEDP、ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、iNOS蛋白表达水平降低(P＜0.05),其中ICA高剂量组变化更显著(P＜0.05).与ICA高剂量组比较,抑制剂组大鼠LVEF、LVFS、E/A、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max、NO、cGMP水平、CD31 及PKG、eNOS、sGCα蛋白表达水平降低(P＜0.05),LVAM、LVPW、LVEDD、LVESD、LVEDP、ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、iNOS蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论:ICA可能通过激活NO-cGMP-PKG通路,减轻炎症反应、改善心室重塑.

目的 研究葛根素对D-半乳糖诱导的心脏老化的保护作用.方法 24只6～8周龄的昆明小鼠随机分成对照组、D-半乳糖组、葛根素低剂量组和葛根素高剂量组4组,通过持续皮下注射D-半乳糖(150 mg/kg/d)建立衰老模型,造模成功后给予葛根素和等量0.9%氯化钠溶液灌胃,60 d 后,应用HE 染色检测心肌组织形态学改变;采用自动生化分析仪检测血清心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)和肌酸激酶(creatine kinase,CK);应用ELISA法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;使用二氢乙锭(Dihydroethidium,DHE)荧光探针测量心肌组织中的组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;免疫组织化学法检测组织 8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)表达,蛋白印迹法检测 4-羟基-2-壬烯醛(4-hydroxy-2-nonenal,4-HNE)、p21和p53蛋白表达.结果 与对照组比较,D-半乳糖组小鼠心肌纤维排列不规则,cTnT、CK、ROS、MDA的水平升高、SOD的水平降低,8-OHdG、4-HNE、p21和p53表达水平明显升高(P<0.01).与D-半乳糖组比较,葛根素低剂量和葛根素高剂量给药组小鼠血清中cTnT、CK水平明显降低(P<0.05).此外,心肌组织ROS、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、8-OHdG、4-HNE、p21和p53 表达水平也明显降低,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的水平显著增加(P<0.05).结论 葛根素通过抑制氧化应激减弱D-半乳糖诱导的心脏衰老,表明葛根素可作为抗衰老治疗的潜在有效中草药活性成分.

目的 研究紫丹酸B(TAB)对糖尿病肾病模型小鼠糖代谢和肾功能的改善作用及机制.方法 采用高脂饮食联合链脲佐菌素建立糖尿病肾病模型小鼠,然后随机分为模型组、阳性对照组(维生素E,20 mg/kg)和TAB低、中、高剂量组(1、2、4 mg/kg),每组12只;另设给予普通饮食的正常对照组.各组小鼠灌胃相应药物或生理盐水,每天1次,连续4周.采用葡萄糖耐量实验、胰岛素耐量实验以及空腹血糖和血清胰岛素含量评估小鼠糖代谢功能;检测小鼠肾脏系数和肾功能相关生化指标[血清中尿酸、血尿素氮、肌酐水平和尿微量白蛋白与肌酐比值];检测小鼠肾组织中氧化应激相关生化指标[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)]的含量;观察小鼠肾组织的病理形态;检测小鼠肾组织中细胞外基质(ECM)沉积相关因子[转化生长因子β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(Fn)、Ⅳ型胶原蛋白(Col Ⅳ)]及蛋白激酶B(Akt)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路相关蛋白的表达水平.结果 与正常对照组比较,模型组小鼠空腹血糖、葡萄糖耐量曲线下面积(AUC)、胰岛素耐量AUC、血清胰岛素含量,血清中尿酸、尿素氮、肌酐水平和尿微量白蛋白与肌酐比值,肾组织中MDA、8-OHdG含量和TGF-β1、Fn、Col Ⅳ蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);肾组织中SOD、GSH-Px含量以及p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05);基底膜增厚、系膜基质堆积、肾小球硬化、肾小管间质纤维化明显.与模型组比较,TAB各剂量组小鼠上述指标水平均显著逆转(P＜0.05),病理改变减轻,且呈剂量依赖性.结论 TAB可改善糖尿病肾病模型小鼠糖代谢和肾功能,减轻肾小管间质纤维化;其作用机制可能与激活Akt/Nrf2/HO-1信号通路,抑制ECM沉积,拮抗高糖诱导的氧化应激有关.

目的 探讨丹参多酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制.方法 采用随机数字表法,将36只成年Sprague-Dawley大鼠分为对照组(不结扎冠状动脉)、缺血再灌注组(I/R组,通过结扎和打开冠状动脉左前降支建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型)和丹参多酚+I/R组(在缺血再灌注的同时,经尾静脉注射丹参多酚5 mg/kg),每组均为12只.通过2,3,5-氯代三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组心肌梗死面积;采用ELISA法检测心肌坏死标志物,包括血清肌钙蛋白T(TnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;采用TUNEL法检测心肌组织的细胞凋亡情况;采用Westernblot检测各组心肌组织中活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达水平;采用冷发光法检测心肌组织三磷酸腺苷(ATP)水平;采用免疫荧光法检测心肌组织8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平.结果 (1)对照组、I/R组和丹参多酚+I/R组的心肌梗死面积分别为0、(23.90±5.66)％和(12.06±5.97)％,I/R组大于对照组(P＜0.01),而丹参多酚+I/R组小于I/R组(P＜0.05).(2)对照组、I/R组和丹参多酚+I/R组血清TnT水平分别为(0.04±0.03)、(16.96±2.80)和(6.95±2.31)n~ml,CK-MB水平分别为(43.6±23.5)、(1 135.8±180.6)和(390.3±121.5) U/L,LDH水平分别为(119.0±58.6)、(1 838.6±543.8)和(631.6±228.3) U/L,I/R组均高于对照组,而丹参多酚+I/R组均低于I/R组(P均＜0.01).(3)对照组、I/R组和丹参多酚+I/R组TUNEL阳性心肌细胞比率分别为(1.07±1.16)％、(21.36±4.11)％和(13.30±3.67)％,I/R组高于对照组,丹参多酚+I/R组低于I/R组(P均＜0.01).(4)对照组、I/R组和丹参多酚+I/R组活化Caspase-3蛋白表达水平分别为0.11±0.05、0.84±0.20和0.43±0.09,I/R组高于对照组,丹参多酚+I/R组低于I/R组(P均＜0.01).(5)对照组、I/R组和丹参多酚+I/R组心肌组织ATP水平分别为(100.0±0.0)％、(34.2±9.2)％和(62.1±18.0)％,I/R组低于对照组,丹参多酚+I/R组高于I/R组(P均＜0.01).(6)对照组心肌组织中几乎无8-OHdG表达;I/R组心肌组织中8-OHdG表达多于对照组;丹参多酚+I/R组心肌组织中8-OHdG表达少于I/R组.结论 丹参多酚可能是通过减轻线粒体DNA氧化损伤,保护线粒体功能,抑制心肌细胞凋亡,从而减轻大鼠心肌的缺血再灌注损伤.

目的:观察并探讨强化瑞舒伐他汀治疗急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI),患者8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和内皮细胞特异性分子1(ESM-1)的水平变化及预后.方法:入选行直接PCI的急性STEMI患者116例,随机分为强化他汀组(瑞舒伐他汀术前20 mg,术后20 mg/d)和常规他汀组(瑞舒伐他汀术前10 mg,术后10 mg/d).观察两组患者入院即刻和术后24 h、第4天、第7天8-OHdG和ESM-1的水平变化.随访比较两组患者术后30 d内主要不良心脏事件(MACE)和不良反应的差异.结果:两组患者8-OHdG和ESM-1水平在术后24 h均明显上升,在术后第4天、第7天均呈下降趋势,强化他汀组较常规他汀组下降更明显(P＜0.05);入院即刻8-OHdG水平与ESM-1水平呈正相关(r=0.562,P＜0.05).强化他汀组肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)峰值水平均低于常规他汀组(P＜0.05).两组患者在MACE事件以及不良反应上比较均差异无统计学意义.结论:强化瑞舒伐他汀在STEMI患者治疗中能够更加迅速降低氧化应激反应并改善血管内皮功能,从而保护心肌、稳定动脉粥样硬化斑块.

目的:探讨人红细胞(RBC)内核苷二磷酸激酶(NDPK)的酶学动力学特性.方法:利用NDPK催化反应底物二磷酸脱氧腺苷、三磷酸脱氧鸟苷生成三磷酸脱氧腺苷及二磷酸脱氧鸟苷(dADP+dGTP(←)dATP+dGDP)的酶促反应,通过改变反应温度、热处理温度、pH条件、底物浓度及抑制剂浓度进行NDPK酶学动力学研究.结果:底物动力学研究中,Linewever-Burk双倒数图为两组平行直线.产物抑制动力学研究中,固定反应底物dGTP浓度并改变dADP浓度时,dATP表现为非竞争性抑制作用,固定反应底物dADP浓度并改变dGTP浓度时,dATP表现为竞争性抑制作用.反应遵循乒乓机制.文中实验条件下,NDPK酶促反应最大速度Vmax约为110 μmol·min-1· g-1,KmdADP=1.26 mmol·L-1,KmdGTP=l.94 mmol· L-1.dATP抑制常数Ki约为0.34～0.67 mmol·L-1.结论:NDPK为酶促反应dADP+dGT dAPT+dGDP的一种高亲和性催化酶.